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ESCOLA COOPERATIVA DE VALE S.

COSME

RELATRIO
Extrao de DNA de clulas vegetais.

Trabalho da disciplina de:

BIOLOGIA.

Realizado por: Paula Alexandra Sousa Mesquita. Nr. 5998.

Orientadora: Dra. Manuela Fonseca.

VALE S. COSME 3 de Outubro de 2012

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NDICE
Objetivos ....................................................................................................................................... 3 Introduo ..................................................................................................................................... 4 Material / Procedimento ............................................................................................................... 7 Material ..................................................................................................................................... 7 Procedimento experimental ..................................................................................................... 7 Dados transformados / Observaes / Resultados ....................................................................... 8 Concluso ...................................................................................................................................... 9 Bibliografia .................................................................................................................................. 10

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Objetivos
Conhecer tcnicas de extrao de DNA das clulas; Compreender o processo necessrio extrao do DNA; Estudar algumas caratersticas da molcula de DNA responsvel pela transmisso hereditria das caratersticas dos seres vivos.

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Introduo
O ADN o suporte fsico da informao necessria para o desenvolvimento de um ser vivo. Por outras palavras, o DNA uma molcula formada por duas cadeias antiparalelas (dupla hlice) ligadas entre si por pontes de hidrognio entre as bases azotadas. A Adenina est ligada com a Timina por 2 ligaes de hidrognio e a Guanina com a Citosina com 3 ligaes de hidrognio. A sucesso dos pares de bases azotadas constitui o suporte da informao gentica. O DNA encontra-se no ncleo, nas mitocndrias e nos cloroplastos. O DNA constitudo por nucletidos, que por sua vez so formados por uma base azotada, uma pentose (glcido com 5 carbonos que se chama desoxirribose) e um grupo fosfato (cido fosfrico). As bases azotadas presentes nos nucletidos dividem-se em dois tipos: bases pricas adenina e guanina que tm um anel duplo; e bases pirimdicas timina e citosina que tm um anel simples. Os nucletidos estabelecem ligaes entre si formando cadeias polinucleotdicas. Estas ligaes so estabelecidas por sua vez entre um grupo fosfato de um dos nucletidos e o carbono 3 da pentose do nucletido seguinte (denominam-se por ligaes fosfodiester). RNA a sigla para cido ribonucleico, que o responsvel pela sntese de protenas da clula. O RNA formado geralmente em cadeia simples, que pode, por vezes, ser dobrado, e as molculas formadas por RNA possuem dimenses muito inferiores s formadas por DNA. O RNA constitudo por uma ribose, por um fosfato e uma base nitrogenada. O RNA formado por uma cadeia simples. Um filamento de RNA pode se dobrar de tal modo que parte das suas prprias bases se pareiam umas com as outras. tambm capaz de assumir uma variedade muito maior de formas moleculares tridimensionais complexas do que a dupla hlice de DNA. Existe tambm o RNA mensageiro, que o intermedirio, pois atua na traduo do DNA em aminocidos para fabricar as protenas de todos os seres vivos da Terra. O RNA tambm o responsvel pela transferncia de informao do DNA at o local de sntese de protenas na clula. A multiplicao do ADN feita atravs de um processo realizado principalmente por enzimas que quebram as ligaes entre as duas cadeias, originando o RNA. A replicao do ADN cumpre a hiptese semi-conservativa, ou seja, cada uma das cadeias serve de molde para as novas cadeias. Assim, as novas molculas de DNA so formadas por uma cadeia nova e outra cadeia antiga.

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Principais caratersticas Pentose Bases pricas Bases pirimdicas Estruturas Origem Enzima Hidroltica Enzima Sinttica Localizao Funo

DNA Desoxirribose Adenina e Guanina Citosina e Timina Dupla hlice Replicao DNAase DNA - polimerase Principalmente no ncleo Informao gentica

RNA Ribose Adenina e Guanina Citosina e Uracilo Hlice Transcrio RNAase RNA - Polimerase Ncleo e citoplasma Sntese de protenas

Outro aspeto bastante importante para o cumprimento dos objetivos saber a constituio da membrana plasmtica. A membrana apresenta essencialmente na sua constituio fosfolpidos, colesterol e protenas (constituio lipoproteica). Ser por esta sua constituio que adicionado o detergente durante a atividade experimental. E ainda, outro tpico bastante importante as protenas. Por sua vez, elas so compostos orgnicos de alto peso molecular. As protenas so formadas pelo encadeamento de aminocidos. Representam cerca de 50 a 80% do peso seco da clula sendo, portanto, o composto orgnico mais abundante de matria viva. Existem 20 tipos de aminocidos diferentes, sendo que o ser humano capaz de produzir 10 tipos. Os outros restantes devem ser obtidos a partir da dieta (chamados aminocidos essenciais). Se a dieta no oferecer a quantidade suficiente de aminocidos essenciais, o corpo entra em processo de degradao de protenas. Protenas so encontradas em todo corpo, ou seja, em msculos, ossos, pele, cabelo e virtualmente qualquer rgo ou tecido. As protenas participam no funcionamento do corpo basicamente de duas formas: Como componentes estruturais: formando estruturas como ossos, msculo e pele. Como componentes funcionais: como enzimas que catalisam as reaes qumicas do organismo.

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Em resumo, para a realizao desta atividade experimental parti de alguns princpios: As membranas celular e nuclear so compostas principalmente por lpidos. As protenas encontram-se aprisionadas na bicamada lipdica. Os organitos celulares so compostos por protenas e cidos nucleicos (DNA e RNA) envolvidos por uma membrana. As paredes celulares das clulas vegetais so compostas essencialmente por polissacardeos. As pequenas estruturas celulares so compostas por substncias com diferentes propriedades qumicas, pelo que os procedimentos experimentais devem ser definidos de modo a separar um determinado constituinte celular das restantes partes, sem causar danos. Cerca de 99% do DNA encontra-se no ncleo da clula.

Com estes princpios podemos perceber que h uma justificao lgica para o facto de termos picado a cebola e usarmos detergente, sal e lcool.

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Material / Procedimento
Material
Cebola; Bisturi ou faca; Banho-maria (37 C); Gaze ou pano; Proveta de 100 ml; Tubo de ensaio; gua destilada; Detergente de loua; Cloreto de sdio; Etanol frio (a 5C); Recipiente de plstico alto; Varinha mgica.

Procedimento experimental
1. Descascar a cebola e rela-la com a varinha mgica, dentro do recipiente de plstico alto. 2. Adicionar uma soluo composta por: _ 100 ml de gua; _ 10 ml de detergente da loua; _ 3 g de cloreto de sdio. 3. Mexer a nova soluo, mas muito devagar, de modo a no criar espuma. 4. Colocar o preparado em banho-maria durante 15 minutos. 5. Filtrar, atravs da gaze de forma a obter 5ml de lquido para um tubo de ensaio. 6. Adicionar, lentamente, 5ml de etanol 96% a 5C. 7. Deixar repousar at se observar a ascenso de uma camada gelatinosa.

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Dados transformados / Observaes / Resultados

Visto que o DNA no se pode dissolver no lcool, na concentrao aqui utilizada, comeou a separar-se da soluo aquosa elevando-se na camada de lcool, criando a espcie de uma bolha a separar. Assim, comeou a observarse que o DNA + RNA + Protenas tm um aspeto translucido ou esbranquiado. O DNA + RNA + Protenas moveram-se lentamente no lcool.

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Concluso
Com a realizao desta atividade experimental, posso concluir que obtive RNA, DNA e protenas na fase final da atividade, em vez de ser apenas DNA. Isto deve-se ao facto de no ter usado RNAase e clorofrmio, que iriam destruir o RNA e as protenas, respetivamente, nessa pequena amostra. Concluo tambm que a adio de cada um dos reagentes e o facto de relar a cebola teve uma explicao lgica. A cebola foi picada para fragmentar o tecido vegetal e consequentemente permitir a rutura da membrana plasmtica que forma as clulas da cebola. A adio de sal proporcionou ao DNA um ambiente favorvel, porque o sal contribuiu com ies positivos que neutralizam a carga negativa do ADN. A adio do detergente afetou as membranas porque elas so constitudas por lpidos. Com a rotura das membranas o contedo celular (incluindo as protenas e o DNA) solta-se e dispersa-se na soluo. A funo de algumas destas protenas mantar o DNA enrolado numa espiral muito apertada. O DNA no solvel no lcool adicionado. Deste modo, ele faz com que o ADN se separe da soluo aquosa elevando-se para a camada alcolica. Isto acontece porque o DNA menos denso do que a gua e que a mistura, logo ir mover-se lentamente para a superfcie, em direo ao lcool, deixando aparecer uns pequenos filamentos.

Assim, podemos concluir que a molcula de DNA pouco solvel (pois no se dissolve facilmente) e muito pouco densa (porque dirigiu-se em direo ao lcool que j por si muito pouco denso).

Com a realizao desta atividade experimental ficamos ento a conhecer as tcnicas de extrao de DNA e a compreender todo processo necessrio.

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Bibliografia

http://www.notapositiva.com/trab_estudantes/trab_estudantes/biologia/biologia_trabalh os/extraccaodna.htm http://pt.scribd.com/doc/62898653/RELATORIO-1-Extracao-de-DNA http://biologiageologia11b.blogspot.pt/2008/09/relatrio-extraco-de-dna-de-clulas.html http://www.dbio.uevora.pt/LBM/Foco/Extraccao/Extraccao_DNA.html http://pt.scribd.com/doc/30280669/Relatorio-de-Extracao-de-DNA http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia/cito5.php http://www.icb.ufmg.br/lbcd/grupo1/grupo1.html

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