Comparacin entre el mtodo de recuento de colonias (UFC) para Staphylococcus aureus coagulasa positiva, y coliformes con la tcnica PetrifilmTM

Mauricio Nez, Anamara chaparro.

Resumen
El estudio microbiolgico de los alimentos es realizado para controlar la calidad del mismo, ya que el mayor riesgo que representa un alimento contaminado es la microbiota presente en este. El anlisis de quesos es un proceso estandarizado en la industria, este busca encontrar fallas en los procesos crticos de control de los alimentos. El estudio consiste en comparar dos mtodos de aislamiento de microorganismos en alimentos, con el objetivo de aislar S.aureus y E.coli se cultivaron inculos de muestras tomadas de un queso casero, se compararon los resultados entre la siembra en Agar Baird-Parker y Petrifilm, se encontraron mejores resultados y pruebas positivas claras en las laminas Petrifilm evidenciando que estas laminas son una manera practica, rpida y segura para aislar microorganismos en alimentos. Palabras clave: Petrifilm, Aislamiento, Cultivo, Alimentos, Agar, Microbiota, Colonias. _______________________________________________________________________ gelificante(agar) soluble en agua , en este caso es agar Baird-Parker Introduccin modificado, el cual despus de la inoculacin solidifica el medio y 1 La identificacin rpida y segura de promueve el crecimiento. Se buscan estafilococos en alimentos es una colonias tpicas pequeas de color materia de gran importancia en la negro con un halo purpura o violeta industria, el recuento de estos que evidencia una prueba de coagulasa microorganismos es usado para medir positiva, estas colonias se toman en la inocuidad y calidad de los productos cuenta para el recuento final de UFC/g alimenticios. Las laminas 3MTM o ml lo cual se dirige a un reporte de PetrifilmTM Staph Express Count Plate calidad donde se enuncian los son laminas de muestreo listas para resultados encontrados. usar que contienen un agente 2 El segundo mtodo usado en el 1 McMahon et al. 3M Petrifilm Staph reconocimiento y recuento de
Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Types of Meat, Seafood, and Poultry: Collaborative Study journal of aocac international vol. 86, No. 5, 2005
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Silbernagel et al. 3M Petrifilm Staph Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Dairy Foods: Collaborative StudyJournal of AOAC international VOL. 86, NO. 5, 2003

Staphylococcus aureus, es el recuento de UFC en el agar cromgeno BairdParker, en este medio se realiza una siembre en superficie inoculando 0,1ml de la muestra.
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La base de este agar se deben aadir Emulsin de Yema de Huevo y Potasio Telurito. Tambin se puede aadir Sulfametacina para inhibir el crecimiento de Proteus. Por la presencia del cloruro de litio y el Potasio Telurito se inhibe el crecimiento de microorganismos no deseados mientras que por la presencia del sodio piruvato y la Glicina se favorece el crecimiento de los Estafilococos. A su vez el potasio telurito combinado con la accin de la yema de huevo permite diferenciar los Estafilococos ya que el Staphylococcus aureus da colonias negras, por la reduccin del potasio telurito a teluro, rodeadas de un halo transparente debido a la actividad lecitinasa la cual degrada la lecitina presente en la yema de huevo.
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Con el objetivo de realizar un recuento de dichos microorganismos de usaron las lminas 3MTM Petrilm E.coli/Coliform Count Plate, estos medios de cultivos listos para su uso contienen el agente solidifcante soluble en agua (Agar), Bilis roja y cristal violeta como inhibidor e indicador principal, nutrientes esenciales, un indicador de produccin de la -Glucoronidasa y un inhibidor que permite un recuento fcil de las colonias. Las colonias tpicas de coliformes fermentadores son de color violeta, y presentan burbujas alrededor indicando produccin de CO2; En el caso de E.coli la produccin de la Glucoronidasa produce unas colonias purpura fermentadoras y productoras de CO2

Metodologa
1) 3MTM PetrifilmTM Staph Express Count Plate y 3MTM Petrilm E.coli/Coliform Count Plate El procedimiento de inoculacin para las lminas petrifilm es similar al de las siembras en placa: a. Rotulado, Pesado de la muestra (Queso) y diluciones necesarias antes de la inoculacin en el medio(10-1, 10-2 y 10-3) b. Inoculacin del medio de cultivo o lamina petrifilm con 1 ml de cada dilucin, por duplicado, e inoculacin de 0.1ml en superficie en Agar Baird-Parker.

En un anlisis microbiolgico de un alimento, se debe tener en cuenta la presencia y el numero de Coliformes presentes en la muestra tanto fecales como termo tolerantes o Escherichia coli.

Cultimed. Instrumentacion cientfico tcnica. Manual bsico de microbiologa (pag 62-63)

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H. Schraf L.A. Watterworth. Enumeration of heterotrophs, fecal coliforms and Escherichia coli in water: comparison of 3M Petrifilm plates with standard plating procedures. Volume 60, Issue 3, March 2005, Pages 335 342.

Colocar la lmina en una superficie nivelada, levantar la cobertura plstica y luego colocar la pipeta de forma perpendicular al medio, luego inocular 1ml de la muestra en el centro de la lmina.

Si no se presentan colonias despus de la incubacin, el recuento es 0 y el test termina

Dejar la cobertura plstica lentamente sobre la lamina sin dejarla caer para evitar que el inoculo se acumul y evitar la formacin de burbujas de aire

Incubar las lminas a una temperatura de 37 C por 24 horas para S.aureus. Incubar las laminas a una temperatura de 35 C por 24 horas para Coliformes y 48 horas para E.coli.

Usar el dispersor para aplicar presin sobre la lamina y diseminar el inoculo en una circunferencia

Contar las colonias negras con un halo violeta a azul oscuro para S.aureus. Contar las colonias color violeta con produccin de CO2 para Coliformes, y las colonias purpura con produccin de CO2 E.coli

Resultados y discusin de resultados:

Al observar la siembra de Staphylococcus aureus en cajas de Petri no se observaron colonias presuntivas, y solo fue posible realizar el recuento en la dilucin 10-2, mientras que al revisar las siembras en las lminas de petrifilm se identificaron colonias de Staphylococcus aureus en ambas diluciones siendo posible el conteo de las colonias. Tabla1: resultados Staphylococcus aureus BP PF -2 10 31 y 38 68 y 65 10-3 1y0 18 y 23 3 INFORME 3X10 UFC/g 7x102UFC/g

Al observar el crecimiento de coliformes totales, en petrifilm se evidencio crecimiento en el medio y fue posible realizar conteo de colonias presuntivas Tabla2: resultados coliformes totales y E.coli PF -2 10 7y8 10-3 2y0 INFORME 7X101UFC/g

Duplicado de coliformes en dilucin 10

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Duplicado de Staphylococcus aureus En dilucin 10-2

Duplicado de coliformes en dilucin 10
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Duplicado de Staphylococcus aureusEn dilucin 10

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Realizando una comparacin entre el mtodo de siembra en caja de Petri y en petrifilm, podemos afirmar que el petrifilm es un mtodo ms certero y efectivo, ya que el nmero de colonias en el caso de Staphylococcus aureus en caja de Petri no hubo colonias presuntivas porque no presentaban halo, mientras que en petrifilm obtuvimos mayor nmero de colonias y nos arroj si estas colonias eran coagulasa positiva con la presencia de un halo azul. Los resultados de petrifilm con respecto a coliformes totales, fue ptimo y adems se evidenci la presencia de E.coli por la produccin de CO2 con la aparicin de unas alas alrededor de la colonia.

Bibliografa
Cultimed. Instrumentacion cientfico tcnica. Manual bsico de microbiologa (pag 62-63) Silbernagel et al. 3M Petrifilm Staph Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Dairy Foods: Collaborative StudyJournal of AOAC international VOL. 86, NO. 5, 2003 O Pepe, G Blaiotta, F Bucci, M Anastas Staphylococcus aureus and Staphylococcal Enterotoxin A in Breaded Chicken Products: Detection and Behavior during the Cooking Process- Am Asoc Microbio i-, 2006 Ingham S.C.; Becker K.L.; Fanslau M.A. Comparison of the Baird-Parker Agar and 3M Petrifilm Staph Express Count Plate Methods for Enumeration of Staphylococcus aureus in Naturally and Artificially Contaminated Foods. Volume 66, Number 11, 1 November 2003 , pp. 2151-2155(5) H. Schraf L.A. Watterworth. Enumeration of heterotrophs, fecal coliforms and Escherichia coli in water: comparison of 3M Petrifilm plates with standard plating procedures. Volume 60, Issue 3, March 2005, Pages 335 342. J.H. Vail , R. Morgan , C.R. Merino , F. Gonzales abc b *c. , R. Miller and J. L. Ram Enumeration of Waterborne Escherichia coliwith Petrifilm Plates. Vol. 32 No. 1, p. 368-373. 2003
Turner, K.M.; Restaino, L.; Frampton, E.W. Efficacy of Chromocult Coliform Agar for Coliform and Escherichia coli Detection in Foods. Volume 63, Number 4, April 2000, pp. 539-541(3) Russell, Scott M. Comparison of the Traditional Three-Tube Most Probable Number Method with the Petrifilm, SimPlate, BioSys Optical, and Bactometer Conductance Methods for EnumeratingEscherichia coli from Chicken Carcasses and Ground Beef. Volume 63, Number 9, September 2000, pp. 11791183(5) Silk, Todd M.; Ryser, Elliot T.; Donnelly, Catherine W. Comparison of Methods for Determining Coliform andEscherichia coli Levels in Apple Cider. Volume 60, Number 11, November 1997 , pp. 1302-1305(4)
a b c

Conclusiones:
El mtodo de siembra en petrifilm es ms efectivo, ya que ahorra tiempo, logrando as un mayor seguimiento a las pruebas que se requieran analizar. Segn los resultados obtenidos y siguiendo la NTC 750 de 2009 podemos decir que este alimento es apto para el consumo, sin causar dao ya que cumple con los parmetros de control establecidos por dicha norma. Siendo mas confiable y verdico el resultado arrojado por el procedimiento realizado en petrifilm.