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Centrifugao A centrifugao uma operao utilisada para separao de componentes de diferentes densidades duma mistura fluida, sedimentando o companente

e de maior densidade que fica no fundo do tubo de ensaio, por ao da fora centrfuga a que fica sujeita a mistura, quando em movimento de rotao. No nosso caso, a primeira centriguao, a 2500 rpm, foi utilisada para separar os organelos de maior densidade que so os ncleos. Dez minutos depois (depois de ter sido decantada a soluo e assim separada os nucleos do resto da soluo) a soluo foi centrifugada outra vez, a 9000 rpm, a fim de se separar os segundos organelos de maior densidade que so as mitocondrias, sendo as mitocondrias o nosso campo de estudo. Nota: nao esquecer da aspiraao, mais um metodo de separaao de componentes de soluoes Homogenizao Foi utilisado um homogenizador Potter-Elvehjem (mais conhecido como Potter) para romper a membrana plasmatica das mitocondrias, este rompimento feito atraves da esmagaao das mitocondria pelas foras de ciisalhamento entre o tubo e o pistao rotativo.

Mtodo do biureto O mtodo se baseia na reao do reativo do biureto, que constitudo de uma mistura de sulfato de cobre e hidrxido de sdio com um complexante que estabiliza o cobre em soluo, sendo o tartarato de sdio o utilisado no nosso caso. O cobre, em meio alcalino, reage com protenas. O produto de reao apresenta duas bandas de absoro, uma em 270 nm e outra em 540 nm. Apesar da banda na regio de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do mtodo do biureto, a banda na regio de 540 nm a mais utilizada para fins analticos, porque diversas substncias, normalmente presentes na maioria dos meios analisados, absorvem na regio de 270 nm causando muita interferncia no mtodo. Apesar de ser rpido, utilizar reagentes de baixo custo e no apresentar grande variao da absortividade especfica para diferentes protenas este mtodo no muito sensvel, mesmo assim, o mtodo de biureto continua sendo recomendado para a determinao da concentrao de protenas totais em plasma sangneo pela Associao Americana de Anlises Clnicas. ABS Todas as substancias absorvem e transmitem luz e a luz que ela absorve e transmite uma caracterstica dessa substancia. Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida, absorvancia maxima.

O que se mede directamente no a quantidade de luz absorvida. S se poderia fazer isto se houvesse um detector junto a cada tomo, para ver se ele absorveu ou no o foto. O que se faz normalmente medir a luz que consegue passar, e no a luz que absorvida. Se um feixe de luz com intensidade Po, no nosso caso de 540 nm, incidido sobre a regio que contm os tomos capazes de absorver, aps passar pela regio, ele ter uma nova intensidade P, menor do que Po, pois uma parte da luz foi absorvida. A nova intensidade ento detectada. A intensidade de P depende da intensidade de Po, da concentrao dos tomos na regio, da distncia percorrida pelo feixe de luz, do comprimento da onda que incide e, claro, de que espcie so os tomos. A quantidade de radiao absorvida est relacionada com a concentrao do elemento de interesse na soluo. (nota: esta parte est muito detelhada, precisa de ser mais precisa em relao ao trabalho, mais resumida e concreta)

Detergente
A membrana das mitocondrias compostas principalmente por lipdos. A funo do detergente desestruturar as molculas da membrana ligando-se aos lipdos. Desta forma, as membranas sofrem ruptura e todo o contedo celular disperso na soluo. Nad+ A nicotina adenina dinucleosidica uma co-enzima que transporta electres de uma molcula para outra ao longo duma cadeia de reces redox ficando reduzida a NADH, um estado que rapidamente retorna ao estado oxidada NAD+ quando doa os electres. Na respirao ela transporte os electres disponibilizados pelo substrato energetico e transporta-os ate ao oxignio (o ultimo redutor na respirao) Glicose A gliclise o primeira fase dpo processo de respirao e consiste na degrdaa da glicose em duas molculas de piruvato, no entanto qualquer hidrato de carbono pode ser utilizado neste processo bioenergtico. -as mitocndrias do fgado no tem muita afinade com a glicose porque a glicose um substrato necessrio para rgos de processos bioenergticos rpidos que o caso dos msculos e do sistema nervoso, mas no do fgado Lactato O lactato obtido pela reduo do piruvato quando a clula no consegue utilizar o oxignio como o ultimo aceitador de electres. Este processo de obteno de lactato chama-se fermentao lctica Succinato So reage com o FAD+. Tambem obtido pela reduo do piruvato quando no h oxignio, so que este o processo de fermentao alcoolica