INTRODUCCIN En los procesos de anlisis clnicos que involucren directamente al tejido heptico, resulta de gran utilidad el determinar los

niveles sericos de Transaminasas , como lo son la alanina aminotransferasa (ALT TGP) y la aspartato aminotransferasa (AST TGO), ya que comparando los valores de actividad ALT v/s AST, es posible determinar el origen heptico, en su defecto cardiaco , al observar alteraciones en estos patrones enzimticos. Por otro lado , resulta muy til para diferenciar hepatitis alcohlicas de otras hepatitis agudas, esto relacionando AST/ALT: En las hepatitis alcohlicas(con necrosis) este ndice es generalmente mayor a 1 (AST aumentada por sobre ALT), mientras que en las hepatitis virales es generalmente menor a 1 (AST disminuida ante ALT). En fin cualquiera que sea el caso , la determinacin de estas enzimas adquiere importancia diagnstica cuando sus valores son enfrentados con valores de otras enzimas de similar origen tisular, permitiendo as completar un perfil enzimtico de rganos como el hgado. MTODO DE REFERENCIA Y DE RUTINA TGO (AST, ASPARTATO AMINOTRANFERASA) METODO DE IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA) Descripcin. La Aspartato aminotransferasa es una enzima que se encuentra localizada tanto a nivel citoplasmtico como mitocondrial, de all que se diga que es una enzima bilocular , se encuentra ampliamente distribuida en msculo esqueltico, rin , cerebro y principalmente en higado y corazn, donde esta en mayor concentracin.Cualquier alteracin en estos tejidos, se vera reflejado en un aumento en el torrente circulatorio de esta enzima, el cual ser directamente proporcional al dao tisular. En aquellos pacientes con afecciones hepticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo en aquellos casos de hepatitis con necrosis. Fundamento. La reaccin es catalizada por la TGO (AST), sta desplaza la reaccin hacia la formacin de Oxaloacetato que reacciona con la MDH (Malato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidacin del NADH medida a 340 nm, es directamente proporcional a la actividad de TGO en la muestra. En el medio de reaccin hay adems LDH (Lactato Deshidrogenasa) suficiente para consumir los cetocidos de origen endgeno, evitando as su interferencia. Reaccin. TGO Laspartato + 2oxoglutarato Oxalacetato + Lglutamato 1

Oxalacetato + NADH + H+ Lmalato + NAD+ MDH Muestra. Suero, Plasma (Heparinizado, EDTA). Muestras hemolizadas no se aceptan ya que poseen elevados niveles de AST dentro de los eritrocitos. Linealidad. Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340nm y 334 nm) 0.080 (365), diluir la muestra 1+ 4 con suero fisiolgico. Multiplicar el resultado por 5. La absorbancia inicial debe ser superior a 0.8 A. En caso de no serlo se puede estar en presencia de actividades enzimticas muy elevadas y obtener resultados errneos. Diluir la muestra y reprocesarla. Metodologa de Anlisis. *Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm. *Paso ptico: 1 cm. *Temperatura: 37C. *Medicin: Contra aire. Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse constante durante el desarrollo del test. Valores Normales. 37C (U/L) Hasta 37 hasta 31

Hombre Mujer Ventajas.

Simple y Rpido Desventajas. Resulta imposible o poco prctico modificar las mezclas reactivas preestablecidas. Sueros hemolizados dan valores falsamente aumentados. Los sueros con concentraciones de cetocidos endgenos elevados generan valores falsos elevados. Pacientes hemodializados o con hipovitaminosis u otras patologias asociadas con dficit de Piridoxal Fosfato (coenzima), generan valores falsamente disminudos. Consideraciones. 2

 A mayor temperatura se obtiene mayor sensibilidad , pero un menor rango de linealidad . La preincubacin con parte del reactivo es para evitar interferencia con cetoacidos endgenos del suero. El Piridoxal fosfato es una coenzima necesaria en la actividad de la TGO, por ello esta ltima se ve afectada en ausencia de la misma. ejemplo: pacientes hemodializados o con hipovitaminosis. Para evitar contaminacin de reactivos , usar pipetas nuevas y no intercambiar las tapas de los reactivos. MTODO DE RUTINA Y REFERENCIA. TGP (ALT, ALANINA AMINOTRANFERASA) METODO IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA) Descripcin. La alanina aminotranferasa es una enzima que tiene como nica localizacin el citoplasma , de ah que se le denomine unilocular. Su mayor actividad la presenta en el tejido heptico y la menor actividad en msculo esqueltico, corazn, rin, pncreas y eritrocitos (en ese orden). Por lo tanto la destruccin o cambio en la permeabilidad de membrana celular provoca la liberacin de ALT a la circulacin sangunea. Su aumento se debe principalmente a alteracin heptica (como colestiasis, hepatitis txicas o virales). En hepatitis viral el aumento de ALT precede a la aparicin de ictericia, si los valores estn aumentados por sobre 6 semanas, nos debe hacer pensar en una hepatitis activa o el comienzo de una hepatitis crnica. Fundamento. La reaccin catalizada por ALT esta desplazada hacia al formacin de piruvato, que reacciona inmediatamente con la LDH (Lactato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidacin del NADH, medida a 340 nm, es proporcional a la actividad de ALT en la muestra. El exceso de LDH en el medio es para consumir cetocidos de origen endgeno, evitando as su interferencia. Reaccin. TGP Lalanina + 2oxoglutarato Piruvato + Lglutamato Piruvato + NADH + H Llactato + NAD+ LDH Muestra. Suero, plasma heparinizado o EDTA. El oxalato , la heparina no inhiben la actividad enzimtica , pero pueden causar cierta turbidez.

La ALT es estable en suero durante 3 dias a temperatura ambiente y hasta una semana a 4C.En la orina se encuentra poca o ninguna actividad, por lo cual no se recomienda para el anlisis. Porcentaje de prdida de actividad. 10% 17%

Refrigerada Hasta 25C Linealidad.

Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340 nm y 334 nm) 0.080 (365 nm), diluir la muestra 1 + 4 con suero fisiolgico. Multiplicar el resultado por 5. La absorbancia inicial debe ser superior a 0.80 A. En el caso de no serlo se puede estar en presencia de actividades enzimticas muy elevadas y obtener resultados errneos. Diluir la muestra y reprocesarla. Valores de referencia. 37C (U/L) Hasta 40 Hasta 31

Hombre Mujer

Metodologa de anlisis. Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm. Paso ptico: 1 cm. Temperatura: 37C. Medicin: contra aire. Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse constante durante el desarrollo del test. Ventajas. Simple y Rpido. El uso de buffer TRIS nos permite que el NADH sea ms estable que en otros mtodos que usan fosfato. El piridoxal 5Fosfato(PP) es un activador ms efectivo de la ALT en buffer Tris que en el de fosfato. Este mtodo tiene una alta especificidad , carencia de interferencias, alta linealidda, reproductibilidad y rapidez. Desventajas. Sueros hemolizados generan valores falsos elevados, debido a que el eritrocito contiene 3 a 5 veces ms ALT que el suero. Sueros con concentraciones de cetocidos endogenos elevados generan valores falsamente elevados. Consideraciones. Muestras de pacientes hemolizadializados o con hipovitaminosis u otras patologas asociadas

con dficit de Piridoxal Fosfato generan valores falsamente disminuidos. A mayor temperatura , mayor sensibilidad, pero menor rango de linealidad . Una absorvancia inicial bajo 0,800 D.O., estando reactivos en condiciones, indica una muestra con muy alta actividad de TGP. Por lo tanto es necesario diluir la muestra. Cuando la tcnica se realiza como ensayo de punto final, la reaccin presenta un efecto de retroinhibicin por piruvato, este disminuye la linealidad. No es conveniente modificar la formulacin de un fabricante luego de adquirir los reactivos. MTODOS ALTERNATIVOS. Mtodo de Reitman y Frankel. Esta es una reaccin acoplada con dinitrofenilhidrazina (DNPH). Es una tcnica colorimtrica y cuantitativa. Reaccin. Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato Piruvato + DNPH Complejo formado por PirDNPHidrazona. La lectura se hace a 505 nm. Es una reaccin de punto final. Es necesario un tiempo de retardo de la reaccin con cetoglutarato, lo que permite el consumo de cetoglutarato endgeno y todo otro proceso que consuma NADH. Este retardo no debe ser inferior a 90 segundos. Muestra. Suero. Mtodo de Wrodlewski y LaDue. Este es un mtodo enzimtico cuantitativo. Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato LD Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+ Esta es una medicin del consumo de NADH a 340 nm. Es de uso muy frecuente. La diferencia con el mtodo de referencia es que este mtodo requiere un tiempo de retardo no inferior a 90 segundos antes de la reaccin con cetoglutarato para permitir el consumo de cetoglutarato endogeno y todo otro proceso que consuma NADH. Adems se recomienda un perodo de preincubacin de 10 minutos con el cofactor piridoxal5fosfato. Muestra. Suero 5

MTODO ALTERNATIVO. (mtodo propuesto por la AACC) A propuesto un mtodo para los laboratorios pequeos de Qumica Clnica, el cual se diferencia del de la IFCC en que: 1. Se emplea un solo reactivo para evitar el procedimiento en dos pasos. 2. La reaccin se lee despus de 150 segundos , durante los 180 segundos siguientes. 3. No se agrega Fosfato de Piridoxal. BIBLIOGRAFIA Ttulo: Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico Autor : Instituto de Salud Pblica de Chile Editorial: El Instituto Santiago Chile 1994 Ttulo: Qumica Clnica Autor: Anderson, Shauna C. Cackyne, Susan. Editorial Interamericana. Mexico 1995 Ttulo: Qumica Clnica Mtodos. Autor: Pesce, Amadeo J. Kaplan, Lawrence A. Editorial Panamericana B.A 1991 Argentina.