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TABLA DE CONTENIDO
I.
Resumen ............................................................................................................................. 3
II. Introduccin ...................................................................................................................... 3 III. Material y Mtodo ............................................................................................................ 4 IV. Resultados .......................................................................................................................... 6 V. Discusin ............................................................................................................................ 8 VI. Conclusin ......................................................................................................................... 8 VII. Literatura citada ............................................................................................................... 8
4 Por otro lado la adquisicin y absorcin de adecuados niveles de inmunoglobulina del calostro es esencial para la salud del neonato. Mximos niveles de IgG srica en neonatos lactantes es alcanzado a las 06 horas (Pachari M, 2008), bajando luego estos valores de 24,52 a 8,8 mg/mL, considerndose concentraciones sobre los 10 mg/mL indicadores de transferencia pasiva exitosa. Las concentraciones de IgG declinan despus de 2 a 5 semanas y hay un marcado incremento entre los 1 y 2 meses, hecho que indica que el sistema inmune del neonato ha comenzado a madurar (Wernery, 2001). La concentracin de IgG puede ser estimada mediantes varias tcnicas, incluidas la determinacin de protenas totales, globulinas, turbidomtrico de sulfato de zinc, precipitacin en sulfato de sodio, aglutinacin en latex, coagulacin en glutaraldehido, ELISA, inmunoturbidomtrico e inmunodifusin radial simple (Hutchison, Salman, Garry, Johnson, Collins, & Keefe, 1995). De todas estas tcnicas, la ms utilizada para la determinacin de concentraciones de IgG es la de inmunodifusin radial simple (SRID), para algunos estudios estos kits fueron elaborados en los mismos laboratorios, estandarizados y calibrados con IgG de bovino y equino disponibles comercialmente. Luego se utilizaron kit estandarizados disponibles comercialmente, una de las desventajas de esta tcnica, es que es considerada muy pocas veces, por ser muy costosa, adicionalmente al largo tiempo asociado para generar resultados, que generalmente es de 24 a 48 horas, pero la mayor ventaja de esta tcnica, es que permite la cuantificacin de las concentraciones de IgG, siendo esta la ms recomendada para trabajos de investigacin que busquen cuantificar las concentraciones de IgG (Weaver, Tyler, Marion, Wallace, Nagy, & Holle, 2000). El calostro de vaca para la suplementacin de camlidos sudamericanos se elige por diversas razones. Este es muy accesible, se han encontrado muchos virus en comn que infectan tanto camlidos como vacunos, y se puede evidenciar la presencia de IgG de vaca en neonatos alimentados con calostro de vaca, hasta los dos meses de edad. Es posible tambin la utilizacin de calostro de cabra para la alimentacin de cras de camlidos (Al-Busadah, 2007), se ha monitoreado la absorcin de IgG del calostro de vacunos y camlidos mediante pruebas de inmunodifusin radial, llegndose a la conclusin que es factible la utilizacin de calostro de vaca (Jorgensen D. , 1998). La administracin de calostro bovino y caprino puede ser considerada en camlidos neonatos cuando no es posible conseguir calostro de camlido. Sin embargo es necesaria la evaluacin de la utilizacin de las mismas para combatir infecciones (AlBusadah, 2007). Las concentraciones de IgG en el calostro de camellos, bovinos y caprinos son de 116 000, 9 800 y 9 600 mg/dL respectivamente. Neonatos alimentados con calostro de vaca y cabra se mostraron saludables despus de la administracin del mismo, siendo la eficiencia aparente de absorcin de 35,1% para calostro de camello, 32,1% para calostro de bovino y 31,3% para calostro de cabra(Al-Busadah, 2007). El presente estudio busca demostrar la utilidad del calostro de vaca en cras de camlidos sudamericanos y su posible efecto protector contra enfermedades infecciosas a temprana edad, en condiciones de campo. III. Material y Mtodo III.1. Ubicacin El trabajo de investigacin se llev a cabo en las instalaciones del Centro de Investigacin de Camlidos Sudamericanos (CICAS) La Raya de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco. Ubicado a 14 28 42,59 de latitud sur y 71 01 41,55 de longitud oeste, a una altura que vara
5 de 4 000 a 5 000 msnm. La Raya, est clasificada como una zona de vida sub alpina muy hmeda con precipitaciones cclicas con niveles mximos en enero y mnimos en los meses de junio a agosto. III.2. Poblacin y muestra Se tuvo una poblacin de 300 cras de alpaca raza huacaya machos, considerando que la poblacin de madres al inicio de la paricin fue de 600 animales, y la proporcin de nacimientos machos/hembras (50/50), habiendo 300 cras machos y 300 cras hembras. As mismo para la investigacin se utiliz una muestra de 20 animales (cras de alpaca de raza Huacaya), provenientes de la punta de paricin (Yanamayo) que consta de 600 madres al inicio de la paricin, cabe sealar que se utilizaron solo machos y en el nmero indicado de cras debido a la poca disponibilidad de los mismos y al material de investigacin escaso y, a que las hembras son protegidas por ser futuros vientres. III.3. Asignacin de tratamientos Para la obtencin de la muestra se tuvo en cuenta, la aleatoriedad con que se realizaron los partos diarios, se obtuvieron las 20 cras machos segn fueron naciendo, el orden en que se tomaron en cuenta para el tipo de calostro al que tuvieron acceso fue de acuerdo a una tabla aleatoria generada en el programa estadstico Minitab Inc. versin. 14 (Anexo 1). Esto con la finalidad de evitar sesgos en el estudio. Una vez determinado el orden aleatorio de los animales, diez de las veinte cras (grupo 2) recibieron calostro de vaca las primeras 36 horas de vida, con restriccin del calostro de su madre, las seis primeras horas se les brind 10 ml de calostro de vaca cada media hora, luego cada 2 horas hasta las 36 horas; las otras 10 cras (grupo 1) tuvieron acceso libre al calostro de su madre. III.4. Obtencin y proceso de muestras de sangre La extraccin de sangre de las cras de alpaca fue obtenida por venipuncin yugular a las 48 horas de nacimiento; 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105 y 120 das. Para tal efecto se utiliz agujas para extraccin de sangre de 21 G x 1 y tubos con separador de suero debidamente rotulados. La obtencin del suero de cras de alpaca se hizo por centrifugacin de la sangre (3500 rpm por 6 minutos), luego de obtenido el suero se congel a -18 C hasta el anlisis en la placa de inmudifusin radial, previo descongelamiento de las muestras de suero con dos horas de anticipacin. III.5. Determinacin de concentraciones de IgG en suero Para la determinacin de la concentracin de IgG en el suero de las cras de alpaca se aplic el principio de la inmunodifusin radial simple que fue desarrollado por trabajos de Fahey y McKelvey (1965), Mancini et al (1965). Que indican que hay especificidad de las protenas en suero y otros fluidos, y dependen de la reaccin de cada una de estas con su anticuerpo especfico. Cuando los pozos que contienen los anticuerpos contra IgG son llenados con el antgeno (suero de cras), hay una precipitacin y se desarrollan anillos que indican la reaccin despus de las 10 a 20 horas a temperatura ambiente. El dimetro del anillo (mm) y el logaritmo (base 10) de la concentracin proteica son relacionadas en una tendencia lineal. Utilizando Tablas de valores de referencia para la determinacin cuantitativa de dimetros de placas de inmunodifusin radial (Anexo 1 y 2), la concentracin de muestras desconocidas puede ser medida. III.5. Anlisis de datos El presente trabajo de investigacin fue Analtico- Descriptivo. El anlisis de
6 los datos obtenidos (concentraciones de IgG en cras de alpaca y peso al nacimiento) se realiz con el uso del paquete estadstico Minitab Inc. versin 14, previa verificacin de los datos obtenidos de campo y gabinete. El anlisis de los datos se hizo a base de estadstica descriptiva, calculando las principales medidas de tendencia central, y elaborando una curva de tendencia con los niveles de IgG alcanzados; adems se realiz el anlisis de regresin polinomial entre las variables edad de la cra y concentracin de IgG en suero de las mismas, utilizndose para tal fin el siguiente modelo polinomial: mg/dL, concentracin elevada debido a la buena absorcin de IgG del calostro de la madre; as mismo estas concentraciones inician una cada para llegar hacia el da 75 con un valor de 527,523 365,332 mg/dL, lo que nos indica que la inmunidad conferida por la madre mediante el calostro ya est quedando sin efecto. A partir de esta edad la concentracin inicia su aumento, llegndose a tener valores de 1368,578 198,822 mg/dL hasta el final del estudio (120 das), estabilizndose as con los valores de concentracin de IgG en suero en animales adultos.
Figura 1: Valores de IgG de camlido para el grupo 1
Dnde: Y: Variable respuesta (Concentracin de IgG en suero). b0: Intercepto. b1: Coeficiente de regresin. X: Variables independiente (edad de la cra). Error residual (0,01). IV. Resultados IV.1. Concentracin de IgG de camlido en grupo 1 En la tabla 2 se observa las principales medidas de tendencia central y de dispersin desde los 2 hasta los 120 das de edad con respecto a los niveles de IgG (mg/dL) de camlido, para el grupo 1. Donde se obtuvo 3165,237 mg/dL y 1368,578 mg/dL de IgG respectivamente como valores promedio, observndose adems que a los 75 das este valor es mnimo con una concentracin de 527,523 mg/dL de IgG de camlido. En la figura 1 se observa la tendencia normal de las concentraciones de IgG de camlido para cras de alpaca que tuvieron acceso normal al calostro de su madre, ntese que a las 48 horas de vida se tiene un valor promedio de 3165,2371060,395 Se traza la lnea de tendencia que se ajuste mejor a los valores obtenidos para el grupo 1; ajustndose estos datos a una lnea de tendencia polinomial de grado 5, segn el modelo lineal: y = -5E-06x5 + 0,001x4 - 0,182x3 + 9,627x2 244,5x + 3596 Donde: y : Concentracin de IgG (mg/dL). x : Edad (das). En la figura 2 se observa la lnea de regresin para los resultados del grupo 1, realizndose para dicha regresin el anlisis de varianza (tabla 3), la cual result altamente significativa (p0,01), indicando eso que la lnea de tendencia propuesta se ajusta correctamente a los valores encontrados.
IV.2. Concentracin de IgG de bovino en grupo 2 En la tabla 3 se observa las principales medidas de tendencia central y de dispersin de las concentraciones de IgG de bovino en suero de cras de alpaca desde los 2 hasta los 120 das de edad para el grupo 2, donde se aprecia que los valores decrecen de 646,738 286,572 mg/dL a 0 mg/dL a los 75 das de edad, para permanecer con este valor hasta finalizado el estudio (120 das), lo cual nos indicara que las IgG de bovino tienen un tiempo aproximado de vida entre 45 a 60 das en suero de cras de alpaca. En la figura 3 se observa la lnea de regresin para la edad y concentracin de IgG de bovino en suero, observndose una tendencia a disminuir alcanzndose valores de 646,738 mg/dL a los 2 das y 24,606 mg/dL a los 60 das, a partir de ah se observa valores de 0 mg/dL de los 75 a los 120 das de edad, realizndose para dicha regresin el anlisis de varianza (tabla 4), la cual resulto altamente significativa (p0,01), lo cual nos indica que la lnea de tendencia se ajusta correctamente a los valores encontrados. Se traz la lnea de tendencia que se ajuste mejor a los valores obtenidos de concentracin de IgG de bovino (mg/dL) para el grupo 2; ajustndose estos datos a una lnea de tendencia polinomial cbica, segn el modelo lineal:
Elaboracin propia.
IV.3. Mortalidad neonatal En la tabla 1 se observa los porcentajes de mortalidad por grupos, evidencindose que en el grupo 2 la mortalidad es superior al grupo 1, evidencindose que el nivel protectivo del calostro de vaca no es suficiente para proteger a las cras de alpaca.
Tabla 1: Mortalidad neonatal por grupos
N N animales muertos 10 10 20 4 1 5
Mortalidad 20 5 25
8 V. Discusin Los valores promedio de IgG en suero obtenidos de cras de alpaca del grupo 1 fueron de 3165,2371060,395 mg/dL a las 48 horas, siendo mayores a los obtenidos por Garnica y Bravo (2001) ,Weaver y otros (2000a y 2000b) , que obtuvieron valores de 2652,87759 mg/dL, 16551197 mg/dL y 17621153 mg/dL respectivamente; estas diferencias posiblemente tengan origen a que Garnica y Bravo (2001) realizaron su investigacin en otra zona y el nmero de animales utilizados fue mayor, mientras que Weaver y otros (2000a y 2000b) utilizaron la tcnica de turbidomtrico de sulfato de sodio, siendo esta prueba poco sensible a comparacin de la cuantificacin que se logra con la inmunodifusin radial en placa. As mismo los valores mnimos de 1534,615 mg/dL fueron superiores a los encontrados por Garmendia y Otros (1987) de 500 mg/dL, pero valores mximos 4451,330 mg/dL fueron relativamente ms bajos que los hallados por los mismos investigadores, siendo este de 5300 mg/dL, para los dos casos tambin fueron a las 48 horas, esta diferencia posiblemente se deba a que para la realizacin de este trabajo elaboraron sus propias placas de inmunodifusin, muy aparte del nmero de animales utilizados que fue mayor. La concentraciones de IgG de bovino en suero de las cras de alpaca alimentadas solo con calostro de vacuno, de los das 2, 15 y 30 fueron de 646,738286,572 mg/dL, 277,441110,501 mg/dL y 126,880116,175 mg/dL respectivamente, siendo estos inferiores a los reportados en cras de camello por Al-Busadah (2007) con valores promedio de 2400220 mg/dL, 110070 mg/dL y 80060 mg/dL para los mismos das, se debera a la especie utilizada. VI. Conclusin Se evidencia que la cras alimentadas con calostro de vaca no lograron niveles adecuados de IgG (>1000 mg/dL), por otro lado tambin se determin que el tiempo de vida media de las IgG bovino en cras de alpaca es de aproximadamente 60 das, no logrando proteger de manera adecuada contra infecciones neonatales. VII. Literatura citada Al-Busadah, K. A. (2007). Efficacy of Feeding Bovine and Caprine Colostrum to Neonatal Camel. Journal of Animal and Veterinary Advances, 6(1), 5-7. Ameghino, E., & De Martini, J. (1991). Mortalidad en crias de alpacas. Boletin de Divulgacin del Instituto Veterinario de Investigaciones Tropicales y de Altura. 71-80. Garnica, J., & Bravo, W. (2001). Absorcion de inmunoglobulinas G calostral en alpacas crias durante la vida perinatal. 9(1), 95102. Herrera, A. (2008). Las Inmunoglobulinas G de los camlidos y sus aplicaciones. 8. Lima: San Marcos. Hutchison, J. M., Salman, M. D., Garry, F. B., Johnson, L. W., Collins, J. K., & Keefe, T. J. (1995). Comparison of two commercially available single radial immunodiffusion kits for quantitation of llama immunoglobulin G. J. Vet. Diagn. Invest.(7), 515-519. Jorgensen, D. (1998). Cow colostrum, an alternative suplement for the newborn llama. Llama life. Pachari M, G. S. (2008). Tiempo de absocin de IgG en alpacas. Tesis de Grado. Tacna. Ramirez, A. (1989). Enfermedades infecciosas en camelidos sudamericanos. 85-105. Roitt, I. (1994). Essential immunology. 448. Tizar, I. R. (2001). Inmunologa Veterinaria (Sexta edicin ed., Vol. I). Texas: McGraw Hil. Weaver, D. M., Tyler, J. W., Marion, R. S., Wallace, L. M., Nagy, J. K., & Holle, J. M. (15 de Febrero de 2000). Evaluation of assay for determination of passive transfer status in neonatal llamas and alpacas. JAVMA, 216(4), 559-563. Wernery, U. (2001). Camelid Inmunoglobulins and Their Importance for the New-Born - A Review. J. Vet. Med. (48), 561-568.
ANEXOS
10
Alpaca Alpaca Alpaca Vaca Vaca Alpaca Vaca Alpaca Alpaca Alpaca Vaca Alpaca Vaca Vaca Alpaca Alpaca Vaca Vaca Vaca Vaca
ANEXO 2
Registro de asignacin de tipo de calostro Nro. Cdigo madre Fec. Nac. Cdigo cra Fec. Nac. 10-mar 12-mar 12-mar Hora Tipo calostro Observaciones Ninguna Ninguna Neumona (02-05-09) Ninguna Enterotoxemia (20-04-09) Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Coccidiosis (18-04-09) Neumona (21-04-09) Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Enterotoxemia (10-04-09)
1 H0500 2 H0001 3 H0034 4 H0379 5 H0147 6 H0904 7 H0491 8 H0611 9 H0171 10 S0009 11 H0084 12 H0881 13 H0522 14 H0152 15 H0172 16 H0329 17 H0348 18 H0283 19 H0037 20 H0177
12-mar 12-mar
16-mar
Mar-04 H3113
Mar-98 H3123
16-mar
21-mar
08:30 Vaca
08:00 Alpaca
Ene-05 H3124 Ene-04 H3127 Ene-01 H3126 Mar-96 H3129 Mar-04 H3133 Feb-01 H3134 Ene-04 H3136 Ene-98 H3138 Feb-01 H3139 Ene-04 H3140 Dic-03 H3142 Ene-04 H3144
09:30 Alpaca 11:50 Alpaca 08:50 Vaca 12:00 Alpaca 10:14 Vaca 11:05 Vaca
09:57 Alpaca 09:00 Alpaca
* Elaboracin propia.
Nro.
1 H0500 H3104 2 H0001 H3106 3 H0034 H3108 4 H0904 H3111 5 H0611 H3123 6 H0171 H3124 7 S0009 H3127
10:30 2141,903 1842,546 1550,443 1550,443 1612,816 10:15 1534,615 1842,546 1550,443 1026,672 09:15 4451,330 1842,546 1175,342 1550,443 09:30 4449,595 1550,443 1075,423 1026,672 11:50 2830,162 1550,443 1550,443 1026,672 12:00 4451,330 1723,288 1550,443 1550,443 09:57 2839,726 1026,672 795,004 392,103 220,870 795,004 583,481 583,481 392,103
220,870 1026,672 1612,816 2240,800 220,870 1026,672 583,481 583,481 809,130 584,098 940,800 678,300 940,800
09:00 3212,409 1842,546 1550,443 1026,672 1026,672 1026,672 1923,575 2240,800 2240,800
ANEXO 5 Tabla de valores de referencia para la determinacin cuantitativa de dimetros de placas de inmunodifusin radial de IgG de bovino
ANEXO 6 Tabla de valores de referencia para la determinacin cuantitativa de dimetros de placas de inmunodifusin radial de IgG de camlido
Elaboracin propia.
g. l. 5 80 85
CM 301 064
Sig.
Tabla 4: Medidas de tendencia central para valores de IgG de bovino en suero de cras de alpaca para el grupo 2
Medida de tendencia central
2d
15 d
30 d
45 d
60 d
75 d
90 d
105 d
120 d
Media(mg/dL) Media ajustada (mg/dL) Error tpico Desviacin estndar Varianza de la muestra Mnimo(mg/dL) Mximo(mg/dL)
Elaboracin propia.
Tabla 5: Anlisis de varianza para la regresin edad vs concentracin de IgG de bovino en grupo 2
g. l. 3 62 65
CM 23 402
Sig.