PROTENAS

En 1838 el Qumico holands Gerardus Johannes Mulder (18021880) denomin protenas a este grupo de sustancias; estableci que la palabra protena se refera a un compuesto que estaba en el origen de sustancias muy distintas y, por tanto, poda ser considerado como un compuesto primario. La palabra protena proviene del griego PROTOS = primero, sustancia original de la que estn hechos los seres vivos. Emil Fischer (18521919), premio Nobel de Qumica en 1902, descubri el enlace peptdico. Las protenas son los componentes orgnicos ms importantes de las clulas animales, constituyendo alrededor del 50% de su peso seco. Estas macromolculas se emplean como componentes estructurales de las clulas y tejidos, intervienen en todos los aspectos de la estructura y funcin celular.

Asimismo, son de principal importancia en la nutricin humana y animal. Estn ampliamente distribuidas en los alimentos de origen animal y vegetal (carnes rojas, cereales, leche y productos lcteos, aves, huevos, pescado, legumbres, nueces, frutos secos, etc.)

Las protenas se encuentran entre los nutrientes ms importantes, junto con los lpidos y los carbohidratos. Adems de su funcin energtica (1 g de protena proporciona 4,1 Kcal al organismo), dada su naturaleza nitrogenada, son necesarias para la sntesis de compuestos propios del organismo implicados en la estructura de las membranas junto con los lpidos, como glicoprotenas en funciones de lubricacin y como nucledos que posibilitan la sntesis de las protenas propias del organismo, as como la formacin de los cromosomas y la divisin celular. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 protenas distintas.

Los seres vivos utilizan a las protenas como materia prima para su desarrollo y control de los procesos qumicos propios del metabolismo. La ingestin adecuada de protenas favorece, entre otras cosas, la formacin de musculatura, dientes, pelo, uas, sangre, la oxigenacin de las clulas, transporte de desechos del metabolismo, etc. Las protenas son las biomolculas con mayor nmero de funciones en el organismo.

I. CONCEPTO.-

Son polmeros lineales de aminocidos, unidos por enlaces peptdicos, de elevado peso molecular; contienen C, H, O, N y en algunos casos S, P y I. En la molcula de protena los aminocidos se unen siguiendo un orden especfico. La composicin elemental de la mayora de las protenas es la siguiente: C = 50% H = 6 8% O = 20 23% N = 15 18% S = 0 4%

Una protena est constituida a menudo por varias cadenas polipeptdicas unidas entre s por ENLACES NO PEPTDICOS.

II. IMPORTANCIA BIOLGICA.

Las protenas constituyen alrededor del 50% del peso seco de los tejidos y no existe proceso biolgico alguno que no dependa de la participacin de este tipo de sustancias. En funcin de la cantidad de aminocidos esenciales (Isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptfano y valina), se establece la calidad de los distintos tipos de protenas. Aquellas que contienen cantidades suficientes de cada uno de los aminocidos esenciales son protenas de alto valor biolgico y, cuando falta un aminocido esencial, el valor biolgico de esa protena disminuye. El organismo no puede sintetizar protenas si tan slo faltara un aminocido esencial. Todos los aminocidos esenciales se encuentran presentes en las protenas de origen animal (huevo, carnes, pescados y lcteos), por tanto, estas protenas son de mejor calidad o de mayor valor biolgico que las de origen vegetal (legumbres, cereales y frutos secos), deficitarias en uno o ms de esos aminocidos Son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario. Las protenas desempean un papel fundamental en los seres vivos y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Importantes en los mecanismos de defensa que involucran las globulinas de la sangre y en la coagulacin sangunea mediante la protrombina y el fibringeno. En la regulacin del metabolismo por hormonas como el glucagn y la insulina.

III. ESTRUCTURA.3.1 Estructura Primaria.Est constituida por la sucesin de aminocidos unidos por enlaces peptdicos que constituyen la base de la estructura, pero no son los nicos, porque existen cadenas polipeptdicas unidas entre s por enlaces secundarios como puentes de H, puentes disulfuro (SS), etc. La estructura primaria indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte. Ejm.: Ribonucleasa (consta de una cadena de 124 aminocidos); Insulina de buey (tiene 2 cadenas: A con 21 aminocidos y B con 30 aminocidos).

3.2 Estructura Secundaria.-

Corresponde a la disposicin de la secuencia de los aminocidos en el espacio. Se refiere a la disposicin espacial que adopta la cadena peptdica a medida que se sintetiza en los ribosomas. La cadena no es plana; el polipptido posee una estructura helicoidal o de -hlice, con enlaces de H o disulfuro. La estructura es estable debido al gran nmero de enlaces de H entre los grupos CO y NH de los enlaces peptdicos. La forma de la cadena vara segn la naturaleza de la protena. Pauling y Corey han establecido que la mayor parte de las protenas tienen una estructura de hlice como el colgeno y elastina.

Configuracin de -hlice

Algunas protenas fibrosas tienen configuracin , que es una estructura en forma de hoja plegada formando un cierto ngulo como sucede en la queratina. En esta configuracin , los aminocidos no forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag, denominada disposicin en lmina plegada.

3.3 Estructura Terciaria.-

Est representada por los sper plegamientos y enrollamientos de la estructura secundaria, constituyendo formas tridimensionales geomtricas muy complicadas que se mantienen por enlaces fuertes (puentes disulfuro entre dos cisteinas) y otros dbiles (puentes de H; fuerzas de Van der Waals; interacciones inicas e interacciones hidrofbicas), originando una conformacin globular, lo cual facilita la solubilidad en agua. Ejm.: escleroprotenas, ubiquitina, globulinas.

3.3 Estructura Cuaternaria.- Son protenas complejas en la que existe una organizacin de dos o
ms cadenas de polipptidos que forman una protena de muchas sub-unidades (protmeros) unidas por enlaces dbiles; a stas se les llama protenas oligomricas. En esta estructura se unen, mediante enlaces dbiles, varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero. El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, a muchos como la cpside del virus de la poliomielitis, que consta de 60 unidades proteicas. Otros ejemplos son los siguientes:

a) Fosforilasa: tiene 2 sub-unidades idnticas, las cuales son inactivas por separado. Tiene
estructura cuaternaria homognea.

b) Hemoglobina: protena oligomrica con estructura cuaternaria heterognea; posee dos

protmeros idnticos con cadena y dos protmeros idnticos con cadena . Las cuatro cadenas se adaptan conjuntamente y luego adoptan una disposicin aproximadamente tetradrica para constituir la estructura cuaternaria.

Izq.: Estructura de la hemoglobina. Las subunidades proteicas se encuentran sealadas en rojo y azul, y los grupos hemo de hierro en verde. Der.: estructura de la hemoglobina mostrando los protmeros de cadena y .

c) Triptfano sintetasa: La unidad biolgicamente activa es un hetero-tetrmero compuesto de

dos subunidades y dos subunidades , cataliza la biosntesis del triptfano.

d) Hexoquinasa: es la enzima de la levadura, posee dos protmeros.

Cambio conformacional de la Hexoquinasa de levadura al catalizar su reaccin. La flecha muestra el sitio activo.

e) Lactato deshidrogenasa (LDH, deshidrogenasa lctica): formada por la asociacin de cinco

cadenas peptdicas, su presencia es mayor en el corazn, hgado, riones, msculos, glbulos rojos, cerebro y pulmones.

Estructura de las protenas (esquema global)

IV. CLASIFICACIN.- Existe una gran diversidad de protenas, por ello existen diversos criterios para
clasificarlas:

4.1 En funcin a la solubilidad (criterio fsico):

a) ALBUMINAS: son solubles en agua o en soluciones salinas diluidas; se coagulan con calor y precipitan en soluciones salinas saturadas. Contienen abundante azufre. Las ms importantes se encuentran en la clara de huevo (ovoalbmina), en el suero de la sangre (seroalbmina) y en la leche (lactoalbmina).

Molcula de albmina albergando seis cidos palmticos

b) GLOBULINAS: insolubles en agua pero solubles en soluciones salinas diluidas como cloruro de sodio; pueden ser de origen vegetal o animal, se encuentran en los tejidos blandos animales y en la sangre; en frutos y semillas. Ejm: seroglobulinas (sangre), ovoglobulina, inmunoglobulinas, globulina fijadora de corticosteroides.

Molcula de globulina fijadora de corticosteroides (Transcortina)

c) PROLAMINAS: insolubles en agua y alcohol absoluto, solubles en solucin acuosa alcohlica (70 a 80%). Son de origen vegetal. Ejm.: zena (maz), gliadina (trigo), hordena (cebada).

d) GLUTELINAS: Solubles en cidos y bases diluidos, insolubles en agua y soluciones salinas diluidas. De origen vegetal. Ejm.: glutenina (trigo), orizanina (arroz).

e) HISTONAS: solubles en agua y cidos diluidos, presentan reaccin alcalina; se encuentran en el ncleo de las clulas eucariotas, en timo, pncreas, riones, leucocitos, etc. Son las protenas responsables del empaquetamiento del ADN, forman parte de alrededor de la mitad de la masa de la cromatina. Hay 5 clases principales de histonas: H1, H2A, H2B, H3 y H4, todas ellas contienen una gran cantidad de residuos cargados positivamente (Arg y Lys). Contienen azufre.

Estructura molecular de una Histona

d) PROTAMINAS: son protenas bsicas (por su contenido en ARG y LIS), no se encuentran libres sino unidas a cidos nucleicos (nucleoprotenas) y slo se detectan en el ncleo celular. Se encuentran en los fluidos seminales; son solubles en agua y amoniaco diluido, fcilmente cristalizables, de peso molecular menor que las histonas.

4.2 En funcin a su composicin (criterio qumico):

a) PROTENAS SIMPLES (holoprotenas) : formadas slo por aminocidos. Ejm.: albminas,

ubiquitina (proteasa intracelular formada por 53 aminocidos).

b) PROTENAS CONJUGADAS (heteroprotenas): contienen, adems de la cadena

polipeptdica, un componente no aminoacdico, orgnico o inorgnico llamado grupo prosttico, que puede ser un azcar, un lpido, un cido nucleico o simplemente un in inorgnico. De acuerdo a la naturaleza del grupo prosttico se subdividen en: Glucoprotenas: son heterosacridos nitrogenados, se les llama tambin mucopolisacridos. Ejm.: mucinas (saliva) protegen y lubrican la mucosa gstrica; hormonas anterohipofisiarias.

Nucleoprotenas: tienen cidos nucleicos como grupo prosttico. La ms antiguamente conocida es la del timo; otras se encuentran en el pncreas, el bazo, los riones, la levadura de cerveza, etc., otra nucleoprotena es la ribonucleasa. Los virus estn constituidos en parte por nucleoprotenas.

Fosfoprotenas: Su grupo prosttico es el cido fosfrico combinado con el hidroxilo de algunos aminocidos que lo contienen, en especial la serina. No se coagulan por efecto del calor, pero s por el de los cidos. Se encuentran entre ellas la casena de la leche y la vitelina de la yema de huevo.

plasma.

Lipoprotenas: tienen lpidos como grupo prosttico. Ejm.: lipoprotenas del

Porfirinoprotenas: Contienen un metal (hierro, magnesio, cobre, etc.) al que deben sus colores caractersticos. Estn unidos a un grupo prosttico y constituyen los pigmentos respiratorios de los animales y vegetales. Ejm.: Hemoglobina (Fe), Mioglobina (hemo), clorofiloprotena (Mg) y ciertas enzimas como los citocromos (citocromo a que contiene Cu, citocromo b con un grupo hierro-protoporfirina y citocromo c con un grupo hemo).

Citocromo C

Esquema tridimensional de la mioglobina. El crculo rojo corresponde a un grupo hemo

Estructura bsica de las hemoprotenas o cromoprotenas

4.3 En funcin a su forma molecular:

a) Protenas Globulares.- presentan una estructura mas o menos esfrica y compacta. Pertenecen a este grupo las prolaminas, gluteninas, albminas, insulina, prolactina, hidrolasas, oxidasas, transferasas. b) Protenas Fibrosas o Fibrilares.- son protenas resistentes y en su mayora insolubles en agua. Pertenecen a este grupo las siguientes: fibringeno, miosina, actina, troponina y tropomiosina; colgeno, queratina, fibrona.

V.

FUNCIONES.- de acuerdo con su funcin biolgica:

5.1 Protenas estructurales: Forman parte de clulas y tejidos a los que confieren apoyo, fuerza y proteccin estructural. Otras confieren elasticidad y resistencia a rganos y tejidos. Dentro de estas podemos citar, el colgeno que tiene una resistencia a la tensin muy alta, se encuentra en tendones y cartlago, el cuero es colgeno casi puro; la elastina presente en el tejido conectivo de los vertebrados, es capaz de extenderse en dos dimensiones; la queratina de la piel, pelo y uas; la espectrina presente en la membrana de los eritrocitos. Las araas y los gusanos de seda segregan fibrona para fabricar las telas de araa y los capullos de seda respectivamente. Las histonas, forman parte de los cromosomas que regulan la expresin de los genes.

Fibrona vista al microscopio electrnico

5.2 Protenas de transporte: Como su nombre lo indica, transportan sustancias o biomolculas tanto en el interior como en el exterior de la clula, se encuentran en el plasma sanguneo o en msculos. Ejemplo: hemoglobina que capta oxgeno y lo transporta a los tejidos de los vertebrados; mioglobina transporta oxgeno en los msculos; lipoprotenas que transportan

lpidos desde el hgado a otros tejidos; hemocianina transporta oxgeno en la sangre de los invertebrados.

Molcula de hemocianina

5.3 Protenas de defensa: Protegen al organismo contra posibles ataques de agentes extraos, entre las que se consideran los anticuerpos (inmunoglobulinas) de la fraccin gamma globulnica de la sangre; las protenas denominadas interferones cuya funcin es inhibir la proliferacin de virus en clulas infectadas e inducir resistencia a la infeccin viral en otras clulas; el fibringeno y la trombina de la sangre importantes en el proceso de coagulacin; las mucinas tienen efecto germicida y protegen a las mucosas. 5.4 Protenas hormonales: Algunas protenas colaboran en la regulacin de la actividad celular o fisiolgica. Se sintetizan en un tipo particular de clulas pero su accin la ejercen en otro tipo. Ejemplo, la insulina y glucagn que regulan el metabolismo de la glucosa; la somatotropina que es la hormona del crecimiento; la calcitonina que regula el metabolismo del calcio. Otras protenas regulan la expresin de ciertos genes, participando en los procesos genticos a travs de las nucleoprotenas y las ciclinas.

Molcula de somatotropina

5.5 Protenas catalticas o enzimas: Permiten aumentar la velocidad de las reacciones metablicas. Casi todas las reacciones qumicas de las biomolculas orgnicas en las clulas estn catalizadas por enzimas. Dentro de las clulas son variadas y se encuentran en cantidad considerable para satisfacer adecuadamente sus necesidades. La gran mayora de protenas son enzimas. Ejemplo: proteasas, lipasas, amilasas, fosfatasas, etc. 5.6 Protenas contrctiles: Son protenas capaces de modificar su forma, dando la posibilidad a las clulas o tejidos que estn constituyendo de desplazarse, contraerse, relajarse, razn por la cual se encuentran implicadas en los diferentes mecanismos de motilidad. Las protenas ms conocidas de este grupo son la actina y la miosina en el tejido muscular; tubulina y dineina en los microtbulos de los flagelos y cilios
Molcula de tubulina

5.7 Protenas de nutricin y reserva: necesarias para el crecimiento del embrin en las semillas como las de trigo, maz, arroz, etc. Ejemplo: ovoalbmina y casena (protenas nutritivas); gliadina y hordena (sirven como reserva de aminocidos para el desarrollo del embrin; ferritina (almacena Fe en los tejidos animales).

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Molcula de ferritina

5.8 Protenas de transferencia de electrones: Son protenas integrales de membrana, comunes en las mitocondrias y cloroplastos cuya funcin se basa en el transporte de electrones desde un donador inicial hasta un aceptor final con liberacin y aprovechamiento de energa. Como ejemplo se citan a los Citocromos que forman parte de la cadena respiratoria. 5.9 Existen otras protenas cuyas funciones son ms bien exticas, como las protenas anticongelantes que se encuentran en el plasma sanguneo de los peces antrticos y que protegen a la sangre del peligro de congelacin. Son producidas por algunos animales, insectos, plantas y bacterias que les permiten sobrevivir en ambientes a temperaturas bajo cero. La monelina, es una protena extrada del fruto de Doscoreophylium camensi (baya de Nigeria), planta trepadora que se encuentra en frica y Madagascar, en zonas forestales. El poder edulcorante de la monelina es aproximadamente 2,000 veces el de la sacarosa. Las temperaturas elevadas mayores a los 70C, los pH extremos y el fro ocasionan una descomposicin y prdida del poder edulcorante. La Resilina, es una protena que se encuentra en las alas de los insectos, posee propiedades elsticas casi perfectas.

VI.

DESNATURALIZACIN Y RENATURALIZACIN DE LAS PROTENAS.La desnaturalizacin de una protena se refiere a la ruptura de los enlaces dbiles (puentes de H, enlaces hidrfobos y electrostticos) que mantenan sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservndose solamente la primaria, la molcula se desordena. En estos casos las protenas se transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan hasta formar compuestos fibrosos e insolubles en agua, la desnaturalizacin va acompaada de una precipitacin de la protena y hace que sta pierda sus propiedades biolgicas, como la actividad enzimtica por ejemplo. Los agentes que pueden desnaturalizar a una protena pueden ser: calor excesivo; radiaciones; sustancias que modifican el pH; agitacin molecular; cidos, bases, detergentes, disolventes orgnicos, urea, etc. El efecto ms visible de este fenmeno es que las protenas se hacen menos solubles o insolubles y que

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pierden su actividad biolgica. La mayor parte de las protenas experimentan desnaturalizacin cuando se calientan entre 50 y 60C; otras se desnaturalizan tambin cuando se enfran por debajo de los 10 a 15C. Por lo general la desnaturalizacin es irreversible pero en algunos casos puede ser reversible y la protena se renaturaliza (renaturalizacin) cuando se hace desaparecer al agente desnaturalizante, recuperando su estructura nativa. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de protenas.

VII.

ANLISIS Y CRITERIOS DE PUREZA DE LAS PROTENAS.Se refiere a los mtodos que permiten poner en evidencia o identificar las distintas protenas presentes en una preparacin biolgica y demostrar que se puede obtener una protena nica. Se aplican los siguientes mtodos: 7.1 Mtodos Fsicos: Electroforesis de zona: separa las protenas manifestndose por medio de bandas coloreadas, se lleva cabo sobre acetato de celulosa o gel de poliacrilamida. Electrofocalizacin: electroforesis de zona que emplea tampones; se usa una mezcla que hace variar el pH en forma continua. La protena se manifiesta sobre el gel de acuerdo a su pHi. Centrifugacin analtica: en donde una protena nica debe dar una cspide simtrica. Cromatografa en columna: permite la separacin de protenas en una mezcla biolgica. 7.2 Mtodos Inmunolgicos: Mtodo de doble difusin: se manifiesta mediante lneas de precipitacin, se realiza en una placa de Petri con gel agar.

Inmunoelectroforesis: electroforesis que emplea antgenos.

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Fases de una inmunoelectroforesis (IEF).

VIII. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LAS PROTENAS.8.1 Reaccin de Biuret:

El reactivo de Biuret est formado por una disolucin de sulfato de cobre en medio alcalino, ste reconoce el enlace peptdico de las protenas mediante la formacin de un complejo entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos, lo que produce una coloracin rojo-violeta.

8.2 Reaccin de Millon:

Reconoce residuos fenlicos, o sea aquellas protenas que contengan tirosina. Las protenas se precipitan por accin de los cidos inorgnicos fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.

8.3 Reaccin Xantoproteica:

Reconoce grupos aromticos, o sea aquellas protenas que contengan tirosina o fenilalanina, con las cuales el cido ntrico forma compuestos nitrados amarillos

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Mag. Q.F. Margarita L. Geng Olaechea

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