Universidad Autnoma de Coahuila

Escuela de Ciencias Biolgicas

Unidad Torren

PRACTICA # 7: Investigacin de V. cholerae en Alimentos.

Alumnos
Cynthia Nallely Aza Ramrez Alma Michell Lpez Ramrez Vctor Manuel Lpez Saldaa Jos Emmanuel Loredo Torres Diana Montes Gonzlez Christians Osiris Navarro Cabrera Melany Scarlett Ortega Kermedy

Q.F.B. Mara Alejandra Chavira Ziga Docente

Fecha de realizacin 12 de Noviembre del 2012 Torren Coahuila, de Noviembre del 2012.

Objetivo. Conocer el fundamento de los medios de cultivo que se utilizan para el aislamiento de Vibrio cholerae a partir de alimentos. Identificar las colonias de Vibrio cholerae en los distintos medios selectivos utilizados. Aplicar la metodologa para el aislamiento de Vibrio cholerae a partir de alimentos. Interpretar la presencia de Vibrio cholerae en alimentos.

Introduccin. Es un bacilo gram negativo curvo, de 0.5 a 1 m de longitud que posee un flagelo polar. Produce oxidasa a diferencia de las enterobacterias, y fermenta glucosa, lo que lo distingue de otros gneros como Pseudomonas. Crece pticamente cuando las condiciones del pH, salinidad y temperatura son las adecuadas (5). La estructura antignica de V. cholerae es similar a la de otras enterobacterias, con un antgeno flagelar H y un antgeno somtico O. El primero no distingue entre un vibrin patgeno y otros miembros no patgenos de la familia, pero el antgeno O permite la diferenciacin; solo V. cholerae portador de los antgenos somticos O1 y O139 se asocia con el clera (4). V. cholerae tiene gran inters clnico debido a la gravedad de los procesos patolgicos en los que interviene. Presenta tres componentes antignicos que son los responsables de su gran virulencia. Son los siguientes: El antgeno somtico O. El antgeno flagelar H, que es comun a todas las cepas de V. cholerae. La exotoxina, que es una enterotoxina de naturaleza proteica y sobre la que se va desencadenar el principal efecto patgeno del clera. Una adhesina que va a permitir a V. cholerae, adherirse a la pared intestinal. No todos los vibriones de V. cholerae son capaces de formar cuadros graves. Para que esto sea asi, es necesario que esta penetre por va oral a travs del agua o alimentos contaminados con el bacilo (sobre todo productos marinos crudos).

Adems deber de ser capaz de eludir el medio acido del estomago, hecho que sucede cuando se ingieren ms de 100 millones de grmenes, circunstancia que puede darse fcilmente en casos de epidemias, sobre todo si se tiene en cuenta que se puede encontrar aproximadamente 1 milln de grmenes por mililitro de agua contaminada (2). Existen cuatro posibles enfoques del abordaje de laboratorio del aislamiento de las especies de Vibrio de muestras clnicas. 1. Utilizar procedimientos normales y no realizar ningn esfuerzo especifico para buscar especies de Vibrio. 2. Utilizar procedimientos y medios de siembra normales, y buscar colonias oxidasa positivas. 3. Incorporar agar tiosulfato-citrato-bilis-sacarosa (TCBS) como placa extra para los coprocultivos y tambin para otras muestras probables, como las heridas, sangre, ojo y odo. 4. Utilizar otros procedimientos especiales para aumentar el aislamiento de V. cholerae, V. parahemolyticus y otras especies de Vibrio (3). Para su identificacin debe de realizarse la prueba de la oxidasa a partir del cultivo en agar sangre de carnero al 5% u otro medio sin azucares fermentables ( p. ej, la lactosa del agar MacConkey o la sacarosa del agar TCBS). La razn de esto es que la fermentacin de un hidrato de carbono produce acidificacin del medio y una prueba de la oxidasa falsa negativa si el pH del medio es inferior a 5.1. La fiabilidad de los sistemas de identificacin comerciales no ha sido validada en lo que se refiere a la identificacin de este microorganismo, aunque la mayora de ellos figuran en la base de datos de algunos sistemas (1).

Desarrollo Experimental. 1. 2. 3. 4. Se peso 25 gr de la muestra, nuestra muestra fueron almejas. Se homogenizo con 225 mL de agua peptonada alcalina. Se incubo de 6 a 8 hrs a 35 C. Se hizo una resiembra en agar MacConkey incubando de 18-24 hrs a 35 C. Confirmando las colonias lactosa (-). 5. Tambin una resiembra en agar TCBS incubando de 18-24 hrs a 35 C. Confirmando las colonias lactosa (+). 6. Se hizo la identificacin bioqumica de Vibrio cholerae. 7. Por ltimo la confirmacin con antisuero V. cholerae O1.

Resultados. Al momento de hacer la confirmacin de colonias lactosa (+) y lactosa (-) no hubo crecimiento alguno de colonias, por tal motivo no se hicieron las experimentaciones posteriores como la identificacin bioqumica y la tipificacin.

Discusiones. En el caso de la muestra posiblemente no hubo crecimiento debido a que era un alimento congelado y la temperatura necesaria para su crecimiento va desde los 10 a 37 C. Su pH quizs no era el adecuado para su crecimiento ya que debe de tener un pH alcalino para poder desarrollarse. Tambin puede ser posible que la muestra no haya tenido demasiada exposicin y por eso no haber indicios de crecimiento.

Conclusiones. Se concluye que la muestra utilizada para la investigacin del microorganismo Vibrio cholerae no presento ningn desarrollo microbiano en los agares TCBS y MacConkey por ende no se presento ningn microorganismo del genero Vibrio, y con esto se dice que el alimento utilizado en la realizacin de esta prctica no contiene bacterias de dicho genero.

Bibliografa. 1. A. Forbes Betty. 2009. Diagnostico Microbiolgico. Editorial Mdica Panamericana. pg. 375. 2. Ausina R. Vicente, Moreno. G. Santiago. 2006. Tratado SEIMC de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Medica. Editorial Mdica Panamericana. pg 369. 3. Granados P. Raquel, Villaverde P. Mara del Carmen. 2003. Microbiologa. Editorial Paraninfo. pg. 121. 4. Koneman Elmer. Allen Stephen. 2008. Diagnostico Microbiolgico. Editorial Mdica Panamericana. pg. 393. 5. Romero C. Ral. 2007. Microbiologa y Parasitologa Humana. Editorial Mdica Panamericana. pg. 847.