UNIVERSIDAD CESAR VALLEJO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA HUMANA

Laboratorio Clnico

Alumno: Cisneros Quereval, Luis

Ciclo: V

Grupo: 10

Mdulo: 17

TRUJILLO - 2012

DETERMINACIN DE LDH EN SUERO

I.

Fundamento Terico:

La LDH (lactato deshidrogenasa) es una enzima, localizada exclusivamente en el citoplasma de la clula, que transfiere H+(deshidrogenasa) y cataliza la oxidacin reversible de L-lactato a piruvato. Tiene un PM de 140000 daltons. Este enzima est compuesto por 4 cadenas polipeptdicas de dos tipos: H y M. Se diferencian por el contenido y secuencia de aminocidos y pueden combinarse para formar 5 tetrmeros (isoenzimas), separables por electroforesis. 1 La subunidad M, se encuentra principalmente en el msculo esqueltico (Muscle) e hgado. 2 La subunidad H, se encuentra principalmente en el corazn (Heart). Pueden aislarse diferentes formas moleculares en el mismo tejido o en tejidos distintos. A estas diferentes formas moleculares las denominamos isoenzimas de la LDH. Sus isoenzimas conocidas son: LD1, LD2, LD3, LD4, LD5. Aunque la elevacin es inespecfica, esta prueba es til para confirmar infarto al miocardio o pulmonar cuando se combinan otros datos. Por ejemplo, la LDH permanece levada durante un tiempo ms prolongado que la CK en el infarto al miocardio. Empieza a elevarse a las 12-24 horas de producido el IMA, alcanza su pico a las 48-72 horas y permanece elevada hasta el sptimo o dcimo da. Por todo lo anterior en el presente informe se explicar cul es el proceso para determinar la cantidad de LDH en suero. Siendo los valores de referencia para la tcnica con reactivo nico a 25, 120-240 U/L.

II.

OBJETIVOS: Determinar los niveles de LDH Relacionar los valores obtenidos con los normales de LDH en suero para llevar a cabo la interpretacin clnica de los resultados.

III.

Materiales y mtodos

Espectrofotmetro 340nm Reactivo nico: 4 partes de reactivo A y 1 parte de reactivo B a. Reactivo A: Solucin de buffer Tris, pH 7,2 conteniendo piruvato y cloruro de sodio. b. Reactivo B: Solucin conteniendo NADH Pipeta automtica de 10-100ml Pipetas de 1.0, 10.0 ml Gotero Agua destilada Muestra de Suero Cronmetro Bao mara 25C Tubos de ensayo 15x125mm

PROCEDIMIENTO:

a) En una cubeta mantenida a temperatura de trabajo agregar 1 mLde reactivo A ms 20 uL de muestra. b) Pre incubar unos minutos. c) Agregar reactivo B, mezclar inmediatamente d) Leer la absorbancia a los 30segundos, al minuto, 2 minutos y 3 minutos. IV. Resultados: LDH: 1/2 minuto: 0.742 1 minuto: 0.735 2 minutos: 0.726 3 minutos: 0.715 Longitud de onda: 366 Factor: 11324 LDH=(A/min) x Factor U/L RESULTADO FINAL LDH: 102 UI/ Valores de referencia 120-240 U/L

Valor de LDH en mujer de 23 aos LDH: 102 U/L V.

CONCLUSIONES: Los valores calculados de LDH durante la presente prctica estn dentro de los rangos normales lo que nos indicara que no hay alteraciones como IMA, miopatas, traumatismos musculares, etc en caso de estar elevada.

DETERMINACIN DE GOT EN SUERO

I.

Fundamento terico

La Aspartato Aminotransferasa (AST) es una enzima de localizacin mitocondrial y citoplasmtica que cataliza la transferencia reversible del grupo amino desde el aspartato al D - cetoglutarato. El contenido hstico de AST, de mayor a menos concentracin, Cardaco. Heptico. Msculo esqueltico. Rin. Cerebro. Pncreas. Bazo. Pulmn. Eritrocitos.
La aspartato aminotransferasa (= AST= glutmico oxalactico transaminasa = GOT) se localiza sobre todo en la mitocondria y est presente en otros rganos, adems del hgado, como son, en orden de frecuencia, el miocardio, msculo esqueltico, riones, cerebro, pncreas, pulmn, leucocitos y eritrocitos. Por el contrario, la alanina aminotransferasa (= ALT= glutmico pirvico transaminasa = GPT) se localiza fundamentalmente a nivel citoslico en el hepatocito, lo que explica su mayor especificidad. Ambas estn presentes en suero en concentraciones inferiores a 30-40 UI/l, aunque el valor considerado como normal vara entre laboratorios, y se debera ajustar segn sexo e ndice corporal, presentando tambin algunas diferencias tnicas. Tiene valor clnico en un infarto agudo de miocardio, por lo tanto su valor mximo se alcanza a las 24 horas tras el infarto, y tiende a bajar en 3 a 4 das si la lesin cardiaca cede. Si persiste elevada es que el infarto est progresando a peor. Por todo lo anterior en el presente informe se explicar cul es el proceso para determinar la cantidad de creatinina srica.

II.

OBJETIVOS: Determinar cuantitativamente los niveles de GOT. Relacionar los valores obtenidos con los normales de GOT srica para llevar a cabo la interpretacin clnica de los resultados.

III.

Materiales y mtodos

Espectrofotmetro 505 nm Agua destilada Sustrato GOT: Solucin con 100mM de aspartato y 2 mM de -cetoglutarato en buffer fosfatos 100mM, pH 7,4. Reactivo 2,4-DNFH: Solucin conteniendo qmmol de 2,4DNFH en cido clorhdrico 1 mol/L Diluyente para enzimas: Solucin de hidrxido de sodio 4 mol/L Pipeta automtica de 10-100ml Pipetas de 1.0, 10.0 ml Muestra de Suero Cronmetro Tubos de ensayo 15x125mm Bao mara a 37C IV. PROCEDIMIENTO:

a) En 02 tubosde ensayo agregar 05 mL de sustrato y llevar a bao maria por 5 minutos. b) Al tubo 1 agregar 100 uL de agua destilada y al tubo 2 100 ml de suero. c) Mezclar por agitacin suave e incubar 30 minutos. d) Agregar a cada tubo de ensayo 0,5 mL de 2,4 DNFH y mezclar e) Llevar a bao maria 5 minutos mas f) Agregar 5 ml de diluyente de enzimas, mezclar y retirar del bao maria. g) Leer la absorbancia a los 2 minutos

V.

Resultados:
GOT D: 0, 322 B: 0, 361 D-B: 0, 049 segn curva de calibracin equivale a 12 U/L

Valor de GOT en mujer de 25 aos GOT: 12U/L

Valores de referencia <= 12 U/L

VI.

CONCLUSIONES:

Los valores determinados cuantitativamente en la presente practica estn dentro del rango normal lo que nos descarta hepatopata, miocardiopatas o lesiones musculares en caso de estar elevada.