Universidade Estadual de Cincias da Sade de Alagoas Pr-Reitoria de pesquisa e ps-graduao.

Especializao Fsica Mdica Aula: interao da radiao com tecidos biolgicos Professora: Dra. Maria Tereza de Arajo Colaborador: Francisco de Assis Martins Gomes Rego Filho Nome: Sabrina Arajo da Silva Tcnicas de Bioimagens
Caractersticas

Espectroscopia de Espalhamento Elstico (ESS)

Ocorre quando o feixe de luz sofre espalhamentos elsticos nicos ou mltiplos o que implica que a luz retorna com a mesma energia dos ftons incidentes. A extenso do efeito de espalhamento depende da relao entre o comprimento de onda da luz e o tamanho da partcula espalhadora.

A P L I C A O E S

Tem aplicaes clnicas com uso de espectroscopia em leses de cabea e pescoo, como em casos de ndulos linfticos de metstases cervical (imediatamente ex vivo), cncer sseo na mandbula (in vitro) e leses displsicas orais (in vivo).

Espectroscopia de caminho diferencial (DPS):

Caractersticas

Tcnica minimamente invasiva, til para determinar propriedades pticas intrnsecas in vivo. Usa espalhamento elstico, mas com caminho do fton fixo, profundidade de penetrao do fton fixa e medida absoluta de absorvedores. O sinal investigado combina informaes acerca da morfologia intracelular, da bioqumica celular e propriedades microvasculares. O sistema consiste de um espectrmetro de reflexo difusa baseado em fibra ptica (fibra bifurcada para iluminao e coleta) e com uma lmpada de tungstnio como fonte de luz branca. Uma outra fibra usada para coletar a luz refletida de forma difusa at um segundo espectrmetro. Cada espectrmetro registra um espectro com escalas de comprimento de onda levemente diferentes. A subtrao das duas medidas seleciona a luz superficialmente espalhada.

Aplicaes

Determinao das propriedades pticas superficiais da mucosa oral in vivo e de tecido de mama in vivo.

Espectroscopia do Infravermelho Prximo (NIR):

Caractersticas

Absoro e Transmisso de luz no NIR em tecidos biolgicos oferece informaes acerca da concentrao da hemoglobina (oxy e deoxy-hemoglobina). A luz no NIR penetra mais nos tecidos comparado com outros comprimentos de onda, a absoro molecular menor e, portanto a sensibilidade no alta.

A P L I C A E S

Sendo usado em diagnstico mdico, farmacutico e pesquisas de combusto. O uso da microscopia NIR em cincia biomdica tem sido proposto para distinguir diferentes biomolculas provando a vibrao de suas ligaes qumicas e usando esse padro molecular e sub-molecular para definir e diferenciar patologias de amostras sadias, bem como, distinguir vrias qualidades e graus de neoplasias em tecidos humanos.

Caractersticas

Espectroscopia de Raman
Muito utilizada na fsica e na qumica para estudar modos vibracionais e de baixas freqncias em um sistema, facilitando a caracterizao e estrutura qumica de molculas em uma amostra. Baseia-se em espalhamento inelstico (perda ou ganho de energia) de luz monocromtica, usualmente de um laser na regio do visvel, infravermelho prximo ou ultravioleta prximo. A espectroscopia Raman considerada como uma tcnica alternativa ou complementar para bipsia, anlises patolgicas e qumicas em muita tecnologia mdica. O sinal gerado por espalhamento Raman muito fraco e dificulta um diagnstico, pode ser complementado combinado com espectroscopia do infravermelho e infravermelho prximo.

A p l i c a e s

Estudos clnicos das reas de pescoo e cabea.Ferramenta de diagnstico para oncologia caracterizando mudanas malignas iniciais. Leses da mucosa oral, mostrando claramente as variaes entre diferentes camadas celulares. Tcnica especfica e altamente sensvel para demonstrar mudanas biolgicas em carcinognese de Barrett (esfago).

Caractersticas

Microscopia de Reflectncia Confocal (CRM)

Aplicaes Utilidade clnica em Oftalmologia imagem da crnea. Substncia fluorescente intravenosa usada para angiografia ou angioscopia da rea vascularizada da retina e da iris.Identificao in vivo de mudanas celulares e intracelulares no epitlio da orofarngea. indicado para estudos de materiais espessos, sem colorao prvia. Permite o detalhamento de estruturas subcelulares que no apresentam limite de resoluo compatvel ao da microscopia de luz fluorescente convencional, como microtbulos, elementos fibrilares do citoesqueleto e elementos finos da matriz celular. Caractersticas

Ferramenta de imageamento no invasiva que permite bipsia ptica de tecidos em nvel celular.A tcnica CRM difere da microscopia convencional j que ela usa um ponto da fonte de luz para iluminar um pequeno dimetro dentro do tecido. Essa tcnica fornece informaes detalhadas do epitlio em profundidades de 0.1 a 0.5 mm. um forte diferenciador entre contraste nuclear e drmico e melhora a deteno de tumores. Usando um agente de contraste, imagem confocal pode ser coletada especificamente de estruturas nucleares com pouco interferncia da vizinhana, resultando em melhoramentos de 1000 vezes o contraste nuclear/drmico.

um sistema que permite a captao no invasiva de fluorescncia e bioluminescncia in vivo e in vitro e a conseqente medida de parmetros relacionados atividade celular, expresso gnica e monitoramento da progresso de doenas.

Imageamento por Fluorescncia

Aplicaes A microscopia por fluorescncia uma tcnica chave no diagnstico clnico (por exemplo, imunologia, patologia, microbiologia, citogentica) e em ambientes de pesquisa. A microscopia por fluorescncia confocal, em particular, tem se tornado uma ferramenta essencial central ao estudo da dinmica estrutural e molecular de clulas vivas. A fluorescncia permite tcnicas de processamento de imagem tais como TIRF,FRET, FLIM, FLIP e FRAP. A microscopia por fluorescncia tambm importante na identificao de minerais fluorescentes, contaminantes e impurezas na cincia de materiais, geologia, inspeo de semicondutores e proteo ambiental.

Caractersticas

Microendoscopia
aplicaes Pode ser usado como guia para cirurgias, bipsia ou simplesmente como inspeo de grandes reas de mucosa com suspeita de leso. Fornece acesso ao estado in situ da margem epitelial quando corta-se clulas escamosas de carcinoma.

O tecido examinado in situ com uma magnitude de 60x at 1000x. Detalhes dos tecidos, clulas e ultra-estruturas celulares podem ser observadas para detectar-se padres especficos de patologias inflamaes, metaplasias, displasias e malignidades. Um microendoscpio (5.5 mm de dimetro e 23 cm de comprimento) anexado a um sistema com cmera de vdeo com sada para um monitor e impressora de fotos. Usa-se a substncia Azul de Metileno.

Tomografia por Coerncia ptica (OCT)

Aplicaes

Caractersticas

Usa luz para determinar sees transversais da anatomia em meios trbidos do tipo tecido vivo. Tem imagens semelhantes ultrassonografia, mas usa luz no lugar de som. A alta resoluo espacial da OCT permite bipsia ptica no invasiva in vivo e fornece informaes de diagnstico localizado e imediato. As imagens de OCT so formadas dividindo-se o feixe de luz em dois, um dos quais direcionado para a amostra de tecido e o outro para um espelho de referncia. A luz refletida da amostra combina-se com a luz refletida pelo espelho de referncia e detectada formando um sinal de interferncia somente quando os comprimentos dos caminhos da amostra e da referncia so casados dentro de uma curta distncia denominada comprimento de coerncia da fonte de luz.

Detectar reas de inflamao, displasia e cncer Nasofaringite, Orofaringite e Laringite. Distinguir leses em cordas vocais acoplado a um microscpio ptico visualiza leses de cncer microinvasivo que viola a integridade da membrana. Oftalmologia Leses da retina e glaucoma Cardiologia Diagnsticos de doenas coronrias.

Microscopia de Polarizao (MP)

Aplicaes

Caractersticas Explora as propriedades da luz polarizada para identificar e caracterizar a estrutura e propriedades de materiais. Utiliza-se um microscpio de luz polarizada onde polarizadores so inseridos para selecionar apenas um plano da luz polarizada (PPL). So dois polarizadores chamados de polarizador e analisador. Os polarizadores situam-se entre a fonte de luz e o condensador e entre a objetiva e a ocular. Os polarizadores selecionam apenas um plano de direo de vibrao de ondas luminosas.

A tcnica pode ser usada qualitativa e quantitativamente em cincia de materiais, geologia, qumica, biologia, metalurgia e medicina clulas musculares estriadas, espermatozoides, paredes celulares, amido, colgeno.

Caractersticas Microscopia Eletrnica (ME) Aplicaes uma importante tcnica para determinar tamanho e forma de estruturas cristalinas e amorfas; inorgnicas e biolgicas.

Tem como base a interao de eltrons com a matria. uma importante tcnica para determinar tamanho e forma de estruturas cristalinas (composio das partculas) e amorfas; inorgnicas e biolgicas. O comprimento de onda do eltron, variando entre 0,1 e 1nm, fornece informaes de resoluo atmica (organelas e estruturas celulares). Princpios bsicos: eltrons tm propriedades ondulatrias (Louis de Broglie) e campo magntico pode ser usado como lentes (Bush).

Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET ou TEM)

Aplicaes

Caractersticas

O MET um dos principais mtodos de anlise em uma vasta gama de campos cientficos, tanto em cincias fsicas quanto biolgicas.

A imagem formada diretamente a partir da impresso do feixe de eltrons na tela de observao, aps a passagem pela amostra. Os eltrons emitidos so absorvidos pelos tomos do ar, ento, um tubo inteiro entre a fonte de eltrons e o detector, mantido sob vcuo. Devido ao pequeno comprimento de onda dos eltrons, o limite de resoluo do MET 0,0002 m, sendo maior do que o de MEV.

Caractersticas

Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

Aplicaes Pode fornecer imagens tridimensionais de objetos relativamente grandes, como vermes e insetos, quanto de clulas livres, como tecidos animais e vegetais, embries, fragmentos geolgicos em anlises de granulometria e textura de solos.

Os eltrons so emitidos termionicamente a partir de um ctodo (filamento) de tungstnio ou hexaboreto de lantnio (LaB6) e acelerados atravs de um nodo, sendo tambm possvel obter eltrons por efeito de emisso de campo. O feixe de eltrons, o qual normalmente tm uma energia que vai desde algumas centenas de eV at 100 keV, focalizado por uma ou duas lentes condensadoras, em um feixe com um ponto focal muito fino, com tamanho variando de 0,4 a 0,5 nm. Este feixe passa atravs de pares de bobinas de varredura e pares de placas de deflexo na coluna do microscpio. A interao entre o feixe de eltrons e a amostra resulta na emisso de eltrons secundrios, eltrons retroespalhados, eltrons Auger, raios-x Bremstralung, raios-x caractersticos, radiao eletromagntica na regio do infravermelho, do visvel e do ultravioleta, fnons alm de causar aquecimento da amostra.

Caractersticas

Microscopia Eletrnica de Tunelamento Quntico

Aplicaes Pode ser usado no vcuo e tambm pode ser usado no ar, gua, fluidos, temperaturas prximas de zero grau kelvin e at algumas centenas de graus Celsius.

Obtm imagens de tomos e molculas, utilizando-se uma agulha microscpica na qual se aplica uma tenso eltrica. Permite medir as propriedades fsicas dos objetos analisados e estudar as foras entre molculas e tomos, e observar as estruturas em escala atmica. O microscpio capaz de obter imagens numa escala atmica de 210-10 m ou 0,0000000002 m, sendo usado na manipulao individual de tomos, acompanhamento de reaes qumicas, reverso de ons produzida pela remoo ou adio individual de eltrons e molculas. O fluxo dos eltrons por efeito tnel, por isso o nome tunelamento.

Microscopia Eletrnica de Fora Atmica (AFM)

Aplicaes

Caractersticas

O AFM possui vrias vantagens em comparao a um microscpio eletrnico de varredura(MEV), o AFM fornece uma imagem tridimensional da superfcie diferentemente do microscpio eletrnico que faz uma projeo bidimensional ou uma imagem bidimensional de uma determinada amostra. Investigaes de no apenas materiais condutores mas tambm isolantes, pois o AFM no utiliza corrente de tunelamento para a formao das imagens. Anlise de qualquer tipo de material.

composto basicamente por uma pequena ponta delgada, que pode ser de silcio (SiO2 ou Si3N4), diamante, etc., que varre a superfcie de interesse nas direes x, y e z. Assemelha-se ao MET, mas apresenta um feixe laser sobre a agulha. Permite uma menor agressividade sobre a amostra e a deteco de superfcies, como por exemplo, de uma bactria viva. Tambm possvel avaliar a estrutura atmica de biomolculas.