Você está na página 1de 98

INDICE BIOMEDICINA Caracterizacin molecular de cepas y vectores de Trypanosoma cruzi del Estado de Veracruz. .................

85 Clonacin de un fragmento del gene que codifica para la protena NS3 de los 4 serotipos del virus dengue ............................................................................................................................................................... 54 Confirmacion diagnostica de Virus Del Papiloma Humano (VPH) en biopsias de cervix, mediante reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR). ........................................................................................................ 20 Deteccin de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae en especmenes genitourinarios mediante PCR Mltiple .......................................................................................................................................... 49 Deteccin de clonas de Staphylococcus aureus meticilino resistentes (MRSA) en el Hospital Regional de Alta Especialidad de Veracruz (HRV) ...................................................................................................... 26 Diagnstico molecular de dengue .............................................................................................................. 32 Efecto del extracto polar de moussonia deppeana sobre la proliferacin y la viabilidad de la lnea celular de cncer de prstata lncaP. .................................................................................................................. 74 Efectos bioclnicos de la obesidad y la induccin de la diabetes en la rata Wistar hembra ......................... 79 Evaluacion de la eficiencia del metodo de conservacion de microorganismos en papel filtro .................... 11 Evaluacin del efecto de catequina y epicatequina de theobroma cacao sobre las lneas mda-mb 231 y bt474 de cncer de mama ........................................................................................................................ 45 Evaluacin del efecto de oxiesteroles dietarios sobre el perfil de lpidos de la membrana plasmtica en hepatocitos de rata wistar. .................................................................................................................... 15 Evaluacin del efecto del cido Linoleico Conjugado (CLA) dietario sobre el estrs oxidativo en ratas con sndrome metablico e hgado graso. ...................................................................................................... 3 Evaluacin del potencial adyuvante de un toxoide derivado de Listeriolisina O sobre clulas presentadoras de antgeno humanas............................................................................................................................. 94 Identificacin de receptores de Angiotensina II y caveolina-1 en cordn umbilical y clulas endoteliales de cordn umbilical (HUVECs) de pacientes preeclmpticas ....................................................................... 40 Identificacin de una zona con alta seroprevalencia de infeccin por Trypanosoma cruzi en la zona centro del Estado de Veracruz ........................................................................................................................... 89 Inmunopatogenia en 200 pacientes con dengue ...................................................................................... 36 Interleucina 17A e IL-17F, nuevos mediadores inflamatorios en la infeccin por virus del Dengue .............. 7 Mutaciones en genes asociados a resistencia a RIfampicina y Etambutol, en cepas de pacientes con Tuberculosis Drogorresistente ............................................................................................................... 63

Numero de eosinofilos en mucosa esofgica de pacientes con esofagitis eosinofilica, esofagitis erosiva, enfermedad por reflujo no erosivo y controles asintomtico. Un estudio en pacientes mexicanos. ...... 69 Patron de susceptibilidad de microorganismos aislados en urocultivos en la unidad de servicios analiticos de salud bioanalisis (usasb). Enero 2007, dicembre 2009 Xalapa Veracruz ............................................. 98 Variacin de la respuesta a un estimulo doloroso en ratas Wistar con ansiedad inducida bajo un estimulo externo. ................................................................................................................................................. 59

EVALUACIN DEL EFECTO DEL CIDO LINOLEICO CONJUGADO (CLA) DIETARIO SOBRE EL ESTRS
OXIDATIVO EN RATAS CON SNDROME METABLICO E HGADO GRASO
Yohevet Romero Sarmiento Alfonso Alexander Aguilera. Ida Soto Rodrguez Agustn Arzaba Villalba Hugo Sergio Garca Galindo

Marco terico:
El hgado graso no alcohlico (HGNA) se define como la acumulacin de grasa macrovesicular en el hgado que excede 5 al 10% del mismo que puede asociarse a grados variables de inflamacin lobulillar con o sin fibrosis(1). Esta condicin puede desencadenar a una cirrosis heptica. El sndrome metablico y sus manifestaciones clnicas como la obesidad y la diabetes son los dos factores de riesgo ms importantes para desarrollar hgado graso. Aproximadamente un 80% de las personas obesas tienen hgado graso, en la gran mayora asociada a sndrome metablico. La resistencia a la insulina es el mecanismo fisiopatolgico de estas alteraciones y que determina que la grasa se acumule fuera del tejido adiposo. El estrs oxidativo es el otro y

segundo evento celular en su progresin a esteatosis, esteatohepatitis y fibrosis, el cual se define como la exposicin inadecuada a especies reactivas de oxgeno (ROS) y el resultado del desequilibrio entre compuestos prooxidantes y antioxidantes que conduce al dao por muerte celular y tisular. En la actualidad no existe tratamiento especfico y han sido utilizados aquellos que revierten el estado de resistencia a la insulina. El tratamiento dietoteraputico juega un papel fundamental. El cido linoleico conjugado (CLA) es una mezcla de ismeros del cido linoleico (cis-9, cis-12-octodecadienoico) que poseen sus dobles enlaces en posicin conjugada (principalmente 9, 11 10, 12), ha sido considerado recientemente como compuestos nutracuticos, en los cuales el CLA ha mostrado un amplio rango de efectos

Estudiante de Maestra Unidad de Investigacin y Desarrollo en Alimentos Instituto Tecnolgico de Veracruz yohevet_romero@hotmail.com

biolgicos: anticancergenos, antiaterosclerticos y antioxidantes. Actualmente no se conoce el efecto dietario que el CLA tiene sobre la inhibicin del desarrollo de hgado graso especficamente sobre el estrs oxidativo heptico(5,6,7).

ratas con hgado graso, que muestre el potencial dietoteraputico en esta enfermedad en un modelo animal.

Metodologa:
Se realiz un estudio experimental en dos etapas, primero se llev a cabo la induccin del sndrome metablico e hgado graso en ratas wistar macho recin destetadas, utilizando sacarosa al 30% en agua para beber (ad libitum) durante 9 semanas; posterior al tratamiento experimental se determinaron los marcadores de dao heptico (AST y ALT) y anlisis histolgico para el diagnstico de esteatosis. La segunda etapa consisti en la evaluacin del efecto del CLA bajo un diseo experimental completamente al azar, formado por 4 grupos: testigo (T), experimental (CLA)reciebiendo el aporte del compuesto en estudio, Hgado graso (HG)recibend aporte de aceite vegetal el cual es incapaz de revertir a la normalidad a estos roedores y en donde se mantienen las condiciones de dao heptico y el grupo ingesta previa de IP-CLA (el cual recibi CLA desde el inicio ingesta de sacarosa simultneamente al tratamiento experimentacin CLA). Se determinaron los marcadores de estrs oxidativo (SOD, GSH-PX y TBARS) en suero y en homogenizado de hgado bajo el efecto del CLA dietario para evaluar los efectos sobre este mecanismo del hepatocito.

Planteamiento del problema:


El CLA ha sido utilizado para evaluar su efecto dietoteraputico sobre la fisiopatologa del sndrome metablico en modelos animales y humanos; aunque existen estudios sobre el efecto que tiene en el mecanismo de resistencia a la insulina, se desconocen los efectos sobre los marcadores celulares de estrs oxidativo como base fisiopatolgica del desarrollo del hgado graso no alcohlico, en el cual participan las enzimas alanin-aminotransferasa (ALT) y apartato-aminotranferasa (AST) como indicadoras de dao heptico y la superxido dismutasa (SOD), glutatin peroxidasa (GSHPX) y compuestos reactantes al cido tiobarbituricos (TBARS) como indicadores de la presencia de compuestos prooxidantes hepticos. En base a lo antes expuesto, el planteamiento del problema se basa en el siguiente cuestionamiento cul es el efecto del CLA dietario sobre los marcadores de estrs oxidativo en ratas con hgado graso no alcohlico, como agente nutracutico con potencial dietoteraputico?.

Objetivo General:
Evaluar el efecto del cido linoleico conjugado (CLA) dietario sobre los marcadores de estrs oxidativo a nivel tisular: superxido dismutasa (SOD), glutatin peroxidasa (GSH-PX) y compuestos reactantes al cido tiobarbiturico (TBARS) en

Resultados:
Se obtuvo la induccin de hgado graso en el modelo utilizado caracterizado por el aumento del peso corporal de los roedores y los parametros metablicos que caracterizan al sndrome metablico; se presentaron

alteraciones en los marcadores de dao heptico tanto en suero como en el homogenizado de tejido heptico. La AST y AST mostraron concentraciones mayores en el grupo Higado Graso (HG) (78.67 3.62 U/L vs 20.16 1.81 U/L; p<0.05 y 68.11 3.62 U/L vs 35.00 0.81 U/L; p<0.05), asociado a alteraciones histolgicas hepticas compatibles con hepatomegalia y esteatosis caracterizada por un aumento de vesiculas de grasa y alteraciones del parenquima hepatico como destruccin de los sinusoides y la arquitectura del lobulillo heptico. El efecto del CLA durante 7 semanas de tratamiento experimental, mostr que las enzimas antioxidantes aumentaron en el grupo recibiendo el aporte del CLA con respecto al grupo Higado Graso (HG) que se mostraron disminuidos; para GSH-PX(11.915 0.463 U/mg prot. vs 8.930 0.625 U/mg prot; p<0.05)y para SOD(78.77 6.56 U/mg prot. vs 43.36 17.5 U/mg prot; p<0.05). Los niveles de stas enzimas se mantuvieron normales en el grupo que recibi una ingesta previa de CLA con respecto al grupo Testigo Sano, para GSH-PX(16.264 1.691 vs 17.983 1.150)y para SOD (80.09 8.02 vs 92.00 4.14). Los compuestos reactantes al acido tiobarbturico (TBARS) como indicador de estrs oxidativo en suero e hgado fueron normales en los roedores del grupo recibiendo el aporte del CLA, mientras que fueron significativamente mayores en el grupo de roedores con hgado graso.

posterior catabolismo en mitocondrias por beta oxidacin, todo ello genera especies reactivas de oxigeno (ROS) como indicador de estrs oxidativo celular, a la vez de una marcada disminucin de las enzimas antioxidantes como la SOD y GSH-PX; sin embargo algunos estudios muestran, que algunos cidos grasos dietarios como los omega 3 influyen sobre la expresin de genes que codifican para algunas enzimas y receptores celulares(2,3,4). El CLA es un regulador de la expresin de algunos genes de resistencia a la insulina y pudiera estar regulando la expresin de las enzimas de estrs oxidativo, dado el aumento encontrado de las mismas en los roedores recibindolo como aporte de CLA dietario, con respecto al grupo que desarroll hgado graso y que mantiene niveles muy bajos de SOD y GSH-PX y aumento de especies reactivas de oxgeno tanto en suero como en el tejido heptico.

Conclusin:
El CLA dietario mostr un efecto benfico sobre los niveles de marcadores de hgado graso (AST y ALT) y estrs oxidativo (SOD y GSH-PX,) caracterizado por reversin a concentraciones normales tanto en suero como en tejido heptico de las enzimas con actividad antioxidante estudiadas; mostrando de esta forma, su potencial dietoteraputico como auxiliar en el tratamiento de hgado graso en este modelo animal de la enfermedad.

Discusin:
La acumulacin de grasa en el hgado cambia sus condiciones fisiolgicas y metablicas, aumenta el acortamiento de las cadenas de cidos grasos en peroxisomas para su

Referencias Bibliogrficas:
1. Evan S.S, Mrak A.R. Imaging of Hepatic Steatosis. Sem. Liv. Dis. 2001; 1:71-80.

2. Foschini , et al. Identificaction of mitocondria in liver biopsies. Virchows Arch. 1998; 267-273. 3. Harrison SA, Di Bisceglie AM. Avances en la comprensin y el tratamiento del hgado graso no alcoholico. 2003; Drugs 63(22): 23792394. 4. Kumar NS, et al. Oxidative stress in experimental liver microvesicular steatosis: Role of mitochondria and peroxisomes. Hepatology. 2006; 1240-1249.

5. Morales SA, Arrese JM. Hgado graso no alcohlico: Patogenia y tratamiento. 2008; 19(2):96-100. 6. Prieto I, et al. Tumor Necrosis Factor alpha, interleukin-1 beta and nitric oxide: induction of liver megamitochondria in prehepatic portal hypertensive rats. World J Surg. 2005; 29:903-908. 7. Valera JMM. Enfermedad por hgado graso no alcoholic, opciones teraputicas. 2006. Gastr. Latinoam. 17(2):191-193.

INTERLEUCINA 17A E IL-17F, NUEVOS MEDIADORES


INFLAMATORIOS EN LA INFECCIN POR VIRUS DEL

DENGUE
Fatima del Roco Snchez Vega Csar Ivn Berzunza Huerta Jos Zarrabal Meza Maria Teresa Martinez Czares Aurora Parissi Crivelli Hctor Vivanco Cid

Marco terico:
Los Flavivirus son un grupo de patgenos con un alto impacto en la salud pblica mundial, debido a su amplia distribucin y su capacidad para causar enfermedades con tasas elevadas de morbilidad y mortalidad en humanos. Ms de 75 diferentes Flavivirus han sido identificados a la fecha y aproximadamente la mitad de los mismos son capaces de causar enfermedad en seres humanos (1). Dentro de este gnero se ubica el virus del Dengue, el cual es considerado un patgeno re-emergente debido a que en las ltimas dos dcadas, la incidencia de enfermedades provocadas por este, han aumentado a un ritmo alarmante. Ms de 2500 millones de personas, es decir, ms de dos quintas partes de la poblacin mundial viven en zonas de riesgo para Dengue y ms de 100 pases han informado de la presencia de esta enfermedad en su territorio (2). La Regin de las Amricas ha sido una de las ms afectadas por la forma clsica o fiebre

por Dengue y su forma ms grave, el Dengue Hemorrgico (DH). La enfermedad es transmitida a humanos a travs de la picadura del mosquito Aedes aegypti, que es el principal vector. Otras especies de Aedes tales como A. albopictus y A. polynesiensis tambin han sido implicados en la transmisin. Pueden distinguirse cuatro serotipos antignicamente relacionados del virus Dengue denominados como Dengue 1, 2, 3 y 4. La infeccin primaria se presenta en un individuo no sensibilizado previamente o bien en aquellos que ya han estado expuestos al contacto previo con algn serotipo y que contraen una nueva infeccin (infeccin secundaria) con otro serotipo diferente. La infeccin en el humano causa un espectro de manifestaciones que van desde sudoracin, desarrollo de un cuadro febril, el cual de manera relevante se asocia con viremia, dolor de cabeza intenso, mialgias, artralgias, exantema, hasta cuadros ms severos tales como DH o el sndrome de choque por Dengue (SCHD), las cuales

Estudiante de Licenciatura INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MEDICO BIOLOGICAS UNIVERSIDAD VERACRUZANA vivacid@hotmail.com

constituyen las complicaciones ms severas (3,4). El DH y el SCHD son definidos por un conjunto de manifestaciones clnicopatolgicas que comprenden: fiebre continua durante 2 a 7 das, petequias, prueba de torniquete positiva, equimosis, tendencia a hemorragias que pueden ser de leves a severas, trombocitopenia (100,000 clulas por mm3 o menos), aumento en la permeabilidad vascular, hemoconcentracin, culminando en choque hipovolmico y la muerte del paciente (5).

Planteamiento del problema:


La alarmante situacin epidemiolgica del dengue en el mundo, aunado a la carencia de una vacuna efectiva en contra del agente etiolgico de la enfermedad hacen necesario enfocar los esfuerzos en investigacin para conocer ms acerca de los mecanismos inmunopatolgicos implicados en la infeccin e investigar sobre nuevos biomarcadores y blancos teraputicos que permitan establecer nuevas estrategias de seguimiento y control de las formas severas de la enfermedad. Desde el punto de vista inmunolgico la infeccin por dengue en el humano cursa con liberacin de una cascada de mediadores inflamatorios producidos por elementos tanto de inmunidad innata como por elementos de inmunidad adquirida. En el presente trabajo se estudio por primera vez la participacin de dos isoformas de la familia de citocinas conocidas como Iinterleucina 17: IL-17A e IL-17F. La funcin de estas dos citocinas ha comenzado a estudiarse y clarificarse en el contexto de una gran variedad de patologas que van desde procesos autoinmunes, alergias, cncer y por supuesto, procesos infecciosos.

La familia de citocinas IL-17, incluye a seis miembros descritos a la fecha denominados como IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E (tambin conocida como IL-25) e IL-17F, siendo IL-17A el miembro mejor caracterizado y ms ampliamente estudiado a la fecha (91-92). IL-17A, es una citocina altamente proinflamatoria con diversas funciones biolgicas y secretada por diferentes poblaciones de linfocitos T activados incluyendo a linfocitos T CD8+, linfocitos T CD4+ (clulas Th17), clulas T ; ; y clulas T asesinas naturales (NKT), eosinfilos, neutrfilos y monocitos (93-100). Todos los miembros estn relacionados entre un 16-50% en su secuencia de aminocidos con IL-17A (101-104), siendo IL17F la de ms alta homologa. En infeccin, se ha demostrado la participacin de estas citocinas en mediar una respuesta inmune protectora contra patgenos intracelulares tpicos como Candida albicans, Listeria monocytogenes, Salmonella entrica, as como Mycobacterium tuberculosis. Recientemente se ha demostrado su participacin en infecciones virales como Hepatitis C y la mediada por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) (57,58). A la fecha no existen evidencias cientficas en la literatura que hayan estudiado la participacin de esta citocina en el contexto de la infeccin por virus dengue tanto clsico como hemorrgico.

Objetivo General:
Determinar la participacin de las citocinas inflamatorias IL-17A, IL-17F en el contexto de la infeccin por virus del Dengue (dengue clsico y dengue hemorrgico).

Metodologa:

Tipo de estudio: Observacional, prospectivo, transversal. Se analizaron muestra de suero de pacientes con diagnstico confirmado de Dengue, las cuales se obtuvieron del Laboratorio Estatal de Salud Pblica durante el periodo de Mayo a Noviembre del 2009. Sueros de pacientes cursando Dengue clsico (n=939), Dengue Hemorrgico (n=292) o sujetos controles sanos (n=359), fueron analizadas para determinar los niveles sricos de citocinas como IL-17A, IL17F; Las citocinas fueron determinadas por tcnica convencional de ELISA (usando kits comerciales de las marcas Peprotech y Ebioscience). El Anlisis estadstico de los datos obtenidos entre los diferentes grupos de estudio fue realizado con el programa GraphPad Prism versin 5, empleando test no paramtrico de MannWhitney.

sanos registraron un valor promedio de 153 pg/ml, mientras que para IL-17F, la concentracin promedio fue de 126 pg/ml. De esta forma una elevacin clara de ambas isoformas de IL-17 es detectada durante la infeccin activa por dengue.

Discusin:
Los resultados obtenidos en el presente trabajo han permitido describir por primera vez la participacin de las citocinas inflamatorias IL-17A e IL-17F en el contexto de la infeccin por dengue. Un aumento significativo en la concentracin de ambas citocinas, de entre 5 a 6 veces sobre los niveles basales detectados en sujetos sanos de la misma rea endmica, pero sin datos clnicos de infeccin reciente, fue evidente en el curso de la infeccin activa por virus dengue. El presente trabajo abre nuevas preguntas sobre la participacin de esos mediadores inflamatorios en proteccin o en la inmunopatognesis de la enfermedad.

Resultados:
Del total de las muestras con diagnostico confirmado de dengue analizadas, 697 (74%) dieron resultados positivos para ambas: IL17A e IL-17F, de las cuales, 454 correspondieron a dengue clsico y 243 a dengue hemorrgico. Los resultados cuantitativos mostraron una media de 728 pg/ml de IL-17A y 630 pg/ml de IL-17F para el grupo de pacientes con diagnstico clnico de dengue clsico, valores que no fueron muy diferentes a los encontrados en el grupo de pacientes con dengue hemorrgico: 815 pg/ml para IL-17A y 654 pg/ml de IL-17F. Ambos grupos de pacientes con dengue, mostraron niveles de IL-17A e IL-17F aumentados significativamente con respecto a sujetos control sanos, sin evidencia de infeccin aguda reciente o crnica (p= 0.0055). Los niveles de IL-17A en sujetos

Conclusin:
Durante la infeccin por virus del dengue en humanos es posible detectar niveles elevados tanto de IL-17A como de IL-17F, lo cual sugiere la participacin de estos mediadores durante la inmunopatologa de la enfermedad.

Referencias Bibliogrficas:
Mukhopadhyay A. Structural perspective of the flavivirus life cycle. Nat Rev Microbiol. 2005. 3, 1322. 2. Guzmn MG, Kour G. Dengue: an update. Lancet Infect Dis. 2002.
1.

2:33(42). 25. William JH McBride, Helle BielefeldtOhmann. Dengue viral infections; pathogenesis and epidemiology. Microbes and Infection. 2000, 10411050. 4. Gubler DJ. Epidemic dengue/dengue hemorrhagic fever as a public health,
3.

social and economic problem in the 21st century. TRENDS in Microbiology. 2002. 10 (2). 5. Green S, Rothman A. Immunopathological mechanisms in dengue and dengue hemorrhagic fever. Curr Opin Infect Dis. 2006. 19 (5):429-36.

10

EVALUACION DE LA EFICIENCIA DEL METODO DE


CONSERVACION DE MICROORGANISMOS EN PAPEL FILTRO
Vanesa Lopez Rosaldo

Marco terico:
A lo largo del siglo XX la tradicin institucional de la investigacin microbiolgica ha estado centrada en brindar soluciones a problemas en los campos de la salud dejando un invaluable legado y un conjunto de colecciones de microorganismos que constituyen la base de futuras investigaciones. Es importante entender que para el mantenimiento de los cultivos deben permanecer puros y homogneos bajo condiciones que aseguren la estabilidad microscpica, mascrocpica, bioqumica, fisiolgica y gentica. Hay gran nmero de mtodos descritos para la preservacin microbiana. Los criterios a ser considerados para la seleccin del mtodo son la viabilidad, pureza, costos del proceso, cantidad de cultivo (para la produccin de microorganismos) y frecuencia de uso. Las colecciones de cultivo son organizaciones que se ocupan de conservar convenientemente cepas de

microorganismos, clulas superiores o diversos materiales biolgicos, suministrndolos previa solicitud a laboratorios de docencia e investigacin. Las primeras colecciones de cultivo que aparecieron en el mundo fueron: La de Praga en el siglo siglo XIX (KRAL) fue la primera coleccin que cont con un catlogo de microorganismos. La ms antigua es la de Lobaina en Blgica dedicada a la conservacin de hongos. La American Type Culture Collection (ATCC) fue fundada en 1925.Actualmente existen todava varias colecciones de cepas utilizables para el control de calidad. Algunos ejemplos son: Rockville, USA

Bacteria- Survey, Inglaterra

Docente y Profesional de la salud Universidad rosaldo04@hotmail.com

Veracruzana

Facultad

de

Bioanalisis

11

: Japanese Federation of Culture Collection of Microorganism- Japn CCTM: Coleccin Nacional Lille, Francia RIA: USSR Reseach Institute for Antibiotics- Mosc, Rusia. NCIB: Coleccin Nacional industrial Aberdeen, Escocia DSM: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Gottinger, Alemania Servicios que prestan las colecciones de cultivos: Recoleccin: Es el servicio mas tpico de una Colecciones de Cultivo. Las colecciones renen cepas que les llegan a travs de distintos conductos, las conservan convenientemente y las suministra previa peticin. Conservacin: Es el trabajo medular de las colecciones microbianas, las cuales mantienen conservadas a los microorganismos bajo diferentes mtodos entre ellos la liofilizacin como preservacin a largo plazo. Suministro de cepas microbianas: Se hace por correo de superficie, areo o mensajera, pero siempre empaquetado correctamente considerndolo como material potencialmente patgeno Depsito de cepas microbianas.1.- Depsito pblico: Cualquier microbilogo puede depositar una cepa, que considere interesante, en la coleccin. Esta cepa se incorpora en el catlogo y puede suministrrsela a cualquier otro microbilogo que la solicite.2.- Depsito no pblico: Algunas Coleccin de Cultivo reciben el nombramiento de Autoridad Internacional de Depsito para fines de patentes, de esta manera se garantiza la descripcin total y reproduccin del proceso patentado. Una vez conseguida la patente, la cepa puede suministrarse previa autorizacin

escrita del propietario, aunque no figure en el catlogo; Organizacin de Cursos, Investigacin y Asesoria.

Planteamiento del problema:


Cual es la eficiencia o porcentaje de recuperacin que ofrece el mtodo de conservacin de microorganismos en papel filtro a 10 aos de su realizacin en especies bacterianas que forman el cepario bacteriano de la facultad de Bioanlisis?

Objetivo General:
Evaluar la eficiencia o porcentaje de recuperacin del mtodo de conservacin de papel filtro de los microorganismos conservados en el cepario microbiano de la facultad de Bioanalisis desde hace 10 aos.

Metodologa:
El trabajo metodolgico se fundamenta en la capacidad de los microorganismos conservados en papel filtro de reactivar su metabolismo en caldo nutritivo y permitir su aislamiento e identificacin morfolgica y bioqumica que a la ves de conocer la eficiencia de conservacin del metodo, verificar que el nombre encontrado a la cepa es el correcto. Se parti de un acervo de viales que se tienen en el cepario de la facultad de Bioanalisis las cuales se seleccionaron con el requisito que tuvieran como mnimo 10 aos de conservacin, despus se propagaron en caldos nutritivos, se inocularon en medios de cultivo por estra cruzada en donde se obtuvo la morfologa colonial, enseguida se les hizo la prueba bioqumica en donde se obtuvo la identificacin taxonmica y se determino la eficiencia en % de la

12

recuperacin.1)SELECCIONAR CEPAS CONSERVADAS EN PAPEL FILTRO(10 AOS DE CONSERVACION)2)PROPAGACION EN CALDOS DE CULTIVO.3)PRUEBAS DE IDENTIFICACION.3.1)MORFOLOGIA COLONIAL Y 3.2) BIOQUIMICAS. 4) IDENTIFICACION TAXONOMICA.5)DETERMINACION DE LA EFICIENCIA EN % DE RECUPERACION EN:5.1)PAPEL FILTRO. 5.2) ACEITE MINERAL.5.3) CONGELACION EN GLICEROL.

que fueron reactivas posterior a su conservacin durante 10 aos fue la siguiente el 30% correspondi a bacteria Gram positivas, mientras que el 70% fueron Gram negativas y en donde el 28.57% fueron Gram positivas que no tuvieron desarrollo y el 71.42% son Gram negativas sin desarrollo.

Discusin:
Los resultados obtenidos muestran una buena eficiencia del mtodo de conservacin de microorganismos en papel filtro ya que esta correspondi al 58.82%, no permitiendo la recuperacin del 41.17% de los viales estudiados. Sin embargo, es importante considerar que este mtodo de conservacin es considerado a mediano o sea presentan efectividad para aproximadamente 5 aos aproximadamente, por lo tanto el encontrar una eficiencia de recuperacin en aproximadamente un poco mas de la mitad de los cultivos muestra ciertas ventajas de este mtodo de conservacin. Como se puede observar este mtodo mostr una mayor eficiencia de conservacin para bacterias Gram negativas y para un nmero considerable de especies principalmente de la familia Enterobacteriaceae. Los resultados de esta evaluacin de la eficiencia del mtodo de conservacin en papel filtro muestra su factibilidad de aplicacin tcnica y econmica para la conservacin de microorganismos en el cepario microbiano; aunado a lo anterior se pone de manifiesto que hace 10 aos de haber realizado el mtodo se cumpli con los objetivos propuestos en el trabajo que antecede al que a la fecha realizado.

Resultados:
A continuacin se detallan los resultados obtenidos del estudio de evaluacin de la eficiencia del mtodo de conservacin de microorganismos en papel filtro, el cual se realiz hace 10 aos para la creacin del cepario microbiano de la facultad de Bioanlisis. Se parti de un grupo de 85 viales conservados los cuales fueron propagados para el aislamiento e identificacin de los microorganismos conservados. VIALES CONSERVADOS QUE FUERON REACTIVADOS Y MOSTRARON CRECIMIENTO EN CALDO NUTRITIVO:N= 85. 41.17% SIN DESARROLLO Y 58.82% CON DESARROLLO.TIEMPO DE RECUPERACION DE LOS MICROORGANISMOS CONSERVADOS EN PAPEL FILTRO: Durante la etapa de recuperacin de los microorganismos conservados se observ que el 48% de ellos mostr desarrollo en caldo de cultivo a las 24 horas de incubacin, seguido del 38% que mostr desarrollo a las 48 horas, finalmente el 14% se reactiv mostrando crecimiento a las 72 horas. DESARROLLO MICROBIANO APARTIR DE LOS VIALES CONSERVADOS, CLASIFICADOS DE ACUERDO A LA TINCION DE GRAM: En relacin al tipo de bacterias

Conclusin:

13

El mtodo de conservacin de microorganismos en papel filtro demostr que SI es posible recuperar bacterias tanto Gram positivas como Gram negativas despus de 10 aos de conservacin. Los resultados obtenidos en la evaluacin de este mtodo nos sugiere que es til para las necesidades e infraestructura con que cuenta la facultad de Bioanalisis, para poder seguir utilizndolo en la conservacin de microorganismos para el apoyo acadmico y del proceso enseanza-aprendizaje de la licenciatura en Qumica Clnica.

cultivo de bacterias (Fecha de ingreso 30 de agosto del 2007) disponible en: http://med.unne.edu.ar/revista138. htm 2. Garca F. MB-5000 BACTERIOLOGIA MEDICA 5000 BACTERIOLOGIA MEDICA 1 CICLO LECTIVO (fecha de ingreso 14 de agosto del 2007) disponible en: http://netropica.org/pdfs%20b%20m edica.pdf 3. Ferradiz Santos Juan, Amador Romero Javier MANUAL DE MICROBIOLOGIA Unidad de calidad. Direccin rea 11. INSALUD.MADRID 1999.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Hernandez CH. F. Experiencia en el

14

EVALUACIN DEL EFECTO DE OXIESTEROLES DIETARIOS


SOBRE EL PERFIL DE LPIDOS DE LA MEMBRANA PLASMTICA EN HEPATOCITOS DE RATA WISTAR.
Rosa Isela Villaraus Cirilo Ida Soto Rodrguez Alfonso Alexander Aguilera Guillermo Hernndez Daz Hugo Sergio Garca Galindo

Marco terico:
El colesterol (colest-5-en-ol) es un metabolito esencial requerido en las principales funciones biolgicas, proporciona la fuente bioqumica para la sntesis de hormonas esteroides y para la biosntesis de la bilis y de las sales cidas de sta1. Los organismos obtienen el colesterol a travs de la biosntesis y de la dieta. La biosntesis del colesterol es un proceso que ocurre principalmente en el hgado, glndulas suprarrenales, ovarios y testculos de mamferos, los cuales muestran mayor actividad biosinttica. El colesterol tambin es requerido en la formacin de la estructura de la membrana celular, junto con las molculas de los fosfolpidos forman la parte integral de la capa bilipdica2, ste se inserta dentro de la bicapa de la membrana con su eje largo perpendicular al plano de la membrana, previniendo la cristalizacin de las cadenas acil de las grasas al ajustarse entre ellas y modificando la actividad de las enzimas enlazadas a la membrana3. El colesterol es una molcula con un enlace

insaturado en la posicin ;5-6 del ncleo del esterol, por lo tanto es propenso para la oxidacin4. La molcula sufre una autooxidacin por el mecanismo de radicales libres generando la formacin de hidroperxidos y posteriormente oxidacin de varios productos, denominado oxiesteroles. Estos productos de la oxidacin son un grupo de esteroles similares en estructura al colesterol, pero contienen un oxgeno funcional adicional como un grupo hidroxilo, grupo epxido o grupo cetona en el ncleo del esterol o al extremo de la cadena de la molcula5. Los oxiesteroles se han asociado con la gnesis de enfermedades crnico degenerativas como la aterosclerosis. Esta se caracteriza por dao histolgico de la estructura arterial por acumulacin de lpidos que contienen colesterol oxidado como la LDL oxidada. Asimismo, se han relacionado con procesos mutagnicos y recientemente, con la apoptosis o muerte celular programada6. El consumo de oxiesteroles a travs de la dieta, es un factor asociado al desarrollo de

Docente y Profesional de la salud Facultad de Bioanlisis Campus Veracruz UNIVERSIDAD VERACRUZANA rosy_isevi@hotmail.com

15

diversas patologas, por lo que se han desarrollado trabajos experimentales en modelos in vitro, principalmente en lneas celulares puras de clulas conjuntivas, musculares y nerviosas, en las cuales se ha medido el efecto citotxico del 7hidroxicolesterol y del 25-hidroxicolesterol5; sin embargo, poco se sabe sobre su efecto en modelos in vivo.

Planteamiento del problema:


Los oxiesteroles dietarios modifican el perfil de lpidos de la membrana plasmtica de los hepatocitos?

Objetivo General:
Evaluar el efecto de oxiesteroles dietarios sobre el perfil de lpidos de la membrana plasmtica en hepatocitos de rata Wistar.

elaboracin de croquetas. Al grupo testigo se le administraron croquetas placebo. Todos los animales recibieron su respectiva dieta ad libitum durante ocho semanas. Se registr el peso corporal y la presin arterial (PA) de los animales al inicio y al trmino del experimento. Al sacrificio de los animales se obtuvieron muestras de hgado para extraer las membranas plasmticas por medio de gradiente de Percoll as como muestras de suero el cual, fue analizado utilizando estuches de diagnstico para colesterol, glucosa, triglicridos y LDL. Los lpidos de las membranas plasmticas de los hepatocitos se obtuvieron por el mtodo de Folch7 para su identificacin y cuantificacin por CG previa metilacin.

Resultados:
El anlisis de cromatografa de gases realizado a la mezcla de oxiesteroles formados por calentamiento para su administracin en las dietas de las ratas Wistar mostr la presencia de los siguientes oxiesteroles: 4-hidroxicolesterol (3 464.67 ppm), 3,6-dione (7 555.99 ppm) 7hidroxicolesterol (3 768.57 ppm), 7 hidroxicolesterol (25 327.27 ppm); 20hidroxicolesterol (4 475.64 ppm), colestanotriol (6 909.38 ppm), 7cetocolesterol (8 928.22 ppm), 25hidroxicolesterol (3 919.52 ppm), oxiesteroles no identificados (13 308.00 ppm) y colesterol (16 490.00 ppm). En cuanto al peso corporal registrado de los animales no hubo cambio significativo entre los grupos experimentales y el testigo. Con respecto a la presin arterial (PA), al inicio del experimento los cuatro grupos de animales mostraron la misma PA: grupo

Metodologa:
Para analizar el efecto de los oxiesteroles se dise un modelo experimental formando por cuatro grupos con seis ratas Wistar machos cada uno de cinco semanas de edad, alojadas individualmente con un ciclo de luz/obscuridad de 12 h a 25C: a) grupo 1 (testigo), b) grupo 2 (POCs+colesterol 1%), c) grupo 3 (POCs+colesterol 2%) y d) grupo 4 (colesterol 1%). Para la dieta experimental se adquiri 1 Kg de colesterol puro. De esta cantidad, 500 g se calentaron durante 90 das a 90C, y se obtuvo una mezcla de oxiesteroles (POCs), la cual fue analizada por cromatografa de gases (CG) para su identificacin y cuantificacin. Para los grupos experimentales se incorpor la mezcla de POCs 1% y 2% colesterol puro al 1% al alimento de mantenimiento molido hasta formar una pasta homognea para la

16

testigo (1666 mm/Hg), grupo POCs+colesterol 1% (1674mm/Hg), grupo 3 POCs+colesterol 2% (1653mm/Hg), y grupo colesterol 1% (1594mm/Hg); sin embargo, al final de la administracin de las diferentes dietas la PA de los grupos mostr diferencia significativa entre los grupos experimentales: grupo testigo (1706 mm/Hg), grupo POCs+colesterol 1% (2063mm/Hg), grupo 3 POCs+colesterol 2% (2104mm/Hg), y grupo colesterol 1% (1964mm/Hg). Al final del experimento el perfil bioqumico de la glucosa y de los triglicridos no presentaron cambios significativos entre los animales alimentados con colesterol, POCs+colesterol 1% y POCs+colesterol 2% (934mg/dl) pero si en relacin con el grupo testigo. Los parmetros de colesterol fueron significativamente distintos entre los animales alimentados con colesterol (1514mg/dl), POCs+colesterol 1% (972mg/dl) y POCs+colesterol 2% (993mg/dl) en relacin con el grupo testigo (1267mg/dl) y en los niveles de LDL tambin hubo cambios significativos en los grupos experimentales de colesterol, POCs+colesterol 1% y 2%: (1055mg/dl; 543mg/dl; 522mg/dl) respetivamente, comparados con el grupo testigo (611mg/dl). Con respecto al perfil de lpidos en la membrana plasmtica del tejido heptico, la concentracin y composicin de cidos grasos saturados, monosaturados y polinsaturados no mostr diferencias significativas, entre los grupos experimentales. Sin embargo, la concentracin del colesterol fue significativamente mayor en el grupo de animales alimentados con colesterol. Cabe sealar que en los grupos POCs+colesterol

1% y 2% adems de disminuir los niveles de colesterol, se identific el 7 ceto-colesterol en las membranas de los hepatocitos, lo que permite suponer que los oxiesteroles son capaces de incorporarse a la membrana plasmtica.

Discusin:
El aumento significativo de la PA en los animales experimentales y de manera particular en los alimentados con las dietas POCscolesterol 1 y 2% obedece a que el consumo dietario de oxiesteroles inhibe la enzima xido ntrico sintasa (ONS) encargada de regular los niveles de xido ntrico a nivel del endotelio8. Los valores del colesterol srico disminuidos en los grupos POCscolesterol 1 y 2% pudo deberse a que los oxiesteroles inhiben la formacin de la hidroximetilglutaril CoA reductasa encargada de regular el metabolismo del colesterol endgeno9. Los niveles elevados de triglicridos en el grupos de animales alimentados con POCs+colesterol supone la posibilidad que pueden tener los oxiesteroles dietarios en la activacin de enzimas que promuevan la formacin de cidos grasos libres lo que dar lugar a una dislipidemia (SEO,2004)10. En ratas Wistar alimentadas con oxiesteroles se ha observado trastornos en el metabolismo de los quilomicrones plasmticos particularmente, el transporte de LDL, debido a que alteran la fraccin de apolipoprotena de la LDL, facilitando la oxidacin de la LDL11. En el presente trabajo la diferencia de los niveles de LDL en los grupos POCs+colesterol 1 y 2%, pudo deberse al mismo efecto. En cuanto a la composicin de lpidos de la membrana plasmtica, los oxiesteroles no modifican la

17

cantidad y el tipo de cidos grasos; sin embargo, su incorporacin puede afectar las propiedades biofsicas de la membrana como la permeabilidad a la glucosa en los liposomas o un aumento en la transferencia de albmina en el endotelio por lo que se les considera pro-aterognicos. Asimismo pueden modificar las protenas embebidas en la membrana y alterar su funcin como receptores a biomolculas especficas12.

7.

8.

Conclusin:
Conclusin: Los oxiesteroles se incorporan a la membrana plasmtica del hepatocito promoviendo cambios en sus propiedades biofsicas.

9.

Referencias Bibliogrficas:
1.

2.

3.

4.

5.

6.

Roux, C., Wolf, C., Mulliez, N., Gaoua, W., Cormier,V., Chevy, F. y Citadelle, D. 2000. Role of cholesterol in embryonic development. Am J Clin Nutr :71 (suppl) 1270S-1279S. Valenzuela, A. Sanhueza, J.y Nieto, S. 2003. Cholesterol oxidation: Health hazard and the role of antioxidants in prevention. Biol. Res., vol.36,:291302. Valencia, P., Sotomayor, C. y Gonzalez, G. 1999. Cholesterol effect on lipid phase and betahydroxybutyrate hydrogenase activity in unilamellar vesicles and in bovine heart mitochondria. Biol Res. 32: R-177 Maerker, G. 1987 Cholesterol autoxidation. Current status. J Am Oil Chem Soc 64: 387-392. Schroepfer, G.J. Jr. 2000. Oxysterols: Modulators of cholesterol metabolism and other processes. Physiology Reviews 80, 361-554. Colles MS, Maxson MJ, Carlson GS,

10.

11.

12.

Chisolm MG. 2001. Oxidized LDLinduced injury and apoptosis in atherosclerosis. Potential role for oxysterols. Trends Cardiovasc. Med. 11:131-138. Folch, J., Lees, M. y Sloane, S.G.H. 1957. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem. 226: 497-509. Kanhal Al, M.A., Ahmad, A.A., Othman Al, A.A., Arif, Z. and Murshed Al, K.S. 2002. Effect of pure oxidized cholesterol-rich diets on some biochemical parameters in rats. Inter. J. Food Sci. Nutr. 53: 381388. Osada, K., Kodama, T., Yamada, K., Nakamura, S. y Sugano, M. 1998. Dietary oxidized colesterol modulates colesterol metabolism and linoleic acid desaturation in rats fed high-cholesterol diets. Lipids 33(8):757-764. Seo, J.B., Moon, H.M., Kim, W.S., Lee, Y.S., Jeong, H.W., Yoo, E.J., Ham., J., Kang, H., Park, M.G., Steffensen, K.R., Stulning, T.M., Gustafsson, J.A., Park, S.D. y Kim, J.B. 2004. Activated liver X receptors stimulate adipocyte differentiation through induction of peroxisome proliferators-activated receptor ; expression. Mol. & Cell Biol. 24(8):3430-3444. Libby, P., Aikawa, M. and Schnbeck, U. 2000. Cholesterol and atherosclerosis. Biochim. Biophys. Acta-Mol. Cell Biol. Lipids. 529: 299309. Sottero, B., Gamba, P., Gargiulo, S., Leonarduzzi, G. y Poli, G. 2009.Cholesterol Oxidation Products and Disease: An Emerging Topic of Interest in Medicinal Chemistry. Curr Med Chem, 16, 685-705

18

CONFIRMACION DIAGNSTICA DE VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO (VPH) EN BIOPSIAS DE CERVIX, MEDIANTE REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR).
Salvador Contreras Huerta Ivone Gomez Gonzalez Guadalupe Alcantar Garcia Armando Mendez Perez

Marco terico:
El Virus del Papiloma Humano (VPH) es uno de los virus que se transmite con mayor frecuencia por va sexual. Al menos la mitad de los hombres y mujeres sexualmente activos contraern el VPH en algn momento de sus vidas. Este virus es considerado inductor de neoplasias malignas de tipo escamoso en el cervix uterino y esta vinculado de forma directa con el cncer cervicouterino y de pene. Despus del cncer de mama, el cncer de cervix ocupa el segundo lugar con una incidencia del 87% y es considerado por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) como una de las principales causas de muerte en el mundo, clculos estadsticos prevn en 40 aos pudiera alcanzar la cifra de un milln de casos. En la actualidad se cuenta con diversas metodologas capaces de diagnosticar este padecimiento, siendo las de mayor relevancia aquellas que involucran al ADN viral; una de estas pruebas es la denominada Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) la cual cuenta con un grado de sensibilidad y especificidad alto. El

desarrollo de las tcnicas de biologa molecular y su amplio uso en estudios epidemiolgicos ha permitido estimar que entre un 2 y un 20 % de la poblacin femenina mundial es portadora oculta del VPH en el cuello uterino. En la ltima dcada se ha confirmado la relacin etiolgica entre la infeccin por ciertos genotipos del VPH y el cncer de cuello uterino. En el campo de la investigacin bsica, este hallazgo constituye un nuevo modelo para estudiar el mecanismo viral de la oncognesis y en el terreno de la epidemiologa, la carcinognesis cervical es de gran trascendencia. Aunque las pruebas de histopatologa aporten datos de lesin indirecta, es necesario realizar el diagnostico certero y oportuno de la presencia viral y la tipificacin del mismo, con la finalidad de ayudar a disminuir el numero de infecciones y por consiguiente el de casos mortales por CaCu al impedir el desarrollo de la neoplasia.

Planteamiento del problema:


Se desconoce el porcentaje de casos realmente positivos para VPH diagnosticados
Xalapa Departamento De Patologia

Docente y Profesional de la salud Facultad De Medicina. Uv Experimental qcpatoex@hotmail.com

19

por histopatologa en biopsias de crvix y la identificacin de los subtipos virales circulantes en la regin.

Objetivo General:
Confirmar la presencia de VPH en biopsias cervicales mediante la tcnica de PCR.

analizados por electroforesis en geles de agarosa al 1.5% con solucin buffer TBE 1X. Todos los productos amplificados por PCR y digeridos por RFLP se visualizaran en un transiluminador con luz ultravioleta. ANALISIS DE LA INFORMACION: se emplearan para la base de datos los Software Office 2007 Excel y Statistica versin 6.0, en primera instancia se realizara un anlisis estadstico univariado aplicando tablas de frecuencias, grficas circulares, de barras, as como diagramas de cajas y alambres. Posteriormente efectuaremos un anlisis divariado que consistir en hallar las posibles correlaciones del padecimiento.

Metodologa:
DISEO: Prospectivo, Transversal, Comparativo y Observacional. UNIVERSO DE ESTUDIO: Se estudiaran un total de 80 biopsias de crvix con diagnstico histopatolgico de lesin intraepitelial o tumor infiltrante inducidos por el virus del papiloma humano y un total de 20 biopsias de crvix sin lesion. VARIABLES: Virus de papiloma humano Subtipos viralesAmbas variables sern medidas en escala nominal considerando presencia o ausencia. PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: Se utilizarn biopsias de crvix en bloques de parafina tomadas previamente y diagnosticadas por histopatologa con lesin intraepitelial de alto grado o carcinoma escamoso invasor, se aislara el ADN para realizar posteriormente amplificacin por PCR de la regin L1 del papiloma virus con el fin de obtener un segmento de 450 pares de bases al someterse a electroforesis en gel de agarosa 1 % en buffer de TBE 1X, posteriormente y si las muestras son positivas se realizara la tipificacin empleando enzimas de digestin segn la tcnica de polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restriccin(RFLP) utilizando las enzimas RsaI, PstI, BamHI, HaeIII e HinFI y los productos sern

Resultados:
Para la realizacin de este estudio se utilizaron 80 muestras de biopsia de crvix provenientes de pacientes diagnosticados con lesin viral por papiloma con edad variable de 14 a 55 aos y 20 muestras de pacientes que se consideraron sanas con un rango de edad de 20 a 41 aos. En la amplificacin por PCR de la regin L1 del virus del papiloma, el grupo de casos tuvo amplificacin solo en el 77.5% (62 muestras), el 22.5% (18 muestras) no amplifico. El grupo control no tuvo amplificacin tal y como se esperaba. En la identificacin del subtipo viral por RFLP en las 62 muestras (100%) que si amplificaron a la regin L1, se observaron 6 expresiones virales las cuales se ordenaron por frecuencia de la siguiente manera: el subtipo 6 fue el de mayor frecuencia con 26% (16 casos), seguido del subtipo 11 con 23% (14 casos), subtipo 42 con 18% (11 casos), subtipo 16 con 16% (10 casos), subtipo 33 con 9% (6 casos) y el subtipo 54 fue el de menor frecuencia con 8% (5 casos).

20

Al clasificarlos de acuerdo al grado de oncogenicidad se obtuvo que el 25% (16 casos) corresponde a subtipos de alto grado (VPH16 y 33) y el siguiente 75% (46 casos) a los clasificados como de bajo grado (VPH6, 11, 42 y 54). Al analizar su distribucin por grupos de edades se encontr que los VPH 16 y 33 tienen mayor relevancia en el grupo de edad de 21-27 aos y nula presencia en el grupo de 14-20 aos, por su parte los VPH 6,11 y 42 tuvieron tambin mayor expresin en el grupo de 21-27 aos con cuatro casos cada uno, en el grupo de 14-20 el VPH 11 mantuvo su expresin al igual que el VPH 6 en el grupo de 35-41 aos. Al efectuar el comparativo entre ambos mtodos (histopatolgico/PCR) se notaron marcadas diferencias, en primer lugar que de el total (80 muestras) solo un 77.5% fue realmente portador de VPH, segundo que el 43.75% (35 casos) considerados como de alto grado, disminuyo a un 20% por PCR y el 56.25% (45 casos) catalogado como de bajo grado aumento a un 57.5% por PCR al demostrarse por RFLP que 1 caso considerado de alto grado no lo era; finalmente un 22.5% resulto no ser portador de virus y mucho menos ser de alto grado.

Discusin:
El desconocimiento de este agente viral, la poca atencin de la gente a campaas de prevencin y diagnostico oportuno, aunado al inicio temprano de la vida sexual, la promiscuidad y no practicar el sexo seguro; ha incrementado el numero de infecciones y por consiguiente el numero de casos de CaCu.Si bien es cierto la mayora de estos diagnsticos son efectuados por gente especializada en citologa e histopatologa, es

claro tambin que existen errores humanos que pudieran alterar un resultado y por consiguiente su tratamiento, razn que motiv a la realizacin de este trabajo; con la finalidad de corroborar los diagnsticos obtenidos por las tcnicas antes mencionadas junto con los reportados por mtodos moleculares como es el caso de PCR. Tras comparar los resultados obtenidos por ambos mtodos (histopatologa/PCR), se muestra que el primer estudio tiene una sensibilidad del 77% con margen de error del 23% tal y como se manifiesta en estudios realizados por el Depto. de Anatoma Patolgica de la Universidad de la frontera en Chile y por el Servicio de Anatoma Patolgica del Policlinico de Espaa en sus artculos titulados Detection of human papilloma virus in cytologic samples or biopsies of the cervix y Correlacin diagnostica entre las displasias de crvix y deteccin por PCR del papiloma virus humano, mostrando gran diferencia de las pruebas realizadas por PCR que implican la amplificacin de un gen tardio (L1) del VPH empleando ADN, que tienen una excelente sensibilidad para detectar alteraciones celulares no captadas por otros mtodos convencionales.

Conclusin:
Despus de haber realizado el presente trabajo, de analizar los resultados y llevar acabo el comparativo de los mismos en los procedimientos que aqu se describieron anteriormente, se concluye que: La prueba de Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) conjuntamente con la amplificacin del gen tardo L1, constituye una metodologa til y muy sensible para la

21

deteccin del Virus del Papiloma Humano, adems de confirmar el diagnstico citolgico, colposcpico e histopatologico; particularmente en lesiones intraepiteliales o con atipias. El empleo de la tcnica de polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP) facilita la identificacin de los subtipos virales causantes de las lesiones en el crvix, ayuda tambin a que el medico brinde de acuerdo a sus conocimientos el tratamiento adecuado y permita la deteccin temprana de precursores graves del cncer. Se espera que los estudios por ADN de VPH con sus respectivos oligonucletidos (MY09/MY11) constituyan un mtodo racional para complementar el frotis de Papanicolaou, la colposcopia y la histopatologa en nuestra entidad y ofrecer as un sistema ms preciso para el diagnostico y valoracin del riesgo carcingeno. Finalmente se pone a consideracin de las Instituciones de Salud y de sus profesionales involucrados en este tema, el uso de tcnicas avanzadas como es el PCRRFLP para incorporarlos a sus laboratorios como una herramienta ms de apoyo diagnostico y por consiguiente se sugiere la preparacin adecuada de su personal para poder desarrollarlas.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Hans UB, Shih NS, Niachaele MM, Chi KO, Villa LL, Hajo D, Cheri P, Identification and assessment of known and novel fragment length polymorphism, nucleotide sequence

9.

and philogenetic algorithms J of infect Dis. 1994; 170:1077-1085. Barasso R, Bergeron C, Veaudenon S. A human papilloma virus associated with cervical intraepithelial neoplasia: Great diversity and distinct distribution in low and high grade lesion. Am J Surg Pathol. 1992; 16:641-649. Bedel MA, Hudson JB, Lalmina LA, NicCance DJ. Immortalization and alteration of Different of human keratinocytes in vitro by the E6 y E7 open reading frames of human Papilloma virus type 18. J Virol. 1990; 64: 519-596. Bergen S, Waller J, et al, Wilczynski SP. Human papilloma virus and cervical cancer: Analysis of histopathologic features associated with different viral types. Hum Pathol. 1988; 19: 697-704. Borregaard N., Elsbach P., Ganz T., Garred P, Svejgaard A. Innate immunity: from plants to humans. Immunol Today 2000; 21:68-70. Bosch FX, Lorincz A, Muoz N, Meijer CJLM, Shah KV. The causal relation between human Papillomavirus and cervical cancer. J Clin Pathol 2002; 55(4): 244- 265. Camarena A, Garca A, Granados J, Navarro C, Zuiga RJ, Olvera R, Prez LE, Quirz V, Selman LM, Vargas AG. Aspectos inmunogenticos de la tuberculosis pulmonar. Rev Inst Enf Resp Mex. 2000; 13(4):240-247. Cancer DJ, Camolon SP, Carkson, Chesters, Jenllsins D, Singer A. The prevalence of human papilloma virus type 16 DNA Sequences in cervical intraepithelial neoplasia and invasive carcinoma of the cervix Br J Obstet Gynecol. 1999:1101-110. Cerwenka, A; Lainer, L.L, Natural Killer Cell, Viruses and Cancer Nature Reviews 2001, 1:41-49.

22

10. Chen W, Jin W, Tian H, Sicurello P,

19. Ho GYF, Biermal R, Beardsley L, et al.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

Frank M, Orenstein JM, et al. Requirement for Transforming Growth Factor ;1 in Controlling T Cell Apoptosis. J Exp Med 2001; 194:439-453. Chenggis ML, Costa N, Kenny MB, Unger BR, In situ hibridization for human papilloma virus DNA in uterine adenosquamous carcinoma with glassy cell features (glassy cell carcinoma). Am J Clin Pathol. 1992; 98:186-187. Colonna M, Samaridis J, Cella M, Angman, Allen R, OCallaghan C. Human myelomonocytic cells express an inhibitory receptor for classical and nonclassical MHC class I molecules. J Immunol 1998; 160: 3096-100. Cmbita, Alba, Coursaget, Pierre y Bravo, Mara, Deteccin de anticuerpos neutralizantes contra virus del papiloma humano tipo 16. Revista Colombiana de Cancerologa 2003; 7(2). Crum CP, Levin RU, Mitao M, Nagal N, Silvester. Histological and molecular analysis of early cervical neoplasia. J Cell Biol Cern Suppl. 1985; 9:70. De Villers FM. Heterogeneity of the human papilloma virus group. J Virol. 1989; 63:4898-4903. Diefenbach A, Raulet D. Strategies for Target Cell Recognition by Natural Killer Cells. Immuno Rev 2001; 181:170-184. Durst ML, Glassman H, Ikenbeerg IH, Zur Hausen HA. Papilloma virus DNA from a cervical carcinoma and its prevalence in cancer biopsy samples from different geographic regions. Proc Nati Acad Sci. 1983:3812-3815. Green D, Droin N, Pinkoski M. Activation-induced Cell Death in T Cells. Immunol Rev 2003; 193:70-80.

20.

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

Natural history of cervicovaginal papillomavirus infection in young women. N Engl J Med 1998; 338: 42328. Ho GYF, Burk RD, Klein S, et al. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for persistent cervical dysplasia. J Natl Cancer Inst 1995; 87:136571. Ikenberg H, Giasmarin L, Gross O, Ornssndorf EJ, Zur Hausen H. Human papova virus type 16 related DNA in Genital Bowns disease and Bowenoid papulosis. Int J Cancer. 1983; 32:562565. Mizul N. Nucleotide sequense analysis of the HLA class I region spanning the 237 kb segment around the HLA and C genes. Genomies. 1997; 42:55-66. Murphy WJ, Koh CY, Raziuddi A, Bennett M, Longo DL. Immunobiology of Natural Killer Cells and Bone Marrow Transplantation: Merging of Basic and Preclinical Studies. Immunol Rev 2001; 181:279-289. Pardoll D. Does the immune system see tumors as foreign or self? Annu Rev. Immunol 2003. 21:807-839. Schiffinan MU, Batir HM, Hoover RN, Olass AG, Cadeil DM, Rush BB, Seonil DR, Shermann ME, Kurman RJ, Wacholder S. Epidemiologic evidence showing that human papilloma virus infection causes most intraepithelial neoplasia. J Nat Cancer Inst. 1993; 85:958-964. Sosa, Mara Beatriz, HPV: el virus del Papiloma Humano. Gineconet.com. 2002. Stanley MA. Human papillomavirus and cervical carcinogenesis. Baillie Clin Obstet Gynaecol2001; 15(5):663-676.

23

28. Stoler,

M H et al., Human papillomavirus type 16 and 18 Gene Expression in Cervical Neoplasias. Human Pathol. 1992; 23(2):117-128. 29. Syijanen MI. Condilomatous lesions in dysplasic and neoplasic epithelium of uterine cervix. Surg Gynecol Obstet 1980; 150:372-376. 30. Zur Hausen H. Papillomaviruses

Causing Cancer: Evasion From HostCell Control in Early Events in Carcinogenesis [Review]. J Natl Cancer Inst 2000; 92: 6908. 31. Documento de consenso. La infeccion por papiloma virus. Sociedad Espaola de Ginecologia y Obstetricia. (SEGO) Ao 2002.

24

DETECCIN DE CLONAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS METICILINO RESISTENTES (MRSA) EN EL HOSPITAL REGIONAL DE ALTA ESPECIALIDAD DE VERACRUZ (HRV)
Miguel ngel Ortiz Gil Mara Elena Velzquez Meza Javier Paul Mora Domnguez Irma Gabriela Echniz Avils Mara Noem Carnalla Barajas Elsa Lilia Mendiola Del Moral

Marco terico:
Antes del uso de antibiticos una bacteriemia causada por S. aureus produca una mortalidad de aproximadamente el 82%. Aun ahora este porcentaje sigue siendo elevado entre el 25-63%.(1) S. aureus produce exoproteinas que contribuyen a colonizar y causar enfermedad en el humano.(2) S. aureus meticilino resistente (MRSA), posee un elemento gentico mvil llamado, casete cromosomal estafiloccico mec (SCCmec), que incluye al gen mecA,(3) el cual codifica para la protena de unin a penicilina 2a (PBP2a) y determina la resistencia a todos los -lactmicos.(4). Existen mltiples linajes clnales de MRSA como consecuencia de la transferencia horizontal del mecA.(5) Seis tipos de clonas pandmicas de MRSA han sido reportadas: Ibrica, Brasilea, Hngara, Nueva York/Japn, Peditrica y EMRSA-16.(6). En Mxico en el Instituto Nacional de Salud Pblica, se han realizado estudios encaminados a conocer las clonas que

circulan en diversos hospitales de la repblica mexicana ( Hospitales del Distrito Federal, Guadalajara, Chihuahua, Monterrey y San Luis Potos) y se ha documentado la presencia de la clona EMRSA-16(7) y la clona internacional multiresistente Nueva York/Japn(8),(9). Las 6 clonas pandmicas de MRSA posen caractersticas distintas en cuanto a sus factores de virulencia y resistencia antimicrobiana. La clona ms predominante en este momento en Mxico es la clona Nueva York/Japn que tiene la capacidad de propagarse, causar brotes y reemplazar las clonas existentes,(10) esto se debe a su alta capacidad de virulencia; entre los genes que posee se encuentran algunas enterotoxinas, las cuales le permiten causar entre otras cosas fascitis necrotizante.(11). Tambin posee la toxina del sndrome de choque txico 1, que causa una gran variedad de sndromes clnicos, incluyendo el sndrome de choque txico e infecciones supurativas(12) y a esto se suma que es resistente a - lactmicos y a una amplia gama de otros antibiticos.(13)

Estudiante de Maestra Instituto Nacional de Salud Publica Especialidad de Veracruz (SSAVER) maog86@gmail.com

Hospital

Regional

de

Alta

25

Planteamiento del problema:


La prevalencia de MRSA en Mxico ha aumentado de forma progresiva en las tres ltimas dcadas, provocando la diseminacin de cepas multiresistentes y altamente virulentas. Dada la importancia que representa este patgeno para la salud pblica y debido a los cambios epidemiolgicos y moleculares que se han venido produciendo, se ha planteado realizar un anlisis de las clonas de MRSA que circulan en el Hospital Regional de Alta Especialidad de Veracruz (HRV) y su perfil de resistencia antimicrobiana. La presencia de cepas de MRSA descendientes de clonas epidmicas favorece con frecuencia el desarrollo de brotes dentro de los hospitales, por lo cual se plantea la siguiente pregunta de investigacin:Cules son las clonas de S. aureus meticilino resistente que circulan en el Hospital Regional de Alta Especialidad de Veracruz?

similitud con el programa (NTSys).(19)

Resultados:
En el periodo de estudio se colectaron un total de 99 cepas, las cuales fueron obtenidas de 8 diferentes servicios mdicos, siendo el de mayor frecuencia medicina interna (53%) y el sitio de aislamiento ms predominante fue el hemocultivo (35%). Los resultados fenotpicos mostraron que el 100% de las cepas fueron catalasa positiva, 92.6% fueron coagulasa positiva y 97% mostraron resistencia a cefoxitina. El 90% de las cepas fueron identificadas como MRSA, siendo estas sensibles a rifampicina, teicoplanina, trimetroprim/sulfametoxazol y vancomicina y resistentes al resto de los antimicrobianos probados. El anlisis genotpico por PFGE mostr la presencia de los subtipos clnales (C28, C31 y C35) los cuales se encuentran relacionados con la clona Nueva York-Japn y el patrn (Ib) es un subtipo de la clona Ibrica.

Objetivo General: Discusin:


Objetivo General: Identificar las clonas de S. aureus meticilino resistente que circulan en el Hospital Regional de Alta Especialidad de Veracruz. En Mxico, la incidencia de infecciones nosocomiales oscila entre 3.8 y 26.1 casos por cada 100 egresos; la mortalidad asociada con infecciones intrahospitalarias en promedio es 5% y para el 2001 ocup la sptima causa de muerte.(20) Los recursos para el control de las infecciones por MRSA siguen siendo limitados y los MRSA son una de las principales causas de infeccin nosocomial en nuestro pas, sin embargo, la magnitud del problema no se entiende completamente, ya que los datos tienden a provenir de grandes hospitales, mientras que gran parte de la poblacin es atendida en centros comunitarios de salud que no cuentan con amplias instalaciones para realizar vigilancia microbiolgica. En Mxico los estudios demuestran un aumento en la prevalencia de los MRSA durante los ltimos aos, la Organizacin

Metodologa:
Estudio transversal prospectivo, se recolectaron cepas del HRV en un periodo comprendido de septiembre 2009 a julio 2010.Se realiz las pruebas de coagulasa, catalasa y cefoxitina.(14) La identificacin de especie y susceptibilidad antimicrobiana se hizo por Sensititre(15), (16). Para el anlisis genotpico se utiliz la tcnica de electroforesis de campos pulsados (PFGE).(17) Los resultados fenotpicos se analizaron con Excel 2010, mientras que los resultados del PFGE se analizaron de acuerdo a los criterios de Tenover 1995(18) y se realiz un dendrograma de coeficiente de

26

Panamericana de la Salud (OPS) en el 2004 report una prevalencia de MRSA del 52%, la Asociacin Panamericana de Enfermedades Infecciosas para 2006 report una tasa de MRSA de 32% y datos ms recientes del 2008 procedentes del estudio TEST muestran una prevalencia del 48% de MRSA.(21) Por lo cual este estudio permiti establecer una vigilancia epidemiolgica de las infecciones nosocomiales por MRSA en el HRV, mostrando que el 93% de los aislados fueron S. aureus con una prevalencia de resistencia a meticilina del 97%. Esta informacin difiere mucho con lo reportado por el Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn (INCMNSZ) durante 1981 a 1992, donde encontraron que el 8% de los aislados fueron S. aureus con una prevalencia de resistencia a meticilina menor a 20%. Sin embargo, estudios recientes muestran prevalencias muy similares entre el HRV y el INCMNSZ (2004 2005), donde indican una prevalencia de S. aureus superior a 50% en aislados con una tasa de resistencia a meticilina del 100%.(22). Estas prevalencias y resistencias antimicrobianas varan en cada hospital y dependen del control en el uso de antimicrobianos y del programa de vigilancia de infecciones nosocomiales. Este estudio evidencio la presencia de dos clonas MRSA pandmicas en el HRV, estableciendo que los patrones C28, C31 y C35 son subtipos de la clona Nueva York/Japn y el patrn Ib es un subtipo de la clona Ibrica. La importancia de este hallazgo radica en que la primera cepa de MRSA resistente a vancomicina (VRSA) perteneci al linaje Nueva YorkJapn.(23),(24) Mientras que la clona Ibrica se disemino ampliamente en Europa(25),(26) y EEUU(27) y fue causante de severos brotes hospitalarios en estas regiones(28) y fue la primera cepa de S. aureus con resistencia intermedia a vancomicina (VISA)(29),(30),(31) y sensibilidad reducida a la teicoplanina.(32)

Conclusin:
La clona Nueva York/Japn ha sido identificada previamente en otros hospitales en Mxico (norte y centro). Este es el primer reporte de esta clona al sur de Mxico, lo que demuestra claramente su gran capacidad de expansin geogrfica, multiresistencia y virulencia. Adems por primera vez se evidencia la presencia de la clona Ibrica en Mxico. La vigilancia epidemiolgica molecular de las clonas de MRSA permiten tener un mayor entendimiento de la dinmica de distribucin de las clonas responsables de infecciones en el HRV; conocimiento indispensable para la prevencin, control y posible erradicacin de este microorganismo.

Referencias Bibliogrficas:
(1) Howe RA, Brown NM, Spencer RC. The new threats of Gram positive pathogens: re-emergence of things past. J Clin Pathol 1996; 49:444-9. (2) Dinges MM, Orwin PM, Schlievert PM. Exotoxins of Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Rev 2000; 13:16-34. (3) Catarina Milheirico, Duarte C. Oliveira and Herminia de Lencastre. Update to the multiplex PCR strategy for assignment of mec element types in Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents and Chemother, Sept. 2007, Vol. 51, No. 9. p. 3374 3377. (4) Henry F. Chambers. Methicillin resistance in staphylococci: molecular and biochemical basis and clinical implications. Clinical Microbiology Reviews. Oct. 1997, Vol. 10, No. 4. p. 781791. (5) Ad C. Fluit, Franz-Josef Schmitz. MRSA: current perspectives. EEUU, Edit. Horizon Scientific Press, 2003.

27

Pag. 146-147. ISBN 0954246454, 9780954246457. (6) Marta Aires de Sousa and Herminia de Lencastre. Bridges from hospitals to the laboratory: genetic portraits of methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones. FEMS Immunology and Medical Microbiology 40 (2004) 101-111. (7) Aires de Sousa M, Miragaia M, Santos Sanches I, et al. Three years assessment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones in Latin America from 1996 to 1998. J Clin Microbiol 2001; 39: 2197-205. (8) Velazquez-Meza ME, Aires de Sousa M, Echaniz-Aviles G, et al. Surveillance of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a pediatric hospital in Mexico City during a 7Year Period (1997 to 2003): clonal evolution and impact of infection control. J Clin Microb 2004; 42: 3877-80. (9) G. Echaniz-Aviles, M. E. VelazquezMeza, M. Aires-de-Sousa, R. MorfnOtero, E. Rodrguez Noriega, N. Carnalla-Barajas, S. EsparzaAhumada and H. de Lencastre. Molecular characterisation of a dominant methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) clone in a Mexican hospital (19992003). Clin Microbiol Infect 2006; 12: 22 28. (10)Coombs GW, Van Gessel H, Pearson JC, Godsell MR, O'Brien FG, Christiansen KJ. Controlling a multicenter outbreak involving the New York/Japan methicillin-resistant Staphylococcus aureus clone. Infect Control Hosp Epidemiol. 2007 Jul;28(7):845-52. Epub 2007 Jun 5. (11)Orii KO, Iwao Y, Higuchi W, Takano T, Yamamoto T. Molecular

characterization of methicillinresistant Staphylococcus aureus from a fatal case of necrotizing fasciitis in an extremely low-birthweight infant. Clin Microbiol Infect. 2010 Mar;16(3):289-92. Epub 2009 Jun 6. (12)Durand G, Bes M, Meugnier H, Enright MC, Forey F, Liassine N, Wenger A, Kikuchi K, Lina G, Vandenesch F, Etienne J. Detection of new methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones containing the toxic shock syndrome toxin 1 gene responsible for hospitaland community-acquired infections in France. J Clin Microbiol. 2006 Mar;44(3):847-53. (13)Aires de Sousa M, de Lencastre H, Santos Sanches I, Kikuchi K, Totsuka K, Tomasz A. Similarity of antibiotic resistance patterns and molecular typing properties of methicillinresistant Staphylococcus aureus isolates widely spread in hospitals in New York City and in a hospital in Tokyo, Japan. Microb Drug Resist. 2000 Fall;6(3):253-8. (14)Konemann, Fabin Benencia et al. Diagnostico Microbiologico: Texto y Atlas color. Edicin,1. Edit. Mdica Panamericana, 2000. Pag, 529 y 531. ISBN 950061250X, 9789500612500. (15)Ortiz Gil MA, Mora Domnguez JP, Aguilera Alfonso A. Colonizacin bacteriana y susceptibilidad antibacteriana de Pseudomonas aeruginosa aisladas de pacientes quemados infectados del Hospital Regional de Alta Especialidad de Veracruz. Enf Inf Microbiol 2009 29 (1): 11-19. (16)National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaaerobic bacteria; 5th Approved

28

standard, 2009; M11-A5. Wayne, Pa, USA. (17)Chung M, de Lencastre H, Matthews P, Tomasz A, Adamsson I, Aires de Sousa M, Camou T et al. Molecular typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by pulsedfield gel electrophoresis: comparison of results obtained in a multilaboratory effort using identical protocols and MRSA strains. Microb Drug Resist. 2000 Fall;6(3):189-98. (18)Tenover FC, Arbeit RD, Goering RV, Mickelsen PA, Murray BE, Persing DH et al. Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed- field gel electrophoresis: Criteria for bacterial strain typing. J Clin Microbiol 1995; 33:2233-2239. (19)Rohlf, F.J. 1994. Numerical taxonomy and Multivariate Analysis System. Version 1.80. Applied Biostastics. Stauket, N.Y. (20)Ivn Karina Ruiz Lpez, Juan Bernardo B. Diemond Hernndez, Daniel O. Pacheco Rosas, Martha Velzquez Camacho, ric M Flores Ruiz and Ma. Guadalupe Miranda Novales. Bacterial resistance in isolates from patients with nosocomial infections. ENF INF MICROBIOL 2007 27 (1): 15-21. (21)Guzmn-Blanco M, Meja C, Isturiz R, Alvarez C, Bavestrello L, Gotuzzo E, Labarca J, Luna CM, RodrguezNoriega E, Salles MJ, Zurita J, Seas C. Epidemiology of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Latin America. Int J Antimicrob Agents. 2009 Oct;34(4):304-8. Epub 2009 Jul 21. (22)Jos Sifuentes-Osornio, Santiago Prez-Patrigeon. Sepsis por Staphylococcus aureus resistente a meticilina: la sombra de una amenaza permanente. Rev Invest Clin 2006; 58 (6): 598-607.

(23)McDougal LK, Steward CD, Killgore GE, Chaitram JM, McAllister SK, Tenover FC. Pulsed-field gel electrophoresis typing of oxacillinresistant Staphylococcus aureus isolates from the United States: establishing a national database. J Clin Microbiol 2003; 41: 51135120. (24)Weigel LM, Clewell DB, Gill SR et al. Genetic analysis of a high-level vancomycin-resistant isolate of Staphylococcus aureus. Science 2003; 302: 15691571. (25)Stefani S, Varaldo PE. Epidemiology of methicillin-resistant staphylococci in Europe. Clin Microbiol Infect. 2003 Dec;9(12):1179-86. (26)Sanches IS, Aires de Sousa M, Sobral L, Calheiros I, Felicio L, Pedra I, de Lencastre H. Multidrug-resistant Iberian epidemic clone of methicillinresistant Staphylococcus aureus endemic in a hospital in northern Portugal. Microb Drug Resist. 1995 Winter;1(4):299-306. (27)Roberts RB, Tennenberg AM, Eisner W, Hargrave J, Drusin LM, Yurt R, Kreiswirth BN. Outbreak in a New York City teaching hospital burn center caused by the Iberian epidemic clone of MRSA. Microb Drug Resist. 1998 Fall;4(3):175-83. (28)Mato R, Santos Sanches I, Venditti M, Platt DJ, Brown A, Chung M, de Lencastre H. Spread of the multiresistant Iberian clone of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) to Italy and Scotland. Microb Drug Resist. 1998 Summer;4(2):107-12. (29)Zribi M, Etienne J, El Euch D, Zribi H, Bes M, Meugnier H, Masmoudi A, Osman AB, Fendri C. [Detection of the first strain of glycopeptide intermediary Staphylococcus aureus in Tunis Rabta hospital.] Pathol Biol (Paris). 2009 Nov 24.

29

(30)Cassone M, Campanile F, Pantosti A, Venditti M, Stefani S. Identification of a variant "Rome clone" of methicillin-resistant Staphylococcus aureus with decreased susceptibility to vancomycin, responsible for an outbreak in an intensive care unit. Microb Drug Resist. 2004 Spring;10(1):43-9. (31)Krzysztoo-Russjan J, Gniadkowski M, Poowniak-Pracka H, Hagmajer E, Hryniewicz W. The first Staphylococcus aureus isolates with

reduced susceptibility to vancomycin in Poland. J Antimicrob Chemother. 2002 Dec;50(6):1065-9. (32)Heym B, Le Moal M, Armand-Lefevre L, Nicolas-Chanoine MH. Multilocus sequence typing (MLST) shows that the 'Iberian' clone of methicillinresistant Staphylococcus aureus has spread to France and acquired reduced susceptibility to teicoplanin. J Antimicrob Chemother. 2002 Sep;50(3):323-9.

30

DIAGNSTICO MOLECULAR DE DENGUE


Armando Mendez Perez : Salvador Contreras Huerta Mercedes Tepetla Peredo Dolores Carranza Gonzalez

Marco terico:
A principios de 1990 el Dengue se convirti en uno de los 5 mayores problemas de salud que aquejan a los pases centroamericanos y una de su variantes; el Dengue clsico es una enfermedad viral que afecta las regiones tropicales y subtropicales en el mundo, predominantemente en reas urbanas y suburbanas, puede evolucionar hacia sus formas graves de dengue hemorrgico y shock asociado a dengue. Se estima que existen anualmente 50 a 100 millones de nuevos casos infectados por virus del dengue en el mundo y de los cuales resultan 250,000 a 500,000 casos de dengue hemorrgico y 24 muertes cada ao por lo cual se ha considerado un problema serio de salud publica. El Dengue es un virus RNA encapsulado y el mas prevalente de los arbovirus en regiones subtropicales y tropicales, genmicamente est constituido por 11 kb y esta subdividido en 3 genes que codifican protenas estructurales (C,M y E) y 7 genes que codifican protenas no estructurales. Hay 4 subtipos que inducen inmunoproteccin para el mismo subtipo pero parcialmente en subsecuente infeccin

con otros serotipos. Esta generalmente aceptado que una infeccin secundaria por este flavivirus implica una respuesta Th2 importante que propicia incremento notable en la formacin de complejos inmunes los cuales juegan un papel critico en la patogenia de dengue hemorrgico y shock. La infeccin por virus del dengue implica un amplio espectro clnico desde inaparente infeccin, resfriado comn, fiebre indeterminada, dengue clsico hasta la expresin clnica mas grave correspondiente a dengue hemorrgico o shock. El diagnostico de certeza, inmediato y de diferenciacin del subtipo resulta fundamental para el estudio etiolgico, clnico y control epidemiolgico. La amenaza del Dengue no se debe, ni se puede enfrentar aisladamente en las actuales condiciones mundiales. Los pases centroamericanos y en especial el nuestro deben actuar de manera conjunta y coordinada para solucionar este problema. En el campo clnico el diagnostico por laboratorio debe ser apoyado por las nuevas tecnologas que permitan no solo detectar la presencia del agente causal, sino mejor aun
Facultad de Medicina. UV Xalapa

Investigador Departamento de Patologia Experimental .qcpatoex@hotmail.com

31

tener una respuesta pronta en los sitios donde se estn presentando los primeros brotes.

Planteamiento del problema:


Se desconoce cuales son los subtipos virus del Dengue presentes en una poblacin y cuales son los que propician el tipo hemorrgico.

Objetivo General:
Confirmar la presencia del virus dengue por medio de RT-PCR en 200 pacientes clnicamente catalogados e identificar los subtipos mediante Nested PCR.

Metodologia:
DISEO Prospectivo, Comparativo y Observacional. Transversal,

UNIVERSO DE ESTUDIO: Se muestrearon 200 pacientes con diagnostico clnico de dengue procedentes del Hospital Civil de Martnez de la Torre, Casa de Salud de la UV en Veracruz, Ver. Y Centro de Salud Carranza de la SSA ubicado en la Colonia el Manglar de Boca del Rio, con el consentimiento aprobado. Los pacientes presentaron un cuadro nosolgico caracterizado por fiebre de 39.2C cefalalgia frontal, mialgias, artralgias, dolor retroorbitario, anorexia y eritema parcial. De estos 200 pacientes 17 cursaron con trombocitopenia, petequias, hemorragia mucocutnea y tres de estos pacientes con un cuadro de shock progresivo. Tambin se seleccionaron 100 muestras aparentemente sanas como testigos. VARIABLES: Dengue clsico: medida en

escala nominal considerando presencia o ausenciaDengue hemorrgico: medida en escala nominal considerando presencia o ausenciaSubtipos 1, 2,3 y 4: medida en escala nominal considerando presencia o ausencia. PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: Se obtuvo de cada uno de los pacientes 7 c.c. de sangre, se centrifug a 3500 rpm, se separ el plasma y se almacen en tubos de eppendorff a -70C. Se eliminaron eritrocitos mediante solucin de lisis y se separaron leucocitos. Del suero y leucocitos se aisl RNA con mtodo tradicional. La transcripcin en reversa se realiz utilizando el amplicn D2-D1 especifico correspondiente a la regin gnica Pre-M del virus. Se incluy transcriptasa inversa AMV ( avian mieloblastosis virus). La cadena resultante se someti a PCR anidado mediante los primers TS1, TS2, TS3y TS4 de los cuales se esperaba obtener amplicones de 482, 119, 290 y 392 pb. Respectivamente. ANALISIS DE LA INFORMACION: Las variables estudiadas fueron Dengue clsico, Dengue hemorrgico y subtipos 1, 2, 3 y 4, en primera instancia se realizo un anlisis estadstico univariado aplicando tablas de frecuencias, grficas circular, de barras, as como diagramas de cajas y alambres. Posteriormente se efectu un anlisis divariado que consisti en hallar las posibles correlaciones del padecimiento.

Resultados:
En la Amplificacin de la regin D1-D2 por RT-PCR, se observo que el 100% de las muestras del grupo de casos fue positivo

32

para Virus dengue, en la determinacin de los subtipos virales para por NESTED PCR se observaron las siguientes expresiones medidas en porcentajes: subtipo viral T1 (0%) T2 (30%) T3 (15%) T4 (12.5% ) y en combinaciones por reinfeccin T2-T1(2.5%) T2-T3 (37.5%) Y T2-T4 (2.5%). Con ello se logro identificar que el 42.5 % correspondi a dengue hemorrgico y el 57.5 % para dengue clsico.

anti viral durante meses no permite diferenciar con certeza si la infeccin corresponde a un brote primario o secundario y con el inconveniente de presentar reaccin cruzada a antgenos homlogos y heterlogos , por lo tanto no es posible identificar si se trata de una infeccin por algn otro de los 4 subtipos virales o reaccin cruzada a otro flavivirus.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Discusin:
El diagnostico molecular de dengue por medio de RT-PCR y PCR anidado mltiple es un anlisis sumamente confiable en el diagnostico de la enfermedad y clasificacin del subtipo viral. Este mtodo conduce a un diagnostico del dengue en su fase aguda desde el primer da de evolucin aislando RNA viral del suero de los pacientes en fase aguda o convalecientes, para identificacin de los 4 subtipos virales ; adems de contribuir al diagnostico etiolgico tambin lo hace significativamente en el control clnico y diferenciacin entre una entidad clnica primaria o secundaria otorgando adems especificidad diagnostica del 98%.

Acosta C. Gmez I Biologa y mtodos diagnsticos dengue, dengue. Rev. Biomed. Vol. 16:113137, 2005 Balmaceda A. Manual de procedimientos de tcnicas para el diagnstico del Dengue. Programa de Reconstruccin Pos-Huracanes George y Mitch. Organizacin Panamericana de la Salud, Oficina Regional de la Organizacin Mundial de la Salud, 2002. Carrillo, Sergio. (1994). Programa de prevencin y control de Dengue Hemorrgico. Maracay. Estado Aragua. Tesis de Grado. Chungue, E.; Cassar, O.; Drouet, M.T.; Guzmn, M.G. y col. Molecular epidemiology of Dengue-1 and Dengue-4 viruses. J. Gen. Virol. 76: 1877-1884, 1995. Crespo MP. El diagnstico viral por el laboratorio. Colombia Mdica 2000; 31:135-50. Cuzzubbo AJ, Vaughn DW, Nisalak A, Suntayakorn S, Aaskov J, Devine PL.

2.

3.

Conclusin:
Entre las tcnicas serolgicas mas comnmente utilizadas es la captura de IgG e IgM, por mtodo de ELISA IgM es detectable entre el da 3 y 5 en el 50% de los pacientes en la fase aguda de la enfermedad primaria o secundaria y alcanza su pico durante 2 semanas y declina hasta hacerse imperceptible a los 2 o 3 meses de evolucin. El serodiagnstico de infeccin por dengue identificando IgG

4.

5.

6.

33

Detection of specific antibodies in saliva during Dengue infection. J Clin Microbiol 1998; 36:3737-9.
7.

.- Delgado I, Vzquez S, Bravo JR, Guzmn MG. Prediccin del serotipo del virus del dengue mediante la respuesta de anticuerpos IgM. Rev. Cubana Med Trop 2002; 54:113-117. Dengue: Manual Prctico. Grupo de consenso nacional para la prevencin y control del dengue en Venezuela. [En lnea] 2001 [fecha acceso 20 febrero 2004] URL disponible en http://www.reinaldogodoyeditor.co m/subpaginas/manualDengue.htm. Dengue en las Amricas http://www.paho.org/spanish/hcp/.. ../arias-denge.htm. y Dengue Hemorrgico

Informacin para los Mdicos. Centro para el Control y Prevencin de las Enfermedades de los Estados Unidos. [en lnea] 2000 [Fecha acceso 20 febrero 2004] URL disponible en. http://geosalud.com/enfermedades _infecciosas/dengue_hemorragico.ht m
11. Dengue aspectos clnicos y de salud

8.

9.

publica, seccin de enfermedades infecciosas transmitidas por vectores.Disponible en http://www.cdc.gov/ncidad/dubod/ dengue/slideset/spanish.setl/i/slide0 8.htm.12 - Fields, B.N.; Knipe, D.M. Virology. 2nd. Edition. Raven Press, 1990.

10. Dengue

34

INMUNOPATOGENIA

EN 200 PACIENTES CON

DENGUE
Armando Mendez Perez Salvador Contreras Huerta Mercedes Tepetla Peredo Dolores Carranza Gonzalez

Marco terico:
La infeccin por virus del dengue causa una significativa morbilidad y mortalidad en los pases tropicales. Aunque inicialmente se describi predominantemente en la infancia, esta enfermedad se ha diseminado actualmente en todos los grupos de edad, con el primer reporte de pandemia en 1950 con este primer brote en el sureste asitico. El virus del dengue pertenece al gnero de flavivirus y se divide en 4 serotipos cada uno de ellos es capaz de de ocasionar un espectro de expresin con un rango amplio desde portadores asintomticos a una enfermedad febril con cifras altas de temperatura, hasta una discrasia hemorrgica con frecuencia fatal.Las primeras manifestaciones clnicas son entre 5 y 8 das post-inoculacin, el husped desarrolla una viremia que dura aproximadamente cinco das. Los sntomas ms frecuentes son: fiebre elevada 39-40C intermitente bifsica, cefalea, mialgias, artralgias, con dolor cervical y lumbar, dolor retrocular, nuseas y/o vmito, dolor

abdominal. Los sntomas respiratorios (tos, rinitis, faringitis) son frecuentes y se pueden presentar erupciones cutnea maculopapular que aparece al comienzo de la fiebre o coincide con un segundo pico febril a los 35 das. Pueden observarse poliadenopatas, granulocitopenia, linfocitosis relativa y trombopenia En los casos severos de la enfermedad (DH) Dengue hemorrgico (SCHD) Sndrome de choque por dengue) adems del cuadro anterior se presenta abruptamente hipotensin, dficit en la perfusin tisular perifrica y manifestaciones hemorrgicas a distintos niveles siendo leves en algunos casos o evolucionando rpidamente hasta llegar a sufusiones en piel, tubo digestivo, sistema nervioso, aparato urinario y serosas con derrame pleural siendo letal un 10-40 por ciento de los casos. En el Dengue hemorrgico hay un descenso del nivel de plaquetas por debajo de 100.000/mm3 y un aumento del hematocrito (hemoconcentracin) En los casos benignos o moderados, luego del descenso de la fiebre, el resto de los sntomas y signos retroceden recuperndose
Facultad de Medicina. UV Xalapa.

Investigador Departamento de Patologia Experimental qcpatoex@hotmail.com

35

espontanamente pero en los casos severos despus de un descenso de la fiebre entre el 3 y el 7 da, el estado del paciente empeora repentinamente, presentndose cianosis, taquipnea, hipotensin, hepatomegalia, hemorragias mltiples y falla circulatoria. La situacin es de corta duracin, pudiendo llevar a la muerte en 12 a 24 horas (1 a 10% de los casos) o a la rpida recuperacin luego del tratamiento antishock. Existe aumento de la permeabilidad vascular, hemoconcentracin, trombocitopenia, y depleccin del fibringeno (y del factor VIII, factor XII, etc.) con concentracin elevada de sus productos de degradacin. A pesar de los avances en el estudio de la respuesta inmunitaria del husped a los antgenos virales la patognesis no es exacta, aunque son varios los mecanismos involucrados simultneamente. Este trabajo se inclina hacia el estudio de la funcin polarizada y dominante de linfocitos CD4 en particular su variante Th2.

UNIVERSO DE ESTUDIOSe estudiaron 200 muestras de suero con diagnostico clnico de dengue confirmado por RT-PCR de pacientes del Hospital Civil de Martnez de la Torre, Casa de Salud de la UV en Veracruz, Ver. Y Centro de Salud Carranza de la SSA ubicado en Colonia el manglar en Boca del Rio. Los pacientes cursaron con fiebre de 39.2C, cefalalgia frontal, dolor retroorbitario, artralgias, mialgias y eritema cutneo. De estos 200 casos 17 cursaron con dengue hemorrgico caracterizado por hemorragias puntiformes en mucosa oral, pinguculas, prpura e hipotensin. Como grupo control se usaron 40 sueros de individuos considerados sanos. VARIABLES: Virus Dengue: medida en escala nominal considerando presencia o ausenciaIL4, IL 9, CCL 18 y CCL 2 : medicin cuantitativa en picogramos (pg). PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: Se obtuvieron 2 c.c. de suero de cada paciente estos se conservaron a menos 70C e identificaron correctamente. Se llevo a efecto la cuantificacin de IL 4, IL 9, CCL 18 y CCL 2 mediante mtodo de ELISA con anticuerpos monoclonales recombinantes marca R&D Systems. Para cada una de las interleucinas se coloco una curva estndar, terminada la reaccin y formacin de complejos se realizo lectura de las muestras a 450nm en lector de microplacas y se obtuvieron lecturas derivadas de las absorvancias mismas que fueron utilizadas para hacer los clculos expresados en picogramos. ANALISIS DE LA INFORMACION: Para la base de datos se empleo el Software Office 2007 Excel donde se realizo un anlisis estadstico

Planteamiento del problema:


Se desconoce el comportamiento de la cintica inmunitaria en los 200 pacientes con virus Dengue.

Objetivo General:
Realizar la cuantificacin de las interleucinas IL4, IL 9, CCL 18 y CCL 2 mediante mtodo de ELISA con anticuerpos monoclonales recombinantes.

Metodologa:
DISEO Prospectivo, Comparativo y Observacional. Transversal,

36

para cada interleucina por separado obteniendo la media y realizando una comparacin con el grupo control, aplicando grficas de barras, as como diagramas de cajas y alambres.

propiciando disfuncin endotelial, esfacelacin y trombocitopenia, previa fijacin y activacin del complemento.

Conclusin:
DISCUSION Y CONCLUSION: El primer contacto del virus con el sistema inmune se produce cuando se internaliza en clulas dendrticas a nivel tisular. Estas clulas procesadoras y presentadoras de antgenos alojan las partculas virales en retculo endoplsmico y endosomas donde RNA viral interacta con Toll 4 y se activa el sistema inmunocompetente . Una vez que estas lneas de clulas se activan liberan IL 4. Este mediador propicia por va paracrina transduccin y transcripcin en clulas procesadoras y presentadoras de antgenos de CCL 18, esta protena es quimiotactico de Linfocitos Th2 los cuales al activarse sintetizan IL 9. CD 40L es expresado en linfocitos TH2 y a travs de este ligando con CD40 en linfocitos B transcriben la sntesis de IgM e IgG. Estas inmunoglobulinas identifican antgenos virales que forman complejos y dibujan un tipo de lesin humoral mediada por anticuerpos al unirse al RII gamma de inmunoglobulina en plaquetas y endotelio propiciando disfuncin endotelial, esfacelacin y trombocitopenia, previa fijacin y activacin del complemento.

Resultados:
Se observaron cifras elevadas en pacientes con dengue clsico de IL 4 28pg/ml (en testigos 3.6 pg/ml), CCL 18 arrojo cifras de 1348 pg/ml en pacientes ( testigos 789pg/ml,) IL 9 en pacientes mostro cifras de 265pg/ml (en controles 24 pg/ml.) y CCL2 60pg/ml (testigos 79.3 pg/ml).

Discusin:
DISCUSION Y CONCLUSION: El primer contacto del virus con el sistema inmune se produce cuando se internaliza en clulas dendrticas a nivel tisular. Estas clulas procesadoras y presentadoras de antgenos alojan las partculas virales en retculo endoplsmico y endosomas donde RNA viral interacta con Toll 4 y se activa el sistema inmunocompetente . Una vez que estas lneas de clulas se activan liberan IL 4. Este mediador propicia por va paracrina transduccin y transcripcin en clulas procesadoras y presentadoras de antgenos de CCL 18, esta protena es quimiotactico de Linfocitos Th2 los cuales al activarse sintetizan IL 9. CD 40L es expresado en linfocitos TH2 y a travs de este ligando con CD40 en linfocitos B transcriben la sntesis de IgM e IgG. Estas inmunoglobulinas identifican antgenos virales que forman complejos y dibujan un tipo de lesin humoral mediada por anticuerpos al unirse al RII gamma de inmunoglobulina en plaquetas y endotelio

Referencias Bibliogrficas:
1.

Acosta C. Gmez I Biologa y mtodos diagnsticos dengue, dengue. Rev. Biomed. Vol. 16:113137, 2005 Balmaceda A. Manual de

2.

37

procedimientos de tcnicas para el diagnstico del Dengue. Programa de Reconstruccin Pos-Huracanes George y Mitch. Organizacin Panamericana de la Salud, Oficina Regional de la Organizacin Mundial de la Salud, 2002.
3.

prevencin y control del dengue en Venezuela. [En lnea] 2001 [fecha acceso 20 febrero 2004] URL disponible en http://www.reinaldogodoyeditor.co m/subpaginas/manualDengue.htm.
9.

Carrillo, Sergio. (1994). Programa de prevencin y control de Dengue Hemorrgico. Maracay. Estado Aragua. Tesis de Grado. Chungue, E.; Cassar, O.; Drouet, M.T.; Guzmn, M.G. y col. Molecular epidemiology of Dengue-1 and Dengue-4 viruses. J. Gen. Virol. 76: 1877-1884, 1995. Crespo MP. El diagnstico viral por el laboratorio. Colombia Mdica 2000; 31:135-50. Cuzzubbo AJ, Vaughn DW, Nisalak A, Suntayakorn S, Aaskov J, Devine PL. Detection of specific antibodies in saliva during Dengue infection. J Clin Microbiol 1998; 36:3737-9. Delgado I, Vzquez S, Bravo JR, Guzmn MG. Prediccin del serotipo del virus del dengue mediante la respuesta de anticuerpos IgM. Rev. Cubana Med Trop 2002; 54:113-117. Dengue: Manual Prctico. Grupo de consenso nacional para la

Dengue en las Amricas http://www.paho.org/spanish/hcp/.. ../arias-denge.htm. y Dengue Hemorrgico Informacin para los Mdicos. Centro para el Control y Prevencin de las Enfermedades de los Estados Unidos. [en lnea] 2000 [Fecha acceso 20 febrero 2004] URL disponible en. http://geosalud.com/enfermedades _infecciosas/dengue_hemorragico.ht m

10. Dengue

4.

5.

6.

11. Dengue aspectos clnicos y de salud

7.

publica, seccin de enfermedades infecciosas transmitidas por vectores.Disponible en http://www.cdc.gov/ncidad/dubod/ dengue/slideset/spanish.setl/i/slide0 8.htm.
12. Fields, B.N.; Knipe, D.M. Virology.

2nd. Edition. Raven Press, 1990.

8.

38

IDENTIFICACIN DE RECEPTORES DE ANGIOTENSINA II Y CAVEOLINA-1 EN CORDN UMBILICAL Y CLULAS ENDOTELIALES DE CORDN UMBILICAL (HUVECS) DE
PACIENTES PREECLMPTICAS
Jos Arnold Gonzalez Garrido Aracely Lopez Monteon ngel Ramos Ligonio Jos Rubn Garca Snchez Guillermo Manuel Ceballos Reyes Enrique Mndez Bolaina

Marco terico:
La preeclampsia es un desorden especfico que afecta al 5% de las enzimas hepticas todos los embarazos y es reconocida clnicamente por la presencia de hipertensin (HTA), aumento de y un bajo conteo de plaquetas (sndrome HELLP), proteinuria (presencia de protenas en la orina) y edema, que ocurre despus de la vigsima semana.1En algunos casos la preeclampsia progresa a algo ms serio conocido como eclampsia, la cual conlleva al coma o la muerte materno-fetal. Cuando la preeclampsia no progresa a eclampsia puede dejar secuelas tales como fallo renal, ruptura heptica, retardamiento del crecimiento intrauterino y muerte fetal intrauterina2,3. Las causas de la preeclampsia no son conocidas, pero existe evidencia de estar asociada a la activacin y disfuncin endotelial, muchas investigaciones han demostrado mediante marcadores

endoteliales una probable asociacin, proponiendo un incremento en la circulacin de los niveles del factor de Von Willebrand, Angiotensina II (Ang II), endotelina y fibronectina.4 El sistema renina-angiotensina (encargado de la regulacin de la presin arterial), realiza su funcin a travs de la Ang II y sus receptores AT1 y AT2, los cuales estn implicados en distintos procesos como el desarrollo y diferenciacin celular.5En 1953 se observo en la membrana celular de clulas endoteliales la presencia de invaginaciones, las cuales se denominaron como caveolas.6,7 Estudios posteriores encontraron la presencia de protenas en las caveolas, denominndolas caveolinas (Cav), describindose tres tipos Cav-1, -2 y -3. Dentro de las caveolinas destaca la cav-1 por tener funciones importantes para la caveola como; direccionar la formacin de caveola y ser un inhibidor inespecfico de protenas tirosina cinasa (mediante su pptido definido en el aminocido 82-101, CSP-1), por lo que
Biomdicas Universidad Veracruzana

Estudiante de Doctorado Centro arngonzalez@uv.mx

de

Investigaciones

39

la cav-1 podra tener un papel importante en la disfuncin endotelial que se presenta en la preeclampsia

Planteamiento del problema:


Debido a que la preeclampsia es una enfermedad de la que se desconocen sus causas de origen, y se asocia a una activacin y disfuncin endotelial, el enfoque de este trabajo es evidenciar la disfuncin a nivel de los receptores de Ang II y observar si existe un cambio en la expresin de la Cav-1, la cual es un inhibidor inespecfico de protenas cinasas.

Objetivo General:
Determinar la expresin de las protenas AT1, AT2 y Cav-1 en el cordn umbilical y clulas endoteliales del cordn de mujeres embarazadas con preeclampsia.

Metodologia:
Tipo de Estudio: Investigacin Bsica Recoleccin de Muestras. Se realiz un estudio experimental con cordones umbilicales de pacientes eutcicos y preeclmpticos donados por el Hospital General Crdoba, Veracruz, llevado a cabo de Agosto de Octubre de 2009 a Marzo de 2010. Se realizaron cultivos de endotelio de cordn umbilical de pacientes eutcicos y preeclmpticos, se transportaron de 2 a 4 cordones umbilicales frescos en solucin de transporte. Los cordones se procesaron en campana de flujo laminar, se extrajeron las clulas endoteliales, las cuales fueron resuspendidas en Medio Suplementado y fueron sembradas en caja de cultivo de 75 cm2, se incubaron y se observ su crecimiento de 5 a 6 das posteriores a su

obtencin, mantenindose en crecimiento hasta confluencia celular. Una vez obtenido los cultivos se realizaron ensayos de inmunocitoqumica para caracterizar al endotelio a travs de la identificacin del factor Von Willebrand, el cual es expresado solo por clulas endoteliales y megacariocitos.Inmunocitoqumica de protenas AT1, AT2 y Cav-1 en HUVECs Una vez caracterizado el endotelio se realizaron los ensayos de inmunocitoqumica indirecta para observar la inmunoexpresin de las protenas AT1, AT2 y Cav-1, utilizando anticuerpos contra cada una de las protenas, posteriormente se utiliz un anticuerpo secundario acoplado a FITC y TRIC. Se realizo el conteo de pixeles en el programa IPLab 3.6.5 y los datos se sometieron a un anlisis estadstico. Western Blot en el cordn umbilical. Se realiz el anlisis de la expresin de los receptores de Ang II en el cordn umbilical de embarazos eutcicos y preeclmpticos. Se realiz la extraccin de protena de los cordones umbilicales y se cuantific la protena mediante el mtodo de lowry. Se realiz el Western Blot en condiciones desnaturalizantes para identificar la presencia de las protenas AT1, AT2, Cav-1 y GAPDH mediante el uso del anticuerpo antiAT1 (1:200), AT2 (1:200), Cav-1 (1:500) y GAPDH (1:3000) (Santa Cruz Biotechnology). Se realiz el revelado de las membranas por la reaccin de la Diaminobencidina (DAB), identificndose la presencia de las protenas. Se realiz un anlisis densitomtrico de los Blots en el programa Labworks 4.0, estos experimentos fueron realizados por triplicado y se someti a un anlisis estadstico en el programa Prism 5.0. Para evidenciar las diferencias estadsticas por

40

medio de p 0.05.

Resultados:
En el anlisis de la expresin de las protenas AT1, AT2 y Cav-1 en el cordn umbilical. Se encontr que el receptor AT1 est presente en una mayor expresin en los cordones de preeclampsia en comparacin con los cordones eutcicos. Al analizar su expresin en las HUVECs se encontr AT1 est presente en una mayor expresin en HUVECs de preeclampsia en comparacin con las HUVECs eutcicas observndose en el anlisis diferencias estadstica de p<0.05. En la expresin del receptor AT2 se encontr un aumento en la expresin en los cordones de preeclampsia en comparacin con los cordones eutcicos observndose en el anlisis densitomtrico una diferencia estadstica de p<0.05. Al analizar su expresin en HUVECs se encontr que el receptor AT2 est presente en una mayor proporcin en las HUVECs de preeclampsia en comparacin con las HUVECs eutcicas, encontrndose diferencias significativas. En la expresin de Cav-1 no se encontr ninguna diferencia en cordones eutcicos o preeclmpticos, al analizar la expresin de Cav-1 en las HUVECs no se encontr ninguna diferencia en su expresin, tanto en las HUVECs eutcicas o preeclmpticas. En ambos anlisis no se encontraron diferencias significativas.

Discusin:
Se han realizado estudios que han evidenciado en la preeclampsia la implicacin de los receptores de Ang II en tejido placentario, mostrando que el receptor AT1 se encuentra disminuida su

expresin, debido a una baja participacin de la placenta en la disfuncin causada por la preeclampsia,9 por otra parte nosotros realizamos la evaluacin de la expresin de los receptores en el cordn umbilical de pacientes con embarazos eutcicos y preeclmpticos, donde se observ que los receptores AT1 y AT2 en el cordn umbilical de preeclampsia se encuentra aumentada su expresin con respecto al cordn eutcico, sin embargo, fue evidente el incremento en la expresin del receptor AT2 en comparacin con el receptor AT1 en ambos cordones, donde se ha descrito que la expresin del receptor AT2 es importante en el desarrollo y diferenciacin celular, asociando su aumento en la expresin en tejidos neonatales.10 Aunque, a pesar de que el cordn contiene una variedad de clulas, al evaluar la expresin de estos receptores en el cultivo de endotelio de cordn umbilical se encontr que la expresin de los receptores de Ang II se mantiene de la misma forma que en el cultivo celular. Lo cual nos permite sugerir que el endotelio mantiene la expresin del tejido al cultivo.La protena Cav-1 que es parte de la caveola, y dentro de este est contenido el pptido de anclaje de Cav-1 definido en el aa 82-101, el cual es un inhibidor inespecfico de cinasas y de gran importancia en el funcionamiento celular.11 La expresin de la Cav-1 no mostro diferencias en los cordones eutcicos o preeclmpticos, adems de que se realizo su bsqueda en endotelio en cultivo, en los cuales se mantuvo la misma expresin que en el cordn umbilical. Se ha propuesto que el desarrollo de la hipertensin en la preeclampsia resulta del dao endotelial generalizado y/o falta de equilibrio en la

41

produccin y/o accin de agentes vasoactivos, dentro de estos agentes determinantes se encuentra la Ang II que lleva a cabo su accin a travs de sus receptores AT1 y AT2, de los cuales, el receptor AT1 se ha descrito que participa en la vasoconstriccin y que el receptor AT2 es un antagonista del receptor AT1, el cual se une directamente formando un heterodmero que inhibe la funcin de vasoconstriccin de receptor AT112, en nuestros resultados observamos que en el endotelio preeclmptico la expresin de estos receptores se encuentra aumentada en comparacin con el endotelio eutcico, evidenciando la disfuncin endotelial en el endotelio preeclmptico. Por otra parte, se ha descrito que el CSP-1 es un inhibidor inespecfico de tirosinas cinasas13, al realizar los ensayos para detectar la presencia de la Cav-1 encontramos que no hay cambios en la expresin de esta protena tanto en el endotelio eutcico como preeclmptico, por lo cual al aumentar in vitro el CSP-1 nos permitir en un futuro prximo evaluar su desempeo en un endotelio eutcico y preeclmptico

Referencias Bibliograficas:
1.

Serrano, N. C. Diaz, L. A. Paez, M. C. Mesa, C. M. Cifuentes, R. Monterrosa, A. Angiotensinconverting enzyme I/D polymorphism and preeclampsia risk: evidence of small-study bias. PLoS Med, 2006. 3(12): e520. Duda, J. Preeclampsia. Still an enigma. West J Med 1996. 164(4): 315-20. Duley, L., S. Meher, and E. Abalos, Management of pre-eclampsia. Bmj, 2006. 25;332(7539): 463-8. Walsh, S.W., What causes endothelial cell activation in preeclamptic women? Am J Pathol, 2006. 169(4): 1104-6. Touyz, R.M. Recent advances in intracellular signalling in hypertension. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2003. 12(2): 165-74. Palade G. Fine structure of blood capillaries. J. Appl. Phys1953. 24:1424-36. Yamada E. The fine structure of the gall bladder epithelium of the mouse. J. Biophys. Biochem. Cytol. 1955.1:44558. Sato, Y., I. Sagami, and T. Shimizu, Identification of caveolin-1interacting sites in neuronal nitricoxide synthase. Molecular mechanism for inhibition of NO formation. J Biol Chem, 2004. 279(10): 8827-36.

2.

3.

4.

5.

6.

Conclusin:
De acuerdo a nuestro objetivo general que fue determinar la expresin de las protenas AT1, AT2 y Cav-1 en la preeclampsia encontramos un aumento en la expresin de las protenas AT1 y AT2 tanto en el cordn umbilical completo como en las HUVECs. Por otra parte la expresin de Cav-1 no mostr diferencias en su expresin en el cordn umbilical completo ni en las HUVECs de pacientes con embarazos eutcicos y preeclmpticos.
7.

8.

42

9.

Li X, Shams M, Zhu J, Khalig A, Wilkes M, Whittle M, Barnes N, Ahmed A.1998.Cellular localization of AT1 receptor mRNA and protein in normal placenta and its reduced expression in intrauterine growth restriction. Angiotensin II stimulates the release of vasorelaxants. J Clin Invest. 1998 Jan 15;101(2):442-54.

attachment of caveolin-1. The caveolin scaffolding domain is both necessary and sufficient for membrane binding in vitro. J Biol Chem, 1999. 274(32):22660-7.
12. AbdAlla, S. Lother, H. Abdel-tawab,

10. Inagami, T., and Y. Kitami. 1994.

A. M. Quitterer, U. The Angiotensin II AT2 Receptor is an AT1 Receptor Antagonist. J Biol Chem. 2001. 276 (43): 39721- 39726.
13. Couet, J., M. Sargiacomo, and M. P.

Angiotensin II receptor: molecular cloning, functions regulation. Hypertens. Res. 17:8797.


11. Schlegel, A. Schwab, R. B. Scherer, P.

E. Lisanti, M. P. A role for the caveolin scaffolding domain in mediating the membrane

Lisanti, Interaction of a receptor tyrosine kinase, EGF-R, with caveolins. Caveolin binding negatively regulates tyrosine and serine/threonine kinase activities. J Biol Chem, 1997. 272(48): 30429-38.

43

EVALUACIN DEL EFECTO DE CATEQUINA Y EPICATEQUINA DE THEOBROMA CACAO SOBRE LAS LNEAS MDA-MB 231 Y BT-474 DE CNCER DE MAMA
Melissa Hernndez Martnez . Ivonne Mara Olivares Corichi Guillermo Manuel Ceballos Reyes Jos Rubn Garca Snchez Jos Arnold Gonzalez Garrido

Marco terico:
A nivel mundial, el cncer de mama es la neoplasia ms comn entre las mujeres, reportndose 411,000 muertes al ao a causa de esta enfermedad y correspondiendo al 10.5% de todos los nuevos casos de cnceres registrados [1].El cncer de mama se define como una proliferacin acelerada, desordenada y no controlada de las clulas que forman la glndula mamaria. En Mxico, se estima que doce mujeres mueren diariamente a causa de esta neoplasia [2].Hoy en da se sabe que el cncer de mama es una enfermedad multifactorial donde genes encargados de la regulacin del ciclo celular, genes supresores de tumor y genes involucrados en el crecimiento y diferenciacin celular muestran alteraciones. Si bien, es indudable la participacin de los mecanismos

genticos, las modificaciones epigenticas estn emergiendo rpidamente como alteraciones que ocurren en las primeras fases de la tumorogenesis y que juegan un papel importante en el desarrollo y la progresin del tumor [3]. Actualmente existe un gran nmero de evidencias que sealan a la dieta como un elemento clave en la prevencin del cncer de mama [4]; de hecho, efectos quimio preventivos de los componentes fitoqumicos de frutas y hortalizas han sido detectados, as como su capacidad de activar genes silenciados por alteraciones epigenticas [5] y su posible capacidad de modular eventos celulares como son la apoptosis, la diferenciacin y el ciclo celular [6].Uno de los fitoqumicos ms representativos e intrigantes son los polifenoles; una familia de compuestos que

Estudiante de Maestra E.S.M. SECCION DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIN INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL meily_zza@hotmail.com

44

se han propuesto como una posible teraputica contra el cncer [7]. Entre estos polifenoles tenemos a los flavonoides, que incluyen los monmeros de Catequina y Epicatequina, los cuales se les relaciona con las propiedades antineoplsicas, sin embargo los mecanismos moleculares involucrados con estos efectos son poco entendidos.

Planteamiento del problema:


Debido a que los flavonoides han sido propuestos como una posible terapia en la carcinognesis, la pregunta a resolver est enfocada en determinar si los flavonoides Catequina y Epicatequina en su forma monomrica presentan efectos antiproliferativos en las lneas celulares MDA MB-231 y BT-474 provenientes de cncer de mama.

Objetivo General:
Evaluar el efecto de Catequina y Epicatequina sobre la proliferacin celular y la induccin de apoptosis en las lneas MDA MB-231 y BT-474 provenientes de cncer de mama.

Metodologia:
Tipo de estudio: Investigacin bsica. Reactivos: Catequina y Epicatequina se obtuvieron de SIGMA Aldrich. Fueron disueltos en metanol a una concentracin de 10 mM y almacenados a -20oC. MTT (3-[4,5Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) se disolvi en DMEN sin rojo de fenol y se almaceno a 4oC. Lneas celulares: Se emplearon las lneas celulares provenientes de carcinoma de mama; BT-474 (ductal) crecida en DMEN AVANZADO, suplementado con 10% de suero fetal bovino

(FBS) y la lnea MDA MB-231(lobulillar) crecida en DMEN Alto en glucosa y suplementado con 7.5% de FBS. Ambas lneas se mantuvieron a 37oC, 5% de CO2 y 95% de humedad. Ensayos de viabilidad celular. Las lneas celulares MDA MB-231 y BT-474 (1X103, 5X103 y 1X104) fueron sembradas en cajas de 96 pozos y se mantuvieron por 24 hrs en condiciones de cultivo. Posteriormente las clulas fueron incubadas con epicatequina y catequina (100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 y 450 M) por 72 hrs. La viabilidad celular fue determinada empleando el reactivo de MTT y de acuerdo al protocolo estndar. Curvas dosis respuesta fueron construidas con los resultados obtenidos y la concentracin inhibitoria 50 (CI50) fue determinada.Efecto de la mezcla Epicatequina-Catequina sobre la viabilidad celular. Las lneas celulares MDA MB-231 (1x104 clulas) fueron sembradas en caja de 96 pozos y se dejaron reposar 24 hrs. Las clulas fueron incubadas con la mezcla Epicatequina-Catequina [350 M de cada flavonoide] por un periodo de 72 hrs. La viabilidad celular fue determinada cada 24 hrs empleando el reactivo de MTT y de acuerdo al protocolo estndar. Como un control del efecto de cada flavonoide; Epicatequina y Catequina fueron empleados individualmente y sus efectos sobre la viabilidad fueron determinados como se menciono anteriormente. Determinacin de apoptosis por fragmentacin de ADN. Las clulas MDA MB-231 y BT-474 (1x106) fueron sembradas y se mantuvieron por 24 hrs en condiciones de crecimiento. Posteriormente, se cambio el medio por DMEN claro en la presencia de los compuestos fenlicos (350 M). Cada 24 hrs las clulas fueron recolectadas y el ADN fue

45

obtenido. Las clulas fueron lizadas, el DNA fue obtenido por precipitacin y su anlisis se realiz a travs de electroforesis en geles de agarosa al 2%.Anlisis estadstico. Los ensayos de proliferacin celular fueron realizados por cuadruplicado, se realizaron dos veces y se analizaron con el programa estadstico GraphPad Prism versin 5.

Resultados:
Con el objetivo de evaluar el efecto antineoplsico de Catequina y Epicatequina sobre las lneas MDA MB-231 y BT-474 se realizaron ensayos de proliferacin celular, para lo cual, se sembraron diferente nmero de clulas de ambas lneas celulares en presencia de los compuestos fenlicos a diferentes concentraciones (ver material y mtodos).Los ensayos de proliferacin celular mostraron que la lnea MDA MB-231 present un efecto inhibitorio en su proliferacin celular con ambos flavonoides, dicho efecto fue dependiente de la concentracin e independiente del nmero de clulas. Al evaluar la proliferacin de la lnea celular BT-474 bajo estas condiciones no se observ efecto alguno. Con los datos obtenidos con Catequina y Epicatequina sobre la proliferacin celular en la lnea MDA MB-231 se calcul la Concentracin Inhibitoria 50 (CI50) obteniendo un valor de: 350 M para ambos compuestos. Con el objetivo de observar si Catequina y Epicatequina administrados en combinacin producan un mayor efecto, se realizaron ensayos de proliferacin celular con la lnea MDA MB-231 (ver material y mtodos). Los resultados obtenidos mostraron un mayor efecto inhibitorio en la presencia de esta mezcla de flavonoides, este resultado

sugiere la existencia de diferentes mecanismos de accin de estos flavonoides. Este resultado abri la posibilidad de estudiar un posible efecto de esta mezcla en la lnea celular BT-474, los ensayos de proliferacin celular en la lnea BT-474 y la mezcla de flavonoides mostraron un efecto inhibitorio. Para evaluar el posible mecanismo de accin de estos flavonoides, la lnea celular MDA MB-231 se creci en presencia de epicatequina, catequina y la mezcla (ver material y mtodos). El ADN fue obtenido y analizado electroforticamente en geles de agarosa al 2 %. Los resultados obtenidos mostraron que Catequina, Epicatequina y la mezcla inducen una fragmentacin del ADN indicativa de apoptosis. Similares resultados fueron obtenidos en la lnea BT-474 cuando la mezcla de flavonoides fue empleada.

Discusin:
En el presente estudio se demostr la accin antiproliferativa de los monmeros de Catequina y Epicatequina en las lneas celulares MDA MB-231 y BT-474 provenientes de cncer de mama. Si bien, un efecto inhibitorio sobre la proliferacin celular de MDA MB-231 fue observado con ambos flavonoides, un mayor efecto fue detectado cuando una mezcla de ambos flavonoides fue utilizada. Interesantemente, el efecto inhibitorio en la lnea celular BT-474 solo fue observado cuando la mezcla de ambos flavonoides fue empleada. Es importante sealar, que si bien, hoy en da la gran mayora de los estudios son orientados a los polmeros de estos compuestos [8], en este trabajo presentamos las propiedades antineoplsicas de estos monmeros. Por

46

otro lado, los resultados obtenidos en el anlisis del ADN bajo estas condiciones, mostraron una fragmentacin caracterstica indicadora de la presencia de apoptosis, sugiriendo como un posible mecanismo de accin la induccin de muerte celular programada en la clula tumoral por parte de estos monmeros.

Mxico; Vol. 51 supl. 2. 2009. S335-S349. [3] Sigalotti L, Fratta E, Coral S, Cortini E, Covre A, Nicolay HJ, Anzalone L, Pezzani L, Di Giacomo AM, Fonsatti E, Colizzi F, Altomonte M, Calabr L, Maio M. Epigenetic drugs as pleiotropic agents in cancer treatment: biomolecular aspects and clinical applications. Italy. J Cell Physiol. 2007, 212(2):330-44. *4+ Romieu I, Lajous M. El papel de la obesidad, la actividad fsica y los factores dietticos en el riesgo de cncer de mama: la experiencia mexicana, Salud Pblica de Mxico; Vol. 51 supl. 2. 2009. S172-S180. *5+ Jaroslaw P, Violetta K, Wanda B. The effect of dietary polyphenols on the epigenetic regulation of gene expresion in MCF-7 breast cancer cells. Poland. ;wi ;cickiego 4, 2009. 192 (2):119-125. [6] Hadi S, Asad S, Singh S, Ahmad A. Putative mechanism for anticancer and apoptosis-inducing properties of plantderived polyphenolic compounds. India. IUBMB Life.2000. 50:167171. [7] Chen D, Milacic V, Chen MS, Wan SB, Lam WH, Huo C, Landis-Piwowar KR, Cui QC, Wali A, Chan TH, Dou QP. Tea polyphenols, their biological effects and potential molecular targets. USA. Histol Histopathol. 2008, 23(4):487-96. *8+ Hsuuw Y, Chan W. Epigallocatechin gallate dose-dependently induces apoptosis or necrosis in human MCF-7 cells. Taiwan. Ann N Y Acad Sci. 2007 .1095:428-40.

Conclusin:
Los ensayos de proliferacin celular muestran que los monmeros Catequina y Epicatequina tienen un efecto inhibitorio sobre la proliferacin celular independiente del nmero de clulas en la lnea MDA MB231.La combinacin de los compuestos fenlicos produjo un mayor efecto en la inhibicin del crecimiento de la lnea celular MDA MB-231.El efecto antineoplsico de Catequina y Epicatequina en la lnea celular BT-474 solo fue observado cuando una mezcla de estos flavonoides fue utilizada.El anlisis electrofortico del ADN de clulas MDA MB-231 y BT-474 tratadas con catequina y epicatequina sugiere a la apoptosis como un posible mecanismo de accin de estos flavonoides.

Referencias Bibliogrficas:
[1] Boyle P y Levin B. World Cancer Report 2008, World Health Organization, International Agency for Research on Cancer. France; 2008. *2+ Lpez C, Suarez L, Torres S. Deteccin del cncer de mama en Mxico: sntesis de los resultados de la Encuesta Nacional de Salud Reproductiva, Salud Pblica de

47

DETECCIN DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS Y NEISSERIA


GONORRHOEAE EN ESPECMENES GENITOURINARIOS MEDIANTE PCR MLTIPLE.
Salvador Contreras Huerta Armando Mendez Perez Yuritzi Alejandra Sandoval Hernandez Martha Lucero Mirafuentes Merino Julio Cesar Baizabal Rebolledo

Marco terico:
Las infecciones de transmisin sexual (ITS) figuran entre las principales causas de enfermedad en el mundo. Durante los ltimos 20 aos su importancia se ha acrecentado debido a su relacin con graves problemas del aparato reproductor. Aunque la magnitud exacta del problema no es bien conocida, en los pases industrializados al menos 1 de cada 100 personas consulta por una ITS, anualmente. En los pases en desarrollo las ITS figuran entre los cinco motivos ms frecuentes de consulta en los servicios de salud y cada ao ms de 333 millones de personas en el mundo adquieren una ITS, la mayora de las cuales son previsibles y curables. En muchos casos, estas infecciones permanecen asintomticas y sin tratamiento, con riesgo de contagio a otros individuos y con la posibilidad de ocasionar serios problemas de salud, incluyendo la infertilidad. Previamente, las ITS de mayor relevancia eran sfilis y gonorrea, sin embargo en la actualidad el

agente de mayor importancia es Chlamydia trachomatis (CT). Este agente infeccioso causa cerca de 90 millones de nuevos casos de infeccin genital por ao, seguido de gonorrea que ocasiona 60 millones de nuevos casos por ao. En la mayora de los individuos de uno u otro sexo la infeccin genital por CT suele ser asintomtica. Sin embargo, en 30% de mujeres que presentan cervicitis se ha observado desarrollo de salpingitis. Asimismo, se puede aislar CT hasta en 50% de las mujeres con enfermedad plvica inflamatoria.6 Esta situacin es preocupante porque la infeccin tubaria puede degenerar en obstruccin permanente y a consecuencia de ello producir infertilidad, o cuando se ocasiona obstruccin parcial puede presentarse embarazo ectpico.7 La infeccin por Neisseria gonorrhoeae (NG) es tambin causa de salpingitis e infertilidad. Por otra parte, las lceras genitales ocasionadas por infecciones bacterianas constituyen condiciones de riesgo para la transmisin del

Docente y Profesional de la salud DEPARTAMENTO MEDICINA. UV XALAPA. qcpatoex@hotmail.com

DE

PATOLOGIA

EXPERIMENTAL

FACULTAD

DE

48

virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y del virus del papiloma humano (VPH), y por lo tanto para el SIDA y el cncer crvicouterino. En hombres la uretritis gonocccica o clamidisica puede ser asintomtica hasta en 30% de los casos. Se ha observado que la infeccin subclnica crnica puede degenerar en prostatitis, epididimitis, estenosis de uretra y de los conductos deferentes, con el riesgo de esterilidad por azoospermia.En vista de la importancia que las ITS tienen para la salud pblica y personal es necesario conocer su frecuencia y caractersticas de presentacin. En Mxico se ha documentado que la prevalencia de infeccin por CT en el tracto genital inferior vara entre 3.3 y 28.4%, y la de gonorrea entre 2.8 y 11.6%, dependiendo de la poblacin muestreada y de la metodologa utilizada para el diagnstico.

pacientes con edades variables (18-50 aos) y de ambos sexos (28 femeninos y 12 masculinos) con diagnostico presuntivo de ITS por clamidia y gonococo. Cada uno de los pacientes incluidos en este estudio otorgo su consentimiento y proporciono informacin personal as como de inicio de vida sexual y numero de parejas. Se incluyeron tambin 20 individuos considerados sanos que sirvieron como grupo control para realizar la validacin del estudio. VARIABLES: Chlamydia trachomatis: medida en escala nominal considerando presencia o ausenciaNeisseria gonorrhoeae: medida en escala nominal considerando presencia o ausencia. PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: La recoleccin del material biolgico se efectu de varias formas, en mujeres se obtuvo muestras de orina y de secrecin vaginal, en varones fue raspado uretral, secrecin purulenta y de orina segn las condiciones de cada paciente. Concluida la recoleccin las muestras fueron rotuladas y procesadas de inmediato. Para la obtencin de ADN se realizaron lavados de las secreciones y centrifugados de las orinas, se obtuvo en todos los casos un botn celular el cual fue sometido a lisis nuclear, una vez liberado el ADN se purifico con lavados de etanol absoluto, 96% , 70% y se solubilizo con NaOH 0.8mM.El ADN de cada una de las muestras fue amplificado por PCR Mltiple mediante el uso de dos pares de iniciadores KL1/KL2 y HO1/HO3 especficos para clamidia y gonococo respectivamente. Concluida la amplificacin se efectu electroforesis en geles de agarosa al 1.5% en buffer de TBE 1X para la identificacin de productos.

Planteamiento del problema:


No se dispone de informacin exacta sobre la prevalencia de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae identificada por PCR Mltiple en especmenes genitourinarios.

Objetivo General:
Detectar y determinar la prevalencia de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae mediante PCR Mltiple en especmenes genitourinarios.

Metodologa:
DISEO Prospectivo, Comparativo y Observacional. Transversal,

UNIVERSO DE ESTUDIO: Se muestrearon 40

49

ANALISIS DE LA INFORMACION: Las variables estudiadas fueron Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae, en primera instancia se realizo un anlisis estadstico univariado aplicando tablas de frecuencias, grficas circular, de barras, as como diagramas de cajas y alambres. Posteriormente se efectu un anlisis divariado que consisti en hallar las posibles correlaciones del padecimiento.

pueden ser comparables con las descritas en la literatura al demostrarse que el grupo femenino es el ms comprometido y por consiguiente el mas afectado.En nuestro estudio la mayor prevalencia de infeccin es la descrita para C trachomatis y con un porcentaje menor la combinacin de ambas entidades patolgicas. Respecto a los varones los resultados indican una menor prevalencia tanto de gonorrea como de clamidiasis. Como se mencion en Mxico no existen datos que revelen la estadstica de casos diagnosticados por PCR Multiple para C.trachomatis y para N. gonorrhoeae ya que la mayora de los estudios han utilizado como marcador de infeccin la presencia de las bacterias en secreciones genitales, identificadas a travs de diversas tcnicas con diferente sensibilidad y especificidad. Considerando que esta investigacin constituye una de las primeras que se realizan con iniciadores especficos para ambas entidades utilizando como indicador de infeccin la presencia de ADN de las mismas.

Resultados:
En la Amplificacin por PCR Mltiple con los iniciadores KL1/KL2 y HO1/HO3, se observo que de los 40 casos sospechosos para ITS 24 (60%) fueron positivos para Chlamydia trachomatis, 8 (20%) para Neisseria gonorrhoeae, 4(10%) para ambas entidades y 4(10%) resultaron negativas. Para el grupo control no hubo amplificacin tal y como se esperaba.En la distribucin por sexo se identifico que el grupo femenino tuvo amplificacin para Chlamydia trachomatis en 15 casos (37.5%), 5 casos (12.5%) para Neisseria gonorrhoeae y 4 casos (10%) para ambas entidades; por su parte el grupo masculino presento 9 casos (22.5%) para Chlamydia trachomatis y 3 casos (7.5%) para Neisseria gonorrhoeae. Por su parte el grupo de edades con mayor numero de casos para ambas patologas fue el de 27 a 36 aos con un 45% y de estos el 22% cuenta con mas de una pareja sexual y el 13% no cuenta con una pareja estable.

Conclusin:
Con lo expuesto anteriormente queda de manifiesto que el uso de pruebas especificas y de alta sensibilidad como el PCR Mltiple permiten identificar de manera rpida y efectiva a N gonorrhoeae y C trachomatis, generando un diagnostico oportuno que permite prevenir fundamentalmente las secuelas en el aparato reproductor causando infertilidad en ambos sexos y disminuir la gravedad de las infecciones. A su vez este procedimiento es relevante con fines diagnsticos, con el propsito de definir la epidemiologa de las infecciones de

Discusin:
Los resultados de este estudio demuestran que la tasa de individuos con riesgo de contraer o que cursan cualquiera de estas dos patologas infecciosas es muy alto. Las cifras encontradas en mujeres y hombres

50

transmisin sexual y para determinar la susceptibilidad antimicrobiana.

Referencias Bibliogrficas:
1. Anceschi, M. M., C. Falcinelli, M. Pieretti, and E. V. Cosmi. 1990. Multipleprimer pairs polymerase chain reaction for the detection of human papillomavirustypes. J. Virol. Methods 28:5966. 2. Bauwens, J. E., A. M. Clark, M. J. Loeffelholz, S. A. Herman, and W. E.Stamm. 1993. Diagnosis of Chlamydia trachomatis urethritis in men by polymerasechain reaction assay of first-catch urine. J. Clin. Microbiol. 31:30133016. 3. Birkenmeyer, L., and A. S. Armstrong. 1992. Preliminary evaluation of theligase chain reaction for specific detection of Neisseria gonorrhoeae. J. Clin.Microbiol. 30:30893094. 4. Bobo, L., B. Munoz, R. Viscidi, T. Quinn, H. Mkocha, and S. West. 1991.Diagnosis of Chlamydia trachomatis eye infection in Tanzania by polymerasechain reaction/enzyme immunoassay. Lancet 338:847850. 5. Cano, R. J., J. C. Palomares, M. J. Torres, and R. E. Klem. 1992. Evaluationof a fluorescent DNA hybridization assay for the detection of N. gonorrhoeae.Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 11:602609 6. Chernesky, M. A., S. Castriciano, J. Sellors, I. Stewart, I. Cunningham,S.

Landis, W. Seidelman, L. Grant, C. Devlin, and J. Mahony. 1990. Detectionof Chlamydia trachomatis antigens in urine as an alternative to swabs Chlamydia trachomatis DNA by ligase chain reaction. J. Clin. Microbiol. 31:729731. 7. Hay, P. E., B. J. Thomas, C. Gilchrist, H. M. Palmer, C. B. Gilroy, and D.Taylor-Robinson. 1991. The value of urine sampling from men with nongonococcalurethritis for the detection of Chlamydia trachomatis. Genitourin.Med. 67:124128. 8. Ho, B. S. W., W. G. Feng, B. K. C. Wong, and S. I. Egglestone. 1992.Polymerase chain reaction for the detection of Neisseria gonorrhoeae inclinical specimens. J. Clin. Pathol. 45:439442. 9. Holmes, K. K., P. Mardh, P. F. Sparling, P. J. Wiesner, W. Cates, S. M.Lemon, and W. E. Stamm. 1990. Sexually transmitted diseases, p. 149 166.McGraw Hill, New York. 10. Iwen, P. C., R. A. Walker, K. L. Warren, D. M. Kelly, S. H. Hinrichs, and J.Linder. 1994. Evaluation of a nucleic acid based test for simultaneouslydetecting Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in endocervicalspecimens, abstr. C517. In Abstracts of the 94th General Meeting of theAmerican Society for Microbiology 1994. American Society for Microbiology,Washington, D.C.

51

11. Jaschek, G., C. A. Gaydos, L. E. Welsh, and T. C. Quinn. 1993. Directdetection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from symptomaticand asymptomatic men by using a rapid polymerase chain reaction assay. J.Clin. Microbiol. 31:12091212. 12. Korch, C., P. Hagblom, H. Oehman, M. Goeransson, and S. Normark. 1985.Cryptic plasmid of Neisseria gonorrhoeae: complete nucleotide sequence andgenetic organization. J. Bacteriol. 163:430438. 13. Loeffelholz, M. J., C. A. Lewinski, S. R. Silver, A. P. Purohit, S. A. Herman,D. A. Buonagurio, and E. A. Dragon. 1992. Detection of Chlamydia

trachomatisin endocervical specimens by polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol.30:2847 2851. 14. Mahony, J. B., K. E. Luinstra, D. Jang, J. Sellors, and M. A. Chernesky.1992. Chlamydia trachomatis confirmatory testing of PCR-positive genitourinaryspecimens using a second set of plasmid primers. Mol. Cell. Probes6:381388. 15. Mahony, J. B., K. E. Luinstra, J. W. Sellors, and M. A. Chernesky. 1993.Comparison of plasmid- and chromosome-based polymerase chain reactionassays for detecting Chlamydia trachomatis nucleic acids. J. Clin. Microbiol.31:17531758

52

CLONACIN DE UN FRAGMENTO DEL GENE QUE CODIFICA PARA LA PROTENA NS3 DE LOS 4 SEROTIPOS
DEL VIRUS DENGUE
Laura Mnica lvarez Rodrguez Mndez-Bolaina Enrique Ramos-Ligonio Angel Aracely Lpez-Monteon

Marco terico:
El dengue es un padecimiento infeccioso viral de tipo agudo y de distribucin mundial causado por cualquiera de los cuatro serotipos del virus del dengue (DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4), el cual es transmitido al humano por la picadura de la hembra hematfaga del mosquito del gnero Aedes (1). La infeccin por cualquiera de los 4 serotipos del virus puede provocar cuadros clnico variados que van desde una forma asintomtica hasta ciertas manifestaciones clnicas, y an causar la muerte. Bsicamente, se reconocen tres cuadros clnicos: la fiebre del dengue o dengue clsico (FD), la fiebre hemorrgica por dengue o dengue hemorrgico (FHD) y el sndrome de choque por dengue (SCD) (2). Este virus posee un RNA el cual codifica para una poliprotena que es procesada por proteasas tanto de origen viral como celular dando origen a 10 protenas, 3 estructurales (C, prM, E) y 7 no estructurales (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, y NS5 (3).

El tratamiento para la infeccin del dengue solo se basa en aliviar sntomas relacionados con la enfermedad, ya que no existen agentes teraputicos especficos para eliminar al virus (4). Por este motivo, el desarrollo de vacunas contra el dengue se ha convertido en una prioridad a nivel mundial, para prevenir epidemias tanto en pases endmicos como no endmicos. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) menciona que una vacuna contra el dengue debe brindar proteccin de larga duracin frente a la infeccin por cualquiera de los 4 serotipos del dengue (5). Las tcnicas de biologa molecular han permitido la clonacin de genes que codifican para protenas del virus, esto nos proporciona la oportunidad de evaluar posibles inmungenos que podrian ser buenos candidatos a vacunas. En el ser humano, la respuesta inmune contra el virus del dengue ha sido muy variada y est dirigida frente a diversos epitopos de las protenas vricas. Estos epitopos, especficos para cada serotipo, pueden utilizarse para el diseo y
Centro de Investigaciones Biomdicas

Estudiante de Doctorado Universidad Veracruzana laalvarez@uv.mx

53

creacin de vacunas tretavalentes que protejan hacia los 4 serotipos. Las protenas no estructurales, como NS1 y NS3, se han reportado como buenos inmungenos, por lo que las hace buenos candidatos en el desarrollo de vacunas contra el dengue (6).

virus dengue (VD) y que posee en su mayora epitopes para clulas T, en el presenta trabajo se propuso la construccin de una protena recombinante de cada serotipo con la finalidad de utilizarlos como candidatos a vacunas.

Planteamiento del problema:


A pesar de la gran incidencia del dengue en el mundo y de su grave situacin, no se dispone de vacunas preventivas ni frmacos antivirales especficos para el tratamiento del dengue. En la actualidad, existen proyectos en desarrollo que intentan construir vacunas recombinantes que expresen las protenas externas de todos los serotipos. La mayora de las vacunas se han preparado utilizando partculas virales inactivas o modificadas. Las vacunas producidas exclusivamente a partir de las protenas virales externas sintetizadas en bacterias son ms seguras dado que, sin el cido nucleico viral, no puede ocurrir contaminacin de la vacuna por partculas infectivas. Sin embargo, las dificultades en desarrollar una vacuna efectiva se centran en el requisito indispensable de una vacuna tetravalente protectora contra los cuatro serotipos. Se sabe que anticuerpos presentes en un individuo que ha sufrido FD representan un factor de riesgo para FHD, facilitando la entrada a la clula del serotipo reinfectante. Por lo tanto, una inmunizacin parcial con una vacuna monovalente implicara un riesgo aumentado en el individuo vacunado de sufrir una forma ms severa de enfermedad ante una infeccin con alguno de los otros tres serotipos. Tomando en cuenta todo lo anterior, y a que la protena NS3 es el principal antgeno del

Objetivo General:
Clonar un fragmento del gene que codifica para la protena NS3 de los 4 serotipos del virus dengue.

Metodologia:
Es un estudio experimental. Se utiliz la lnea celular C6/36 de Aedes albopictus infectada con los cuatro serotipo del virus dengue para aislar el RNA viral mediante el mtodo de TRizol (7). El RNA fue inmediantamente retrotranscrito a cDNA. El cDNA se empleo como molde para amplificar un fragmento del gen de la protena NS3 del virus dengue mediante PCR utilizando oligonucletidos serotipo-especficos (8). Los productos de PCR de cada serotipo se ligaron de manera independiente en el vector de clonacin pCR 2.1 TOPO. Con el DNA plasmdico de cada una de las clonas de cada serotipo se realizaron reacciones de restriccin con la enzima Eco RI para identificar la liberacin de los fragmentos de NS3. Con la finalidad de expresar los fragmentos de NS3 de cada serotipo, stos, se subclonaron en el vector de expresin pGEX-5X-1 el cual fue linearizado con la enzima Eco RI. Las clonas obtenidas se crecieron para la extraccin del DNA plasmdico por lisis alcalina, posteriormente fueron sometidas a reacciones de restriccin y los fragmentos fueron analizados en geles de agarosa al 1% teidos con bromuro de etidio. Para

54

identificar la expresin del gen de la protena NS3 se utilizaron las clonas positivas al fragmento de cada serotipo. Brevemente, se realizaron cultivos no inducidos e inducidos con IPTG, se realizaron extractos celulares los cuales se analizaron mediante geles de poliacrilamida al 10% y teidos con azul de coomassie. Finalmente se comprob la expresin del fragmento del gen de la protena NS3 de los cuatro serotipo mediante Western Blot (WB) utilizando un Ab policlonal dirigido contra GST.

expresaron una protena de 49 kDa (22 kDa correspondiente al fragmento NS3 y 27 kDa correspondientes a la GST). Para comprobar la expresin de la protena recombinante se realizo un WB con un anticuerpo policlonal anti-GST observndose el reconocimiento de la protena recombinante del peso esperado.

Discusin:
Debido al impacto actual del dengue en todo el mundo y su diseminacin, ha aumentado el inters en el desarrollo de una vacuna contra el dengue que sea segura, eficaz y que induzca proteccin de por vida hacia los cuatro serotipos. Los avances en las tcnicas de biologa molecular han facilitado el desarrollo de vacunas recombinantes contra diferentes virus, lo que ha permitido la produccin de protenas a gran escala. La mayora de los esfuerzos se han enfocado a producir vacunas utilizando la protena E, mientras que tambin se han utilizado las protenas no estructurales del virus (NS) (9). La protena NS3 se puede considerar como una posible candidato para el diseo de una vacuna debido a que constituye la fuente principal de epitopes de clulas CD4 + y CD8+ (10, 11). En principio, es factible realizar una vacuna contra el VD ya solo causa infeccin aguda y la replicacin del virus es efectivamente controlada despus de 3 a 7 das de viremia. Sin embargo los individuos que se han recuperado de una infeccin por VD, son inmunes al reto con el mismo serotipo pero no a otros serotipos del VD (12). Los problemas en el desarrollo de una vacuna contra el VD son que no se comprende aun la patognesis del FHD, as como la ausencia de un modelo animal para la enfermedad. Se sabe que los anticuerpos

Resultados:
De las reacciones de ligacin de cada uno de los fragmentos de NS3 de cada serotipo del VD en el vector pCR 2.1 TOPO, se selecciono una clona que mostro la liberacin de un fragmento de 597, 596, 590 y 598 pb para el serotipo DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4 respectivamente. Los fragmentos de cada una de estas clonas se subclonaron en el sitio Eco RI del plsmido pGEX-5X-1 para obtener la protena recombinante. Este plsmido tiene la caracterstica de que la protena sale fusionada a la GST, lo que facilita su purificacin por afinidad. Se obtuvieron varias clonas positivas para cada serotipo, seleccionadas a travs de la liberacin del fragmento correspondiente, sin embargo, simultneamente se realizaron ensayos de expresin piloto con IPTG debido a que la ligacin se realizo con una sola enzima de restriccin se corra el riesgo de que los fragmentos estuvieran en orientacin contraria y esto diera lugar a la prdida del marco de lectura abierto. De las clonas analizadas, se obtuv una clona positiva para el serotipo DEN1, DEN2, DEN3 y tres clonas positivas para el serotipo DEN4, todas ellas

55

pre-existentes contra el VD son un factor de riesgo para desarrollar FHD, por lo tanto, una vacuna efectiva deber ser tetravalente y necesita prevenir la infeccin provocada por los cuatro serotipos el VD (13).

Conclusin:
6.

Figueroa R, Mndez A, Ramos C. (2005). Induction of protective antibodies against dengue virus by tetravalent DNA immunization of mice with domain III of the envelope protein. Vaccine. 23:3469-76. Lpez Antuano FJ, Mota J. (2000). Desarrollo de agentes inmunizantes contra el dengue. Rev Panam Salud Pblica. 7(5): 285-292 Houts GE, Miyagi M, Ellis C, Beard A, and Beard JW. (1979). Reverse transcriptase from avian myeloblastosis virus. J. Virol. 29(2): 517522. Li J, Lim SP, Beer D, Patel V, Wen D, Tumanut C, Tully DC, Williams JA, Jiricek J, Priestle JP, Harris JL, Vasudevan SG. (2005). Funtional profiling of recombinant NS3 proteases from all four serotypes of dengue virus using tetrapeptide and octapeptide substrate libraries. J.Biol.Chem. 280:28766-28774. Sugrue RJ, Fu J, Howe J, Chan YC. (2007). Expression of the dengue virus structural proteins in Pichia pastoris leads to the generation of virus like particles. J Gen Virol. 78:1861-1866.

Los resultados nos permiten concluir que tenemos las protenas recombinantes correspondientes a la protena NS3 del VD de cada serotipo, lo cual nos permitir utilizarla como antgeno tetravalente en el modelo de ratn, la efectividad del candidato a vacuna se realizar comparando la respuesta inmune inducida por la vacuna con el perfil de inmunidad protectora desarrollada en una infeccin natural.

7.

8.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Hung SL, Lee PL, Chen HW, Chen LK, Kao CL, King CC. (1999). Analysis of steps involved in dengue virus entry into host cells. Virology. 257: 156167. Shu PY, Huang JH. (2004). Current Advances in dengue diagnosis. Clin Diagn Lab Immunol. 11(4):642-50. Beasley, D. (1994). Preparation of a recombinant dengue virus vaccine. A literature review highlights. httt://www.life.sci.qut.edu.au/david /litrev/litrev.htm. Gibbons RV, Vaughn DW. (2002). Dengue: an escalating problem. Clinical review. BMJ: 324(7353):1563-1566. Mota J, Acosta M, Argotte R,

2.

9.

3.

10. Kurane I, Zeng L, Brinton MA, Ennis

4.

FA. (1999).Definition of an epitope on NS3 recognized by human CD4+ cytotoxic T-lymphocyte clones crossreactive for dengue virus types 2, 3 and 4. Virology. 15:169-174.
11. Prez Daz AB, Sierra Vzquez B,

5.

56

Delgado Hernndez I, Rodrguez Roche R, Guzmn Tirado MG. (2010).Ensayo de linfoproliferacin antgeno especfico al virus dengue con clulas T humanas. Rev Cubana Med Trop. 52(3): 197-202.
12. Halstead SB. (1993) Pathophysiology

on dengue/dengue haemorrhagic fever. New Delhi: WHO-SEARO. p 80103.


13. Chaturvedi UC, Shrivastava R, Nagar

R. (2005). Dengue vaccines: Problems and prospects. Indian J Med Res. 121:639-652.

and pathogenesis of dengue haemorrhagic fever. In: Thongcharoen P, editor. Monograph

57

VARIACIN DE LA RESPUESTA A UN ESTIMULO DOLOROSO EN RATAS WISTAR CON ANSIEDAD INDUCIDA BAJO UN ESTIMULO EXTERNO.
Victor Manuel Duran Sainz Rosa Mara Torres Hernndez Rosa Mara Alvarez Santaman Pedro Gutierrez Aguilar

Marco terico:
La ansiedad se define como un estado de malestar caracterizado por intranquilidad, expectacin aprehensiva y aumento de la vigilancia en ausencia de un estimulo desencadenante; que se manifiesta tambin reacciones autonmicas, como la sudoracin, taquicardia, alteraciones gastrointestinales, tensin muscular e insomnio, entre otras. Cuando un individuo se enfrenta a una situacin de peligro se puede observar un conjunto de cambios conductuales y vegetativos orientado a contender de manera adecuada con dicha situacin. Entonces, la ansiedad puede definirse como uno de los procesos cerebrales directamente involucrados en la sobrevivencia de diferentes especies animales, especialmente de aquellas que por su naturaleza son vctimas de los depredadores. La definicin ms aceptada de dolor la que indica que es una experiencia subjetiva acompaada de componentes

sensoriales y emociones desagradables y que frecuentemente est descrito en funcin de la magnitud del dao con el que se asocia. El trmino que involucra al conjunto de mecanismos por los cuales el estmulo nocivo perifrico es transmitido al sistema nervioso central (SNC) se denomina nocicepcin.3 Cuando un animal se enfrenta a un depredador, con frecuencia se puede observar que su primera reaccin es escapar para evitar que lo captures. Si no puede escapar, entonces la respuesta predominante es mantenerse inmvil, esta respuesta es directamente relacionada con la naturaleza del estmulo adverso; cuando stos se enfrentan a un estmulo perturbador localizado, como un electrodo o una fuente de luz, despliegan un patrn conductual especifico dirigido a ocultar este estmulo. Esta conducta se conoce como conducta defensiva de enterramiento, y depende de la disponibilidad de material
Universidad Veracruzana

Estudiante de Licenciatura manuel_duran10@hotmail.com

Facultad de Medicina Veracruz

58

para enterrarse.4. El tipo de respuestas observada en los animales de laboratorio se agrupan en tres categoras.A) Msculoesquelticas; B) Autonmicas y C) Conductuales (psquicas) que incluyen: agresividad, vocalizacin, forcejeo y escape. Se considera que estas ltimas son las ms tiles desde el punto de vista experimental y se estima que representan una integracin central del estmulo original.5Teniendo en cuenta la subjetividad del dolor y la similitud de esta experiencia en la mayora de los seres dentro de la filogenia, los estudiosos del dolor han tratado de determinar parmetros comunes de evaluacin, de ah que numerosas investigaciones se hayan enfocado en el examen de las conductas asociadas al dolor, las que se catalogan como una serie de comportamientos con los que el animal comunica a su ambiente que est padeciendo una experiencia nociceptiva.En consecuencia, dentro de los variados modelos animales que existen para el estudio del dolor, existen los que se basan en la produccin controlada de dolor por medios qumicos o mecnicos, precisando determinadas caractersticas de la estimulacin nociceptiva, como intensidad, localizacin, frecuencia, duracin y se evalan las respuestas dadas a dicha estimulacin. Generalmente se analizan la latencia de respuesta del retiro o de la huida de la estimulacin progresiva que inflinge el dao; dicha latencia tiene una relacin inversamente proporcional a la intensidad de la estimulacin nociceptiva, tambin se presentan conductas de huida, saltos o ataque con el objetivo claro de disminuir las fuentes del dolor.6Existen diversas razones por las que resulta importante identificar la ansiedad y la depresin: la ansiedad

disminuye el umbral y la tolerancia al dolor; ambas se asocian con la magnificacin de los sntomas mdicos; la depresin se acompaa de pobre respuesta al tratamiento. As mismo, el malestar emocional se ha asociado con la manifestacin de sntomas fsicos a travs de la activacin autonmica del estado de alerta o la exacerbacin de los sntomas existentes.7

Planteamiento del problema:


Cual es la respuesta al estimulo doloroso en la rata winstar en estado de ansiedad en comparacin del estado normal?

Objetivo General:
Determinar la respuesta al estimulo doloroso en la rata winstar en estado de ansiedad en comparacin del estado normal

Metodologa:
Se realiz un estudio transversal, comparativo, experimental y prospectivo. Con autorizacin del Comit de tica e Investigacin de la Facultad de Medicina. Criterios de inclusin ser ratas con peso entre 150 a 300 mg (cuadro 1), que no hayan recibido medicamentos en un lapso de una semana mnimo. De los criterios de no inclusin abarcara a ratas que estn embarazadas, que no tengan algn miembro, o que hayan recibido medicamentos en un lapso de una semana.Se eligieron al azar las ratas que formaron parte del grupo A (n = 10) y el grupo B (n = 10). Habiendo elegido al grupo A se inici colocndolas individualmente en un recipiente con agua hasta una altura de 30 cm, a temperatura ambiente, durante 10 minutos. Posteriormente se les coloc una pinza de

59

caimn adecuada para el estudio en la base de la cola y se registr la vocalizacin, forcejeo y si intentaron o no escapar en un estado basal, a los 10 y 20 minutos; se llev a cabo el procedimiento con la pinza de caimn en las ratas del grupo B. Anlisis estadsticos: La significancia estadstica se determino mediante el anlisis de las variables ordinales con la prueba de 2.

Resultados:
A la presencia de intento de escape de las ratas del grupo A (100%) en comparacin a las del grupo B (30%) (p<0.01), La vocalizacin en estado basal de las ratas del grupo A fue predominantemente Alta (70%) mientras que en el grupo B fue de intensidad Media (70%)(NS). El forcejeo en el grupo A tuvo un predomino de intensidad alta (70%) y el grupo B (45%) (p<0.01).A los 10 minutos despus de repetir el estimulo la vocalizacin de intensidad media en el grupo A el 70% el grupo B el 90%(p<0.01); el forcejeo se vio proporcionalmente equiparado con una intensidad predominantemente media en el grupo A con el 90% y el grupo B con 80%. A los 20 minutos despus del estimulo doloroso, la vocalizacin media del grupo A (70%) mientras que el grupo B (50%), (p<0.01); el forcejeo en el grupo A fue predominantemente de intensidad media (90%) y en el grupo B de (60%), (p<0.01)

estos a su vez descubrieron una relacin entre la ansiedad mesurada bajo el tiempo que tarda el roedor con la Conducta defensiva de enterramiento y la percepcin del dolor nociceptivo.Los datos recaudados sealan que las ratas del grupo B poco a poco fueron equiparando a las ratas del grupo A con respecto a la vocalizacin y al forcejeo, esto podra darse a interpretar al dolor como propio mecanismo ansiognico.

Conclusin:
Este estudio muestra que un aumento en la ansiedad aumenta la percepcin de la nocicepcin inducida tras un estimulo doloroso, mostrando una relacin entre estos factores.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Morales Tania, Alfaro-Ramrez del Castillo Olga Isabel, Snches-Romn Sofa, Guevara-Lpez Uriah, VzquezPineda Fernando. Ansiedad y depresin por dolor crnico neuroptico y nociceptivo. Revista Mdica del Instituto Mexicano del Seguro Social 2008; Vol. 45: pp 479484 De la Ossa Susana, Martinez Yuleima, Herazo Edwin, Campo Adalberlto. Estudio de la consistencia interna y estructura factorial de tres versiones de la escala de Zung para ansiedad. Colombia mdica. 2009; Vol. 40. Pp. 71-77 Medina-Lpez Jos Ral, DomnguezRamrez Adriana Miriam, LpezMuoz Francisco Javier, Utilidad de las interacciones farmacocinticas/

2.

Discusin:
Los estudios de la Dra. Guadalupe JimnezVelzquez y colaboradores5 donde su poblacin demostr tener un incremento de la nocicepcin mediante el registro por el modelo PIFIR (del ingls Pain-Induced Functional Impairment Model in the Rat);

3.

60

farmacodinmicas de analgsicos, Revista mexicana de Anestesiologa 2007; Vol. 30: pp 114-121.


4.

nocicepcin, Revista mexicana de Anestesiologa 2007; Vol. 30: pp 1419.


6.

Banos, J. E. Y Ruiz-Barria, G.. La evaluacin del dolor experimental en el laboratorio: los modelos de dolor neuroptico en animales. Revista Social Esp. Dolor. 2006; vol.13, pp. 542-552. Jimnez-Velzquez Guadalupe, Fernndez-Guasti Alonso, LpezMuoz Francisco Javier. Efectos de la ansiedad (inducida farmacolgicamente) sobre la

Gmez Clauda, Saldvar-Gonzlez J. Alfredo, Rodrguez Rodolfo, Modelos animales para el estudio de la ansiedad: Una aproximacin crtica, Salud Mental 2002; Vol. 25: 14- 24 Santacruz Mara del Pilar, Oyuela Ral, Brinez Jos Arturo. Efectos sobre la actividad nociceptiva de la rata de un pptido nootrpico sinttico. Revista Latinoamericana de Psicologa, 2008; Vol.40, p.97-109.

7.

5.

61

MUTACIONES EN GENES ASOCIADOS A RESISTENCIA A RIFAMPICINA Y ETAMBUTOL, EN CEPAS DE PACIENTES CON TUBERCULOSIS DROGORRESISTENTE
Betzaida Cuevas Crdoba Roberto Zenteno Cuevas Aremy Cuellar Snchez Beatriz Buentello Volante

Marco terico:
La tuberculosis (TB) es una enfermedad remergente causada por bacterias del gnero Mycobacterium. De acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) en 2007 se reportaron 9.27 millones de casos nuevos, 13.7 millones de casos prevalentes y 1.78 millones de defunciones1. Uno de los factores que han dificultado el manejo y control clnico de la TB a nivel mundial es la drogorresistencia (TB-DR), la OMS estima que el 20% de los casos de TB son resistentes a un antibitico y el 5.3% son resistentes a isoniacida y rifampicina, es decir multidrogorresistentes (TB-MDR)2. Tradicionalmente, el diagnstico confirmatorio de la TB-DR requiere de 4 a 9 semanas, favoreciendo su dispersin al permitir el contagio a los contactos del paciente 3-5. En contraparte, el empleo de nuevas tcnicas en biologa molecular, permiten desarrollar novedosos mtodos diagnsticos de TB-DR, altamente sensibles especficos y rpidos. El diagnstico de

resistencia a Rifampicina es de suma importancia debido a su fuerte asociacin con la resistencia a Isoniacida, por lo cual se considera como marcador de TB-MDR3. Por otro lado el Etambutol se recomienda para tratar infecciones especialmente en personas con VIH, Diabetes Mellitus, o antecedentes de abandono o recada6,7; la probabilidad de resistencia a este frmaco es ms baja que otras drogas, por lo cual se incluye en el tratamiento primario de pases con una tasa elevada de resistencia primaria a otro frmaco de primera lnea7. Es bien sabido que los bacilos de Mycobacterium son desarrollan resistencia mediante mutaciones en genes especficos; aunque dichos mecanismos moleculares estn parcialmente descritos, la resistencia a rifampicina (Rifr) y etambutol (Etar), se ha asociado a mutaciones en los genes rpoB y embB respectivamente3,6. Sin embargo, el porcentaje en que se presentan los tipos y localizaciones de dichas mutaciones es variable entre zonas geogrficas.

Estudiante de Doctorado Instituto de Salud Pblica / Doctorado en Ciencias Biomdica Universidad Veracruzana betsaida_20@hotmail.com betcuevas@uv.mx

62

Planteamiento del problema:


Veracruz es uno de los estados que presenta ms casos de TB-DR a nivel nacional. El prolongado tiempo de espera para su diagnstico favorece la implementacin de tratamientos farmacolgicos generalizados, inespecficos, poco efectivos y ms costosos. Con menor probabilidad de curacin y mayor riesgo de contagio, lo cual incrementa la DR y hace de este un fuerte problema social, econmico y de salud. En contraposicin, los recientes avances tecnolgicos del campo molecular permiten la incorporacin de nuevas tcnicas que proporcionan informacin sobre las mutaciones que explican la DR en las cepas de Mycobacterium del estado; permitiendo el desarrollo a mediano plazo de procedimientos de diagnstico molecular especficos, sensibles y rpidos, as como evaluar la utilidad, efectividad, validez y seguridad local de emplear mtodos diagnsticos aprobados en otros pases.

Laboratorio Estatal de Salud Pblica del Estado de Veracruz (LESP), de los cuales 88 fueron aptos para realizar el estudio. A partir de los bacilos se realiz: extraccin de ADN, amplificacin por Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) los genes; rpoB (266pb) y embB (260pb), secuenciacin por electroforesis capilar (Applied Biosystems 3500) y anlisis de mutaciones (Sequencing Analysis y SeqScape) A nivel molecular se identific: codn de mutacin, tipo de cambio de base y tipo de mutacin. Mediante el resumen clnico y el reporte de perfil de farmacorresistencia proporcionado por el LESP se obtuvieron datos epidemiolgicos del paciente portador del bacilo como: resistencia a frmacos, edad, sexo, comorbilidad, toxicomanas, tiempo de evolucin de de TB y tipo de tratamiento. Finalmente se realizaron anlisis estadsticos de asociacin entre las mutaciones presentes en el genoma del bacilo y las variables epidemiolgicas del paciente portador de TB-DR.

Objetivo General:
Realizar una caracterizacin gentica de las cepas DR de Mycobacterium tuberculosis presentes en Veracruz, identificando mediante secuenciacin, la frecuencia de mutaciones en regiones de genes rpoB y embB, que ocasionan resistencia a Rifampicina y Etambutol respectivamente; en relacin al contexto epidemiolgico del paciente.

Resultados:
Se analizaron 88 cepas del mismo nmero de pacientes, la media de edad fue de 45 aos (15) con rango de 15 a 87aos. En cuanto al gnero, el 66% fueron hombres y el 34% mujeres, con una razn de masculinidad de H:M 1.96:1. Respecto a la drogorresistencia el 68.1% (60) fueron Rifr y 58% (51) Etar. Para el anlisis de cepas Rifr se secuenciaron 60 fragmentos de 266pb del gen rpoB (codn 478-564), incluyendo la regin reportada como portadora del mayor nmero de mutaciones asociadas a resistencia a Rifampicina (codn 507 al 533). En el 10% de los aislados no se encontraron cambios de

Metodologa:
Estudio observacional en el cual se recolectaron 114 aislados TB-DR entre los aos 2007-2010 provenientes del

63

base en el fragmento analizado; sin embargo, el 90% presentaron mutaciones no sinnimas en 4 codones (516, 522, 526, 531), las cuales se explican por 10 cambios de base. La mutacin encontrada con mayor frecuencia fue en el codn 531 (70%), con un cambio de base en el nucletido 163 de C;T G, cambiando de aminocido de Ser a Leu Trp. Se realiz anlisis estadstico de X2 y Test exacto de Fisher para buscar asociacin entre la mutacin S531L,W del gen rpoB respecto a las otras variables. Se encontr asociacin con alta significancia estadstica (p=0.01) entre dicha mutacin y la resistencia a Estreptomicina, la cual posiblemente se explique por la relacin en el mecanismo de accin de ambos frmacos. A cerca de las cepas Etar, se secuenciaron 51 fragmentos de 260pb del gen embB (codn 264-349), incluyendo al codn 306 que es donde se reporta el mayor nmero de mutaciones asociadas a resistencia a Etambutol, encontrando que en ms del 60% no se identificaron mutaciones en el fragmento analizado. Por otro lado, el 40% de las cepas analizadas presentaron mutaciones no sinnimas ubicadas en 3 codones (306, 328, 330), las cuales se explican por 6 cambios de base. La mutacin encontrada con mayor frecuencia fue en el codn 306 (31.4%), con cambios de base en los nucletidos 128 de A; G, o 130 de G;C,A T, ocasionando el cambio de Met a Val o Iso. Tras el anlisis estadstico de X2 y Test exacto de Fisher se observ que todas las cepas que presentaron mutacin M306V,I en gen embB fueron resistentes >3 frmacos y ninguna cepa monorresistente o birresistente present dicha mutacin,

encontrando asociacin con alta significancia estadstica (p=0.01) entre esta mutacin y la mulltirresistencia, especficamente con la resistencia a Isoniacida (p=0.37). Pese a realizar anlisis de asociacin de las mutaciones rpoB 531 y embB 306 con variables como: sexo, jurisdiccin de residencia, diabetes, alcoholismo, drogadiccin y tipo de tratamiento, no se encontr significancia estadstica en ningn caso.

Discusin:
Un alto porcentaje de cepas presentaron mutaciones en la regin caliente del gen rpoB (90%), lo cual concuerda con lo reportado en otros pases6,8-11; sin embargo, 6 cepas no presentaron mutaciones del codn 478 al 564, lo cual tal vez sugiere otro mecanismo de resistencia para este frmaco. Segn los resultados obtenidos, una prueba de diagnstico molecular con una sensibilidad del 95% requerira el diseo de 10 sondas distintas, lo cual incrementara su costo. Por otro lado, la utilizacin de la prueba comercial INNO-LiPA Rif TB, incluye sondas para las mutaciones: D516V,H526D,Y y S531L12; considerando los resultados de este estudio hubiera generado una sensibilidad mxima de 75% o menor en funcin de los cambios de nucletidos que originaron el cambio de aminocido, generando un alto porcentaje de falsos negativos. Este hecho resalta la importancia de describir las mutaciones presentes en una regin antes de implementar un sistema de diagnstico. Respecto a la resistencia a Etambutol, la mutacin del codn 306 se observ en el 31.4%, a diferencia de lo

64

reportado en otros pases como Moroco en Sudfrica con un 42.3%13 China en donde esta mutacin se present en el 62.2% de las cepas14,; lo cual refleja que la regin secuenciada est poco conservada en Veracruz, abriendo la pauta para extender la bsqueda de mutaciones buscar ro arriba o en otros genes asociados al opern como embA y embC, con la finalidad de incrementar la sensibilidad y especificidad de futuras pruebas moleculares para el diagnstico de resistencia a dicho frmaco. En este sentido, la mutacin en el codn 306 de embB parece ser por s sola, un posible marcador de resistencia a mltiples frmacos, lo cual concuerda con lo reportado por otros autores que sugieren que mutaciones en dicho codn parecer proveer a la cepa de ventajas para desarrollar resistencia ante Isoniacida y Rifampicina, siendo ms comn que desarrollen multidrogorresistencia y drogorresistencia extrema15., o como sugieren otros autores podra incrementar la habilidad de la cepa para la transmisin entre sujetos16.

1.

World Health Organization. REPORT 2009. Global Tuberculosis Control. Epidemiology Strategy Financing. 1.8 Sumary pp.32. Disponible en: http://www.who.int/tb/publications /global_report/2009/en/index.html Anti-tuberculosis Drug Resistance in the world. Fourth Global Report. WHO 2008. Ejecutive Sumary. Result. Survey coverage and populationweighted means. Pp 15. disponible en: http://www.who.int/entity/tb/public ations/2008/drs_report4_26feb08.p df Quirs-Roldn E. Airoldi M. Moretti F. Carosi G. Bases moleculares de resistencia de Mycobacterium tuberculosis. Rev Diagn Biol. 2001; 50(4): 200-203. Tapia R. El Manual de Salud Pblica. Unidad II. Captulo 6 Tuberculosis. 2ed. Editorial Intersistemas. Mxico 2006. pp 469-505. Prisco P. J. et al. Estrategias innovadoras para el diagnstico y seguimiento de los pacientes tuberculosos. Arch Bronconeumol. 2007; 43(4):225-32. Said S. Becerril P. Molina G. Barrios H. Tuberculosis causada por cepas de Mycobacterium tuberculosis drogorresistentes. Enf Emerg 2005; 7(1):13-19. WHO. Treatment of tuberculosis: Guidelines for National Programmes. 3 nd Ed. Geneva, Switzerland, 2003.

2.

3.

4.

Conclusin:
5.

El porcentaje de mutaciones identificadas en los aislamientos para rpoB y embB fue menor a lo reportado por otros pases (531 rpoB=40-75%, y 306 embB=40-60%), evidenciando la necesidad de realizar este tipo de estudios para el diseo de herramientas de diagnstico molecular de TB-DR altamente sensibles y especficas. As mismo, los resultados encontrados abren la posibilidad de utilizar la mutacin embB 306 como marcador de MDR, en cepas de TB de Veracruz.

6.

7.

Referencias Bibliogrficas:

65

8.

Soo-Young K. Yeon-Joon P. Won-Il K. Sun-Hwa L. Chulhun Ludgerus C. Seok-Jin K. Molecular analysis of isoniazid resistence in Mycobacterium tuberculosis isolates recoveres from south Korea. Diagnostic Microbiology and infectious desease. 2003;47:497-502. Zhang M, Yue J, Yang Y, Zhang H, Lei J, Jin R, Zhang X, Wang H. Detection of Mutations Associated with Isoniazid Resistance in Mycobacterium tuberculosis Isolates from China. Clin Microbiol. 2005; 43(11): 54775482.

Jordaan A , Lahlou O. Elouad R, Akrim M, Victor T Elmzibri M. Analysis of Isoniazid, Streptomycin and Ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from Morocco. J Infect Dev Ctries 2009; 3(4):278-284.
14. Wu X, Liang J, Zhang J, Lu Y, Li H,

9.

Zhang G, Yan G and Ding B. Detection and evaluation of the mutations of embB gen in ethambutol-susceptible and resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from China. Chin. Med. J. 2005; 118(20):1739-1741.
15. Safi H, Sayers B, Hazbn M, Alland D.

10. Wada T. Maeda S. et al. Dual-Probe

Assay for Rapid Detection of DrugResistant Mycobacterium tuberculosis by Real-Time PCR. Journal Clinical Microbiology. 2004;42(11):5277-5285.
11. Kocagoz T, Saribas Z y Alpaslen A.

Rapid determination of rifampin resistence in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis by realtime PCR. J Clin Microbiol. 2005; 43(12):6015-6019.
12. Rossau R, Traore H, Beenhouwer H,

Transfer of embB Codon 306 Mutations into Clinical Mycobacterium tuberculosis Strains Alters Susceptibility to Ethambutol, Isoniazid, and Rifampin. Antimicrobial agents and chemotherapy, 2008;52(6):2027 2034.
16. Hazbn M, Bobadilla del Valle M,

Mijs W, Jannes G, Rijk P, Portaels F.Evaluation of the INNO-LiPA Rif Assay, a Reverse Hybridizacin Assay for the Simultaneous Detecction of Mycobacterium tuberculosis complex and its Resistence to Rifampin. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1997;41(10):20932098.
13. Chaoui I , Sabouni R , Kourout M ,

Guerrero M, Varma-Basil M, Filliol I, Cavatore M, and col. Role of embB Codon 306 Mutations in Mycobacterium tuberculosis Revisited: a Novel Association with Broad Drug Resistance and IS6110 Clustering Rather than Ethambutol Resistance. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2005; 49(9):37943802.

66

NMERO DE EOSINOFILOS EN MUCOSA ESOFGICA DE PACIENTES CON ESOFAGITIS EOSINOFLICA, ESOFAGITIS EROSIVA, ENFERMEDAD POR REFLUJO NO EROSIVO Y CONTROLES ASINTOMTICO. UN ESTUDIO EN PACIENTES MEXICANOS.
Eli De la Cruz Patio Maura Torres Aguilera : Peter Gruber Pagola Isabel Ruz Juarez Federico Roesch Dietlen Jos Mara Remes Troche

Marco terico:
En la ltima dcada existen reportes acerca del incremento de una entidad denominada Esofagitis eosinofilica (EEo), la cual se caracteriza por que en poblacin adulta afecta a hombres de raza blanca y que frecuentemente sufren de disfagia y/o pirosis refractaria. El diagnstico de esta entidad se basa en un incremento en el recuento de eosinfilos que infiltran la mucosa esofgica ( >20 eosinofilos por campo de alto poder). Sin embargo, otras condiciones como la Enfermedad por Reflujo Gastroesofgico (ERGE) tambin puede producir un incremento en el nmero de eosinfilos en la mucosa esofgica, aunque el punto de corte en esta condicin no est

bien definido, e incluso en algunas poblaciones se sugiere aadir otros parmetros (hallazgos anatomo patolgicos caractersticos: formacin micro abscesos de eosinfilos y capas superficiales de eosinfilos frecuentemente asociados a zonas desprendimiento de zonas de necrosis de clulas escamosas) para establecer el diagnostico de EEo, esto debido a un amplio margen de concentracin de eosinfilos en las diferentes poblaciones estudiadas . La EEo se ha asociado antecedentes de atopia, sin embargo la fisiopatologa aun es desconocida.

Planteamiento del problema:


La EEo es un padecimiento emergente, ocasiona altos costos a los sujetos
Instituto de Investigaciones Medico

Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana Biolgicas mauri_ta@hotmail.com elihistop@hotmail.com

67

afectados, ya que los sntomas no son especficos por lo que habitualmente suele hacerse el diagnostico con ERGE refractario, la EEo es una de las causas principales de disfagia, y pirosis, ocasionando un impacto elevado en la calidad de vida. La poblacin mexicana esta frecuentemente expuesta a enfermedades parasitarias, que ocasionan un incremento en el nmero de eosinfilos a nivel sanguneo, y es probable que este antecedente sea un factor que ocasione un aumento en la concentracin de eosinfilos en la mucosa del tracto digestivo. Se ignora si el conteo de eosinfilos en la mucosa esofgica en nuestro medio es similar a lo reportado en otras poblaciones.

Objetivo General:
evaluar de forma prospectiva el nmero de eosinfilos (a gran aumento) presentes en la mucosa esofgica de pacientes con EEo, Esofagitis Erosiva, Enfermedad por Reflujo No Erosiva (ERNE) y en un grupo de sujetos considerados como controles asintomticos

eosina. Segn los datos clnicos, endoscpicos y anatomo-patolgicos se clasificaron a los sujetos en los siguientes grupos: GRUPO A (GA), sujetos con sntomas de ERGE 3 veces por semana y Esfago normal endoscpicamente (ERNE); GRUPO B (GB), sujetos con sntomas de ERGE 3 veces por semana y Esofagitis Erosiva grado A-o B de los ngeles; GRUPO C (GC), sujetos sin sntomas de ERGE y Esfago endoscpicamente normal (Controles Sanos); GRUPO D: Diagnstico definido de EEo (sintomatologa asociada a >20 Eosinfilos en campo de alto poder, sin respuesta a terapia anti secretora. Las biopsias fueron analizadas por un patlogo gastrointestinal cegado. Se realiz el conteo de eosinofilos que infiltraron la mucosa esofgica en 10 campos de alto poder (40x) y se realizo el anlisis mediante estadstica descriptiva.

Resultados:
Se incluyeron 124 sujetos en el grupo con ERNE, 35 con Esofagitis Erosiva , 16 controles y 6 casos de EEo. No hubo diferencias en cuanto al genero y la edad en los grupos A, B y C, pero los pacientes con EEo fueron mayores ( p<0.05). En el Grupo A con 124 sujetos (70 femenino), edad promedio 44.8 (13 - 40), presento un media de numero de eosinfilos en el esfago prxima de 0 (0-0) y en el distal de 3.5 (2-5); en el Grupo B se incluyeron a 35 sujetos (14 femenino), con edad media 49.6 (26-58) con una media de eosinfilos en esfago proximal de 0 (0-0), y 5 (3-7) en el distal; En el Grupo C se incluyeron 16 sujetos (5 femenino) edad media 49.2, con 0 (0-0) eosinfilos en la porcin distal y 0 (0-0) en la distal; en el

Metodologa:
Se trata de un estudio observacional, transversal, analtico, cegado simple, donde se incluyeron sujetos adultos de forma consecutiva que, previo consentimiento informado, y evaluacin clnica inicial, fueron sometidos a endoscopia gastrointestinal alta, en el periodo comprendido del entre Agosto 2008 y Diciembre de 2009, a los cuales se les realizo toma de biopsia de la mucosa esofgica de todos los sujetos de estudio (8 fragmentos, 4 de esfago proximal y 4 de la porcin distal del esfago), las cuales fueron posteriormente procesados de forma convencional y teidos con hematoxilina

68

Grupo D se incluyeron 6 sujetos (1 femenino) edad media 60.25, con un conteo de eosinfilos de 18 (18-22) en la porcin proximal y de 25 (20-37) en la porcin distal

Discusin:
En nuestro estudio cabe destacar la ausencia de infiltracin eosinfilica en el rea prxima del esfago tanto en el grupo control, sujetos con ERNE y ERGE erosivo (Grupos A, B y C), en contraste con los sujetos con EEo donde la concentracin media de eosinfilos en la porcin proximal fue elevada y muy similar al conteo de eosinfilos de la porcin distal del esfago, este hallazgo es similar a lo encontrado en otros pases, donde incluso han protocolizado las toma de biopsias de esfago a diferentes niveles para evitar falsos positivos. Si bien en porcin distal del esfago del grupo con ERNE y con ERGE erosiva hubo infiltracin eosinfilica, los rangos se mantuvieron considerablemente inferiores de los rangos de sujetos con EEo, diversos estudios realizados en otras poblaciones han demostrado que la terapia anti secretora reduce el conteo de eosinfilos en estos sujetos. Cabe destacar que en sujetos sin sintomatologa (grupo control) no hubo infiltracin de eosinfilos en ninguna seccin del esfago.

ERNE se localiza solo en porcin distal del esfago, la cual se encuentra en contacto directo con el agresor (reflujo acido y/o no acido) responsable de la lesin hstica a la mucosa que conlleva a la infiltracin y reaccin inmunolgica secundaria local y circunscrita. El promedio de conteo de eosinfilos en la mucosa esofgica de los pacientes con EEo mexicanos, es menor que lo reportado en otras poblaciones.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Molina-Infante J, Ferrando-Lamana L, Fernandez-Bermejo M, PorcelCarreo S.Eosinophilic esophagitis in GERD patients: a clinicopathological diagnosis using proton pump inhibitors. Am J Gastroenterol. 2009 Nov;104(11):2856-7 Straumann A, Spichtin HP, Grize L, Bucher KA, Beglinger C, Simon HU. Natural history of primary eosinophilic esophagitis: a follow-up of 30 adult patients for up to 11.5 years. Gastroenterology. 2003 Dec;125(6):1660-9. Almansa C, Krishna M, Buchner AM, Ghabril MS, Talley N, DeVault KR, Wolfsen H, Raimondo M, Guarderas JC, Achem SR. Seasonal distribution in newly diagnosed cases of eosinophilic esophagitis in adults. Am J Gastroenterol. 2009 Apr;104(4):828-3 Steiner SJ, Gupta SK, Croffie JM, Fitzgerald JF.Correlation between number of eosinophils and reflux index on same day esophageal biopsy and 24 hour esophageal pH

2.

3.

Conclusin:
Este estudio demuestra que normalmente en poblacin mexicana no debe de existir infiltracin por eosinofilos en la mucosa esofgica. En las variantes de la ERGE, puede existir infiltracin esoinofilica de bajo grado. La existencia de infiltracin esosinfilica tanto en sujetos con ERGE erosivo como

4.

69

monitoring. Am J Gastroenterol. 2004 May;99(5):801-5


5.

10. Yantiss RK, Odze RD . Optimal

Liguori G, Cortale M, Cimino F, Sozzi M. Circumferential mucosal dissection and esophageal perforation in a patient with eosinophilic esophagitis. World J Gastroenterol. 2008 Feb 7;14(5):8034. Lucendo AJ, Carrin G, Navarro M, Pascual JM, Gonzlez P, Castillo P, Erdozain JC. Eosinophilic esophagitis in adults: an emerging disease. Dig Dis Sci. 2004 Nov-Dec;49(1112):1884-8 Merwat SN, Spechler SJ. Might the use of acid-suppressive medications predispose to the development of eosinophilic esophagitis?. Am J Gastroenterol. 2009 Aug;104(8):1897-902. Kephart GM, Alexander JA, Arora AS, Romero Y, Smyrk TC, Talley NJ, Kita H. Marked deposition of eosinophilderived neurotoxin in adult patients with eosinophilic esophagitis. Am J Gastroenterol. 2010 Feb;105(2):298307 Rodrigo S, Abboud G, Oh D, DeMeester SR, Hagen J, Lipham J, DeMeester TR, Chandrasoma P. High intraepithelial eosinophil counts in esophageal squamous epithelium are not specific for eosinophilic esophagitis in adults. Am J Gastroenterol. 2008 Feb;103(2):43542.

approach to obtaining mucosal biopsies for assessment of inflammatory disorders of the gastrointestinal tract. Am J Gastroenterol. 2009 Mar;104(3):77483
11. Dubecz A, Mentrikoski M, Peters JH.

6.

Eosinophilic esophagitis with severe GERD. Am J Gastroenterol. 2009 Feb;104(2):527-9.


12. Odze RD. Pathology of eosinophilic

esophagitis: what the clinician needs to know. Am J Gastroenterol. 2009 Feb;104(2):485-90


13. Bohm M, Richter JE. Treatment of

7.

eosinophilic esophagitis: overview, current limitations, and future direction. Am J Gastroenterol. 2008 Oct;103(10):2635-44; quiz 2645. Epub 2008 Aug 21.
14. Prasad GA, Talley NJ, Romero Y,

8.

9.

Arora AS, Kryzer LA, Smyrk TC, Alexander JA. Prevalence and predictive factors of eosinophilic esophagitis in patients presenting with dysphagia: a prospective study. Am J Gastroenterol. 2007 Dec;102(12):2627-32
15. Dellon ES, Aderoju A, Woosley JT,

Sandler RS, Shaheen NJ. Variability in diagnostic criteria for eosinophilic esophagitis: a systematic review. Am J Gastroenterol. 2007 Oct;102(10):2300-13.
16. Spechler SJ, Genta RM, Souza RF.

Thoughts

on

the

complex

70

relationship between gastroesophageal reflux disease and eosinophilic esophagitis. Am J Gastroenterol. 2007 Jun;102(6):1301-6
17. Molina-Infante J, Ferrando-Lamana

clinical, endoscopic, and histologic findings in adult eosinophilic esophagitis: a case series and systematic review of the medical literature. Dis Esophagus. 2007;20(4):311-9.
21. Arora AS, Yamazaki K. Eosinophilic

L, Mateos-Rodrguez JM, PrezGallardo B, Prieto-Bermejo AB. Overlap of reflux and eosinophilic esophagitis in two patients requiring different therapies: a review of the literature. World J Gastroenterol. 2008 Mar 7;14(9):1463-6.
18. Xu JY, Xie XP, Song GQ, Hou XH.

esophagitis: asthma of the esophagus? Clin Gastroenterol Hepatol. 2004 Jul;2(7):523-30.


22. King

Healing of severe reflux esophagitis with PPI does not improve esophageal dysmotility. Dis Esophagus. 2007;20(4):346-52.
19. Ngo P, Furuta GT, Antonioli DA, Fox

J, Khan S. Eosinophilic esophagitis: perspectives of adult and pediatric gastroenterologists. Dig Dis Sci. 2010 Apr;55(4):973-82. Epub 2009 Apr 24.

23. Moawad FJ, Veerappan GR, Wong

RK. Eosinophilic esophagitis. Dig Dis Sci. 2009 Sep;54(9):1818-28


24. Yamazaki K, Murray JA, Arora AS,

VL. Eosinophils in the esophagus-peptic or allergic eosinophilic esophagitis? Case series of three patients with esophageal eosinophilia. Am J Gastroenterol. 2006 Jul;101(7):1666-70.
20. Pasha SF, DiBaise JK, Kim HJ, De

Alexander JA, Smyrk TC, Butterfield JH, Kita H. Allergen-specific in vitro cytokine production in adult patients with eosinophilic esophagitis. Dig Dis Sci. 2006 Nov;51(11):1934-41. Epub 2006 Sep 29.

Petris G, Crowell MD, Fleischer DE, Sharma VK. Patient characteristics,

71

EFECTO DEL EXTRACTO POLAR DE MOUSSONIA DEPPEANA SOBRE LA PROLIFERACIN Y LA VIABILIDAD DE LA LNEA CELULAR DE CNCER DE PRSTATA LNCAP.
: Cynthia Fernndez Pomares . Miguel ngel Domnguez Ortiz . Enrique Jurez Aguilar . Omar Muoz Muiz Myriam Bravo vila Mara Elena Hernndez Aguilar

Marco terico:
El cncer es una de las causas ms importantes de morbilidad y mortalidad alrededor del mundo.1 En el 2008 la neoplasias malignas fueron la tercera causa de muerte entre la poblacin mexicana, siendo el carcinoma prosttico la neoplasia con mayor incidencia en los hombres2. Esta enfermedad se desarrolla debido a alteraciones en los genes responsables del control del ciclo celular, en consecuencia, las clulas cancerosas proliferan descontroladamente e invaden otros rganos del cuerpo.3. La incidencia del cncer est fuertemente relacionada con el estilo de vida y alimentacin de cada pas. Datos epidemiolgicos muestran que individuos que migran a otro pas, tienen la misma incidencia de cncer que los habitantes originarios del pas al que emigr;4. Dato sumamente importante que

sugiere que el ambiente es un factor ms determinante en el desarrollo del cncer que el mismo fondo gentico del individuo.5. Adems, estos estudios tambin indican que poblaciones que poseen una alimentacin rica en frutas y vegetales tienen una menor incidencia de cncer.6

Planteamiento del problema:


A pesar de todos los avances en la investigacin sobre el cncer, actualmente no se cuenta con un tratamiento cien por ciento efectivo, es por ello que se ha encontrado en la fitoterapia una alternativa prometedora para combatir este mal, puesto que existen compuestos fitoqumicos capaces de prevenir y combatir el cncer, tales como el licopeno del tomate, el resveratrol de la uva, la quercetina de la guayaba y la curcumina de la crcuma.7 Con fundamento en lo anterior, el presente

Estudiante de DoctoradoUniversidad Veracruzana chiselv8@yahoo.com chiselv8@hotmail.com

Dependencia:

Instituto de Neuroetologa

72

estudio evalu el efecto del extracto de Moussonia deppeana sobre la proliferacin y la viabilidad de la lnea celular de cncer de prstata LNCaP.

Objetivo General:
Evaluar el efecto del extracto polar de Moussonia deppeana (H2O/EtOHMd) sobre la lnea celular de carcinoma prosttico LNCaP.

Metodologia:
Obtencin del extracto. La planta M. deppeana fue recolectada en el mes de noviembre en el Municipio de Coatepec, Veracruz. El extracto polar se obtuvo mediante maceracin de 300 g de la parte area de la planta (hojas y tallos) en una mezcla de etanol: agua 1:1 v/v.Anlisis Fitoqumico. La identificacin cualitativa de los metabolitos presentes en el extracto se realiz mediante cromatografa en capa fina, utilizando como agentes reveladores luz UV, CoCl2, FeCl3 (para flavonoides), cido perclrico (para esteroles) y solucin de Dragendorff (Bi(NO3)3/KI/CH3COOHpara alcaloides). Adems, se realiz un anlisis en Resonancia Magntica Nuclear de protn (H1 RMN) para la identificacin la naturaleza qumica de los compuestos presentes en el extracto.Determinacin de la capacidad antioxidante. La capacidad antioxidante del extracto se determin por el mtodo de DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidracilo) (BrandWilliams modificado por Miliauskas, 2004). El DPPH es un radical libre que es estabilizado por los antioxidantes presentes en el extracto. La reaccin es evaluada mediante el espectro visible donde se aprecia una disminucin en la absorbancia (517 nm)

proporcional a la reduccin del DPPH. Contenido total de polifenoles. Se determin el contenido total de polifenoles utilizando el reactivo de Folin-Ciocalteu. Las sales de molibdeno y tungsteno presentes en el reactivo son reducidas por los antioxidantes del extracto formando xidos de molibdeno y tungsteno de color azul intenso. La absorbancia obtenida en el espectrofotmetro a 765 nm es directamente proporcional al contenido de polifenoles, el cual es reportado como miligramos de cido glico por gramo de peso del extracto seco (mg GAE/g dw). Determinacin del poder reductor. El poder reductor se evalu mediante el mtodo de Oyaizu, 1986.8. La capacidad antioxidante es determinada por la reduccin del in Fe+3 a Fe+2, reaccin colorimtrica que es cuantificable en el espectrofotmetro a 700 nm. Cultivo de la lnea celular LNCaP. La lnea celular de carcinoma prosttico de humano, derivada de metstasis del nodo linftico supraclavicular, fue mantenida en medio RPMI suplementado con suero fetal bovino al 8%, a 37 C en atmsfera de CO2 al 5%. Es productora de fosfatasa cida prosttica humana y de antgeno prosttico especfico. Posee receptores a andrgenos y estrgenos.Ensayos de Proliferacin celular. Las clulas fueron sembradas en cajas de 96 pozos a una densidad de 5022 cel/pozo, incubndose por 48 horas en las condiciones anteriormente descritas. Posteriormente las clulas fueron tratadas con diferentes concentraciones del extracto H2O/EtOHMd (62.5, 125, 187.5, 250, 500 y 1000 g/ml) utilizando como vehculo DMSO (Dimetil sulfxido) a un volumen final del 0.25%. Finalmente la proliferacin de las clulas fue

73

evaluada a diferentes tiempos de incubacin con el extracto (24, 48, 72 y 96 hrs) por el ensayo de Metil tiazol tetrazolium (MTT) descrito por Mossman, 1983.9 Brevemente, los cultivos son incubados con MTT (5 mg/ml) por 4 hrs a 37oC y 5% de CO2, finalmente los cristales de formazn obtenidos son disueltos con DMSO y la absorbancia de dicha solucin es cuantificada en un lector de ELISA a 570 nm. Para diferenciar el efecto antiproliferativo de un posible efecto citotxico en este ensayo, se determin la viabilidad de los cultivos tratados mediante la tincin con azul de tripano y el conteo directo en cmara de Neubauer.Ensayo de citotoxicidad. Las clulas fueron sembradas a una densidad de 10000 cel/ pozo en una placa de 96 pozos y se incubaron 72 hrs a 37 C y 5% de CO2. Una vez que el cultivo alcanz la confluencia, se aplic el extracto H2O/EtOHMd a diferentes concentraciones (62.5, 125, 187.5, 250, 500 y 1000 g/ml). La viabilidad celular fue evaluada a las 48 hrs posttratamiento mediante el ensayo de MTT. Finalmente se determin la concentracin inhibitoria (IC50).Anlisis estadstico. Los datos de los ensayos de proliferacin y citotoxicidad se analizaron con un ANOVA de dos vas con ranqueo de datos y prueba posthoc de Tukey en el programa JMP 6, los resultados se expresan como el porcentaje promedio de proliferacin o viabilidad, respectivamente, en relacin con el valor ms alto obtenido por el control en el tiempo. La determinacin de la IC50 se realiza con un ajuste no linear en el programa Sigma Plot 10.0. Cada ensayo se realiz por triplicado.

Resultados:

Las pruebas cualitativas para la identificacin de metabolitos revelaron la presencia de alcaloides, esteroles y polifenoles en el extracto polar de M. deppeana. La resonancia magntica nuclear (1H RMN) muestra seales en la regin de 6.5 a 8 ppm, lo que sugiere la existencia de compuestos de tipo aromtico. El extracto tambin mostr adecuados niveles de activad antioxidante y poder reductor, adems de un alto contenido de polifenoles. Por otra parte, las clulas tratadas con EH2O/EtOHMd a las concentraciones de 250, 500 y 1000 g/ml tuvieron un porcentaje de proliferacin menor al alcanzado por el cultivo sin tratamiento a las 48, 72 y 96 hrs (F(6,83)= 101.15, P < 0.05, r2= 0.96). Sin embargo, la observacin microscpica revel una diferencia en la densidad y morfologa de los cultivos tratados con el extracto a las concentraciones de 500 y 1000 g/ml, donde se aprecia a las clulas redondeadas y con ncleo picntico, lo cual indica que el extracto polar tiene un efecto citotxico a esas dosis. Por otro lado, las clulas tratadas con dosis menores (62.5 a 250 g/ml) no muestran diferencia morfolgica aparente respecto al cultivo sin tratamiento, sin embargo se puede apreciar una disminucin en la densidad celular dependiente de la dosis y del tiempo de tratamiento. Para corroborar los resultados se evalu el porcentaje de viabilidad celular por tincin con azul de tripano durante el ensayo de proliferacin celular, donde se aprecia una disminucin en el porcentaje de viabilidad de las clulas tratadas solo con las dosis ms altas del extracto. En el ensayo de citotoxicidad se apreci una disminucin en el porcentaje de viabilidad de los cultivos tratados con el extracto respecto a las

74

clulas sin tratamiento de forma dosis dependiente, donde la dosis inhibitoria del 50% de la poblacin (IC50) fue de 222.667 g/ml. El anlisis microscpico muestra diferencias morfolgicas slo en los cultivos tratados con dosis de 500 y 1000 g/ml.

PA: Saunders, 2005. 2. INEGI Estadsticas Vitales, 1998-2008. Bases de datos. http://www.inegi.org.mx/inegi/contenidos/e spanol/prensa/Contenidos/estadisticas/2010 /cancer0.doc.3. Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P. Molecular Biology of the Cell. Garland Science. 4th ed. New York and London: Garland Science; 2002. Captulo 23, Cancer. 4. Aggarwal BB, Shishodia S. Molecular targets of dietary agents for prevention and therapy of cancer. Biochemical Pharmacology. 2006 May 14;71(10):1397421. 5. World Cancer Research Fund / American Institute for Cancer Research. Food, Nutrition, Physical Activity, and the Prevention of Cancer: a Global Perspective. London: 2008. WCRF/AICR. 6. Willett WC. Diet and health: what should we eat?, Science. 1994 Apr 22;264(5158):532- 7. 7. Surh YJ. Cancer chemoprevention with dietary phytochemicals. Nat Rev Cancer. 2003 Oct;3(10):768-80. 8. Oyaizu M Studies on products of browning reaction prepared from glucoseamine. Jpn J Nutr 44:307-314.

Discusin:
El extracto polar de M. deppeana posee actividad antiproliferativa y citotxica sobre la lnea celular LNCaP, efectos que son dependientes de la dosis y del tiempo de tratamiento. El anlisis fitoqumico del extracto y los ensayos de actividad antioxidante, revelan la presencia de compuestos polifenlicos, los cuales pueden ser responsables de los efectos del extracto sobre la vida y el crecimiento del cultivo, esto de acuerdo a lo reportado con otros compuestos de esta misma naturaleza, mismos que podran actuar a nivel molecular regulando la expresin de los genes implicados en estos procesos.(10-12)

Conclusin:
Estos resultados nos sugieren un gran potencial del extracto de M. deppeana como agente anticancergeno, por lo cual es de suma importancia evaluar el potencial antiproliferativo de este extracto sobre otras lneas celulares, caracterizar el tipo de muerte celular, los mecanismos moleculares y los compuestos qumicos por medio de los cuales ejerce su efecto antineoplsico.

Referencias Bibliograficas:
1. Abbas, AK, Andrew Lichtman. Cellular and Molecular Immunology. 4th ed. Philadelphia,

75

EFECTOS BIOCLNICOS DE LA OBESIDAD Y LA INDUCCIN DE LA DIABETES EN LA RATA WISTAR HEMBRA


Areli Olazo Marinero Jos Arnold Gonzlez-Garrido Octavio Maldonado-Saavedra Aracely Lpez-Monteon Guillermo Manuel Ceballos-Reyes Enrique Mndez-Bolaina

Marco terico:
La obesidad es la enfermedad nutricional ms prevalente en los pases industrializados y est experimentando un incremento significativo en los pases en vas de desarrollo. Numerosos estudios epidemiolgicos evidencian que la esperanza de vida en los obesos es reducida y su morbilidad es elevada, siendo un problema de Salud Pblica. Adems de ser un factor de riesgo para desarrollar diabetes mellitus 2 (DM2), hipertensin arterial y otras enfermedades crnicas.1El ndice de Masa Corporal (IMC) es el resultado de dividir el peso en kilogramos por el cuadrado de la talla en metros (kg/m2), es una indicacin simple de la relacin entre el peso y la talla, se utiliza frecuentemente para identificar sobrepeso y obesidad.2,3La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) define el sobrepeso como un IMC>25 kg/m2, y la obesidad como un IMC>30 kg/m2. Segn la norma oficial mexicana (NOM-043-SSA2

2005) la obesidad es la enfermedad caracterizada por el exceso de tejido adiposo en el organismo.3,4Enfermedades relacionadas con la obesidad Complicaciones respiratorias, hepatobiliares, del aparato locomotor, enfermedades cardiovasculares, cncer, DM2 y sndrome metablico, etc.4,5,6La DM es un de trastorno metablico, que afecta a diferentes rganos y tejidos, se caracteriza por hiperglicemia. La diabetes es una enfermedad crnica que aparece cuando el pncreas no produce insulina suficiente o cuando el organismo no utiliza eficazmente la insulina que produce.7,8,9Clasificacin de la diabetes segn la OMSDM1, DM2 y Diabetes gestacional.8La DM2 representa el 90% de los casos mundiales y se debe en gran medida a un peso corporal excesivo, a la inactividad fsica, entre otras.8,9rgano importante para el metabolismo de los carbohidratos

Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana (Orizaba, Veracruz) enmendez@uv.mx emendezb@hotmail.com

Facultad

de

Ciencias

Qumicas

76

El hgado, es la mayor vscera del ser humano. Pesa aproximadamente 1.5 kg, es de color rojo-oscuro, situado en la parte superior derecha de la cavidad abdominal, justo debajo del diafragma. Ayuda en el metabolismo de los carbohidratos, lpidos y triglicridos.10,11La forma de diagnosticar esta enfermedad, es a travs de los signos y sntomas, aunque, en ocasiones es asintomtica, por lo que para confirmar o descartar su presencia se han desarrollado pruebas del tipo estmulo-respuesta,11 como la prueba de tolerancia a la glucosa.12,13

pancreatoma hasta la utilizacin de productos qumicos.19,20,21 La estreptozotocina (STZ) (2-desoxi-2([metil(nitroso)amino]carbonilamino)- ;-Dglucopiranosa, sintetizada por la Streptomycetes achromogenes, utilizada para inducir la DM1 como la 2, segn el momento de la inyeccin, la dosis empleada y frecuencia de inyeccin.22,23

Objetivo General:
Analizar los efectos de la obesidad y la induccin de la diabetes en los valores de glucosa, colesterol y triglicridos en rata Wistar hembra.

Planteamiento del problema:


La diabetes espontnea entre los animales es relativamente comn. El primer caso fue descrito en 1851 en un primate. En la mayora de los roedores, la diabetes es de origen gentico y se acompaa de obesidad.14,15Caractersticas generales de la rata Wistar. Esta caracterizada anatmica, fisiolgica y genticamente, se reproduce fcilmente, son animales muy adaptables, fciles de cuidar y manejar. Es posible producirlas libres de grmenes y enfermedades, , con lo cual se reduce la principal variable no controlada.16Efectos de la dieta La abundancia calrica parece facilitar el desarrollo de la obesidad y la diabetes en los seres humanos. En algunos roedores tambin se ha demostrado que los factores ambientales contribuyen a la presentacin de este sndrome.17,18 Diabetes inducida La induccin de la diabetes se ha logrado por diversos medios. En 1889, Von Mering y Minkowski produjeron diabetes experimental en perros mediante la remocin quirrgica del pncreas.Existen diferentes modelos que van desde la

Metodologia:
Para el desarrollo de este trabajo se utilizaron ratas Wistar hembra, con un peso de 200 a 220 g, divididas en 3 grupos (n=5): Grupo control, las cuales se mantuvieron con alimento normal y acceso libre a agua. Grupo de ratas obesas, a las cuales se les mantuvo con alimento hipercalrico y acceso libre a agua. Grupo diabtico (ratas obesas y/o diabticas), las cuales recibieron STZ, va ip, (65 mg/kg de peso/0.5 mL de citrato de sodio-pH 4.5) para alcanzar una concentracin de glucosa en plasma de 14 mmol/L o mayor.El valor de glucosa se obtuvo utilizando un glucmetro digital Bayer Health Care, mediante puncin en la pata de la rata, la muestra de sangre se coloc en la tira reactiva (biosensor de glucosa oxidasa), los valores fueron reportados en mg/dL. Para determinar los niveles sricos de colesterol y triglicridos se realizo una puncin cardiaca, las muestras fueron analizadas en el Laboratorio de Anlisis Clnicos-FCQ-UV. Los datos se

77

presentaron como la mediade. Para la expresin grfica y el anlisis estadstico de resultados se utilizaron los programas Prism 3.02 e InStat 3.05, respectivamente; y una
ANOVA para establecer diferencias significativas (p<0.05).

Resultados:
Al comparar los pesos de las ratas en diferentes tiempos: inicial, intermedio y final, los efectos ms significativos fueron a partir de las ratas obesas intermedias (210.48.6) vs. control (2039.2) (p<0.001), al comparar a las ratas obesas diabticas intermedias (2096.6) vs. control (2039.2) (p<0.001), al comparar a las obesas finales (229.76.6) vs. control (223.710) (p<0.001), comparando tambin las obesas finales (229.76.6) contra las obesas diabticas finales (19014) (p<0.05). Aunque se observo disminuido el peso en las obesas diabticas debido a los efectos de la diabetes por la STZ, al compararla vs. control (223.710) (p<0.001). En los resultados obtenidos para el valor de glucosa se observaron cambios significativos partir de las muestras intermedias, al comparar las ratas obesas intermedias (129.82) vs. control (561) y contra las obesas diabticas intermedias (199.64.7) (p<0.001), al comparar al grupo obeso final (143.22.8) vs. control (560.8) y vs. grupo obeso diabtico final (25139.4) (p<0.001).En el nivel de colesterol en sangre los cambios se observaron en la semana 8 comparando las ratas obesas (98.22.3) vs. control (97.81.6) (p>0.05, no significativa), pero al comparar las ratas obesas diabticas finales (103.63) vs. control (97.80.8) (p<0.05).Para los niveles de triglicridos observamos cambios significativos comparando las obesas intermedias

(71.43.6) vs. control (36.21.9) (p<0.001), comparando obesas diabticas intermedias (79.42.3) vs. control (36.21.9) (p<0.001). Al comparar a las obesas finales (772.7) vs. obesas diabticas finales (821.2) y vs. control (37.22.3) (p<0.001). Al comparar las dimensiones del hgado de las ratas obesas diabticas finales (5.90.3) vs. control (5.10.4) (p<0.01), comparando obesas finales (8.70.4) vs. control (7.41) (p<0.01), al comparar las obesas diabticas finales (9.40.06) vs. control (7.41) (p<0.01), para el tamao y peso del pncreas no se observaron diferencias significativas (p>0.05).

Discusin:
El presente modelo fue diseado para observar los efectos de la diabetes inducida por STZ y para encontrar una asociacin entre la reduccin del peso de los animales, el peso relativo del hgado y el pncreas en ratas Wistar hembra. En este estudio, se utiliz STZ en una dosis de 65 mg/kg.26 Esta reportada la utilizacin de 90 mg/kg por va ip en ratas. Los niveles de glucosa, colesterol y triglicridos en sangre, tanto el peso corporal, as como las mediciones al hgado y pncreas se registraron para poder observar los efectos, el cual demostr que la STZ fue eficaz para producir hiperglucemia grave.25,19,30En los animales tratados con STZ se observ la prdida de peso debido a los efectos deletreos de STZ que causa la alquilacin del ADN y produce hiperglucemia.26,31El hgado de los animales tratados con STZ, se observo un aumento en su peso(hipertrofia) cuando los animales del grupo obeso diabtico fueron comparados vs. control, a pesar de que el

78

peso de todos los animales del grupo tratado con STZ se observ disminuido. Probablemente debido a la acumulacin de triglicridos que conducen al agrandamiento del hgado debido a la afluencia cada vez mayor de cidos grasos en el hgado inducida por hipoinsulinemia, as como la obesidad y la baja capacidad de excrecin de lipoprotenas del hgado como resultado de una deficiencia de sntesis de la apolipoprotena B.27,28,31El peso del pncreas en el grupo obeso diabtico no mostr ningn cambio respecto al tratamiento con STZ. La disminucin en el peso corporal y la tendencia a la disminucin de peso del pncreas podra atribuirse a la alteracin y desaparicin de los islotes pancreticos y la destruccin selectiva de las clulas productoras de insulina.25,29Se puede concluir que la STZ a travs de su accin directa alquilante puede causar necrosis celular y la destruccin selectiva de las clulas beta pancreticas causando hiperglucemia, en una dosis de 65 mg/kg. Adems, la produccin de la diabetes por STZ y la hipoinsulinemia causan cambios en el peso corporal de los animales obesos diabticos. Tambin se puede concluir que la reduccin en el peso corporal se asoci con aumento del peso relativo del hgado aunque el peso del pncreas no fue afectado, se observ una tendencia a la disminucin en el peso y tamao de este ltimo.

cada uno de los modelos, se vieron afectados algunos rganos por la selectividad de la STZ. Finalmente, se concluy que empleando una dosis de 65 mg/kg de STZ en ratas Wistar hembra obesas, se indujo en los animales diabetes que afecto de forma significativa los rganos internos importantes en el metabolismo (hgado y pncreas) y los niveles sricos de triglicridos, colesterol y glucosa, por lo que podra ser empleado como herramienta para evaluar el efecto de la obesidad y la DM2.

Referencias Bibliogrficas:
1.- EBRAHIM, S. Obesity, fat, and public health, International Journal of Epidemiology 2006; 35:12. 2.- Organizacin mundial de la salud, Obesidad y sobrepeso. (Recuperado) http: //www.who.int/mediacentre/factsheets/fs3 11/es/index.html (consultado 08-04-2010). 3.- Estados Unidos Mexicanos- Secretaria de salud, NORMA Oficial Mexicana NOM-043SSA2-2005, pg. 12. (Recuperado) http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/no m/174ssa18.html (consultado 10-04-10). 4.- Rhys Williams, The metabolic syndrome, Diabetes voice, May 2006-volumen 51, special issue.1-37. 5.- Sorl Guerola-J.V. (2008). Obesidad y alteraciones metablicas: factores genticos y ambientales en poblacin mediterrnea. Tesis doctoral, Departamento de medicina preventiva y salud pblica, Universidad de Valencia. Valencia Espaa. 523 p. 6.www.nlm,nih.gov/medlineplus/spanish/ency

Conclusin:
Se evidenci que existe una relacin entre la dosis de STZ y la induccin de diabetes estable en ratas. Los parmetros evaluados demostraron una alteracin dependiente tanto de la STZ, como del peso corporal de

79

/article/003101.htm 2010).

(consultado:

8-05-

7.- Harrison Principios de Medicina Interna 16a edicin. (2006). Captulo 338. Diabetes mellitus (en espaol). Harrison online en espaol. McGraw-Hill (consultado: 30-052010) 8.- Organizacin Mundial de la Salud, Diabetes. (Recuperado) http://www.who.int/mediacentre/factsheets /fs312/es/index.html (consultado 10-05-10). 9.- Estados Unidos Mexicanos- Secretaria de salud,-Diabetes segn la Norma Oficial Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la diabetes. (Recuperado) http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/no m/m015ssa24.html (consultado 10-04-10). 10.- Steven E. Kahn, M.B., Ch.B., Steven M. Haffner, M.D., Mark a. Heisen, Ph.D., William H. Herman, M.D., M.P.H., Rury R. Holman, F.R.C.P., Nigel P. Jones, M.A., Barbara G. Kravitz, M.D. F.R.C.P.C., Giancarlo Viberti, M.D., F.R.C.P., for the ADOPT study group, Glycemic Durability of Rosiglitazone, metformin, or Glyburide Monotherapy, N Engl J Med 355:23:2427-2441(2006). 11.- LeRoith, Derek. Taylor, Simeon I. Olefsky, Jerrold M. Diabetes mellitus. Fundamentos y clnica. Espaa McGraw-Hill 2003. 12.- Bosi. PL, Carvalho AM, contrera D, Casale G, Pereira MA, Gronner MF, Diogo TM, Torquarto MT, Oishi j, Leal AM. Prevalence of diabetes and impaired glucose tolerance in the urban population of 30 to 79 years of the city of So Carlos, So Paulo. Arq

Bras Endocrinol Metabol. 53(6):72632(2009).13.- Trujillo Arriaga HM. La curva de tolerancia a la glucosa oral. Un enfoque alternativo. Contactos 64:21-24(2007) 14.- Mordes, J.P. and Rossini, AA.: Animal models of diabetes. Am. J. Med., 70: 353360, 1981. 15.- Stuhlman, RA., Packer, J.T. and Doyle, R.E.: Spontaneous diabetes mellitus in Mustromys albicaudatus. Diabetes, 21 (6): 715-721,1972. 16.- grupo modelos experimentales para las ciencias zoohumanas. (Recuperado) http://neurocienciaut.jimdo.com/bioterio/ (consultado 13-06-2010). 17.- Andrews, J.E., Ward, B.C. and Altman, N.H.: Spontaneous Animal Models of Human Disease. Vol. I. Academic Press. USA, 1979. 18.- Clause, B. T. (1998). The Wistar Institute Archives: Rats (Not Mice) and History, Mendel Newsletter February, 1998. 19.- Tze, W.J. and Tai,. J.: All transplantation and xenotransplantation of pseudo islets in diabetic rats and mice. Transplantation, 38(4): 438-40, 1984. 20.- Young, F.G.: Growth hormone and experimental diabetes. Proc. Am. Diabetes Assoc., 10: 23-24,1950. 21.- Ganda OP, Rossini AA, Like AA. Studies on streptozotocin diabetes. Diabetes. 1976; 25:595-603. 22.- Elsner M, Guldbakke B, Tiedge M, Munday R, Lenzen S. Relative importance of transport and alkylation for pancreatic betacell toxicity of streptozotocin. Diabetologia. 2000; 43:1528-1533.

80

23.-Punithavathi, V. R.; Anuthama, R. & Prince, P. S. Combined treatment with naringin and vitamin C ameliorates streptozotocin-induced diabetes in male Wistar rats. J. Appl. Toxicol.; 28(6):806-13, 2008. 24.- Kang, N.; Alexander, G.; Park, J. K.; Maasch, C.; Buchwalow, I.; Luft, L. C. & Haller, H. Differential expression of protein kinase C isoforms in streptozotocin-induced diabetic rats. Kidney Int., 56(5):1737-50, 1999. 25.- Habibuddin, M.; Daghriri, H. A.; Humaira, T.; Al-Qahtani, M. S. & Hefzi, A. A. Antidiabetic effect of alcoholic extract of Caralluma sinaica L. on streptozotocininduced diabetic rabbits. J. Ethnopharmacol., 117(2):215-20, 2008. 26.- Piyachaturawat, P.; Poprasit, J.; Glinsukon, T. & Warichanon, C. Gastric mucosal lesions in Streptozotocin-diabetic rats. Cell. Biol. Intern. Rep., 12(1):53-63, 1988. 27.- Ohno, T.; Horio, F.; Tanaka, S.; Terada, M.; Namikawa, T. & Kitch, J. Fatty liver and hyperlipidemia in IDDM (insulin dependent diabetes mellitus) of Streptozotocin treated shrews. Life Sci., 66(2):125-31, 2000.

28.- Merzouk, H.; Madani, S.; Chabane, Sari, D.; Prost, J.; Bouchenak, M. & Belleville, J. Time course of changes in serum glucose, insulin, lipids and tissue lipase activities in macrosomic offspring of rats with Streptozotocin induced diabetes. Clin. Sci. (Lond), 98(1):21-30, 2000. 29.- Kim, J. D.; Kang, S. M.; Seo, B. I.; Choi, H. Y.; Choi, H. S. & Ku, S. K. Anti-diabetic activity of SMK001, a poly herbal formula in streptozotocin-induced diabetic rats: therapeutic study. Biol. Pharm. Bull., 29(3):477-82, 2006. 30.- Heidari, Z.; Mahmoudzadeh-Sagheb, H. & Moudi, B. A quantitative study of sodium tungstate protective effect on pancreatic beta cells in streptozotocin-induced diabetic rats. Micron., 39(8):1300-5, 2008. 31.- Lee, S. I.; Kim, J. S.; Oh, S. H.; Park, K. Y.; Lee, H. G. & Kim, S. D. Antihyperglycemic effect of Fomitopsis pinicola extracts in streptozotocin-induced diabetic rats. J. Med. Food, 11(3):518-24, 2008.

81

CARACTERIZACIN MOLECULAR DE CEPAS Y VECTORES DE TRYPANOSOMA CRUZI DEL ESTADO DE VERACRUZ.


Jess Torres Montero Daniel Guzmn Gmez Aracely Lpez Monteon Eric Dumonteil Angel Ramos Ligonio

Marco terico:
La enfermedad de Chagas o Tripanosomiasis Americana es una enfermedad infecciosa que se encuentra ampliamente diseminada y es considerada como un problema importante de salud pblica que afecta a toda Amrica Latina 1. De 16-18 millones de individuos son infectados por T. cruzi en Amrica Central y Sudamrica 2.El agente causal de la enfermedad es el protozoario hemoflagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi), y su principal mecanismo de transmisin es el vectorial, por insectos de la familia Reduviidae, siendo el principal gnero Triatoma. La prevalencia de esta enfermedad se relaciona con el subdesarrollo y la pobreza. Conocer si los vectores contienen al parsito, indica el riesgo en el que la poblacin est expuesta de padecer la infeccin por T. cruzi por habitar en zonas endmicas en convivencia con el agente vector. Con el apoyo de la biologa molecular se ha logrado diagnosticar y clasificar a T. cruzi en lneas filogenticas, incluyendo distintos linajes 3, 4. De la misma manera la identificacin taxonmica en el vector utilizando el anlisis de espaciadores del

transcrito interno (ITS) del DNA ribosomal (DNAr), donde los ITS-1 diferencia complejos y los ITS-2 diferenca especies 5. La identificacin taxonmica del vector, se realiza mediante el anlisis del segundo espaciador del transcrito interno del DNAr (ITS-2), revelando diferentes haplotipos y facilitando la taxonoma del vector 6.

Planteamiento del problema:


T. cruzi es un parsito protozoario, agente etiolgico de la enfermedad de Chagas, considerada una enfermedad crnica, el parsito es transmitido por insectos triatominos (chinches) que se distribuyen en distintas regiones geogrficas de Amrica latina. Conocer si los vectores contienen al parsito, indica el riesgo en el que la poblacin est expuesta de padecer la infeccin por T. cruzi por habitar en zonas endmicas en convivencia con el agente vector. Recientemente se ha clasificado a T. cruzi en lneas filogenticas, las cuales incluyen distintos linajes. Debido a la gran diversidad gentica que presenta hoy en da el parsito es necesario clasificar a T. cruzi y estudiar los hbitats en donde ste se

Estudiante de Doctorado Centro De Investigaciones Biomdicas Universidad Veracruzana jetorres@uv.mx angramos@uv.mx

82

localice para proponer estrategias de control del vector y de la misma enfermedad, con el fin de obtener una correlacin entre la heterogeneidad de cepas y su tropismo tisular (presentacin clnica de la enfermedad), y por otra parte, el conocer la clasificacin de los vectores, distribucin en la zona e identificar la presencia de T. cruzi en ellos representa un acercamiento de gran alcance epidemiolgico para determinar los ciclos de transmisin de las diversas poblaciones del parsito entre los vectores y especies mamferas. En base a lo anterior es de vital importancia realizar la tipificacin molecular de cepas de T. cruzi aisladas de vectores colectados que circulan en localidades rurales de la zona centro del estado de Veracruz para contar con una informacin ms certera sobre la epidemiologa de la enfermedad en la regin; as como herramientas para la prediccin y vigilancia entomolgica de la enfermedad que permitan a las autoridades de salud intervenir de forma ms eficiente.

Municipio de Tezonapa perteneciente al estado de Veracruz a los cuales se les realiz lavado intestinal. A partir de la muestra obtenida se diagnostic el agente infeccioso T. cruzi mediante la amplificacin del kDNA mediante ensayos de PCR y se caracteriz el linaje (I-II) del parsito a las muestras que salieron positivos a T. cruzi. Por otro lado, a partir de las extremidades de los vectores se extrajo DNA y con ste se caracteriz taxonomicamente a T. dimidiata presente en la zona; mediante (ITS-2) empleando el metodo de la PCR.

Resultados:
Se encontraron 297 vectores, de los cuales 224 (75.42%) se recolectaron en lugares intradomiciliares, 58 (19.52%) en lugares peridomiciliares, 3 (1.01 %) en lugares silvestres y 12 (4.05 %) de ellos se desconoce su procedencia. Resultaron 41 (13.80%) vectores positivos de un total de 297 analizados. Los 41 muestras positivas a T. cruzi corresponden al linaje I del parsito. Los 297 vectores pertenecen al grupo 2 dentro de la clasificacin filogentica utilizando como marcador al ITS-2.

Objetivo General:
Identificar y caracterizar molecularmente la (s) cepa (s) del parsito Trypanosoma cruzi y al vector Triatoma dimidiata presentes en localidades rurales de la zona centro del estado de Veracruz.

Discusin:
En base a los anlisis y resultados obtenidos, observamos que el parsito est presente en la regin y por lo consiguiente que el hombre adquiera la enfermedad. El linaje I de T. cruzi encontrado concuerda con estudios generados mediante el anlisis de marcadores genticos (RAPD); formando un grupo homogneo para los ciclos domsticos y selvticos sobre el rea geogrfica de Mxico. No as el linaje II caracterstico de los ciclos domsticos en Argentina, Brasil, Bolivia

Metodologa:
Es un estudio de tipo experimental. Se recolectaron vectores en comunidades rurales, para la identificacin y caracterizacin de T. cruzi, y para la clasificacin de los vectores. Se recolectaron vectores de 13 localidades rurales del

83

y Chile. A pesar de que los vectores analizados pertenecen al grupo 2 (que junto con el grupo 3 se encuentra presente en Mxico) dentro de la clasificacin filogentica, no deja de ser importante ya que se pueden presentar hbridos debido a la migracin del vector al mismo hombre llevando consigo al vector; incluso al parsito, creando nuevos hbridos tanto para el vector como para T. cruzi al adaptarse a nuevos habitas y huspedes. Incluso llegar a infestar lugares si no se tiene el control adecuado de los vectores, lo que provocara posibles infecciones. El anlisis por PCR es costoso sin embargo presenta buenos resultados a diferencia de la microscopia ptica.

Rassi A. Chagas disease (American Trypanosomiasis) Its impact on transfusion and clinical medicine.1992.
2.

Organizacin Mundial de la Salud. Reporte sobre la enfermedad de Chagas. Grupo de Trabao Cientfico TDR/GTC/09. Julio 2007. Dorn PL, Selgean S, Guillot M. Simplified Method for Preservation and Polymerase Chain Reactionamplification of Trypanosoma cruzi DNA in Human Blood. Mem Inst Oswaldo Cruz 1997; 92(2): 253-255. Souto RP, Fernandes O, Macedo AM, Campbell DA, Zingales B. DNA markers define two major phylogenetic lineages of Trypanosoma cruzi. Molecular and Biochemical Parasitology. 1996; 83:141152.

3.

4.

Conclusin:
Se encontr la presencia de Trypanosoma cruzi en vectores colectados en zonas rurales del Municipio de Tezonapa, sugiriendo una transmisin vectorial activa del parasito en estas localidades rurales, El linaje I de T. cruzi encontrado concuerda con estudios realizados por otros grupos donde se ha observado que es el que predomina en distintos estados del pas. Por otra parte, los vectores corresponden al grupo 2 dentro de la clasificacin filogentica. Estos resultados sugieren una convivencia estrecha con el vector representando as un riesgo potencial para la transmisin del parsito, por lo que es necesario implementar nuevos programas de control contra el vector que permitan asegurar la calidad de vida de los habitantes de estas comunidades.

5. BEEBE N, COOPER R, FOLEY D, ELLIS J. Populations of the south-west Pacific malaria vector Anopheles farauti s.s revealed by ribosomal DNA transcribed spacer polymorphisms. Heredity 2000; 94:244-253. 6. Bargues MD, Klisiowicz RD, GonzalesCandelas F, M. Ramsey JM, Monroy C, Ponce Carlos, et al. Phylogeography and Genetic Variation of Triatoma dimidiata, the Main Chagas Disease Vector in Central America, and Its Position within the Genus Triatoma. PLos Negl Trop Dis. 2008; 2 (5): 233-248

Referencias Bibliograficas:
1.

Wendel S; Brener, Z; Camargo ME;

84

IDENTIFICACIN DE UNA ZONA CON ALTA SEROPREVALENCIA DE INFECCIN POR TRYPANOSOMA CRUZI EN LA ZONA CENTRO DEL ESTADO DE VERACRUZ
: Daniel Guzmn Gmez Aracely Lpez Monteon Eric Dumonteil Angel Ramos Ligonio

Marco terico:
La enfermedad de chagas o tripanosomosis americana es causada por el parsito protozoario Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Esta enfermedad representa un problema de salud pblica en Amrica latina, en donde la organizacin Mundial de la salud estima que aproximadamente 60 millones de personas esta en riesgo de adquirir la infeccin y 9-12 millones de personas estn infectadas (1). En Mxico, la enfermedad de chagas es endmica en varias regiones, pero estos datos permanecen subestimados, esta informacin limitada no es disponible acerca de la epidemiologa de la enfermedad (2, 3).El Estado de Veracruz, es una de las regiones donde la endemicidad de la infeccin por T. cruzi es poco establecida, posee un total de 7 millones de personas y es dividido en 11 jurisdicciones sanitarias, varias especies de Triatominos han sido encontrados en el estado, incluyendo algunos con una alta capacidad vectorial, tales como Triatoma dimidiata o T.

pallidipenis (4). Tambin la presencia de infeccin por T. cruzi ha sido documentada en varias poblaciones humanas. De acuerdo a la encuesta nacional de seroprevalencia en los aos 80s, Veracruz fue uno de los estados en Mxico con alta seroprevalencia en la poblacin general (; 3.0 %) (5). Tambin se ha documentado la infeccin por T. cruzi en donadores de banco de sangre en la ciudad de Orizaba, Ver. (6). Y casos de cardiomiopata chagsica crnica se han observado en las jurisdicciones sanitarias de Poza Rica Veracruz (7). Otros estudios de la distribucin de la infeccin en diferentes jurisdicciones sanitarias del estado de Veracruz indican que la infeccin por T. cruzi puede estar ausente en jurisdicciones tales como Coatzacoalcos, Orizaba y Martnez de la Torre, y una alta seroprevalencia fue observada en las jurisdicciones de Tuxpan y Pnuco (2.8% y 1.6% respectivamente) y en la jurisdiccin de Crdoba (1.3%). Adems, la deteccin de la infeccin por T. cruzi en nios menores de 18 aos de edad (1.85.2%) sugiere la presencia de una trasmisin
Centro de Investigaciones

Estudiante de Doctorado Universidad Veracruzana Biomdicasdaguzman@uv.mx angramos@uv.mx

85

activa del parsito jurisdicciones (4).

en

estas

mismas

Planteamiento del problema:


Como se detall, la enfermedad de Chagas forma parte de las enfermedades infecciosas presente en el estado de Veracruz, pero su importancia y dinmica de transmisin permanece desconocido. Dada la importancia en salud pblica de esta enfermedad en las Amricas, es de suma importancia llevar a cabo un estudio epidemiolgico inicial que proporcion datos claves y actualizados sobre la magnitud del impacto de la enfermedad de Chagas y los riesgos de transmisin en diferentes poblaciones y regiones del estado, utilizando una metodologa rigorosa y pruebas diagnosticas bien establecidas.

total de 654 muestras que se utilizaron para la identificacin de anticuerpos especificos para T. cruzi utilizando cuatro diferentes ensayos: dos ensayos de ELISA utilizando extractos crudos del parsito, un ensayo de ELISA utilizando una protena recombinante, un ensayo de inmunofluorescencia (IFI) y un anlisis de Western blot (6). Un cuestionario corto fue aplicado a los participantes acerca del conocimiento del vector y de aspectos clnicos generales.

Resultados:
De los 654 sueros colectados, la mayora provena de mujeres (61%). Todas las muestras fueron tamizadas para la presencia de anticuerpos contra T. cruzi, con un total de 110 muestras positivas con al menos dos pruebas, con una seroprevlaencia del 16.8% (IC 95%=14.2-19.9%). Ciento cinco muestras dieron resultados positivos a tres pruebas y 44 fueron positivos solo para una prueba (IFI). Las dos pruebas de ELISA y la IFI fueron congruentes con ndices kappa de hasta 0.99 0.005, sin embargo el Western blot mostro una baja sensibilidad (;= 0.56 0.05%). Adicionalmente, los pacientes que fueron positivos mencionaron que identificaban al insecto vector (78.5%) al contrario de los pacientes negativos (66%).Los anlisis de distribucin geogrfica de la infeccin por T. cruzi, mostraron que la infeccin se concentro en 11 de las 13 localidades del municipio de Tezonapa con una seropositividad del 28.9%. El porcentaje ms alto de infeccin se observ en las localidades de Caxapa (61.5%) y las Josefinas (40%), mientras que de las 5 localidades del municipio de Tierra Blanca, solamente tuvieron casos positivos las localidades de El

Objetivo General:
Actualizar los datos seroepidemiolgicos de la infeccin por T. cruzi en la zona centro del Estado de Veracruz.

Metodologa:
Es un estudio de tipo experimental y observacional. Diecinueve localidades rurales pertenecientes a los municipios de Tezonapa y Amatln en la jurisdiccin de Crdoba y del municipio de Tierra Blanca en la jurisdiccin de Cosamaloapan. En cada localidad rural se inform acerca de la enfermedad de Chagas mediante el apoyo de las Unidades Medicas Rurales (IMSSOportunidades), y los participantes interesados donaron una muestra de sangre, previo consentimiento informado. A partir de las muestras se obtuvo el suero de cada uno de los pacientes, se recolectaron un

86

Moral y Amatln. Las diferencias observadas pueden ser atribuidas a factores ambientales tales como tipo de vegetacin, uso de tierra, humedad y posiblemente a la separacin geogrfica de las dos reas por montaas. La ausencia de infeccin por T. cruzi en Tierra Blanca fue asociada a la prdida de vegetacin y humedad, y la alta infeccin en Tezonapa fue asociada con la presencia de vegetacin tropical.

Discusin:
El proposito de este estudio fue la actualizacin de la informacin epidemiolgica por la infeccin de T. cruzi en la regin central del estado de Veracruz. Las muestras fueron analizadas con cuatro ensayos diagnsticos. La concordancia entre las dos ELISAs y la IFI fue alta, lo cual representa una alta credibilidad de los resultados. Por el contrario, el ensayo de Western blot parece tener una baja sensibilidad porque este solo confirma una limitada proporcin de los casos que resultaron ser positivos con los otros ensayos. Este bajo reconocimiento del Western blot ha sido observado en previos estudios en el estado de Morelos, Mxico, en el cual solamente el 20 % de los casos positivos por ELISA fueron confirmados (10), y en un estudio con muestras de donadores de sangre en Orizaba, Veracruz (6). Este reconocimiento puede ser debido a un pobre reconocimiento de los antgenos desnaturalizados y sugiere que el Western blot puede ser un mtodo no apropiado para la confirmacin de la infeccin por T. cruzi. Por su parte, la alta concordancia entre los ensayos basados sobre las cepas Y y H1, las cuales pertenecen a diferentes linajes, y

conjunto con otros estudios, muestran un excelente reconocimiento en ensayos basados con una variedad de fuentes de antgenos con sueros de pacientes en Mxico (11, 12).Sobre la base de dos o mas ensayos positivos, se detect un promedio de seroprevalencia a la infeccin por T. cruzi de 16.8 % (IC95%= 14.2-19.9%) en esta rea de estudio, la cual es considerablemente mas alta que en estudios previos. Se han reportado en esta jurisdiccin rangos de seroprevalencia van de 1.3% en la poblacin general y de 1.8% en nios menores de 18 aos, sin embargo, el tamao de las muestras es mucho mas pequeo y las localizaciones geogrficas no se han especificado y puede haber diferencias por este hecho (4, 8). Interesantemente, no se han reportado casos en nios en la jurisdiccin de Cosamaloapan (4), y nuestros datos parecen confirmar esta observacin ya que no se detectaron casos en el municipio de Tierra blanca perteneciente a la jurisdiccin de Cosamaloapan. Sin embargo, se encontr una alta seroprevalencia en la jurisdiccin de crdoba, particularmente en el municipio de Tezonapa, el cual tiene un promedio significativo de elavada infeccin en nios. Sobre los datos de un rango de transmisin vertical ; 10% (13), nosotros calculamos arriba de 3.4 % de recin nacidos infectados por via congnita y posiblemente mas casos relacionados a la familia (14). Basado a un total de mil nacimientos por ao, esto podra corresponder aproximadamente a 35 nios infectados congnitamente en el municipio de Tezonapa. Nuevamente estos resultados son muchos mas altos que los reportados en el noreste del estado de Veracruz, donde ningn caso de infeccin congnita fue

87

encontrado en donde la seroprevalencia a la infeccin por T. cruzi en mujeres embarazadas fue de 3.5 % (15).

Conclusin:
El promedio de seroprevalencia de infeccin por T. cruzi fue de 16.8 %, y se identific al municipio de Tezonapa como un regin hiperendemica, con rangos de seroprevalencia mayores del 45% en la poblacin infantil. Estos rangos de transmisin elevados pueden asociarse con una transmisin congnita y vectorial, en donde estudios adicionales tendrn que realizarse para ayudar a identificar estos procesos de transmisin.
5.

contra Trypanosoma cruzi y su asociacion con factores de riesgo en menores de 18 anos de Veracruz, Mexico . Rev Panam Salud Publica 22: 75 82. Velasco Castrejon O , Valdespino JL , Tapia Conyer R , Salvatierra B , Guzman Bracho C , Magos C , Llausas A , Gutierrez G , Sepulveda J , 1992 . Seroepidemiologia de la enfermedad de Chagas en Mexico . Salud Publica Mex 34: 186 196 . Ramos-Ligonio A , Ramirez-Sanchez ME , Gonzalez-Hernandez JC , Rosales-Encina JL , Lopez-Monteon A , 2006 . Prevalencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en donadores de sangre del IMSS, Orizaba, Veracruz, Mexico . Salud Publica Mex 48 : 13 21 . Olivera-Mar A , Hernandez-Vicencio C , Camacho-Marie M , HernandezBecerril N , Monteon-Padilla VM , Vallejo M , Reyes PA , 2006 . Chronic chagasic cardiomyopathy at the Hospital General de Zona no. 24 IMSS. Poza Rica, Veracruz [in Spanish] . Arch Cardiol Mex 76: 269 276 . Segura EL , Escobar-Mesa A , 2005 . Epidemiologa de la enfermedad de Chagas en el estado de Veracruz . Salud Publica Mex 47: 201 208 . Sanchez B , Monteon V , Reyes PA , Espinoza B , 2001. Standardization of micro-enzymes-linked immunosorbent assay (ELISA) and western blot for detection of

6.

Referencias Bibliogrficas:
1.

World Health Organization , 2007 . Reporte Sobre la Enfermedad de Chagas. 1720 de Abril de 2005, Actualizado en Julio de 2007, Buenos Aires, Argentina. Geneva : World Health Organization . Dumonteil E , 1999 . Update on Chagas disease in Mexico . Salud Publica Mex 41: 322 327 . Cruz-Reyes A , Pickering-Lopez JM , 2006 . Chagas disease in Mexico: an analysis of geographical distribution during the past 76 years: a review . Mem Inst Oswaldo Cruz 101: 345 354 . Salazar PM , Rojas G , Bucio M , Cabrera M , Garcia G , Ruiz A , Guevara Y , Tapia R , 2007 . Seroprevalencia de anticuerpos

7.

2.

3.

8.

9.

4.

88

Trypanosoma cruzi antibodies using extracts from Mexican strains as antigens . Arch Med Res 32: 382 388 .
10. Rangel-Flores

Oswaldo Cruz 104: 797 800 .


13. Buekens P , Almendares O , Carlier Y

H , Sanchez B , Mendoza-Duarte J , Barnabe C , Breniere FS , Ramos C , Espinoza B , 2001 . Serologic and parasitologic demonstration of Trypanosoma cruzi infections in an urban area of central Mexico: correlation with electrocardiographic alterations . Am J Trop Med Hyg 65: 887 895 .

, Dumonteil E , Eberhard M , Gamboa-Leon R , James M , Padilla N , Wesson D , Xiong X , 2008 . Motherto-child transmission of Chagas disease in North America: why dont we do more? Matern Child Health J 12: 283 286
14. Sanchez Negrette O , Mora MC ,

11. Monteon VM , Ramos A , Reyes PA ,

1993 . Reactivity of sera from Chagas patients to extracts of Mexican Trypanosoma cruzi isolates [in Spanish] . Rev Biol Trop 41: 861 865
12. Luquetti AO , Espinoza B , Martinez I

Basombrio MA , 2005 . High prevalence of congenital Trypanosoma cruzi infection and family clustering in Salta, Argentina . Pediatrics 115: e668 e672 .
15. 1Olivera Mar A , Guillen Ortega F ,

, Hernandez-Becerril N , Ponce C , Ponce E , Reyes PA , Hernandez O , Lopez R , Monteon V , 2009 . Performance levels of four Latin American laboratorios for the serodiagnosis of Chagas disease in Mexican sera samples . Mem Inst

Cruz Vidal S , Hernandez-Becerril N , Perez Galdamez E , Cordova Concepcion G , Reyes PA , Monteon VM , 2006 . Serological and parasitological screening of Trypanosoma cruzi infection in mothers and newborns living in two Chagasic areas of Mexico . Arch Med Res 37:774 777 .

89

EVALUACIN DEL POTENCIAL ADYUVANTE DE UN TOXOIDE DERIVADO DE LISTERIOLISINA O SOBRE


CLULAS PRESENTADORAS DE ANTGENO HUMANAS
: Diana Magali Viveros Luna : Alfredo Domnguez Lpez Leonardo Daniel Enrquez-Tenorio : Roberto Lagunes Torres Carmen Sofia Silva Caetas Hctor Vivanco-Cid.

Marco terico:
Uno de los aspectos clave en vacunacin, es la identificacin de estrategias para incrementar la inmunogenicidad de antgenos. El uso de molculas adyuvantes y acarreadores es sin duda, la estrategia ms empleada en vacunacin para tal fin. Los adyuvantes son a menudo necesarios para crear vacunas eficientes al actuar de una forma no-especfica, mediante la activacin de uno o ms componentes del sistema inmune innato, promoviendo inflamacin de bajo grado y de esta forma potenciando la respuesta hacia el antgeno de inters. El conocer los mecanismos por los cuales estos actan, as como la evaluacin de aspectos bsicos tales como la seguridad de su empleo en modelos experimentales animales y posteriormente en el humano, son aspectos muy importantes cuando se estudian nuevas molculas candidatos a ser considerados como adyuvantes y/o acarreadores. En aos recientes, una molcula producida

por el patgeno intracelular Gram-positivo Listeria monocytogenes (LM) denominada Listeriolisina O (LLO), ha cobrado gran inters en el campo de investigacin enfocado a la identificacin de nuevos adyuvantes y molculas acarreadoras. LLO es una toxina formadora de poros, con la capacidad de unirse a membranas celulares a travs de colesterol (1). Algunas estrategias se han utilizado para incluir a LLO en innovadoras formulaciones vacunales experimentales. Se ha utilizado para facilitar el acceso de protenas pasajeras hacia el citosol de clulas presentadoras de antgeno profesionales (APCs), bsicamente para inducir respuestas de linfocitos CD8 in vivo e in vitro. (2-3). Adems de esto, LLO ha sido empleada tambin como una molcula acarreador para incrementar la inmunogenicidad de antgenos del virus de inmunodeficiencia humana, (4) antgenos tumorales (5) y antgenos modelo tales como ovoalbmina entre otras (2). En todas estas propuestas la administracin conjunta de LLO en combinacin con el antgeno de inters (ya

Estudiante de Licenciatura hvivanco@uv.mx

Instituto De Investigaciones Medico Biologicas Universidad Veracruzana vivacid@hotmail.com

90

sea como protenas de fusin o bien como formulaciones de liposomas que encapsulan ambos: LLO + antgenos pasajeros) ha permitido incrementar la inmunogenicidad de los antgenos de inters, con vigorosa respuesta celular (CD4 y CD8), as como una notable respuesta inmune humoral.

Planteamiento del problema:


Una de las limitantes del uso de toxinas bacterianas como molculas adyuvantes, lo es el potencial riesgo que representa su actividad biolgica en la administracin a seres humanos. LLO posee actividad citotxica sobre mltiples estirpes celulares cuando esta es empleada en altas concentraciones. En el modelo murino, la inyeccin va intravenosa de esta toxina, produce un efecto letal cardiotxico en ratones (22). Este efecto adverso est asociado a la propiedad citoltica de la molcula, la cual provoca una destruccin masiva de globulos rojos, as como dao sobre tejidos de mltiples rganos blancos (corazn, hgado y rin entre otros). Con la finalidad de explorar si en ausencia de la propiedad citoltica, LLO an puede ser un adyuvante-acarreador efectivo en vacunacin, en el presente trabajo se gener y evalu los efectos de una mutante no ltica de LLO (denominada como detoxLLO), sobre clulas presentadoras de antgenos humanas (Celulas Dendrticas y macrfagos humanos), enfocndose sobre los parmetros de maduracin de clulas dendrticas y produccin de citocinas inflamatorias.

maduracin de clulas dendrticas a travs del anlisis de la expresin de molculas coestimuladoras CD80, CD86, CD40 y la expresin de MHC clase II, as como evaluar el efecto de detoxLLO en la produccin de mediadores inflamatorios como el Factor de Necrosis Tumoral alfa (TNF-;), IL-1 e IL-6 en macrfagos humanos.

Metodologa:
Tipo de estudio: Bsico, experimental. El gen de Listeriolisina O ha sido clonado dentro del vector de expresin pET29 por reaccin en cadena de la polimerasa. El gen de Listeriosina fue modificado en su porcin carboxi-terminal por medio de un protocolo estndar de mutagnesis dirigida por oligonucletidos y PCR. La porcin conocida como regin de unin a colesterol (Cholesterol Binding Domain) fue modificada, insertando tres mutaciones en los codones que codifican para los aminocidos Cistena en posicin 484, Triptofano 491 y Triptofano 492 de la protena madura. Se procedi a realizar la expresin y purificacin de la protena detoxLLO y la protena LLO nativa para ser usada como control o referencia. La expresin de las protenas se realiz transformando la cepa BL21 con los vectores. Las bacterias fueron crecidas en medio LB con kanamicina, se adicion IPTG para promover la expresin de los plsmidos. Las bacterias fueron cosechadas y sonicadas para liberar las protenas recombinantes. Se realiz la purificacin de las protenas con una matriz de afinidad de iones nquel (NiNTA agarose beads, Qiagen). Se aislaron clulas mononucleares de sangre perifrica humana mediante gradiente de densidad

Objetivo General:
Evaluar los efectos de una mutante no ltica de Listeriolisina O (detoxLLO) en la

91

empleando Ficoll-hypaque y se sembraron en botellas de cultivo celular de 75 cm2 estriles. Mediante adherencia al plstico se separaron los monocitos de las clulas no adherentes. Las clulas dendrticas inmaduras se obtuvieron al incubar los monocitos humanos purificados, en presencia de GM-CSF 200 ng/mL e IL-4 50 ng/mL durante 7 das a 37OC con 20 mL de medio RPMI suplementado suero fetal bovino al 10%. Para la obtencin de macrfagos humanos, los monocitos purificados por adherencia fueron incubados con medio RPMI 1640 con suero fetal de bovino descomplementado al 10% y suero humano al 2%. Las clulas se incubaron a 37C y 5% CO2 durante 6 das. Clulas dendrticas inmaduras (500,000) fueron estimuladas con 500 ng/ml de detoxLLO o LLO nativa durante 24 horas en placas de cultivo de 24 pozos. Las clulas fueron recolectadas y centrifugadas a 1500 rpm durante 5 minutos. Las clulas se resuspendieron en 100 l de solucin de bloqueo y se incubaron a 4 C durante 1 hora. Posteriormente las clulas se incubaron con los siguientes anticuerpos monoclonales anti-CD80-FITC, anti-CD86-PE y anti-CD40FITC y contra molculas del MHC clase II en solucin de tincin y analizarlas por medio de citometra de flujo. Determinacin de citocinas inflamatorias en el sobrenadante de macrfagos humanos estimulados con detoxLLO: Macrfagos humanos (500,000 clulas) fueron estimulados con 500 ng/ml de detoxLLO, LLO nativa o con 100 ng/mL de LPS de E. coli como control positivo, durante 24 horas en placas de 24 pozos. Al trmino de este tiempo se recuperaron los sobrenadantes y fueron congelados a -20 C hasta analizar la produccin de citocinas

proinflamatorias: TNF-alfa, IL-1 e IL-6 por tcnica de ELISA.

Resultados:
Al comparar la protena nativa LLO y el toxoide generado (detoxLLO), ambas molculas indujeron significativos niveles de citocinas inflamatorias humanas en macrfagos humanos con una tendencia de detoxLLO a inducir niveles ms elevados de mediadores inflamatorios. La produccin de TNF-alfa alcanza su pico mximo de produccin (1620 pg/ml de TNF-alfa) a las 24 horas en macrfagos estimulados con 500 ng/ml de LLO nativa. La misma concentracin de detoxLLO (500 ng/ml) induj niveles superiores de TNF-alfa a las 24 horas (1830 pg/ml de TNF-alfa. La produccin de IL-1 a las 24 horas en macrfagos estmulados con LLO nativa registr un valor promedio de 1200 pg/ml, niveles inferiores a los obtenidos para los macrfagos estimulados con detoxLLO (1546 pg/ml). Para IL-6 los valores obtenidos fueron muy similares entre ambas protenas (880 pg/ml para macrfagos estimulados con LLO nativa, y 960 pg/ml de detoxLLO). Al comparar ambas protenas por su potencial de inducir la maduracin de clulas dendrticas humanas, se observ un aumento en la expresin de las molculas co-estimuladoras CD80, CD86, CD40 y MHC clase II para las 24 horas, en comparacin con clulas dendrticas humanas sin estimular. La expresin de estos marcadores fue mayor en las clulas estimuladas con detoxLLO que las estimuladas con la preparacin de LLO nativa, aunque la intensidad media de fluorescencia fue menor a la registrada por clulas dendrticas humanas estimuladas con

92

100 ng/ml de Lipopolisacarido.

Discusin:
Los resultados obtenidos en el presente trabajo permiten confirmar que la capacidad de inducir la activacin de clulas del sistema inmune innato humanas de la protena LLO, es independiente de su actividad citoltica. El toxoide generado en el presente trabajo (detoxLLO), conserva sus propiedades inmunognicas, con ligera tendencia a promover una mayor cantidad de mediadores inflamatorios en macrfagos humanos estimulados durante 24 horas. De igual forma que para los mediares inflamatorios, detoxLLO conserva su capacidad de inducir la expresin de marcadores de maduracin celular en clulas dendrticas humanas, uno de los aspectos claves que se sabe, permiten el inicio de la inmunidad adquirida. Es probable que las tendencias observadas de mayor produccin de mediadores inflamatorios y una mayor expresin de molculas de coestimulacin, se expliquen por su reduccin en su potencial citotxico per se, lo cual permitira que un mayor nmero de clulas en cultivo, sobrevivieran por ms tiempo en el cultivo y por tanto siguieran produciendo una mayor cantidad de mediadores inflamatorios en el sobrenadante o una mayor expresin de molculas de coestimulacin en las clulas en cultivo.

antgeno humanas a secretar mediadores inflamatorios como TNF-alfa, IL-1 e IL-6, as como la expresin de molculas de coestimulacin como CD80, CD86, CD40 y MHC clase II, lo cual abre la posibilidad de utilizar esta molcula como un adyuvante eficaz y seguro en vacunacin.

Referencias Bibliogrficas:
1.

Palmer, M. The family of thiolactivated, cholesterol-binding cytolysins. Toxicon. 2001. 39:1681. Darji A, Chakraborty T, Wehland J, Weiss S. Listeriolysin generates a route for the presentation of exogenous antigens by major histocompatibility complex class I. Eur J Immunol. 1995. 25(10):296771. Lee KD, Oh YK, Portnoy DA, Swanson JA. Delivery of macromolecules into cytosol using liposomes containing hemolysin from Listeria monocytogenes. J Biol Chem. 1996. 271(13):7249-52. Bu Z, Ye L, Skeen MJ, Ziegler HK, Compans RW, Yang C. Enhancement of immune responses to an HIV env DNA vaccine by a C-terminal segment of listeriolysin O. AIDS Res Hum Retroviruses. 2003. 19(5):40920. Neeson P, Pan ZK, Paterson Y. Listeriolysin O is an improved protein carrier for lymphoma immunoglobulin idiotype and provides systemic protection against

2.

3.

4.

Conclusin:
El toxoide generado a partir de la molcula Listeriolisina O nativa, conserva sus propiedades inmunognicas, al inducir la activacin de clulas presentadoras de

93

PATRON DE SUSCEPTIBILIDAD DE MICROORGANISMOS AISLADOS EN UROCULTIVOS EN LA UNIDAD DE SERVICIOS ANALITICOS DE SALUD BIOANALISIS (USASB). ENERO 2007, DICEMBRE 2009 XALAPA VERACRUZ.
Jose de Jesus Daniel Lpez Muoz Claudia Belen Ortega Planell Omar Lagunes Merino Andy Arceo Rodrguez

Marco terico:
Las infecciones del tracto urinario se definen como un grupo de condiciones que tienen en comn la presencia de un nmero significativo de bacterias en la orina. Las infecciones agudas de las vas urinarias se pueden subdividir en dos grandes categoras anatmicas: la infeccin de las vas superiores (uretritis, cistitis y prostatitis) y la infeccin de las vas superiores (pielonefritis aguda, absceso renal y perinfrico). En la mayor parte de los casos, el crecimiento de 101 unidades formadoras de colonias por mililitro (ml), puede ser clnicamente importante especialmente en nios y en especmenes obtenidos por catter urinario; cualquier crecimiento patgeno es considerado clnicamente importante si fue obtenido por aspiracin supra pbica. La infeccin del tracto urinario puede ser recidivante, que pueden ser recadas o reinfecciones. La recada se refiere a la reactivacin de la infeccin con el mismo

microorganismo que estaba presente antes de iniciarse el tratamiento, es decir se debe a la persistencia del microorganismo en el tracto urinario. La reinfeccin es un nuevo efecto con un microorganismo diferente de la bacteria original, aunque en ocasiones puede ser el mismo agente bacteriano. El uso indiscriminado de antibiticos por parte de la poblacin, ha causado el incremento de la resistencia de diversos agentes causales de IVU. La resistencia bacteriana es un tema trascendental en salud pblica dado que es de vital importancia el conocimiento de los perfiles de susceptibilidad antimicrobiana encaminados a la orientacin para la elaboracin de esquemas de tratamiento eficaces. La flora de los pacientes hospitalarios es muy distinta a la de la comunidad, esto se debe a la multirresistencia presentada por los agentes causales de enfermedades en los pacientes hospitalizados y a la modificacin de la flora debido a la colonizacin por microorganismos propios de la flora nosocomial de gran patogenicidad. Los
Facultad de Bioanlisis

Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana jojedanlm@hotmail.com asiolita@yahoo.com.mx

94

microorganismos que se aslan con mayor frecuencia son los bacilos Gram negativos y los estafilococos. De acuerdo a diversos estudios realizados en nuestro pas, las bacterias Gram negativas son las responsables de las IVU y los antimicrobianos evaluados con mayor porcentaje de susceptibilidad son el ceftibuten y la netilmicina en cambio, la ciprofloxacina, trimetoprim-sulfametoxazol, amikacina y la levofloxacina representaron los antibiticos con mayor resistencia (Barriga Angulo y cols. 2008). En un estudio llevado a cabo en el Instituto Nacional de Pediatria (2002) no se encontraron diferencias significativas en la resistencia de bacterias Gram negativas y el uso de ciprofloxacina, cefepime y ceftriaxona.

urocultivos en el USASB de agosto del 2008 a diciembre del 2009.

Metodologa:
El tipo de estudio fue observacional, descriptivo y transversal. Se llev a cabo en la Unidad de Servicios Analticos de Salud Bioanlisis, durante el periodo de agosto del 2008 a diciembre del 2009 una evaluacin de 138 muestras de urocultivos.Se estudiaron 138 muestras de las cuales 34 fueron positivas. Los aislamientos fueron caracterizados a nivel de gnero y especie con base a las tcnicas reco-mendadas por la Sociedad Americana de Microbiologa. Con respecto a la sensibilidad se utilizaron diferentes antimicrobianos: Cefalotina, Netilmicina, Nitrofurontoina, Amikacina, Ampicilina, Carbenicilina, Meropenem, Acido Nalidixico, Trimeto/Sulfame,Pefloxacina, Cefotoxima, Cefoperaxone, Gentamicina, Nitrofurontoia. Para la determinacin de la susceptibilidad antimicrobiana, se llevaron a cabo los procedimientos recomendados por el Instituto de Estndares de Laboratorios Clinicos (CLSI) de Estados Unidos de Amrica, utilizando la tcnica de difusin con sensidiscos (Kyrbi-Bauer) en agar de Meller Hinton.Para el anlisis de los datos se elabor una base de datos en el programa Microsoft Excel 2007 y posteriormente se realiz estadstica descriptiva para calcular frecuencias absolutas y relativas.

Planteamiento del problema:


De acuerdo a cifras reportadas por diversos estudios, la incidencia anual de infecciones en vas urinarias es de 0.5 a 0.7 casos por paciente. En Norteamrica, cada ao se enferman ocho millones de personas, representando 100, 000 ingresos hospitalarios. En Mxico, la morbilidad debido a las IVU se encuentra dentro del tercer lugar, solo por debajo de las infecciones respiratorias y diarreicas. En cuanto al ambiente hospitalario, las IVU contribuyen la etiologa de las infecciones nosocomiales y se asocia con las insuficiencia renal crnica. Por esta razn, se hace necesaria la determinacin de la susceptibilidad de los agentes causales de IVU, con la finalidad de conocer el patrn de resistencia/sensibilidad en la poblacin que acude a la Unidad de Servicios Analticos de Salud Bioanlisis (USABS).

Resultados:
Fueron un total de 231(100%) muestras de urocultivos, se obtuvieron 163(70.56%) positivas y 68(29.43%) negativas; los microorganismos que se aislaron con mayor frecuencia fueron los siguientes: Klebsiella

Objetivo General:
Determinar la susceptibilidad de diferentes antibiticos en microorganismos aislados de

95

oxytoca, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Pantoea agglomerans, Pseudomonas sp, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis.

Discusin:
Ms del 95 % de la IVU son causadas por bacilos gram negativos y entre ellos las entero bacterias, de las cuales Escherichia coli es la ms frecuente. En este estudio Escherichia coli es reconocida como el microorganismo que se aisl con mayor frecuencia. El porcentaje de aislamiento de Escherichia coli es similar a los resultados publicados por autores internacionales de estudios sobre prevalencia de microorganismos bacterianos en urocultivos tales como Hooton TM. The current management strategies for communityacquired urinary tract infection.Otras bacterias aisladas en fueron Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Enterobacter agglomerans, Pseudomonas sp. La existencia del incremento de cepas resistentes a la ampicilina convierte a esta droga en una opcin menos eficaz para el tratamiento de la IVU.

para uso emprico y teniendo en cuenta el costo-beneficio podran ser una herramienta til a la hora de tomar una decisin teraputica. La eleccin de un antibitico para el tratamiento de la infeccin de vas urinarias requiere un conocimiento de las bacterias ms frecuentes y su perfil de resistencia bacteriana. La ampicilina debe ser eliminada como opcin teraputica inicial dada la alta tasa de resistencia que presentan los patgenos ms frecuentes.

Referencias Bibliogrficas:
Alfaro F. E. (2005). Pruebas presuntivas del analisis de orina en el diagnstico de infeccion de vias urinarias. [En lnea]. Disponible. http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/106/ 10647508.pdf 07/03/10 Consultado 06/03/10. lvarez B. (n.d). Infecciones urinarias en el hospital universidad del norte. [En lnea]. Marzo 15 2010. Disponible en http://www.scielo.org.co/pdf/sun/v23n1/v2 3n1a03.pdf Consultado 06/03/10. Andreua A. (13-4-2004). Etiologa y sensibilidad a los antimicrobianos de los uropatgenos causantes de la infeccin urinaria baja adquirida en la comunidad. [En lnea]. Disponible: http://external.doyma.es/pdf/28/28v23n01a 13070401pdf001.pdfConsultado 18/05/10 Antn J. (n.d). Infeccin urinaria. [En lnea] Marzo 20 2010. Disponible en http://www.scribd.com/doc/16795848/Infec cion-Urinaria Consultado 20/05/10 Arredondo G. (2008). Infecciones de vas urinarias: Problema de salud en Mxico poco atendido. [En lnea]. Disponible http://www.diariosalud.net/index2.php?opti on=com_content&do_pdf=1&id=9102 Consultado el 04/03/2010 Barriga. A. (2008) Susceptibilidad antimicrobiana in vitro de 1200 microorganismos Gram negativos causales de infecciones de vas urinarias.[en lnea]. Consultada el 5 marzo 2010. Disponible en

Conclusin:
Segn los resultados obtenidos de nuestro estudio, se corrobora de acuerdo con otros estudios, que la mayor frecuencia de infeccin de vas urinarias se da en el sexo femenino. Claramente observamos que el microorganismo responsable de la mayor parte de los casos de IVU es la Escherichia coli, sin embargo encontramos otros no tan frecuentes, como Klebsiella, Proteus y Enterobacter.De acuerdo con los antibiticos utilizados para realizar nuestras pruebas el antibitico que mostro mayor sensibilidad en las bacterias fue amikacina ya que presentaron un alto margen de seguridad

96

http://www.amimc.org.mx/revista/2008/28_ 3/susceptibilidad.pdf Consultado 18/04/10 Benavides. P. L. (11 de abril de 2005). Vigilancia de los niveles de uso de antibiticos y perfiles de resistencia bacteriana en hospitales de tercer nivel de la Ciudad de Mxico.[En lnea]. Disponible: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script= sci_arttext&pid=S003636342005000300005&lng=es&nrm=iso Consultado 23/05/10 Broseta E , Dalet F. (2002). LA INFECCIN URINARIA. [En lnea]. Disponible http://www.seimc.org/documentos/protocol os/microbiologia/cap14.htm Daza R.M. (2005). Resistencia bacteriana a antimicrobianos: su importanciaen la toma de decisiones en la prctica diaria.[En lnea]. Disponible: http://www.msc.es/biblioPublic/publicacion es/docs/bacterias.pdf Consultado 01/05/10 Embic . A. (n.d). Resistencia de las bacterias a los antibiticos. [En lnea]. Marzo 10 2010.Disponible en http://www.amcmh.org/PagAMC/medicina/ articulospdf/53ResistenciaBacterias.pdf Consultado 15/04/10 Erna. C. T. (2002). Condiciones para un buen estudio de susceptibilidad mediante test de difusin en agar. [En lnea]. Disponible: http://www.scielo.cl/pdf/rci/v19s2/art01.pdf Consultado 01/04/10 Generalidades de antibioticos. [En lnea]. Marzo 09 2010. Disponible en http://www.intramed.net/sitios/librovirtual1 /pdf/librovirtual1_50.pdf Consultado 20/05/10 Garca R. J. A., Cantn R. (2000) Mtodos Bsicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos. [En lnea]. Disponible http://www.seimc.org/documentos/protocol os/microbiologia/cap11.htm#B11 Gonzales. C. (ene. 2009, vol.20, no.1, p.1115) Sensibilidad antibitica de bacterias causantes de infecciones del tracto urinario en un hospital general. Enero junio del ao 2008. [En lnea]. Disponible:

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1 018-130X2009000100004&script=sci_arttext Consultado 21/04/10 Govantes. B. J. Manual Normon. 7 edicin. Edit.Normon. Madrid. P.p.67-69, 147, 793 Leons S. E. (2002). Etiologa y resistencias bacterianas de las infecciones urinarias en un centro de salud rural. [En lnea]. Marzo 11 2010. Disponible en http://www.samfyc.es/Revista/PDF/v3n2/06 .pdf Consultado 21/05/10 Kumate Jess, Onofre Muoz. MANUAL DE INFECTOLOGA CLNICA.. Decimosexta edicin, 2001. Mndez Editores Lifschitz, V. B. (2 0 0 5). Susceptibilidad frente a fosfomicina de bacterias uropatgenas resistentes a fluoroquinolonas.En lnea]. Disponible: http://www.unne.edu.ar/Web/cyt/com2005 /3-Medicina/M-019.pdf Consultado 24/05/10 Loris. C. R. Nefrologa/Urologa, Infeccin urinaria [En lnea]. Disponible: http://www.tinitus.com.ar/Download/Bibliot eca/Pediatria/Nefrouroprot14-infeccionorina.pdf. Consultado 11/05/10 Marn. M. (2003). Antibiticos betalactmicos. [En lnea]. Marzo 09 2010. Disponible en.http://external.elsevier.es/espacioformac ion/eimc/eimc_docs/28v21n01a13042137pd f001.pdf Consultado 21/03/10 Martnez. M. R.(2001). LA SALUD DEL NIO Y EL ADOLSCENTE. Mexico. Cuarta edicin. Editorial Manual Moderno. Paginas: 630, 648, 985. Maurlanda A. M, Maribel R. (Vol. 5 No. 1 Enero- Abril, 2000.) Sensibilidad y especificidad del general de orina patolgico como predictor de infeccin urinaria. [En lnea]. Disponible: http://www.bvs.hn/RMP/pdf/2000/pdf/Vol5 -1-2000-5.pdf Consultado 12/05/10 Ochoa C. S. (Junio 2005; Vol.18 N 2): 124135. Etiologa de las infecciones del tracto urinario y sensibilidad de los uropatgenos a los antimicrobianos. [En lnea]. Disponible:

97

http://www.seq.es/seq/02143429/18/2/124.pdf Consultado 12/05/10 Onofre M. J. (2001) MANUAL DE INFECTOLOGA CLNICA. Mexico. Decimosexta edicin. Editorial Mndez Editores. Pginas 59-65.Protocolo de normas de atencin segn niveles, con enfoque de integracin de la atencin. [En lnea]. Marzo 15 2010. Disponible en http://www.hrrio.cl/clinicos/Protocolos/Prot ocolo%2030.%20Pubertad%20Normal.pdfConsultado 21/05/10 Palavecino. E. P. (vol.26 No.3,1997 ). Interpretacion de los estudios de susceptibilidad antimicrobiana. [En lnea] Disponible. http://escuela.med.puc.cl/publ/Boletin/Labo ratorio/Interpretacion.html Consultado 06/03/10. Scope. (2005). INFECCION DE VIAS URINARIAS. [En lnea]. Disponible. http://www.drscope.com/pac/infecto1/c5/in1c5_p7.htm. Consultado 06/03/10 Seija. V.(n.d). Principales grupos de antibiticos. [En lnea]. Marzo 09 2010.

Disponible en http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Bacte CEFA34.pdfConsultado 19/04/10. Su nio y los antibiticos. (n.d). [En lnea]. Marzo 10 2010. Disponible en http://www.quicksetemr.com/AAP/pdffiles/ papers/Antibiotics_S0219.pdfConsultado 06/03/10. Surdas J. C. Laboratorio clnico. 7 edicin. Edit. Ciencias Mdicas. La Habana 2004. P.p 159,377. Torales S. F. (2000). Infeccin de Vas Urinarias [En lnea]. Consultada el 7 marzo 2010. Disponible en http://bvs.insp.mx/articulos/1/13/v2n5.pdf Consultado 06/05/10. Valsencia. M. (n.d). Teraputica anti infecciosa. [En lnea]. Marzo 10 2010. Disponible en http://med.unne.edu.ar/catedras/farmacolo gia/clas4to/16_atb_marco_concp05.pdfCons ultado 14/04/10. Zambrano R. H. Manual para la toma de muestra para anlisis microbiolgico. Bogot 2007. Pg. 12

98