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Extrao com Fluido Supercrtico


Glaucia M. F. Pinto Jefferson F. Pinto
Protimu Ltda Pontifcia Universidade Catlica de Campinas, Faculdade de Qumica

Isabel C. S. F. Jardim *
icsfj@iqm.unicamp.br

Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica

Informaes do Artigo

Resumo Neste trabalho apresentou-se uma discusso das caractersticas da extrao com fluido supercrtico, suas condies de operao, uma comparao com outras tcnicas de extrao e aplicaes analticas da tcnica. O trabalho mostra que um fluido supercrtico pode ser obtido com diferentes substncias se as mesmas se encontrarem acima do ponto crtico, da temperatura crtica e presso crtica, o que pode ser visualizado em um diagrama de fases. Dentre os fluidos supercrticos mais utilizados destaca-se o dixido de carbono devido a seus baixos parmetros crticos, no toxicidade, no inflamabilidade, no reatividade, possibilidade de obteno com alto grau de pureza, grande acessibilidade, baixo custo e ser gasoso em temperatura ambiente, sendo que este ainda pode ser modificado pela adio de solventes orgnicos. A operao da extrao com fluido supercrtico permite o acoplamento on-line e a recuperao do solvente utilizado. Os parmetros que governam a SFE so discutidos, principalmente presso, temperatura, natureza da matriz e polaridade do fluido extrator. Alguns aspectos de comparao mostram que a extrao com fluido supercrtico uma tcnica atrativa para ser aplicada no preparo de amostras slidas, pois apresenta vantagens em relao s outras alternativas de tcnicas de preparo de amostra (soxhlet, ultra-som, extrao por solvente acelerado, entre outras), devido as caractersticas de rapidez; baixo custo por extrao; reduzido consumo de solventes orgnicos; baixa manipulao; boa preciso e exatido; versatilidade; boa recuperao e facilidade de automao. O trabalho ainda apresenta algumas aplicaes da SFE, que hoje so muito numerosas e variadas, incluindo amostras ambientais (solo, gua, ar, sedimentos, suspenses e tecidos animais), alimentos (frutas, vegetais, cereais, tecidos animais...), produtos naturais (leos essncias, aromas...), frmacos (drogas de abuso, hormnios...) e polmeros.
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Histrico do Artigo
Criado em Abril de 2006

Palavras-Chaves
Extrao Fluido supercrtico Qumica Analtica Fluido extrator Cromatografia

* Autor para contato

 Objetivo

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Descrever a tcnica de preparo de amostra de extrao com fluido supercrtico, seus parmetros e esquema de operao bsico, correlacionando com outras tcnicas de preparo de amostras e apresentando alguns exemplos de aplicaes tpicas em qumica analtica.

Introduo A extrao com fluido supercrtico (SFE - Supercritical Fluid Extraction) uma tcnica de extrao utilizada principalmente quando se deseja retirar substncias de interesse (analitos) de matrizes slidas. Ela emprega um fluido em condies supercrticas, que apresenta propriedades intermedirias entre um gs e um lquido. O crescimento desta tcnica est relacionado com a preocupao da comunidade cientfica com a sade e o bem estar do ser humano, gerando a necessidade de analisar matrizes cada vez mais complexas (como guas naturais, solos, sedimentos e ar, alm de amostras de alimentos, plantas, frutas, plsticos, etc.), com baixos nveis de concentrao (traos e sub-traos).

Figura 1. Diagrama de fases mostrando a regio do fluido supercrtico para o dixido de carbono [1,2-4].

de um lquido (e portanto um poder de solvatao) e simultaneamente uma compressibilidade parecida com a de um gs. O grande poder de solvatao ocasiona uma alta permeao do fluido na amostra, aumentando a probabilidade de uma extrao completa [2,6]. Na Tabela 1 apresentam-se as propriedades fsicas do SF e observa-se, comparando com as propriedades de lquidos e gases, que o SF apresenta alta densidade, baixa viscosidade e difusibilidade superior da fase lquida (o que explica a grande e atrativa taxa de transferncia de massas do SF) [1,2,4].
Tabela 1. Ordens de magnitude de parmetros fsicos para gases, fluidos supercrticos e lquidos (adaptada da Ref. 1).

Objeto

Densidade / g mL-1

O fluido supercrtico O primeiro relato da observao de uma fase supercrtica ocorreu em 1822, feito pelo Baro Cagniard de la Tour. Ele notou, visualmente, que a separao de fases entre um gs e um lquido desaparecia quando certas substncias eram aquecidas em recipientes fechados [1]. Um fluido supercrtico (SF-Supercritical Fluid) definido como sendo formado acima do ponto crtico, da temperatura crtica (Tc) e presso crtica (Pc), o que pode ser visualizado em um diagrama de fases, apresentado na Figura 1. Quando somente um valor crtico atingido (temperatura ou presso) o fluido considerado em estado subcrtico [5]. Acima do ponto crtico, algumas propriedades da substncia, como densidade e viscosidade, so intermedirias entre um gs e um lquido. O fluido adquire uma densidade similar
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Gs (ambiente)

0,0006 - 0,002 0,0001 - 0,003

Viscosidade dinmica/ g cm-1 s-1

Coeficiente de difuso / cm 2/s-1 0,1 - 0,4

Fluido 0,2 - 0,5 supercrtico (Tc, Pc) Lquido (ambiente) 0,6 - 1,6

0,0001 - 0,0003 0,0007 0,002 - 0,03 0,000002 - 0,00002

Uma das propriedades mais importantes de um fluido supercrtico, que est relacionada sua alta densidade (0,2 a 0,5 g mL-1), a sua capacidade de dissolver molculas no-volteis de alta massa molar. Por exemplo, o dixido de carbono supercrtico dissolve n-alcanos com 5 a 30 tomos de carbono [2]. Alm disso, a alta difusibilidade do fluido supercrtico garante extraes rpidas. Outra importante caracterstica do SF que sua densidade pode ser precisamente ajustada, variando os valores de temperatura e presso (situao compreendida pela observao do grfico da Figura 2), enquanto a densidade de um lquido s alterada pela adio de outros solventes ou com uma grande elevao da temperatura. Esta caracterstica de densidade varivel responsvel

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Existem SF que podem ser considerados opes em substituio ao dixido de carbono, mas todos apresentam desvantagens que inibem o seu uso: os clorofluorcarbonos so inimigos ambientais, pois destroem a camada de oznio e causam o efeito estufa, o xido nitroso pode ser explosivo na presena de matria orgnica e tende a se decompor espontaneamente, o xennio apresenta custo muito elevado, a amnia tem alta reatividade, entre outros [1,5]. O dixido de carbono s no pode ser considerado um SF perfeito porque, devido a sua alta densidade, apresenta uma capacidade limitada de dissolver molculas polares. Esta desvantagem geralmente contornada pela adio de modificadores, tambm chamados de co-solventes ou entrainers. Os modificadores podem ser solventes orgnicos, reagentes derivatizantes ou reagentes de parinico. Eles so adicionados continuamente no fluxo de SF (acarretando na necessidade do uso de uma segunda bomba) ou diretamente na amostra. Neste caso, as vantagens so o favorecimento da dessoro do analito e a diminuio do volume de solvente, mas a desvantagem a necessidade de um perodo esttico adicional [1,5,8]. A funo dos modificadores facilitar a solubilidade e a dessoro do analito do stio ativo da matriz. Porm, os co-solventes devem ser adicionados em baixa concentrao (a concentrao mais usada de no mximo 10% v/v), pois uma adio excessiva pode ocasionar efeitos indesejveis, uma vez que os parmetros crticos do SF so alterados para condies mais drsticas, podendo levar a condies subcrticas, na qual a seletividade reduzida, pode-se necessitar de uma etapa de clean-up prvia anlise e a eficincia da coleta do soluto extrado corre o risco de ser prejudicada [1]. A incorporao do modificador altera muito o poder de solvatao do SF e o efeito na transferncia de massa tambm modificado, especialmente se o modificador interagir com o soluto [1]. Os modificadores mais utilizados so os solventes orgnicos e dentre eles o mais empregado o metanol, mas a acetona, o clorofrmio, o diclorometano e a acetonitrila tambm tm sido bastante usados [8]. A gua, apesar de muitas vezes ser considerada prejudicial no mecanismo de extrao, tm sido utilizada em alguns trabalhos como modificadora [9,10], pois verificou-se que ela ocasiona um inchao da matriz, o que favorece a extrao em certos casos. O uso de gua supercrtica apresenta desvantagens, pois as condies de temperatura e presso necessrias so elevadas e nestas condies, se uma desgaseificao muito eficiente no for realizada, a gua torna-se muito corrosiva para o sistema de ao inoxidvel.

pela grande seletividade dos SF, o que representa uma vantagem, principalmente para matrizes complexas de origem ambiental [1,3,4].

Figura 2. Grfico mostrando a correlao entre densidade, presso e temperatura, SCF = regio do fluido supercrtico, NCF = regio prxima ao lquido crtico = regio subcrtica, CP = ponto crtico (adaptada da Ref. 1).

Os fluidos supercrticos mais utilizados Sem dvida, o fluido supercrtico mais utilizado o dixido de carbono devido a seus baixos parmetros crticos (Tabela 2), no toxicidade, no inflamabilidade, no reatividade, possibilidade de obteno com alto grau de pureza, grande acessibilidade, baixo custo e ser gasoso em temperatura ambiente (o que facilita a separao do analito extrado) [1,3,4,7].
Tabela 2. Temperatura, presso e densidade (dc) crticas para alguns solventes [1].

Solvente Xennio

Tcrtica /C Pcrtica /MPa dcrtica / g mL-1 16,6 25,9 31,0 5,76 4,69 7,29 7,17 1,10 0,52 0,47 0,74 ----

Trifluorometano

Clorotrifluorometano 29,0 Dixido de Carbono xido Nitroso Hexafluoreto de Enxofre Propano Amnia gua

3,87

0,58 0,45

36,5 45,5

3,71 4,85

Clorodifluorometano

96,4

96,8

Triclorofluorometano

132,4 198,0 374,0

4,24 4,35

11,13 21,77

0,22 ----

0,24 0,30

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A operao de extrao inicia-se com o bombeamento do solvente para a clula extratora que contem a amostra. O gs ento pressurizado e aquecido at chegar s condies desejadas. Na clula extratora, ocorre o contato entre a amostra e o fluido supercrtico, que pode ser de maneira dinmica, na qual o SF continuamente passado atravs da matriz ou esttica, na qual se emprega uma quantidade fixa de SF que permanece um perodo de tempo em contato com a matriz, acontecendo a extrao. Aps esta etapa, o extrato obtido levado at um restritor (fixo ou varivel), no qual h um controle de temperatura e presso. O extrato separado do fluido, que retorna ao seu estado fsico original (devido despressurizao), recolhido em um sistema de coleta utilizando geralmente um solvente, um sistema criognico, uma reteno em fase slida adequada ou ainda acoplamento on-line com um sistema de anlise ou deteco. O solvente extrator normalmente recolhido e reciclado.

Uma alternativa recente e interessante ao uso de dixido de carbono modificado, empregada na extrao de compostos polares, o uso de gua subcrtica, isto , gua aquecida sob condies moderadas e constantes de presso. Nestas condies, a presso apresenta menor efeito, pois as mudanas de densidade so menores. temperatura elevada (~200 C) e presso de aproximadamente 5 MPa, a polaridade da gua torna-se similar do metanol ou da acetonitrila e a tenso superficial e a viscosidade tambm so reduzidas para valores prximos as do metanol e da acetonitrila [11,12]. Field et al. [13] utilizaram a SFE com dixido de carbono e extrao com gua subcrtica, seqencialmente, para determinar Dacthal e seus metablitos cidos (mono e dicarboxlicos) em solo. A recuperao dos metablitos cidos utilizando SFE com dixido de carbono com metanol e acetonitrila foi menor que 50%, mas com gua subcrtica foi maior que 90%. Crescenzi et al. [14] analisaram multirresduos de herbicidas em solo utilizando gua subcrtica, obtendo resultados superiores aos obtidos com extrao Soxhlet e a extrao por ultrassonificao (USE - Ultra Soniffication Extraction).

Parmetros da SFE Os parmetros que governam a SFE so principalmente: presso, temperatura, natureza da matriz e polaridade do fluido extrator [5,7].

Operao da SFE O processo de SFE pode ser dividido em quatro estgios principais: dessoro do analito da matriz, solubilizao do analito pelo fluido supercrtico, arraste do analito para fora da clula de extrao e coleta do analito extrado [7,15]. A Figura 3 mostra um esquema de um sistema bsico de SFE.

Presso
Existe uma presso, conhecida como threshold pressure, na qual o soluto comea a se solubilizar no fluido supercrtico. Esta zona de solubilidade aumenta muito rapidamente com a presso, que corresponde ao aumento rpido na densidade do fluido, at atingir um valor mximo. Aps o valor mximo ocorre ligeira queda de solubilidade com o aumento da presso, o que pode ser explicado pelas foras de repulso entre as molculas do soluto dissolvidas no fluido supercrtico. O controle da presso permite realizar uma extrao seletiva. A ttulo de exemplo, pode-se realizar a extrao seletiva de alcanos a uma temperatura de 45 C e uma presso de 7,5 MPa, em relao aos hidrocarbonetos poliaromticos (PAH), extrados a uma temperatura de 45 C e uma presso de 30 MPa [5,7,17].

Figura 3. Esquema de operao de uma extrao com fluido supercrtico, incluindo a etapa de concentrao (opcional) e a etapa de anlise qumica [16].
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Temperatura
Um aumento da temperatura, presso constante, ocasiona

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baixa solubilidade da gua no fluido supercrtico. Devido a isso, se o fluido supercrtico utilizado na extrao for o dixido de carbono provavelmente ocorrer a formao de pequenas partculas de gelo [5,8]. Para evitar a presena indesejvel da gua, um procedimento comumente adotado a adio de agentes secantes, como o Hydromatrix (uma terra de diatomcea peletizada), o sulfato de magnsio, o sulfato de sdio, o celite ou a celulose CF-1. As desvantagens dos sulfatos de sdio e magnsio so as baixas capacidades relativas de reteno de gua e, alm disso, o sulfato de magnsio aquece quando hidrata. Os sulfatos podem ainda obstruir o restritor devido a suas partculas pequenas e formar aglomerados quando misturados com a gua. De fato, o Hydromatrix parece ser o agente secante mais eficiente, apresentando, como principal vantagem, o fato de reter at duas vezes sua massa em gua. Um ponto a ser considerado, que os agentes secantes Hydromatrix, celite e celulose CF-1 mostraram reteno parcial de alguns pesticidas [5].

uma diminuio na densidade do fluido supercrtico e portanto no seu poder de solvatao. Logo, os compostos no volteis tero sua solubilidade diminuda nestas condies e em conseqncia, o rendimento da extrao ser diminudo. O comportamento dos compostos volteis mais complexo, pois a solubilidade deles no fluido supercrtico depende do poder de solvatao do fluido e das tenses do vapor [7]. Nas matrizes naturais, nas quais a grande maioria dos solutos encontra-se fixo nos stios ativos da matriz, uma elevao da temperatura resulta em um aumento do rendimento de extrao, independente da volatilidade do soluto. Isto ocorre pois h um aumento na energia trmica, que facilita a dessoro dos solutos fixos nos stios ativos da matriz [7,17]. O ponto de fuso dos solutos de interesse tambm um fator importante, uma vez que muitos solutos dissolvemse mais facilmente no fluido supercrtico se estiverem no estado lquido [17]. Deve-se lembrar que a elevao da temperatura prejudicial no caso de molculas orgnicas termolbeis.

Polaridade do fluido extrator


Como previamente mencionado, a presena de um modificador altera a polaridade do SF. Os mecanismos de interao do modificador no so bem explicados, mas existem quatro modos de ao propostos [5]: ocorre um aumento da solubilidade dos solutos devido mistura do SF com o solvente polar; ocorre uma troca dos solutos fixos nos stios ativos da superfcie da matriz pelo solvente modificador; h uma fixao do solvente modificador na superfcie da matriz evitando que ocorra uma readsoro dos solutos; ocorre uma solvatao adicional da matriz (inchao) facilitando a penetrao do SF.

Natureza da matriz
O rendimento da extrao depende fortemente das caractersticas da matriz, principalmente natureza dos stios ativos, superfcie especfica, porosidade, polaridade e umidade [7]. Em anlises ambientais utilizando SFE, a matriz mais comum estudada o solo, o qual por si j constitui uma cincia especfica [17]. Para aumentar a superfcie de contato entre a matriz e o SF, intensificando a transferncia de soluto para o SF, as partculas do solo devem ser as menores possveis. Amostras de solo com alto teor de enxofre elementar devem sofrer a adio de cobre particulado, pois a formao de sulfeto de cobre inibe possveis interferncias, uma vez que o enxofre pode ser extrado durante a SFE e causar obstrues no restritor [9]. A presena de gua na amostra um assunto delicado. Como regra geral, quantidades ao redor de 5% podem favorecer o rendimento da extrao devido ao efeito de inchao da amostra, facilitando a difuso do fluido supercrtico e aumentando a polaridade do fluido, funcionando como um modificador. Um excesso de gua, por outro lado, vai ocasionar uma diminuio no rendimento da extrao, principalmente devido formao de plugging no restritor, ocasionado pela
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Provavelmente, em amostras de solo contaminadas naturalmente, matrizes vegetais e biolgicas, os trs primeiros modos de ao ocorram simultaneamente [7].

SFE e Outras Tcnicas de Extrao Nas ltimas dcadas, a preocupao com o desenvolvimento de tcnicas analticas mais modernas foi bastante intensa, fazendo com que hoje a etapa de anlise apresente alto

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elevada (50-200 C) e, conseqentemente, presso alta (3,5-21 MPa), para manter o solvente no estado lquido. Esta tcnica permite obter extraes quantitativas em aproximadamente 15 min. [18]. O inconveniente principal da USE, MAE e ASE que estas tcnicas, inevitavelmente, co-extraem compostos indesejveis da matriz, resultando na necessidade de incluir uma etapa de clean-up [18]. Assim, a SFE apresenta uma vantagem importante sobre as demais tcnicas citadas, pois alm de ser rpida e utilizar baixo volume de solventes, possui uma alta seletividade, excluindo a necessidade de eliminao de interferentes, previamente anlise [18]. O tempo de preparo de uma amostra utilizando SFE pode variar entre 15 min a 2 h, enquanto que utilizando extrao Soxhlet este tempo oscila entre 16 e 30 h. O volume de solvente orgnico gasto em uma SFE , em mdia, de 15 mL (se o trapeamento for realizado com solvente), j utilizando a extrao Soxhlet o volume mdio de solvente gasto de 150 mL. Calcula-se que o custo de extrao por amostra, utilizando SFE seja ao redor de US$ 5.50 versus US$ 22.00 para o mtodo convencional [16]. Estes e outros fatores tm despertado a ateno dos pesquisadores para a SFE e muito se tem investido no desenvolvimento e investigao de novas e variadas aplicaes para esta tcnica de extrao, principalmente na rea ambiental, devido complexidade das matrizes envolvidas (que requerem um mtodo eficiente de extrao) e pelo fato de que, nos dias atuais, o interesse global nesta rea supera qualquer outra. Outros fatores que impulsionaram o desenvolvimento e o aumento da utilizao da SFE em escala analtica foram: a) o investimento e a disponibilizao de equipamentos comerciais, sendo atualmente sete os fabricantes de equipamentos, com a ISCO liderando o mercado [11,12] e b) o surgimento de um mtodo oficial da Agncia de Proteo Ambiental Norte-Americana (EPA Environmental Protection Agency), em 1992 (Mtodo 3560 para determinao de hidrocarbonetos de petrleo em solos). Hoje existem mais dois mtodos oficiais da EPA que utilizam SFE: Mtodo 3561, para anlise de hidrocarbonetos aromticos polinucleares (PAH) e mtodo 3562, para anlise de bifenis polinucleares (PCB) e pesticidas organoclorados (OCP) em solos, sedimentos, aerossis e outros materiais slidos. Dentre as principais desvantagens da SFE devem-se citar:

grau de tecnologia, rapidez, preciso e exatido. O mesmo no ocorreu com a etapa de preparo da amostra. Assim, mais recentemente, percebeu-se que esta etapa representa uma parcela excessiva do tempo (61%) [1] e do custo total da anlise, e tambm a maior responsvel pelo erro associado ao resultado final. Esta realidade ocasionou uma grande preocupao com o desenvolvimento das tcnicas de extrao de analitos de matrizes complexas, pois sem elas a determinao no possvel. Buscando principalmente, as seguintes caractersticas: Rapidez; Baixo custo por extrao; Reduzido consumo de solventes orgnicos; Baixa manipulao; Boa preciso e exatido; Versatilidade; Boa recuperao; Facilidade de automao.

Tm-se desenvolvido tcnicas de extrao alternativas para as tradicionalmente utilizadas (que no possuem tais caractersticas): extrao lquido-lquido (LLE - LiquidLiquid Extraction), utilizada para amostras lquidas e extrao por solvente (Soxhlet), utilizada para amostras slidas. A extrao em fase slida (SPE - Solid Phase Extraction) e a microextrao em fase slida (SPME - Micro Solid Phase Extraction), tm substitudo, com sucesso, a maioria das aplicaes da LLE. Como alternativa extrao Soxhlet surgiram a extrao assistida por microondas (MAE - Microwave Assisted Extraction), a extrao com fluido supercrtico (SFE), a extrao por ultrassonificao (USE - Ultra Soniffication Extraction) e a extrao por solvente acelerado (ASE - Accelerate Solvent Extraction), sendo que a SFE e a ASE so as que tm se mostrado mais atrativas para substituir a extrao Soxhlet. MAE e USE so tcnicas baseadas na utilizao de uma quantidade reduzida de solvente, escolhido de acordo com a natureza do analito de interesse, no qual o processo de extrao acelerado pelo uso de um tipo de energia, microondas e ultra-som, respectivamente. Os resultados de extrao obtidos so geralmente equivalentes aos da extrao Soxhlet, mas o tempo gasto no ultrapassa 30 min, na maioria dos casos [18]. A ASE a tcnica mais recente e utiliza temperatura
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 [12,19].

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vivel. Algumas aplicaes mais recentes e relevantes foram selecionadas, com grande destaque para as aplicaes na rea ambiental:

Alto custo instrumental (de US$ 10 a 80 mil); Grande nmero de parmetros para otimizar e controlar; Laborioso desenvolvimento de mtodo; Condies de extrao fortemente dependentes da matriz.

Amostras ambientais
a) Matrizes slidas (solo e sedimentos) Solo e sedimentos apresentam grande interesse ambiental, pois sabe-se que eles esto interligados com os demais compartimentos do ecossistema, existindo processos de transporte de contaminantes dos solos (ou sedimentos) para a gua e o ar, influenciando, portanto, na contaminao do meio ambiente como um todo. Sem dvida, o solo a matriz ambiental na qual o uso da SFE apresenta maior potencialidade e viabilidade. Isto porque, fora alguns cuidados prvios com a amostra (controle da umidade, tamanho de partculas e adio de cobre para eliminao de enxofre) nenhuma condio especial de anlise necessria. A amostra slida adicionada diretamente na clula extratora. Alm disso, os conceitos envolvidos so relativamente simples e bem estabelecidos. Na maioria dos casos, o dixido de carbono um fluido supercrtico bastante adequado, sendo que a necessidade de adio de um modificador depende do analito. Os analitos mais extrados em amostras deste tipo so: PAH, PCB e pesticidas. Morselli et al. [20] determinaram hidrocarbonetos de petrleo em solos utilizando SFE. Foram utilizadas amostras de solo fortificadas para as determinaes. As extraes foram realizadas em um equipamento Hewlett-Packard modelo 7650T, utilizando dixido de carbono e extrao dinmica e esttica. Foram adicionados 5 ou 10% (v/v) de acetona, como modificador, diretamente na clula de extrao. As extraes foram realizadas a uma temperatura de 80 C e uma presso de 22,7 MPa, sendo a coleta feita em fase estacionria octadecilsiloxano (C18). A soro dos hidrocarbonetos foi avaliada utilizando a equao de Freundlich e verificou-se que ela depende fortemente do contedo de matria orgnica dos solos. Avaliou-se que as recuperaes do analito

Um dos fatores importantes para decidir se as vantagens da SFE compensam as desvantagens o nmero de anlises que o laboratrio interessado na tcnica realiza.

Aplicaes da SFE em Qumica Analtica Apesar das aplicaes da SFE na rea analtica serem relativamente recentes, meados da dcada de 80, esta tcnica de extrao tem sido utilizada h muito tempo em aplicaes industriais. Os primeiros a utilizarem o poder de solvatao do SF foram Hannay e Hogarth em 1879 [1], estudando a solubilidade do cloreto de cobalto (II), cloreto de ferro (II), brometo de potssio e iodeto de potssio em etanol supercrtico [1]. Aps isto, os estudos com SF foram intensificados surgindo vrias patentes para extrao de diversos produtos naturais, como extrao de cafena do caf, extrao da nicotina do tabaco, obteno de aromatizantes de diversas especiarias, alm de aplicaes que incluem extrao de leos vegetais, preparao de alimentos dietticos (eliminao de gorduras), purificao de compostos e etc. Sem dvida, a aplicao industrial de maior destaque a obteno do caf descafeinado, que antes da utilizao da SFE era obtido por extrao com solventes orgnicos txicos. Hoje, as aplicaes da SFE so muito numerosas e variadas, incluindo amostras ambientais (solo, gua, ar, sedimentos, suspenses e tecidos animais), alimentos (frutas, vegetais, cereais, tecidos animais...), produtos naturais (leos essncias, aromas...), frmacos (drogas de abuso, hormnios...) e polmeros. Muitas pesquisas tentam mostrar as potencialidades do uso de SFE. Tais pesquisas deixam claro que, apesar da potencialidade, isto , da SFE poder ser aplicada uma ampla variedade de matrizes, para determinao de diversos analitos, muitas vezes as condies especficas que devem ser usadas para tornar a extrao possvel ou eficiente, no compensam as vantagens apresentadas, e portanto, apesar de potencial, o uso da SFE deixa de ser
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dependem da soma do equilbrio entre as extraes dinmicas e estticas. Verificou-se que a presena de 5% (v/v) de acetona como modificador foi a condio que forneceu os melhores resultados. Berset e Holzer [10] desenvolveram um mtodo para extrao, utilizando SFE, e quantificao, utilizando cromatografia gasosa de alta resoluo acoplada espectrometria de massas, de alguns dos principais contaminantes ambientais: os PAH, os PCB e os OCP. A matriz analisada era constituda por uma suspenso de esgoto domstico, industrial e esgoto obtido aps o escoamento superficial de gua. Foi adicionado cobre s amostras secas, para um tratamento prvio, e as SFE foram realizadas utilizando um equipamento Hewlett-Packard 7680T, sendo as condies de extrao diferenciadas para cada tipo de contaminante. As extraes de PAH foram realizadas em trs etapas com extraes dinmicas e estticas. A primeira utilizou dixido de carbono, temperatura de 80 C, presso de 12,1 MPa e coleta em fase slida (C18). Na segunda o SF foi dixido de carbono com 1% (v/v) de metanol e 4% (v/v) de diclorometano, temperatura de 120 C, presso de 33,5 MPa. A terceira etapa tambm foi realizada com dixido de carbono puro como SF nas mesmas condies de temperatura e presso da segunda etapa. A primeira etapa de extrao dos PAH visou a extrao dos PAH mais volteis, a segunda etapa extraiu os PAH menos volteis e a terceira etapa foi usada para purgar o sistema e prepar-lo para a prxima extrao. Antes do experimento, houve a adio de 20% (v/m) de gua para ocupar os stios polares da matriz e facilitar a extrao. As extraes de PCB foram realizadas empregando extrao dinmica e esttica, com dixido de carbono puro, temperatura de 80 C e presso de 30,5 MPa. A coleta do extrato foi feita em Florisil. Para os OCP, as extraes foram realizadas dinmica e estaticamente, utilizando dixido de carbono puro como SF, temperatura de 50 C, presso de 29,9 MPa e coleta em C18. Os extratos sofreram uma etapa de clean-up utilizando colunas de slica gel (PAH e PCB) e coluna de terra de diatomceas (OCP). As recuperaes obtidas foram boas, com valores muito prximos a 100% na grande maioria dos casos. Os nveis de concentrao encontrados foram, em mdia, de 6,9 mg/kg (massa seca) para a soma de 16 PAH constantes na lista da EPA; 0,1 mg/kg (massa seca) para a soma de sete PCB estudados, e 0,0020,072 mg/kg (massa seca) para os OCP determinados no esgoto. S foi encontrada correlao entre tipo de esgoto e grau de contaminao para os PAH. Rissato et al. [21] desenvolveram um mtodo multiressduo para determinao de pesticidas organoclorados, organonitrogenados, organofosforados e pireterides em solo usando a SFE e compararam o rendimento obtido com o de extrao slido-lquido convencional. A determinao dos pesticidas foi feita por cromatografia gasosa com detector de captura de eltrons (GC-ECD) e por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (GC-MS), precedida de uma etapa de cleanup utilizao cartuchos C18. Alguns parmetros experimentais relevantes para a eficincia de extrao foram estudados, presso de 40 MPa, temperatura de extrao de 60 C e tempo de 20 min. Como a soro de pesticidas pode ser afetada pelo tempo de residncia no solo, amostras de solo fortificadas foram extradas aps perodos diferentes de repouso (1, 20 e 40 dias). Uma amostra de solo real, coletada em um campo agrcola em Bauru (SP-Brasil), tambm foi analisada empregando as condies experimentais j otimizadas para SFE e extrao slido-lquido. Os resultados obtidos mostraram que a SFE pode ser utilizada para extrair uma grande quantidade de pesticidas de diferentes classes de amostras de solo com menor tempo de extrao e uso reduzido de solventes, obtendo-se valores de recuperao acima de 80%. b) Matrizes lquidas (gua) A gua o recurso natural de maior importncia para os seres vivos, uma vez que um homem (por exemplo) pode passar vrios dias sem comer, mas no pode passar 2 dias sem beber gua. Alm disso, o homem tem cada vez mais conscincia de que a gua um recurso finito e ento, vem crescendo a preocupao com relao s contaminaes deste recurso. Esta matriz talvez a que apresente maiores dificuldades nas tentativas de utilizao da SFE. O parmetro decisivo na extrao de amostras de

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gua (ou lquidas genericamente) o coeficiente de distribuio do analito entre o SF e a fase lquida. Do ponto de vista do transporte do analito, a extrao dinmica preferida em relao esttica devido a problemas de possveis precipitaes do analito durante o processo de decrscimo de presso. Poucos trabalhos [22-25] tm sido realizados com SFE diretamente em matrizes aquosas, apesar de existirem clulas extratoras prprias para este uso [7]. Este tipo de extrao tem maiores possibilidades quando o analito apresenta solubilidade reduzida em gua ou voltil [26]. A SFE pode ser aplicada diretamente s matrizes aquosas de duas maneiras: a) colocando a amostra diretamente na clula de extrao especial ou b) adicionando a amostra a um suporte slido (o mais usado Celite), que colocado na clula de extrao. A segunda maneira apresenta a vantagem de se utilizar o mesmo equipamento usado para amostras slidas e a desvantagem de permitir a extrao de um volume reduzido de amostra [26]. A alternativa freqentemente utilizada, em substituio a SFE direta, para extrao de matrizes lquidas, o uso da SPE previamente SFE. Primeiramente, a amostra aquosa submetida SPE, utilizando como sorvente disco de extrao com grupos octadecil (C18) ou outro, e posteriormente a fase slida, contendo os solutos de interesse, levada para a SFE [26]. Isto, pode acarretar perdas de reprodutibilidade, aumento do erro da anlise e diminuio da recuperao, pois ocorre o acoplamento e a soma de duas tcnicas de extrao, cada qual com suas desvantagens. Alm disso, a extrao dos analitos retidos em fase slida utilizando eluio com solvente mais simples e rpida que a eluio usando SFE, o que envolveria, ainda, o desenvolvimento de um novo mtodo. A vantagem do uso do SF para extrair os analitos da fase slida, estaria centralizada, principalmente, em aplicaes envolvendo o uso on-line de cromatografia gasosa (GC) pois, como a maioria dos SF um gs em temperatura ambiente, isto facilitaria o acoplamento. Porm, a SFE com matrizes aquosas direta apresenta a desvantagem de necessitar de extraes contnuas (em recirculao) para melhorar as recuperaes, que mesmo assim so menores que as obtidas com SPE/SFE. Desta forma, a SFE direta torna-se mais demorada. Os contaminantes mais estudados em gua so os PAH, fenis e pesticidas. Messer e Taylor [27] estudaram a recuperao de traos de 39 analitos semi-volteis de amostras de gua fortificadas. Neste estudo foi utilizado 1 litro de amostra, que primeiramente foi passado por um disco de extrao, Empore C18, sendo posteriormente extrado em sistema de SFE. Foi realizada uma SFE com dixido de carbono puro e outra com dixido de carbono modificado com acetona (melhor condio para os compostos mais polares). Em ambos os casos, a coleta do analito foi feita em cartucho C18, sendo eludo posteriormente com diclorometano. A anlise dos extratos foi feita por cromatografia gasosa acoplada ao espectrmetro de massas (GC/MS). As recuperaes obtidas variaram entre 35-158%, com estimativa do desvio padro relativo entre 3,3-15%. Sandra et al. [28] analisaram amostras de suco de fruta fortificadas com pesticidas, utilizando SFE e GC/MS. Os autores verificaram que a adio de uma fase slida na clula de extrao foi essencial, e para este propsito foi usada a fase Chromsorb W, formando um sandwich com a amostra lquida. Aps as extraes a coleta foi feita em cartucho C18 e as recuperaes obtidas ficaram entre 85-103%. Kane et al. [29] compararam os resultados obtidos, para extrao de surfactantes no-inicos utilizando a SFE direta de amostras aquosas e o uso de SPE previamente SFE. O mtodo de SFE direta utilizou uma clula de extrao modificada para maximizar a exposio do analito e a extrao foi realizada continuamente at atingir 2 h. As recuperaes obtidas com SFE direta no excederam 60%, com um tempo de extrao de 2 h, enquanto que com o uso de SPE/SFE as recuperaes foram de aproximadamente 90% e o tempo de extrao foi de 30 min. c) Matrizes gasosas (ar) Muitos compostos orgnicos volteis podem ser encontrados no ar (atmosfrico, de ambiente fechado ou aberto), principalmente sorvidos em material particulado, poeira ou aerossis, apontando possveis contaminaes ambientais. Como se trata de materiais que estariam entrando diretamente em nossas vias respiratrias, sua anlise de grande interesse. Vrios processos antropognicos e biognicos contribuem para a presena de compostos orgnicos na fase particulada da troposfera, entre eles: a emisso

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de veculos movidos gasolina e diesel, a queima de madeira, a abraso de superfcies de folhas de plantas, o cozimento de alimentos, o uso de equipamentos movidos a gs natural, a fumaa de cigarros, etc.. Cada uma destas fontes emite uma mistura complexa de compostos orgnicos e como conseqncia, os aerossis ambientais contm mais de cem compostos. Algumas das classes de compostos geralmente encontradas so: os alcanos, os cidos carboxlicos, os PAH, os monoterpenes, os furanos, os fenis, os benzenos alquilados e at os pesticidas [30]. Para anlise desta matriz, com interesse nos contaminantes orgnicos volteis livres ou sorvidos no material particulado, a primeira etapa a passagem do ar por um filtro para reteno dos analitos e este filtro submetido extrao ou o material slido nele retido. Este procedimento inerente matriz e portanto no constitui um fator complicante na SFE, que ainda apresenta a vantagem de que, na maioria dos casos, a mesma clula utilizada para coleta da amostra tambm usada na extrao desta, diminuindo a manipulao e portanto os erros. Swami et al. [31] retiveram os termicidas, clordane e clorpirifos, provenientes do ar ambiente, em Florisil e os submeteram a SFE com dixido de carbono como SF, em temperatura de 80 C e presso de 37,9 MPa. O material extrado foi coletado em cartucho de fase slida (Bondasil C18) e eludo com hexano (uma poro de 1,3 mL e outra de 1 mL). A tcnica de anlise utilizada foi GC com detector de captura de eltrons. As eficincias de reteno dos analitos em Florisil e as eficincias de extrao foram, em mdia, de 85%. Utilizando 20 m3 de ar eles obtiveram limites de deteco de 0,1 ng/m3 para clordane e 1 ng/m3 para clorpirifos. Para avaliar a qualidade dos resultados obtidos com a SFE muitos autores aconselham a comparao com resultados obtidos com outras tcnicas empregadas com a mesma finalidade. Liompart et al. [32] apresentaram uma comparao entre as principais tcnicas que vm substituindo a tradicional extrao Soxhlet: a SFE, a USE e a MAE. As trs tcnicas foram utilizadas para extrao de compostos fenlicos (fenol, o-cresol, m-cresol e p-cresol) em solos, tendo os resultados de recuperao e preciso comparados. A Tabela 3 apresenta os principais parmetros de extrao de cada tcnica. A SFE foi realizada com dixido de carbono e o modificador, metanol, foi adicionado diretamente na amostra. Para a coleta do extrato utilizou cartucho de fase slida C18, com posterior eluio com hexano. Foram testadas extraes com SF e microondas com a amostra derivatizada com piridina.
Tabela 3. Parmetros utilizados na extrao de fenis em solo por SFE, MAE e USE.

Parmetro

Temperatura de 45 extrao (C) Volume de solvente (mL)

SFE

MAE 130

USE

Ambiente 30 (diclorometano) 0,58

0,1 (metanol) 2 (hexano) 2 (hexano, eluio) 29,0 8 (acetona) 3,87

Tempo total de extrao (min)

A SFE foi realizada com dixido de carbono e o modificador, metanol, foi adicionado diretamente na amostra. Para a coleta do extrato utilizou cartucho de fase slida C18, com posterior eluio com hexano. Foram testadas extraes com SF e microondas com a amostra derivatizada com piridina. Para amostras com maior contedo de carbono (maior reteno dos analitos), a SFE apresentou resultados de recuperao menores que a MAE. Nos demais casos, as recuperaes das duas tcnicas foram boas (prximas a 100%) e quase 50% superiores aos resultados obtidos com a USE. Sabendo dos resultados (recuperaes com SFE equivalentes as obtidas com MAE, sendo ambas superiores as obtidas com USE), pode-se observar novamente a Tabela 3 e verificar que a SFE apresentou maior tempo de preparo da amostra (25 min), mas menor consumo de solvente orgnico (0,1 mL de metanol), alm de uma temperatura bem menor que a utilizada na MAE. Porm, deve-se lembrar que o custo de implementao da SFE maior que da MAE e que os autores realizaram de 4-6 extraes simultneas no sistema de MAE (o qual permite at 12 extraes simultneas), enquanto que a SFE no permite extraes simultneas. Heemken et al. [19] compararam o uso de SFE e ASE com extrao Soxhlet, USE e saponificao metanlica para determinao de microcontaminantes orgnicos em material marinho particulado. Os analitos estudados incluram PAH, hidrocarbonetos alifticos e clorados e os sedimentos marinhos analisados foram materiais certificados. As recuperaes obtidas, para os PAH, com SFE

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variaram entre 96 e 105% e com ASE entre 97 e 108%. Comparando com os valores certificados, as recuperaes de SFE e ASE ficaram entre 86 e 88 % destes valores. Os resultados de recuperao obtidos para os alcanos, utilizando SFE, de 93 115%, e ASE, de 94 107%, foram iguais aos obtidos com Soxhlet, USE e MAE. As estimativas de desvio padro relativos estavam na faixa de 2,9 7,5 % para PAH e alcanos, usando SFE e ASE. A vantagem da extrao com saponificao metanlica que a quantidade de gua da matriz no influencia na extrao, porm o tempo de anlise de 2,5 h e o volume de solvente orgnico, de 100 mL (hexano), so grandes desvantagens. A maior vantagem de ASE foi o tempo de extrao (15 min), contra 90 min da SFE. A vantagem da SFE foi o menor consumo de solvente (15 mL) contra 20 mL da ASE, porm a diferena pequena. Bowyer e Pleil [33] utilizaram a extrao Soxhlet para comparar os resultados obtidos com SFE na extrao de compostos orgnicos de amostras de carpetes. Em ambas as tcnicas de extrao, as amostras de carpete foram extradas diretamente, sem tratamento prvio. Na extrao Soxhlet foram utilizados 200 mL de diclorometano e refluxo por 16 18 horas. Na SFE foi utilizado dixido de carbono como SF e a coleta foi realizada em 3 4 mL de diclorometano, com um tempo total de extrao entre 70 e 80 minutos. As extraes Soxhlet e SFE forneceram resultados similares, em nmero e tipos de compostos extrados. Isto pode ser visto na Figura 4, que mostra uma comparao entre os cromatogramas obtidos por GC/MS, para os extratos das duas tcnicas.
Figura 4b. Cromatograma de ons totais ilustrando os resultados obtidos para a extrao SFE de uma amostra de carpete.

Devido s vantagens que a SFE apresenta em relao extrao Soxhlet, principalmente em termos de tempo de extrao e consumo de solventes, ela foi considerada uma alternativa vivel e superior, no caso apresentado.

Drogas de abuso
Uma das aplicaes neste campo refere-se anlise de cabelo humano para verificao da presena de cocana e benzolegonina [34]. Radcliffe et al. [35] apresentaram um breve relato das atividades desenvolvidas com auxlio de fludo supercrtico na determinao de drogas derivadas do pio, cocana, cannabis e sedativos. As metodologias utilizadas podem servir tanto para determinar a concentrao destas drogas no momento da morte quanto para avaliar a dependncia a longo prazo. Tambm foram apresentados resultados das anlises de impresses digitais e resduos de explosivos.

Alimentos
Determinao de flavorizantes em framboezas [36] e determinao de pesticidas em frutas e vegetais [37]. Boselli e Caboni [38] realizaram a extrao, em microescala, de fosfolipdeos em amostras de ovo em p, utilizando dixido de carbono supercrtico em uma densidade de 1,06 g/mL (presso de 51,7 MPa e temperatura de 40 C), em uma proporo de 67 g de extrato por 100 g de amostra. Os resultados mostram que a metodologia proposta uma boa alternativa para fins analticos.

Figura 4a. Cromatograma de ons totais ilustrando os resultados obtidos para a extrao Soxhlet de uma amostra de carpete.
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Mohamed et al. [39] realizaram a extrao de colesterol



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em manteiga com metano supercrtico obtido em temperaturas de 40, 55 e 70 C e presses na faixa de 8,5 a 24,1 MPa, em fluxo semi contnuo. Para determinar a seletividade do processo, a operao de extrao foi seguida de adsoro em alumina. Com a metodologia proposta foi possvel reduzir o nvel de colesterol para 3% do valor inicial.

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