PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

I. Objetivo Adquirir destreza en la preparacin de medios de cultivo. Preparar un medio de cultivo adecuado (Agar-Papa-Dextrosa) para el posterior estudia de un microorganismo. Identificar los factor (nutrientes, temperatura, humedad, etc.) es que determinan un medio de cultivo ptimo para cada microorganismo. Fundamento Terico Importancia de los Medios de Cultivo Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para cultivar microorganismos, tales como bacterias, hongos y otros. Los microorganismos no pueden estudiarse individualmente debido a su tamao tan pequeo, por lo que solo pueden ser estudiados en poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos en medios artificiales.

II.

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. o Disponibilidad de nutrientes adecuados Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. o Consistencia adecuada del medio Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.

o Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. o Condiciones adecuadas de humedad Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. o Luz ambiental La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. o PH La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. o Temperatura Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios. o Esterilidad del medio Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el creci-

miento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante) III. Procedimiento Experimental

Medio Esterilizados por calor hmedo 1. Se calcula la masa de agar-papa-dextrosa (apd) para una concentracin de en 70ml de agua; se procede con la disolucin por bao mara, en concinas elctricas previamente calentada el agua. 2. Se prepara, previamente esterilizado, un tubo de ensayo de 16 x 15 mm con tapn de rosca o de algodn, con 10 ml aproximadamente del medio con agar, no se aprieta los tapones de rosca 3. Se esteriliza con calor hmedo en autoclave, a 128C y 15 libras de presin, durante 15 minutos. 4. Se reparte posteriormente en condiciones de esterilidad, con ayuda de mechero bunsen, en cajas de Petri cuando el medio estril aun este caliente aproximadamente a 60C. 5. Se deja solidificar la mitad de los tubos (aun calientes) en posicin inclinada.

IV.

Resultados Se espera obtener 1 medio de cultivo en el tubo de ensayo, y 2 medios de cultivo en cajas Petri.

V.

Conclusiones 1. El preparado de agar-papa-dextrosa viene a ser un medio deshidratado, que requiere preparacin por disolucin, para preparar medios semislidos. 2. Los medios de cultivos son sustancias empleadas para observar el crecimiento de una bacteria especfica. 3. Los materiales han de estar esterilizados para evitar que otros microorganismos crezcan en el medio de cultivo. 4. Los medios de cultivo deben tener las condiciones (nutrientes, PH, temperatura, etc.) necesarios para el crecimiento de una bacteria especfica.

VI.

Bibliografa

Microbiologa Clnica; Guillermo Prats Padtor pg. 24 25 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

VII.

Anexos

Investigadores argentinos trabajan en la clonacin de especies de la selva misionera en peligro de extincin

Segn datos oficiales, el deterioro de los bosques de la selva misionera es un reflejo de lo que sucede en todo el pas, ya que en menos de un siglo se perdieron dos tercios del patrimonio forestal.

La selva misionera cuenta con una gran riqueza biolgica expresada por la diversidad de estratos vegetales y la fauna terrestre e ictcola que posee. A pesar de que sta alberga a ms de 200 especies arbreas, es evidente el proceso de deterioro sufrido por su vegetacin debido a la extraccin indiscriminada de las especies maderables. Su mayor impacto reside en la erosin gentica causada por la presin de seleccin, porque se eliminan los mejores ejemplares adultos y, en general, se dejan en pie a los que estn enfermos, de escaso valor gentico para la futura regeneracin. Otro de los factores que afectan a la regin reside en las tasas excesivas de corte y la falta de acciones complementarias de manejo, que dan como resultado la aparicin de bosques degradados con una excesiva cantidad de caas que, junto con la proliferacin de lianas, impiden la regeneracin de las especies arbreas, lo que requiere de perodos prolongados para su establecimiento. Frente a este problema, la ingeniera forestal Evelyn Raquel Duarte trabaja en la aplicacin de herramientas biotecnolgicas para clonar especies arbreas nativas de la selva misionera en peligro de extincin. El objetivo principal de su trabajo es el desarrollo de procedimientos de clonacin del germoplasma nativo para llevar a cabo programas estratgicos de recuperacin de las especies en peligro. Segn indic la investigadora a InfoUniversidades, la eleccin de las especies a clonar se basara en las de mayor importancia econmica que despertaron el inters del sector maderero: Balfourodendron riedelianum (guatamb), Cordia trichotoma (peterib), Myrocarpus frondosus (incienso); como as tambin distintas especies del gnero Cedrela (Meliaceae)

que debido a sus caractersticas xilotecnolgicas (color, veteado, densidad y facilidad para ser trabajada en aserrado y carpintera), gener una intensa explotacin. El cultivo in vitro de tejidos es una herramienta biotecnolgica utilizada en la propagacin vegetativa de numerosas especies vegetales. Ofrece una serie de ventajas respecto de los sistemas tradicionales de propagacin, entre las que se cuentan la posibilidad de obtener plantas libres de enfermedades en forma rpida, masiva y en trminos econmicamente costeables. La ingeniera Duarte trabaja para desarrollar un protocolo de clonacin que combine el empleo de tcnicas tradicionales de organognesis en medios semislidos y el de micropropagacin en sistemas de inmersin temporal. De esta forma se pretende inducir la formacin de embriones somticos o yemas adventicias en medios de cultivo semislidos y su posterior crecimiento y desarrollo en biorreactores de inmersin temporal, cuyas caractersticas tcnicas permitiran acelerar y optimizar la produccin de vitroplantas.