PRIONES

Apablaza C. Elizabeth1, Daz G. Carola1 & Moncada V. Danny1

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Bioqumica, Facultad de Farmacia, Universidad de Concepcin

Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad de Concepcin, Chile 2012.

RESUMEN Los priones son protenas con una alteracin en su estructura terciaria, siendo este error en el plegamiento lo que le dara un carcter patgeno a estas molculas, con respecto a otra protena de estructura normal con la cual comparte una secuencia aminoacdica idntica. La protena prin o PrPSc tiene capacidad de autorreplicarse, modificar el comportamiento bioqumico de la protena normal PrPc, alterando su plegamiento y finalmente su funcin, desembocando en ms partculas patgenas. Las enfermedades prinicas no tienen cura y se producindose tanto en animales, como lo es las enfermedades de las vacas locas, como en humanos, siendo ms frecuente la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob o ECJ, entre otras. Tambin agregados proteicos a modo de placas amieloides desembocan en patologas neurodegenerativas como el Alzheimer.

PALABRAS CLAVE: Prin, PrPsc, PrPc, Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, Alzhimer. INTRODUCCIN Los priones son protenas patgenas alteradas que difieren de las bacterias, hongos, parsitos, virus y viroides tanto en su estructura y caractersticas fsicoqumicas como en la enfermedad que causan, adems de las posibilidades de sobrevivencia a sta. Son pequeas partculas infecciosas son protenas anmalas con unas sorprendentes propiedades que las hacen ms resistentes que la mayora de las protenas a la inactivacin por mtodos fsico-qumicos, siendo esta estructura proteica denominada prin por Prusinier (1).
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La protena prin o PrPSc, es la isoforma scrapie de la protena natural PrPC (isoforma celular) presente en prcticamente todos los tejidos del organismo, que

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tienen idntica secuencia aminoacdica, pero distinta disposicin espacial. Condicin que concede al prin la capacidad de autorreplicarse y modificar su comportamiento bioqumico. La PrPSc se produce por el plegamiento errneo de la protena celular PrPC (2). La forma de actuar de un prin es provocar un cambio de configuracin en una protena natural del organismo, la PrPC, alterando su funcionalidad y dando lugar a la protena de configuracin alterada PrPSc. Ambas formas proteicas poseen idntica

secuencia de aminocidos y la nica diferencia entre ellas estriba en su estructura terciaria, es decir en la forma de plegamiento de la cadena polipeptdica (3). La protena PrPC normal tiene un 40% de hlice-alfa y muy escasa proporcin de hoja-beta. En cambio, la protena de configuracin alterada PrPSc se compone de un 30% de hlice-alfa y un 45% de hojabeta lo que le confiere la capacidad de formar complejos supramoleculares acumulables denominados amiloides (figura 1).

Figura

1.

Diferencias

entre

la

configuracin normal y la configuracin alterada de la protena PrP (4.) Cambio de plegamiento de PrPC a PrPSc.

La estructura terciaria de la protena recombinante del prin humano se ha desvelado recientemente. sta consiste en tres -hlices que conforman un ncleo ordenado en el extremo carboxilo terminal de la molcula y una zona amino terminal desestructurada y flexible. La configuracin alterada que da lugar a la enfermedad prinica se caracteriza en que: - Tiene un alto contenido de hoja-beta. - Es insoluble frente a los detergentes. - Es resistente a la protelisis o degradacin de la protena mediante enzimas.
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- Tiene tendencia a agregarse.

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- Se localiza mayoritariamente en el espacio extracelular.

La protena alterada tiene una caracterstica nica: interacciona con una molcula de protena normal, le cambia la conformacin y la hace capaz de convertir las estructuras de ms protenas normales. Ah radica al parecer, el poder infectivo de los priones (5). El principio bsico de la hiptesis de ganancia de funcin es que la agregacin de PrP Sc sensibiliza a las neuronas a la muerte celular programada y conduce a la enfermedad prinica. A su vez, la hiptesis de prdida de funcin se basa en la idea de que la prdida de PrPC conduce a la vulnerabilidad de las clulas y a las enfermedades prinicas. Las dos hiptesis no son mutuamente excluyentes, y la interdependencia entre la acumulacin de PrPSc, la muerte celular y la enfermedad sigue sin resolverse.

BIOLOGA MOLECULAR DE LOS PRIONES. La protena PrPC est codificada en un gen cromosmico muy similar entre las distintas especies de mamferos. El gen de la PrP existe en una nica copia y est localizado en el brazo corto del cromosoma 20 en el hombre y en una regin equivalente del cromosoma 2 en ratones. El gen del ratn contiene tres exones, mientras que el gen humano y de hmster nicamente dos. La secuencia de aminocidos (ORF) de todas las protenas conocidas de priones se encuentra codificada en su totalidad dentro de un nico exn. El gen se expresa de manera constitutiva prcticamente en todos los tejidos del organismo adulto, siendo su expresin mxima en tejidos neuronales (cerebro, cerebelo, mdula e hipotlamo). PrP tamao es de 30 a 35 kDa (Figura 2).

Figura 2. Estructura del gen de la PrP en mamferos (6).

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ENFERMEDADES PRINICAS Las causas que provocan el error en el plegamiento de la PrPC, descritas anteriormente, definen las formas de las enfermedades producidas por priones: Formas espordicas de la enfermedad: son las que aparecen sin causa aparente y para las que no hay explicacin en la actualidad. Formas infecciosas: se explican por la interaccin de la PrPSc sobre la PrPC lo que provoca su transformacin a PrPSc. Formas hereditarias: provocadas por alteraciones genticas heredables que facilitan el plegamiento errneo de la PrPC. Los agregados proteicos en forma de placas amiloides causan patologas

neurodegenerativas de evolucin lenta en humanos, como la enfermedad de Huntington o el Alzheimer, ste ltimo ser descrito ms en detalle.

DESARROLLO PRIONES Y ENFERMEDADES (EN GENERAL) Las enfermedades prinicas son enfermedades degenerativas del sistema nervioso causadas por partculas transmisibles que contienen una isoforma patgena de la protena prin, por lo que su patogenia se atribuye a cambios importantes en el metabolismo de la protena celular (PrPC). Estas patologas se definen como Encefalopatas espongiformes transmisibles (EET) las cuales son de carcter infeccioso, gentico o espordico y se caracterizan por la neuro-degeneracin y la agregacin de protenas. Es de saber que no solo afectan a los seres humanos sino tambin a animales, algunas de las cuales se nombran en la tabla N1. Tabla N1: Enfermedades prinicas en humanos y animales.
Enfermedades Humanas Kuru Esporadica ECJ Familial ECJ Iatrogenica ECJ Variante ECJ Enfermedades en animales Scrapie, tembladera o rascadera (ovejas y cabras) La encefalopata transmisible del visn Enfermedad degenerativa de los ciervos y alces La encefalopata espongiforme bovina Encefalopata espongiforme transmisible de los rumiantes salvajes en cautividad Encefalopata espongiforme felina

* ECJ: Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob

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Las enfermedades pueden afectar a los diferentes grupos etarios y en el curso de la patologa pueden mostrar una variedad de sntomas motores o cognitivos, y aunque su prevalencia es relativamente baja, las EET son prcticamente incurables y fatales. La enfermedad prinica humana ms comn es la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) en donde la mayora de los casos son espordicos y sin total conocimiento de su transmisin, se dice que el 10-15% de los casos se hereda, y que un pequeo nmero transmite por procedimientos mdicos. Sin embargo la propagacin de enfermedades prinicas humanas a travs del consumo de material infectado se ha asociado con el Kuru y la denominada nueva variante ECJ. Si bien mata mundialmente a una persona por cada milln de habitantes, en Chile su incidencia es preocupante pues es el triple del promedio mundial; adems que una vez diagnosticada no existe tratamiento y slo puede ser confirmado su padecimiento por medio de una autopsia(2). Las enfermedades animales causadas por priones parecen ser transmitidas ya sea por el contacto con animales infectados o por el consumo de alimentos contaminados. (7,8)

PRIONES Y ENFERMEDADES DEGENERATIVAS La preocupacin por las enfermedades neurodegenerativas, como el Alzheimer, Parkinson y las EET han llevado a la bsqueda de caractersticas en comn para poder encontrar las principales causas de estas. Uno de los descubrimientos ha sido, que se caracterizan por los depsitos de protenas anormales, a menudo con amiloide de grandes fibrillas. Sin embargo, han surgido preguntas sobre si tales fibrillas o pequeos oligmeros subfibrilares son las causas principales de la enfermedad. Consecuencia de que los depsitos anormales en las EET (las cuales pueden transmitirse por los priones) son ricos en PrPres (forma resistente a proteasa de la protena PrP con la capacidad de convertir la normal;

cientficos de los Estados Unidos evaluaron sistemticamente la relacin entre la infectividad, la actividad de conversin y el tamao de varios PrPres que contenan
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sensible a la proteasa forma de la protena [PrPsen] en PrPres; descubierto en 1994),

estos agregados. Mediante fraccionamiento (por tamao) y anlisis por dispersin de luz y electroforesis no desnaturalizante en gel, obtuvieron.

Figura 3: Anlisis PAGE de PrPres tratados con detergente. En

a y b, muestras de fracciones FlFFF (flow field-flow fractionation) que fueron separaradas mediante electroforesis en geles PAGE Tris-acetato en gradiente 3-8% y analizadas por tincin de plata (a) o inmunotransferencia con anticuerpos monoclonales 3F4 anti-PrP despus de la transferencia a PVDF (b) . En c y d, muestras adicionales purificadas de PrPres que se hirvieron en tampn de SDS-PAGE sin sonicacin, se sometieron en geles PAGE Bis-Tris gradiente 10% y se analizaron en duplicado por cualquier inmunoblotiting (c) o en conversin de fase slida(d). Nmeros fraccionarios y tipos de PrPres utilizado (PK PrPres, proteinasa K digerido PrPres) se muestran en la parte superior. Glicoformas de PrP y oligmeros se indican a la izquierda, y los pesos moleculares estndares (kDa) se muestran a la derecha. (9)

Tabla N2: Parmetros biofsicos de las fracciones de PrPres (9).

Para visualizar los tamaos y formas de las partculas de PrPres fraccionadas, las muestras de fracciones FlFFF (flow field-flow fractionation) representativas se analizaron
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observadas en la Tabla N2 la fraccin 26 contena una preponderancia de fibrillas largas,

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por microscopa electrnica de transmisin. Y en consonancia con los valores de r altas

mientras que la fraccin 21 contena fibrillas ms cortas en conjuncin con ms material amorfo. Las fracciones 10 y 15 revelaron una coleccin de pequeas partculas esfricas y amorfas no habiendo fibrillas visibles en estas fracciones, con estos resultados y otros experimentos realizados, pudieron revelar que, con respecto al contenido de PrP, la infectividad y la conversin de actividad alcanz su punto mximo marcadamente en 17-27 nm (300-600 kDa), mientras que las partculas de estas actividades fueron sustancialmente menores en fibrillas grandes y prcticamente ausente en oligmeros de molculas de PrP 5. Con lo que se sugiri que las partculas no fibrilares, con masas equivalentes a 14-28 molculas de PrP, son los iniciadores ms eficientes de la enfermedad de TSE (9). PRIONES Y ALZHEIMER La enfermedad

de

Alzheimer (EA) se caracteriza por la presencia de placas seniles extracelulares y ovillos

neurofibrilares intracelulares dentro del cerebro afectado, es una de las enfermedades neurodegenerativas

caracterizada por el procesamiento anormal del pptido amiloide- (A) y la protena celular prinica (PrPC). Estudios han encontrado que PrPC, podra jugar un papel crtico en la patognesis de esta patologa. (10) Teniendo en cuenta que los Figura 4: PrPC inhibe la - Secretasa en la escisin de APP. Clulas SH-SY5Y que
expresan APP695 se transfectaron de forma estable con el ADNc que codifica a la PrP murina. (A) Deteccin de PrPC en lisados de clulas con 3F4. (B) Deteccin de la APP en lisados celulares con AB54. (C) Deteccin de sAPP en medio condicionado con 6E10. (D) Deteccin de sAPP en medio condicionado con 1A9. (E) Cuantificacin de inmunoblot sAPP por anlisis densitomtrico. (F) ELISA cuantificacin de A en el medio condicionado. En todos los casos, los resultados son la media SD de tres experimentos independientes. n.d., no se detecta (11)

principales componentes de las placas seniles son los pptidos amiloide (A), que derivan de la transformacin proteoltica de la

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protena precursora amiloidea (APP por Amyloid Precursor Protein) cientficos del Reino Unido en el 2007 demostraron que PrPC regulaba la -secretasa (BACE1) o tambin conocida como beta-APP en la escisin de la protena precursora de amiloidea (APP) en el Alzheimer. En un extracto de su trabajo, para conocer como alteraba la PrPC, ellos tomaron el cDNA que codificaba para la PrP murina y lo transfectaron en clulas *SH-SY5Y que expresaban APP695. En las clulas transfectadas PrPC apareci como una banda ancha de 32 a 40kDa, debido a las formas diferencialmente glicosiladas (Fig. A). La presencia de PrPC no tuvo efecto sobre la cantidad de holoproteina APP695 en los lisados celulares (Fig. 1B) o en la cantidad de sAPP en el medio celular (Fig. C). Sin embargo, PrPC inhibi drsticamente a sAPP (en un 97,5%) (Fig. D y E) y redujo la secrecin en el medio condicionado de A 1-40 en un 92% y de A 1-42 a un nivel indetectable (Fig. F). De esta manera observando q PrPc disminuyo tanto a sAPP y A pudieron concluir que el efecto inhibidor es a nivel de -secretasa en la escisin de APP. (11) Ya al 2009 existan estudios que insinuaban funciones potenciales para PrPC en el Alzheimer, como el recin visto, en la regulacin fisiolgica de procesamiento de APP a travs de su interaccin con BACE1 (-secretasa) o como su papel en la progresin patolgica del EA por mediacin de toxicidad A mediante la unin a oligmeros A42 (12). Sin embargo an quedan muchos estudios a futuro para llegar en concreto a una solucin a esta patologa, que afecta a un gran nmero de habitantes en el mundo, en especial a los ms ancianos.
*Las SH-SY5Y son una sub-lnea clonada 3 veces de una biopsia de mdula sea derivada de la lnea SK-N-SH (ECACC n 86012802). Tienen actividad dopamina-beta-hidroxilasa y pueden convertir el glutamato en el neurotransmisor GABA. Formar tumores en ratones inmunodeprimidos en aproximadamente 3-4 semanas (informacin extrada de Ficha de lnea Celular - CIC, http://cic.ugr.es/servicios-y-unidades/ficha-Lineas-Celulares.php?codigo=61).

CONCLUSIN Las enfermedades causadas por priones son, por mltiples razones, patologas sin precedente. Son enfermedades neurodegenerativas de carcter espordico, infeccioso y hereditario; el mecanismo de transmisin de stas contradice el Dogma Central de la Biologa Molecular ya que el agente etiolgico es capaz de replicarse a s mismo en
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ausencia de cido nucleico, y adems, viola el principio biolgico que establece que la secuencia de aminocidos de una protena determina de manera clara el plegamiento o

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estructura terciaria de sta. El evento clave en el desarrollo de las Enfermedades causadas por priones (EPRs), el cambio conformacional de la protena prin, permanece en el mbito de las hiptesis. De esta manera, se pone de manifiesto la necesidad de involucrar esfuerzos para la generacin y rectificacin de conocimiento concerniente a este fenmeno. El prin, por lo tanto, no es otra cosa que un rebelde que vino a contradecir el precepto central de la biologa molecular. Aquel que dice que no hay posibilidad de transmisin de informacin, ni replicacin, sin que medie entre otros el ADN. En los seres humanos, las enfermedades prinicas son generalmente enfermedades terminales progresivas que tienen un perfil alto a pesar de su baja incidencia. Desafortunadamente, hoy en da no hay cura para la enfermedad de prion. En el mejor de los casos, los mdicos pueden tratar de ayudar a controlar los sntomas que causan malestar. Solo en modelos experimentales ha habido resultados positivos pero que no se pueden llevar a cabo en humanos aun.

BIBLIOGRAFA

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