Extrao de DNA do IP Material - Folhas de Ip do Cerrado.

-Uma faca de cozinha (muito cuidado, pea a ajuda de um adulto) - Dois copos tipo americano -gua quente (garrafa de caf, 60 C) - gua filtrada -Sal de cozinha -Detergente de louas neutro -lcool etlico 92,8% gelado (-10C, deixe no congelador 1 hora antes de realizar o procedimento) -Basto fino de vidro ou madeira (ou canudo de plstico mais duro) -Filtro de papel (caf) -Gelo modo -Bacia para o gelo -Pilo
Procedimento - Macere as folhas do IP ou de qualquer outro vegetal com o auxlio de um pilo. No copo americano, coloque quatro colheres de sopa de detergente neutro e uma colher de ch de sal e adicione gua at a metade, mexa bem at dissolver completamente. Coloque as folhas agora maceradas no copo com a soluo detergente/sal e leve ao banho-maria por 15 minutos. -Retire o copo do banho-maria e resfrie-o rapidamente, colocando-o na bacia com gelo durante 5 minutos. -Coe a mistura no coador de papel, recolhendo o filtrado em um copo limpo. -Com cuidado adicione meio copo de lcool gelado ao lquido filtrado, deixe-o escorrer vagarosamente pela borda. Formam-se duas fases, a superior, alcolica, e a inferior, aquosa. -Mergulhe o basto do copo e, com movimentos circulares, misture as fases. Formam-se fios esbranquiados, que so os aglomerados de molculas de DNA.

Entenda o que acontece Depois que o procedimento realizado possvel visualizar facilmente pequenos grumos esbranquiados que so os filamentos de DNA. Lembre-se que a visualizao a olho nu possvel porque a quantidade de DNA muito grande e os filamentos esto todos agrupados.

Macerao A macerao quebra a parede celular, que a estrutura extracelular que envolve e protege a clula vegetal.

Detergente O detergente ajuda a dissolver a bicamada lipdica que compe a membrana plasmtica, as membranas das organelas e a carioteca que limita o ncleo.

Sal O sal ajuda a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, impedindo que elas precipitem com o DNA.

Banho-maria O aquecimento em banho-maria visa o desarranjo dos fosfolipdios das membranas e a desnaturao parcial das enzimas do tipo DNAse, evitando que o DNA seja cortado em pequenos fragmentos, o que dificultaria a sua extrao posterior.

lcool O DNA no solvel em etanol (lcool etlico), por isso promove o agrupamento dos filamentos, tornando-se visveis. Quanto mais gelado estiver o lcool, menos solvel o DNA vai estar.