Introduccin: Concepto de Manipulacin Gentica y su Importancia en el Momento Actual.

1
Teresa Palomeque Messa, Jose Antonio Carrillo vila y Pedro Lorite Martnez rea de Gentica. Departamento de Biologa Experimental. Facultad de Ciencias Experimentales. Universidad de Jan. 23071 Jan. Manipulacin es la accin y efecto de manipular. Este verbo tiene varios significados. Significa en primer lugar, operar con las manos, especialmente ciertas sustancias para obtener un resultado; significa tambin y en un sentido ms figurativo y familiar gobernar los asuntos propios y ajenos. La primera acepcin aunque inexacta, se acerca algo a lo que hoy entendemos por manipulacin gentica; la segunda con su doble sentido peyorativo, se aleja bastante del concepto que puede tener de la misma un cientfico actual con una cierta tica. No pretendemos indicar que la manipulacin gentica sea una actividad inocua, ninguna actividad humana lo es. Es necesario evaluar en todos los casos los posibles beneficios y si stos compensan los riesgos, minimizando siempre estos ltimos. En su acepcin ms amplia, manipulacin gentica significa cualquier cambio realizado en el material gentico. El hombre ha utilizado esta manipulacin desde muy antiguo, existiendo datos arqueolgicos que lo confirman. Por ejemplo, entre los aos 8000 y 1000 a.C. se domesticaron y se utilizaron para diversas tareas caballos, camellos, bueyes y numerosas razas de perros (derivados de la familia de los lobos). Se piensa que plantas como el maz, el trigo, el arroz y la palmera datilera se vienen cultivando desde el ao 5000 a.C., realizando a la vez, una cierta seleccin artificial dentro de los conocimientos de la poca. En el arte asirio se representa la
1

Manipulacin gentica: metodologa, aplicaciones y biotica. 2001. T. Palomeque, M. Martnez y P. Lorite (Editores). UNED. Centro Asociado Andrs de Vandelvira. Jan.

T. Palomeque et al.

polinizacin artificial de la palmera datilera (Figura 1). Este acto humano ha influido indudablemente, en los tipos de palmeras que se encuentran en la regin. Actualmente hay unas 400 variedades de palmeras en slo cuatro oasis del Sahara, que difieren entre s en caracteres, tiles para el hombre, como el sabor del dtil.

Figura 1. Relieve esculpido que representa la polinizacin artificial de palmeras durante el reinado del rey asirio Arsunasirpal II (883-859 a.C.)

El nacimiento de la gentica como disciplina organizada se puede situar en el ao 1900 con el redescubrimiento de los experimentos de Mendel realizado por De Vries, Correns y Von Tschermak. Durante el crecimiento y desarrollo de esta ciencia, varios descubrimientos clave han servido de puntos de inflexin, acelerando todos ellos a la velocidad a la que crecen los conocimientos en gentica y a la vez, abriendo nuevos campos de investigacin. Uno de los primeros hitos fue la teora cromosmica de la

Concepto de manipulacin gentica

herencia. Este concepto propuesto por Sutton y Boveri en 1902, lo desarrollaron Morgan (1910, 1912) y sus colaboradores utilizando la mosca del vinagre (Drosophila melanogaster). Uno de sus postulados principales, el establecimiento de que los genes estn en los cromosomas, permiti la comprensin de la gentica de la transmisin, de la determinacin del sexo, del ligamiento y la utilizacin de los cromosomas para cartografiar genes en sus loci especficos. Un segundo hito fue el descubrimiento realizado por Avery, MacLeod y McCarty (1944) de que el ADN es la molcula que contiene la informacin gentica. Este descubrimiento estimul la investigacin en virus y bacterias y condujo al establecimiento del modelo sobre la estructura del ADN de Watson y Crick (1953). Este modelo ha trado consigo el conocimiento de las bases moleculares del cdigo gentico, de la transcripcin, de la traduccin y de la regulacin gnica. A partir de ese momento se realizaron numerosos descubrimientos cientficos en un periodo relativamente corto de tiempo. Podemos destacar la identificacin de los 23 pares de cromosomas en las clulas humanas (1956), la identificacin de las primeras enzimas de restriccin (1970) que permitieron la creacin de la primera molcula de ADN recombinante en el laboratorio (1972), la introduccin con xito de genes de una especie en otra (1973), la clonacin del gen de la insulina humana (1978), la creacin del primer ratn transgnico insertando el gen de la hormona de crecimiento de la rata en vulos de ratona fecundados (1982), la produccin de insulina humana con tcnicas de ADN recombinante (1982), desarrollo de la tcnica reaccin en cadena de la polimerasa, PCR (1985), la primera propuesta comercial para establecer la secuencia completa del genoma humano (1987), el primer tratamiento con xito mediante terapia gnica en nios con trastornos inmunolgicos (nios burbuja) (1990), la comercializacin en California del primer vegetal modificado genticamente, en concreto el tomate (1994) y una larga serie de importantes descubrimientos. Sin lugar a dudas, podemos afirmar que en los ltimos aos, y en los prximos, estamos experimentando y experimentaremos otra, y quizs la ms profunda, transicin en la historia de la gentica: el desarrollo y la aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante. Este trmino hace referencia a la creacin de nuevas combinaciones de segmentos o de molculas de ADN que no se encuentran juntos en la naturaleza. El conjunto de las tcnicas de manipulacin est incluido en lo que conocemos

10 T. Palomeque et al.

como Ingeniera Gentica. La Ingeniera Gentica es un trmino que abarca los distintos caminos para cambiar el material gentico. La Ingeniera Gentica puede definirse como "la manipulacin deliberada de la informacin gentica, con miras al anlisis gentico o al mejoramiento de una especie". La importancia de esta tecnologa y su influencia en la sociedad puede ponerse de manifiesto con un simple anlisis de su repercusin en los medios de comunicacin. Hace algo ms de diez aos los polticos y por supuesto la gente en general, no saba la diferencia entre genomas y gnomos, los diminutos habitantes fantsticos de los bosques segn los cuentos. Sirva de ejemplo una ancdota protagonizada por el presidente George Bush en 1989. En una ceremonia de entrega de Medallas Nacionales de Ciencia y Tecnologa, celebrada en la Casa Blanca, Bush expuso con orgullo todo lo que su gobierno y el de su predecesor haban hecho por la ciencia. Cit entre otros logros la iniciativa del estudio del Gnomo(en ingles gnome) humano. No hizo ademn alguno de rectificar y en la sala no se produjo ni una sonrisa ni un murmullo. Los premiados entre los que se encontraban Stanley N. Cohen y Herbert W. Boyer, inventores de la tcnica de corte y empalme, subieron al podio con la seriedad propia del acto y estrecharon la mano la mano del presidente. En el acta del discurso figuraba claramente la palabra gnomo. Todo esto suceda el ao en que el gobierno americano iba a invertir 28,2 millones de dlares en las primeras etapas del Proyecto del Genoma Humano. En la actualidad pocas son las personas que no conocen algo sobre este proyecto. El 26 de Junio del ao 2000, el presidente de los EEUU, Bill Clinton, el Primer Ministro britnico, Tony Blair, el presidente de Celera Genomics, Craig Venter y el director del Proyecto Genoma Humano, Francis Collins, anuncian la terminacin de la secuencia del genoma humano (Figura 2). Con ello se inaugura una nueva era, que dada la coincidencia con el nuevo siglo, bien podramos definir con el lema La gentica en el siglo XXI. Sin embargo, no fue hasta unos meses despus, el 12 de Febrero de 2001, cuando el mundo celebr uno de los ms importantes hitos cientficos de los ltimos aos: la publicacin de la secuencia del mapa gentico humano.

Concepto de manipulacin gentica 11

Figura 2. Presentacin oficial de la secuencia completa del genoma humano el 26 de junio del 2000. Craig Venter (izquierda), presidente y director cientfico de Celera Genomic Corporation y Francis Collins (derecha), director del National Human Genome Research Institute.

El trabajo publicado esta lejos de ser completo. Realmente es una etapa, aunque importante. Los artfices de esta proeza han sido, los investigadores integrados en el consorcio pblico Proyecto Genoma Humano (PHG) y la compaa Celera Genomics de Rockville (Maryland) con su grupo de investigadores. En el consorcio pblico estn integrados investigadores y centros de investigacin de Estados Unidos, Inglaterra, Japn, Francia Alemania y China. La metodologa usada por ambos equipos es fundamentalmente diferente. El PGH utilizando clulas sanguneas y espermticas, separaron primero los 23 pares de cromosomas de la clula humana. Cada uno de estos cromosomas se cort despus en fragmentos, estos se secuenciaron y posteriormente se localiz y se agrup cada segmento de ADN en su cromosoma. De esta manera, un tanto artesanal se fueron elaborando progresivamente las secuencias de segmentos gnicos

12 T. Palomeque et al.

individuales, de genes, de cromosomas completos y por ltimo del genoma completo. Celera utiliz una metodologa ms corta y directa. En primer lugar, cortaron en fragmentos el genoma entero, cada uno de esos fragmentos fue ledo, es decir secuenciado. Posteriormente, estos fragmentos se reunieron ordenadamente, viendo las zonas donde se solapan. En esta ltima etapa la utilizacin de potentes ordenadores y sofisticados programas fue fundamental. Celera y PGH se han considerado como competidores en la carrera del conocimiento del genoma. Indudablemente la empresa privada ha gozado de una ventaja incuestionable. El PGH es una empresa pblica y por tanto enva de manera rutinaria sus datos sobre el genoma al GenkBank, una base de datos pblica a la que se puede acceder a travs de Internet (www.ncbi.nlm.nih.gov/), indudablemente, la compaa privada ha utilizado los datos del PGH. En esta lucha y rivalidad estn tambin implicadas una serie de empresas en cuya financiacin estn incluidas las principales compaas farmacuticas. Entre ellas destacamos, Incyte Genomics con sede en Palo Alto (California), Millenium Pharmaceuticals con sede en Cambridge (Massachusetts) etc. De acuerdo con los datos obtenidos, el 99,9% del ADN de todas las personas es similar. Sin embargo existe un 0,1% variable. Son estas zonas variables las ms interesantes. Incluso un simple polimorfismo de un nucletido individual (SNP) puede ser importante en la respuesta a ciertas medicinas (Figura 3). En concreto en el genoma humano se han identificado 1,4 millones de este tipo de polimorfismos. En opinin de Craig Venter, estas pequeas variaciones genticas son la causa de que muchas medicinas no sean efectivas en determinados sectores de la poblacin. Se ha puesto como ejemplo, el Rezulin un medicamento utilizado para la diabetes de tipo II, que se ha relacionado con mas de 60 fallecimientos por toxicidad heptica. Aunque la medicina a la carta no haya salido todava de la mesa del laboratorio, algunos analistas financieros consideran que podra convertirse, en un futuro prximo, en un negocio de millones de dlares. El inters de estas compaas comerciales se basa en la elaboracin de nuevas medicinas y sus posibles patentes.

Concepto de manipulacin gentica 13

AAGAGATGATGTGAGTAAAACCCGCGATT AAGAGATGATGAGAGTAAAACCGGCGATT

CGATCGATGAGCTGATCGTACGAAGGT CGACCGTTGAGCTGATCGTACGAAGGT

GCGCATGCTAGACAGTAGTCAGTGCAT GCGCCTGCTAGACAGTAGTCAATGCAT

Figura 3. Tipo de variacin ms comn entre la poblacin humana: polimorfismos para un slo par de nucleotidos (SNPs = single nucleotide polymorphisms). Se muestran seis polimorfismos de este tipo.

El estudio del genoma y la cantidad de informacin que se generar en los prximos aos, ha llevado tambin al desarrollo vertiginoso de la Bioinformtica, una nueva disciplina que une la Biologa y la Informtica. La secuencia del genoma humano, formada exclusivamente por los pares de A, C, G, y T, sin mas informacin adicional, ocupa mas de tres gigabytes, aproximadamente 2.000 discos normales de ordenador. Si se aade la informacin sobre los llamados organismos modelo y la informacin sobre protenas, el conjunto de informacin puede ser abrumadora. El objetivo de la Bioinformtica es la recogida y el almacenamiento de datos, as como la bsqueda de la interpretacin de los mismos. La Bioinformtica inici su andadura a principios de los aos ochenta con una base de datos llamada GenBank, creada por el Departamento Estadounidense de Energa para almacenar secuencias cortas de ADN, las nicas que se conocan en esos aos. Posteriormente, la administracin de este banco de datos se transfiri al Centro Nacional para Informacin sobre tcnicas biolgicas (NCBI) de los Institutos Nacionales de la Salud de Estados Unidos. El volumen de datos empez a crecer de forma exponencial cuando el PGH despeg en 1990. Paralelamente se fueron desarrollando otras compaas pblicas y privadas. Para comprender la importancia de la Bioinformtica podemos poner como ejemplo, una de las operaciones ms bsicas que consiste en la bsqueda de semejanzas u homologas entre un fragmento de ADN recin

14 T. Palomeque et al.

secuenciado, y los segmentos ya disponibles de diversos organismos. El hallazgo de emparejamientos aproximados permite predecir el tipo de secuencia y en su caso, el tipo de protena que podra especificar ese segmento de ADN. Quizs el programa ms popular de anlisis de secuencias sea el BLAST (de Basic Local Alignment Search Tool) que apareci por primera vez en 1990. Este programa forma parte de un conjunto de elementos de investigacin de secuencias de ADN y de protenas, disponible en varias versiones por distintos proveedores y directamente por el NCBI. Como ejemplo de la utilidad de la Bioinformtica podemos destacar a la catepsina k. Es un enzima que podra ser importante para el tratamiento de la osteoporosis. El anlisis del ADN y ARN extrado de osteoblastos de personas con tumores seos demostr que estas clulas expresaban con exceso un tipo de protenas ya conocidas: catepsinas k. Las investigaciones estn ahora dirigidas a encontrar un posible frmaco que bloquee la diana celular para esta protena. En el futuro, para el conocimiento de la funcin de cada gen sern de gran utilidad los datos extrados de organismos ms sencillos y llamados organismos modelo. Entre ellos, podemos destacar a la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, cuyo genoma se termin de secuenciar en marzo del ao 2000. La comparacin con el genoma humano demuestra que el 60% de los 289 genes humanos que se sabe que estn implicados en algn tipo de enfermedad, tienen su equivalente en esta mosca. Adems unas 7000 protenas (50% de las protenas de la mosca) muestran semejanzas con las protenas conocidas de mamferos. Uno de los genes de la mosca con un equivalente humano es el p53. Este gen humano est situado en el brazo corto del cromosoma 17 y cuando el nmero de mutaciones que presenta una clula es elevado, interrumpe momentneamente el ciclo celular para que la clula pueda reparar sus lesiones. Para conseguir este efecto estimula la transcripcin del gen que codifica la protena p21. La protena p21 inhibe a un gen importante en el control del ciclo celular que es el CDk-2 de forma que se impide la transicin entre las etapas G1S. Si las mutaciones son demasiado numerosas para ser reparadas, p53 orienta hacia la apoptosis. Si este gen no es funcional, la clula continua dividindose y reproduciendo las anomalas de su genoma. La versin p53 de la mosca acta de una forma similar; si la protena p53 de la mosca est inactivada las clulas pierden la capacidad de autodestruirse despus de sufrir un dao gentico, pasando a

Concepto de manipulacin gentica 15

crecer sin tasa. Semejanzas de este tipo hacen a la mosca un buen modelo para estudiar las alteraciones genticas que subyacen en el cncer humano. Otro organismo modelo y ya secuenciado en 1998, es el gusano nemtodo Caenorhabditis elegan, que presenta tambin una alta proporcin de protenas similares a las de mamferos. En la actualidad se estn utilizando para estudiar nuevos medicamentos para la diabetes. En concreto se utilizan gusanos con una mutacin en el gen que codifica para el receptor de insulina y que, por tanto, tienen detenido su crecimiento. A estos individuos se les trata con diversas sustancias, posibles futuros frmacos, para determinar cul de ellos restaura su crecimiento. El genoma de la levadura de la cerveza, Sacharomyces cerevisiae, otro organismo modelo, se conoce desde 1996. Los estudios realizados en ella han permitido el conocimiento de los mecanismos fundamentales que regulan la divisin celular. Dentro de esta exigua mencin de organismos modelo no podemos olvidarnos del ratn, por su condicin de mamfero y por tanto con mayores similitudes en relacin con su organizacin y metabolismo. En la Tabla 1 se muestra un resumen de los diferentes organismos eucariotas secuenciados hasta el momento.
Nmero de genes por milln de bases secuenciadas

Organismo

Ao

Millones de bases secuenciadas

Porcentaje total secuenciado

Porcentaje de eucromatina secuenciada

Nmero de genes estimados

Saccharomyces cerevisiae Caenorhabditis elegans Drosophila melanogaster Arabidosis taliana Genoma humano (HGP) Genoma humano (Celera)

1996 1998 2000 2000 2001 2001

12 97 116 115 2.693 2.654

93 99 64 92 84 83

100 100 97 100 90 88-93

5.800 19.099 13.601 25.498 31.780 39.114

483 197 117 221 12 15

Tabla 1. Genomas eucariticos secuenciados (datos tomados de Bork y Copley 2001, Nature 409: 818-820.

16 T. Palomeque et al.

El grupo International Human Genome Sequencing Consortium en el articulo publicado en Nature (2001) expone los principales resultados de su investigacin. Por su parte Craig Venter y dems cientficos integrados en Celera Genomics lo hacen en el artculo publicado en Science (Venter et al. 2001). En primer lugar expondremos algunas de las conclusiones ms importantes de ambos grupos, para comentar despus algunas cosas significativas en relacin con las mismas. En la revista Nature, los investigadores destacan los siguientes puntos que en su opinin han quedado clarificados, aunque lgicamente, an quedan detalles por aclarar: 1. El genoma humano presenta una variacin marcada en la distribucin de ciertas caractersticas, incluyendo genes, elementos transponibles, riqueza en CG, islas CpG y tasa de recombinacin. La distribucin de estas caractersticas puede ser indicativa de su funcin. 2. El nmero estimado de genes codificantes de protenas es sobre 30.000-40.000, slo aproximadamente dos veces ms que la mosca. 3. El conjunto de protenas (proteoma) codificado por el genoma humano es ms complejo que el de los invertebrados. Este hecho se debe a la existencia de dominios y motivos proteicos especficos de vertebrados pero sobre todo al hecho de que los vertebrados durante su evolucin, parece que han reorganizado componentes preexistentes dando lugar a la aparicin de dominios nuevos y ms variados. 4. Cientos de genes parecen ser el resultado de transferencia horizontal desde las bacterias en algn momento de la evolucin. Numerosos genes se derivan de elementos transponibles. 5. Aunque aproximadamente la mitad del genoma humano deriva de elementos transponibles, estos presentan una marcada prdida de su actividad de transposicin. 6. Las regiones telomricas y subtelomricas de los cromosomas se caracterizan por presentar secuencias que son duplicaciones de segmentos de otras zonas del genoma. Esta duplicacin de segmentos es mucho ms frecuente en humanos que en los

Concepto de manipulacin gentica 17

restantes organismos secuenciados (S. cerevisiae, D. melanogaster y C. elegans). 7. El estudio de la organizacin de los elementos Alu explica su sorprendente distribucin y abundante presencia en las zonas ricas en GC, sugiriendo una seleccin a favor de su mantenimiento. 8. La tasa de mutacin es ms alta en la meiosis del macho, aproximadamente el doble que en la de la hembra, indicando por tanto que la mayora de las mutaciones ocurren en el macho. 9. Se confirma la relacin entre bandas G y zonas cromosmicas con bajo contenido en GC. 10. Las tasas de recombinacin son ms altas en los extremos de los brazos cromosmicos que en el resto del cromosoma. Igualmente esta tasa es ms alta en los brazos cromosmicos cortos. Al parecer se confirma la ocurrencia de al menos un sobrecruzamiento por brazo cromosmico y meiosis. 11. Se han identificado ms de 1,4 millones de polimorfismos para un nico nucletido (SNPs).

En el resumen del trabajo publicado en Science se destacan tambin una serie de conclusiones importantes. Estos investigadores realizaron la titnica tarea de leer 27.271.853 secuencias en aproximadamente 9 meses. Estas secuenciaciones se realizaron en ADN procedente de 5 individuos. Teniendo en cuenta el tamao estimado del ADN humano (14,8x109 pb), suponen 5,11 lecturas, que unidas a las 2,9 lecturas realizadas por el PGH, suman un total de 8 lecturas completas del genoma. Su estudio determina la existencia de 26.588 genes codificantes de protenas. Adicionalmente, estiman la existencia de otros 12.000 genes mediante la comparacin computacional con los datos correspondientes a otros organismos como el ratn. Junto con diversos datos numricos relativos a la proporcin de genes situados en regiones de bajo contenido en G+C (50%), proporcin de ADN intergnico (75%), y otros similares, destacan la existencia de bloques de segmentos duplicados, lo que indicara una compleja evolucin del genoma humano. Anlisis genticos comparativos indican que en los vertebrados la expansin gnica est asociada con las funciones neuronales, con los mecanismos de regulacin durante el desarrollo de formacin especfica de tejidos, con los mecanismos de regulacin hemosttica y del sistema imnume. Por ltimo, la comparacin con los datos obtenidos por el PGH, ha

18 T. Palomeque et al.

permitido la localizacin de 2,1 millones de polimorfismos para un nico nucletido (SNPs), si bien menos de 1% de ellos producen variaciones en las protenas. El anlisis de genomas complicados como el humano han demostrado, como hemos indicado, la existencia de una gran cantidad de ADN repetitivo. Li et al. (2001) consideran que 43% del genoma est formado por elementos repetitivos, incluidos fundamentalmente en cuatro clases principales: 1 elementos interdispersos cortos (SINES), 2 elementos interdispersos largos (LINES), 3 elementos con repeticiones largas (LTR elements), 4 transposones de ADN (Tabla 2). Los ms frecuentes pertenecen a la familia Alu (llamados as por tener la secuencia diana de esta enzima de restriccin) y a LINE1 (LIN1). Todos estos tipos de repeticiones estn relacionados con elementos genticos caracterizados por su capacidad para moverse por el genoma. En general, tienen caractersticas de elementos intercambiables o segmentos de ADN que muestran caractersticas de haber sido en algn momento parte del genoma de seres independientes.
Tipo de elemento repetitivo SINE Alu LINE L1 Transposones LTR Otros TOTAL Nmero encontrado 1.404.300 1.010.400 1.045.800 661.000 308.800 531.900 7.300 3.959.200 Nmero de copias Porcentaje respecto estimado al genoma total 1.841.000 12,5 1.324.600 10,7 1.371.100 18,9 866.600 15,4 404.900 2,7 697.300 7,9 9.600 0,1 4.323.900 42,5

Tabla 2. Elementos repetitivos en el genoma humano (datos tomados de Li et al. 2001. Nature 409: 847-849).

Curiosamente, el fugu un pez de Japn, potencialmente venenoso ha alcanzado una cierta fama, porque cuenta con un genoma al que la mejor definicin que le cuadra es la de conciso. No tiene ADN de deshecho, nada de material intil. Lo que se obtiene es exactamente lo que dice el envase.

Concepto de manipulacin gentica 19

Puede considerarse como el manual perfecto de instrucciones genticas. Ahora bien por supuesto, no es el summun de la creacin si lo fuera l nos comera a nosotros y no al revs. He ah la paradoja. Muchos de estos elementos repetitivos contienen secuencias que indican la presencia de una maquinaria celular capaz de transcribirlos. Algunos de ellos presentan genes de la enzima transcriptasa inversa. Evolutivamente, varios cientos de genes humanos que codifican protenas, en concreto 223 protenas humanas, puede considerarse que proceden de transferencia horizontal de bacterias ocurrida en algn momento de la evolucin de los vertebrados (International Human Genome Sequencing Consortium Nature 2001). Algunos son responsables de caractersticas del metabolismo humano que de no ser as resultaran difciles de explicar, salvo como caprichos de la evolucin. Por ejemplo, nuestra capacidad de metabolizar drogas sicotrpicas, como la enzima oxidasa monoamina involucrada en el metabolismo del alcohol. Henry Gee, subdirector de la revista Nature (2001) hace unas curiosas reflexiones relacionadas con lo que acabamos de exponer. Segn este autor, los seres humanos, nacidos por medios naturales son seres genticamente modificados y segn el mismo autor y en un sentido muy estricto, los ecologistas duros no deberan permitir que sus hijos se casaran con otros seres humanos, si no quieren que la humanidad, en general, se vea contaminada por genes exticos. Sorprendentemente la comparacin de estos elementos repetitivos humanos, con las repeticiones de otros eucariotas muestra diferencias considerables. El genoma humano presenta una alta densidad de estos elementos en la eucromatina, de tal forma que en las regiones donde estn localizados ms genes, el nmero de copias de elementos Alu es mayor. Este hecho no ocurre en los dems eucariotas analizados, aunque es posible que en estos ltimos, su presencia haya sido infravalorada ya que no existen bases de datos completas al respecto. Adems, las copias de los transposones presentes en el genoma humano son ms antiguas y por tanto modificadas, que las existentes en otros eucariotas cuyo origen parece ser ms reciente, presentando menos deleciones que los transposones caractersticos de la especie humana. El genoma humano presenta especialmente repeticiones del tipo Alu y LINE1, como antes indicamos, hecho que no ocurre en otros organismos, aunque se cree que pueda ser una

20 T. Palomeque et al.

caracterstica general de mamferos. Se considera que en mamferos, la relativa falta de elementos con transmisin horizontal puede estar relacionada con la adquisicin de un sistema inmune bien desarrollado, ya que en general, la transferencia horizontal requiere vectores infecciosos como virus, y el sistema inmune no lo permite. A pesar de lo anterior, cuando se comparan estos elementos en ratn y humanos, se observa que los del ratn no han perdido, al menos no tanto como los correspondientes a los humanos, su actividad de transposicin. Por ltimo, y como otra caracterstica importante, es su casi ausencia en los cuatro complejos gnicos que regulan el desarrollo (HOXA, HOXB, HOXC y HOXD). Los interrogantes con respecto a este ADN considerado como basura, son por supuesto demasiado mplios, pero, por otra parte, los conocimientos que se van adquiriendo sobre ellos son tan fascinantes, que han llevado a algunos cientficos a considerar que, quizs, sean los elementos intercambiables los que hayan contribuido a desencadenar todo el potencial del genoma humano, e incluso, los que hayan contribuido en primera instancia a la fragmentacin de los genes (presencia de exones e intrones). Posiblemente en ellos est la explicacin evolutiva de la mayor complejidad del ser humano y de otros organismos superiores. Si no fuera por todos estos elementos, puro deshecho como Alu, quizs habra resultado mucho ms difcil combinar genes y partes de genes para generar formas alternativas de lectura de los mismos genes (Gee 2001). La importancia de toda esta tecnologa y de sus posibilidades no acaba, ni mucho menos en los diversos puntos que someramente hemos analizado. Un campo fundamental, y an casi desconocido, son las protenas especialmente en relacin con sus propiedades e interrelaciones entre ellas. Son tan importantes que su estudio ha acuado un nuevo trmino para designarlo protemica. Antes sola considerarse que un gen equivale a un ARN mensajero y a una cadena polipeptdica, pero la realidad es mucho ms complicada. Ahora se sabe que los genes pueden leerse por partes, que se empalmen y se cortan para generar diversos mensajeros y que los cambios (procesamiento) subsiguientes de las protenas recin formadas para las codifican esos transcritos, pueden alterar su funcin. La consecuencia es que la secuencia de ADN de un genoma cuenta slo una pequea parte de la historia de lo que hace una clula concreta. La

Concepto de manipulacin gentica 21

investigacin debe tener tambin muy en cuenta al transcriptoma (conjunto de ARNm que una clula produce en un momento dado) y al proteoma o conjunto de protenas que se sintetizan en funcin de las instrucciones que hay en esos ARNs. Una de las muchas tcnicas utilizadas para el estudio del transcriptoma es el sistema GeneChip, desarrollado por Affymetrix en Santa Clara, California. Este sistema se basa en la utilizacin de laminillas de vidrio muy pequeas, llamadas microarrays que se revisten con una fina capa de ADNc, que representa los ARNm sintetizados por un tipo concreto de clula. Para utilizar este sistema, se asla el ARNm de su muestra celular, se marca con un marcador qumico y se vierte en la placa. Observando a qu parte del ADNc se empareja y se une la muestra del ARNm, pueden identificarse las secuencias de ARNm de una muestra. Esta marca comercial tiene en el mercado conjuntos de placas que permiten la identificacin de, por ejemplo, ms de 17000 genes relacionados con el cncer. El grupo de D.D. Shoemaker, ha aplicado con bastante xito una tcnica similar a la descrita, al cromosoma 22 (en concreto 22q) y a otras partes del genoma (Shoemaker et al. 2001). El Instituto Nacional del Cncer de Maryland, lleva varios aos realizando lo que se ha llamado ndice de los genes tumorales humanos, identificando hasta la fecha ms de 50.000 genes que estn activos en uno o ms tipos de cncer. Por ejemplo se conoce que en las clulas de cncer de mama actan 5.692 genes, de ellos hay 277 que no se expresan en otras clulas. Sustancias qumicas dirigidas especficamente contra cada una de esas protenas, podran ser medicamentos del futuro. En el estudio y anlisis de las protenas hay adems que tener en cuenta los importantes procesos de su reciclaje, si estos procesos funcionan mal, por exceso o por defecto aparecen diversas enfermedades habituales. Hasta hace unos aos se consideraba que la degradacin de las protenas ocurra exclusivamente en los lisosomas. Sin embargo desde 1988, se sabe que en esta degradacin intervienen adems grandes complejos multienzimticos que forman macroestructuras llamada proteosomas (tamao medio 2.000.000 daltons). Hay diversos procesos celulares fundamentales que dependen de la correcta destruccin de protenas. Por

22 T. Palomeque et al.

ejemplo, la divisin celular, tal como se ha demostrado en la levadura Sacchraromyces cerevisae. Antes de empezar a dividirse una clula, de cualquier tipo animal o de levadura, debe empezar por copiar su ADN, y para iniciarla la clula necesita activar las protenas Cdk de la fase S del ciclo celular, compuestas a su vez por dos protenas, una ciclina y una subunidad de Cdk. Las Cdk de fase S son inactivas porque estn unidas a protenas inhibidoras (CKI) que se sintetizaron durante la divisin celular previa. Para activar las Cdk de fase S, la clula debe desprenderse de las protenas inhibidoras, envindolas a un proteosoma que las degradar. El proceso comenzar con el etiquetamiento de la protena con un marchamo de muerte: la unin a otra protena, una ubiquitina (Ub). El proceso de etiquetado est regulado con una fina precisin, si falla las clulas se dividen de manera incontrolada y pueden producir tumores. Para evitar fallos intervienen al menos, otras tres protenas diferentes: E1, E2 y E3. Algunos virus han desarrollado estrategias para que este proceso funcione mal y poder invadir al organismo, entre ellos el VIH. Este virus para entrar en la clula necesita unirse a una protena que es la CD4 situada en la superficie celular de las clulas T del sistema inmunitario. Ahora bien, esta misma protena bloquea la produccin de virus en una fase posterior. Para evitarlo, el virus ha desarrollado un ingenioso sistema. Produce una protena (Vpu) que se une a CD4 y a otro complejo proteico que hace que CD4 se una a ubiquitina y entre en el proteosoma destructor (revisiones en Koepp et al. 1999, Borman 2000, Goldberg 2000). El conjunto de todas estas nuevas tecnologas, tendrn tambin mucho que aportar en los estudios evolutivos y rboles genealgicos. Desde mediados de los aos sesenta se estn utilizando las diferencias en genes y protenas para trazar parentescos y dependencias en vez de ceirse exclusivamente a los caracteres anatmicos o fisiolgicos (revisin en Woese 1998, Doolittle 1998, 1999). Muy en relacin con este tema estn los proyectos encaminados a lo que se ha llamado la clonacin del arca de No conjunto de proyectos de biotecnologa que intentan evitar que desaparezcan la especies en extincin (revisin en Corney-Smith et al. 1999, Myers et al. 2000, Wilson 2000). Todas las posibilidades y aplicaciones de esta tecnologa que hemos comentado y las que necesariamente se han quedado en el tintero por su

Concepto de manipulacin gentica 23

amplitud, como la produccin de plantas y animales transgnicos para la alimentacin humana, la terapia gnica, inciden directamente en la vida del hombre y de una manera muy directa en algo consustancial a la naturaleza humana: la tica. Su importancia es tal que ha dado lugar a nuevas disciplinas relacionadas con la Biologa, como la Biotica y otras de suma importancia relacionadas con el conjunto de la legislatura internacional y de cada pas. Bibliografa. Avery OT, MacLeod CM, McCarty M. 1944. Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types. Induction to transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from Pneumococcus type III. J. Expl. Med. 79: 137-158. Borman S. 2000. Intricacies of the proteasome. Chemical and Engineering News 78: 43-47. Boveri T. 1902. ber mehrpolige Mitosen als Mittel zur Analyse des Zellkerns. Verh. Phys.-med. Gesellsc. Wrzburg 35: 67-90. Corley-Smith GE, Brandhorts BP. 1999. Preservation of endangered species and populations: a role for genome Banking, somatic cell cloning and androgenesis?. Mol. Repro. Dev. 53 (3): 363-367. Doolittle WF. 1998. You are what you eat: a gene transfer rachet could account for bacterial genes in eukaryotic nuclear genomes. Trends in Genetics 14 (8): 307-311. Doolittle WF. 1999. Phylogenetic classification and the universal tree. Science 284: 2124-2128. Gee H. 2001. Basura, pero nuestra. Periodico El Mundo, 13 febrero del 2001, pg 29. Goldberg AL. 2000. Probing the proteasome pathway. Nature Biotechnology 18: 494-496. International Human Genome Sequencing Consortium.2001. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature 409: 860-920. Koepp J, Harper W, Elledge SJ. 1999. How the cyclin became a cyclin: regulated proteolysis in the cell cycle. Cell 4: 431-434. Li WH, Gu Z, Wang H, Nekruntenko A. 2001. Evolutionary analyses of the human genome. Nature 409: 847-849.

24 T. Palomeque et al.

Morgan TH. 1910. Sex limited in heritance in Drosophila. Science 32: 120122. Morgan TH. 1912. Complete linkage in the second chromosome of the male of Drosophila. Science 36: 710-720. Myers N, Mittermeier RA, Mittermeier CG, Da Fonseca GAB, Kent J. 2000. Biodiversity Hotspots for conservation priorities. Nature 403: 853-858. Shoemaker DD et al. 2001. Experimental annotation of the human genome using microarray technology. Nature 409: 922-940. Venter JC et al. 2001. The sequence of the human genome. Science 291: 1304-1350. Watson JD, Crick FHC. 1953. The molecular structure of nucleic acids. A structure for deoxyribose nucleic acid. Nature 171: 737-738. Wilson EO. 2000. Vanishing before our eyes. Times (Informe especial sobre el da de la Tierra 2000) Abril-Mayo: 29-34. Woese C. 1998. The universal ancestor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 14 (8): 6854-6859.