Você está na página 1de 8

A NR, Silva AB, Pereira G, Costa JN Sucupira rtigos de reviso / review Article

Mtodos Para Determinao da Atividade Antioxidante de Frutos Methods for Measuring Antioxidant Activity of Fruits

Natlia Rocha Sucupiraa*; Aline Braga da Silvaa; Gerlndia Pereiraa; Juliana Nascimento da Costaa
Universidade Federal do Cear, Departamento de Tecnologia de Alimentos, CE, Brasil *E-mail: natsucupira@yahoo.com.br Recebido: 31 de maro de 2012; Aceito: 17 de maio de 2012

Resumo
Os estudos envolvendo compostos antioxidantes naturalmente presentes em alimentos e a preveno ou controle de algumas doenas no transmissveis tm chamado a ateno da comunidade cientca e da populao em geral. Entre os alimentos que contm antioxidantes naturais, as frutas e os vegetais so os que mais contribuem para o suprimento diettico destes compostos, associados aos efeitos bencos sade humana. Os mtodos para avaliao da atividade antioxidante total (AAT) propostos na literatura so diversos, porm alguns so mais apropriados que outros, dependendo da natureza dos compostos presentes na constituio de cada fruta. O presente trabalho realizou uma reviso de literatura com as principais metodologias utilizadas para a avaliao da atividade antioxidante de frutas a m de acompanhar o progresso metodolgico dos principais ensaios antioxidantes atualmente em uso. Palavras-chave: Mtodos. Alimentos. Preveno de Doenas. Antioxidantes.

Abstract
Studies on antioxidants present in foods and the prevention or control of non-communicable diseases have attracted the attention of the scientific community and the general population. Among natural antioxidants, fruits and vegetables are those which contribute most to the dietary supply of these compounds associated with beneficial effects on human health. Methods for evaluation of total antioxidant activity (TAA) proposed by the literature are diverse, but some are more appropriate than others depending on the nature of the compounds present in each fruit. This study reviewed the main methodologies on literature to evaluate the antioxidant activity of fruits, in order to monitor the methodological progress of the main antioxidant assays currently in use. Keywords: Methods. Food. Disease Prevention. Antioxidants.

1 Introduo O consumo de frutas est aumentando nos mercados interno e internacional, devido ao crescente reconhecimento dos benefcios sade e valor teraputico desses alimentos. O Brasil possui grande nmero de espcies de frutas nativas e exticas com potencial interesse para a agroindstria, alm de provvel fonte futura de renda para a populao local. Esses frutos representam uma oportunidade para produtores locais de ganhar acesso aos mercados especiais, nos quais os consumidores do nfase presena de nutrientes capazes de prevenir doenas degenerativas1. O consumo de frutas j no simplesmente resultado de gosto pessoal ou preferncia, mas se tornou uma preocupao de sade, devido presena de importantes nutrientes nas frutas. Evidncias epidemiolgicas tm demonstrado que o consumo regular de frutas est associado reduo da mortalidade e morbidade por algumas doenas crnicas no transmissveis. Compostos toqumicos com ao antioxidante presentes nas frutas, como por exemplo, os polifenis, tm apresentado efeito protetor nestes alimentos, contra doenas crnico-degenerativas2. A capacidade antioxidante pode ser expressa por meio de
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

vrios parmetros, incluindo a remoo de um radical peroxil (ORAC - oxygen radical absorbance capacity, TRAP - total reactive antioxidant potential), a capacidade de reduo de metal (FRAP - ferric reducing antioxidant power, CUPRAC - cupric ion reducing antioxidant capacity), a capacidade de remoo de radical orgnico (ABTS - 2,20-azino-bis (cido 3-ethylbenzthiazoline-6-sulfnico), DPPH - peroxidao do 2,2-difenil-1-picrylhydrazil) e a quanticao de produtos formados durante a peroxidao de lipdeos (TBARS, a oxidao do LDL, co-oxidao do -caroteno)3. Os mtodos FRAP, ABTS, DPPH e ORAC so mais utilizados para determinar a capacidade antioxidante in vitro. O mtodo de branqueamento de -caroteno, que avalia o nvel de inibio dos radicais livres gerados durante a peroxidao do cido linolico, tambm bastante conhecido4. Os mtodos para avaliao da atividade antioxidante total (AAT) propostos na literatura so diversos, porm alguns so mais apropriados que outros, dependendo da natureza dos compostos presentes na constituio de cada fruta. Deste modo, existem mtodos para frutos ricos em compostos hidroflicos e mtodos para frutos ricos em compostos lipoflicos5.
263

Mtodos Para Determinao da Atividade Antioxidante de Frutos

2 Desenvolvimento 2.1 Antioxidantes Um antioxidante pode ser denido como uma substncia que, em baixas concentraes, retarda ou previne a oxidao do substrato6. Algumas caractersticas so necessrias para ser considerado um bom antioxidante, por exemplo, ter a presena de substituintes doadores de eltrons ou de hidrognio ao radical, em funo de seu potencial de reduo; capacidade de deslocamento do radical formado em sua estrutura; capacidade de quelar metais de transio implicados no processo oxidativo; e acesso ao local de ao, dependendo de sua hidrolia ou lipolia e de seu coeciente de partio7. Quanto ao mecanismo de combate aos radicais livres, os antioxidantes podem ser classicados em primrios e secundrios. Outra classicao divide os antioxidantes em sintticos e naturais5. Os antioxidantes so conhecidos pela ao em diferentes nveis do processo de oxidao envolvendo molculas de lipdeos. Eles podem agir diminuindo a concentrao de oxignio; evitando a fase de iniciao da oxidao; quelando ons metlicos; decompondo produtos primrios a compostos que no so radicais8. Existem algumas lacunas com relao aos antioxidantes, tais como: a inexistncia de recomendao para cada antioxidante; falta de padronizao quanto ao real valor antioxidante dos alimentos; e possveis efeitos txicos da administrao de elevadas doses desses compostos5. Os antioxidantes naturais incluem os tocoferois, vitamina C, carotenides e compostos fenlicos. Os compostos fenlicos existentes nas plantas atuam protegendo-as contra injrias em seus tecidos, contra a ao de subprodutos provenientes da fotossntese que podem causar danos e tambm contra plantas herbvoras. Muitos desses compostos tm similaridades quanto estrutura molecular bsica, em que todos possuem pelo menos um anel aromtico com um grupo hidroxila ligado a ele, incluindo, principalmente, os cidos fenlicos e flavonides, que conferem defesa contra o ataque de radicais livres8. 2.1.1 Vitamina C O cido ascrbico considerado um dos mais potentes e o menos txicos dos antioxidantes naturais. um sequestrador muito ecaz de radicais, tais como: o nion superxido, o radical hidroxila, o perxido de hidrognio e o oxignio singlete. Em solues aquosas, tambm combate ecientemente espcies reativas de nitrognio, impedindo a nitrosao de molculas9. O cido ascrbico tambm pode atuar como pr-oxidante. Na presena de metais com mais de um estado de valncia, como o Fe2+ e o Cu+, os radicais ascorbato e hidroxila podem ser gerados, iniciando o processo de peroxidao lipdica11. Entre as principais fontes de vitamina C, esto os frutos ctricos, acerola, goiaba e kiwi, alm de algumas hortalias,
264

como brcolis, couve de Bruxelas, tomate e pimento. 2.2 Carotenides So pigmentos naturais que possuem papel muito importante na siologia dos vegetais, conferindo-lhes cor e participando da fotossntese, conjuntamente com a clorola. Muitos dos carotenides presentes nos vegetais apresentam atividades de pr-vitamina A e antioxidante10. Os carotenides podem capturar ecientemente radicais de oxignio singlete e radicais peroxila. So os mais ecientes inativadores naturais do oxignio singlete, atuando de duas formas diferentes: uma via fsica, que ocorre pela transferncia de energia das molculas de oxignio singlete aos carotenides; e uma via qumica, que constitui aproximadamente 0,5% do total da inativao do oxignio singlete. Sequestram radicais peroxila por interao qumica. Os carotenides possuem carter lipoflico, atuando como antioxidante sobre as lipoprotenas LDL e HDL11. 2.3 Compostos fenlicos Os compostos fenlicos compem a grande classe dos toqumicos alimentares. Sua frmula qumica contm pelo menos um anel aromtico, ao qual est unida uma (ou mais) hidroxila(s). Existe grande variedade de compostos fenlicos, classicados em dois grupos, flavonides e no flavonides12. Estes compostos so considerados como os antioxidantes mais ativos nos vegetais, sendo encontrados com grande frequncia13. No entanto, os estudos sobre os efeitos bencos sade humana s foram intensicados a partir da dcada de 9014. Em geral os compostos fenlicos so multifuncionais como antioxidantes, pois atuam de vrias formas: combatendo os radicais livres atravs da doao de um tomo de hidrognio de um grupo hidroxila (OH) da sua estrutura aromtica, que possui a capacidade de suportar um eltron desemparelhado atravs do deslocamento deste ao redor de todo o sistema de eltrons da molcula; quelando metais de transio, como o Fe2+ e o Cu+; interrompendo a reao de propagao dos radicais livres na oxidao lipdica; modicando o potencial redox do meio; reparando a leso a molculas atacadas por radicais livres11-15. Os compostos fenlicos se apresentam amplamente distribudos entre as distintas partes das plantas, porm sua maior concentrao est nas frutas, nas hortalias e em seus derivados, tais como: azeite virgem de oliva, vinho tinto, ch, cerveja, entre outros. Tambm em cereais e leguminosas so encontrados em concentraes considerveis. Os distintos alimentos de origem vegetal contm diferentes tipos de compostos fenlicos, em concentraes variveis16. 2.3.1 Compostos fenlicos em frutas Os compostos fenlicos so importantes constituintes de vrias frutas e hortalias, sendo que a quanticao dessas substncias revela informaes a respeito da atividade
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

Sucupira NR, Silva AB, Pereira G, Costa JN

antioxidante, qualidade do alimento e dos potenciais benefcios a sade17. Frutas e hortalias, alm de fornecerem componentes importantes para desempenharem funes bsicas do organismo como, por exemplo, cido ascrbico, -caroteno e cido flico, so fontes de compostos bioativos diretamente associados preveno de doenas18. As molculas tpicas de antioxidantes so derivadas das formas isomricas dos polifenois e flavonas, isoflavonas, flavonois, catequinas, cumarinas, cidos fenlicos e outras substncias encontradas nos vegetais19. A avaliao e determinao de polifenis totais em frutas e hortalias produzidas e consumidas no Brasil so essenciais para avaliar os alimentos-fonte de compostos bioativos e estimar sua ingesto pela populao18. A utilizao do mtodo de Folin Ciocalteau permite quanticar o teor de flavonides, antocianinas e compostos fenlicos presentes nas amostras. Esse mtodo foi descrito por Singleton e Rossi, em 196520. 2.4 Mtodos utilizados na avaliao da atividade antioxidante A determinao da atividade antioxidante dos alimentos, alm de predizer o potencial antioxidante do alimento antes de ser ingerido, importante para avaliar a proteo contra a oxidao e a deteriorao do alimento, reaes que podem levar diminuio da sua qualidade e do seu valor nutricional20. Foram descritos numerosos mtodos de mensurao da atividade antioxidante de substncias e alimentos, mas todos eles tm em comum a presena de um agente oxidante, um substrato adequado e uma estratgia de medida do ponto nal20. Os mtodos que determinam a atividade antioxidante de alimentos so classicados em dois grupos: o primeiro se baseia na captura de radicais livres; o segundo, na determinao da oxidao de uma molcula alvo20. As metodologias para a determinao da capacidade antioxidante so numerosas e podem estar sujeitas a interferncias, alm de se basearem em fundamentos diversos. Dessa forma, levando-se em conta os pontos fortes, pontos fracos e aplicabilidade de cada tipo de ensaio3, atualmente preconiza-se a utilizao de duas ou mais tcnicas, j que nenhum ensaio usado isoladamente para determinar a capacidade antioxidante ir refletir exatamente a capacidade antioxidante total de uma amostra21. 2.5 Determinao da captura de radicais livres Nos ltimos anos, desenvolveu-se a tcnica analtica de espectrometria de ressonncia de spin de eltrons (ESR). Como a vida mdia dessas espcies muita baixa (entre 10-9 segundos), no se consegue realizar a medida de forma direta, mas acoplando o radical livre a um composto nitroso capaz de com ele formar um aduto; esse complexo estvel e pode ser detectado por ESR22. Esse mtodo ainda pouco utilizado, em face do alto custo de instrumentao.
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

2.6 Determinao da oxidao de molculas Desenvolveram-se diversos mtodos para medir a atividade dos radicais livres sobre molculas do organismo, como as protenas, os cidos nuclicos e os lipdeos23. Nas tcnicas de determinao in vitro da oxidao lipdica, os substratos lipdicos so diversos: cido linolico, steres metlicos dos cidos graxos e a LDL. Outro substrato empregado so os lipossomos. A oxidao pode ser iniciada pela adio de ons metlicos (Cu+, Fe2+), de AAPH [2,2-azobis(aminopropano) diidroclorido], de perxido de hidrognio, ou ainda pela aplicao de calor22. A oxidao dos cidos graxos insaturados leva sua quebra, com consequente formao, dentre outros compostos, do malonaldedo (MDA), que pode ser determinado pelo mtodo TBARS (Substncias Reativas ao cido Tiobarbitrico), no qual se faz reagir o MDA com o cido tiobarbitrico para formar um pigmento rosado, que apresenta um mximo de absoro a 532-535 nm24. 2.7 Mtodo de co-oxidao do -caroteno/cido linolico Esse tipo de avaliao da atividade antioxidante realizada em meio emulsionado, pela tcnica de co-oxidao de substratos. Foi descrita inicialmente por Lima20 e modicada por Miller25. um mtodo colorimtrico, realizado em comprimento de onda de 470 nm, baseado na leitura referente descolorao da soluo preparada com -caroteno e cido linolico, em meio aquoso. A descolorao ocorre em funo das estruturas radicalares formadas pela oxidao do cido linolico, que atacam as duplas ligaes do -caroteno, perdendo seu cromforo, resultando na descolorao do pigmento alaranjado, caracterstico da soluo. A presena de antioxidantes no sistema protege o cido linolico, prolongando o perodo de formao dos radicais26. Trata-se de um ensaio espectrofotomtrico baseado na oxidao (descolorao) do -caroteno, induzida pelos produtos da degradao oxidativa do cido linolico27, ou seja, o mtodo avalia a atividade de inibio de radicais livres gerados durante a peroxidao do cido linolico4. Normalmente se utiliza o antioxidante sinttico butilhidroxidotolueno (BHT) como padro positivo para comparao dos resultados. Esse mtodo tem sido utilizado para analisar vrias matrizes alimentares, principalmente frutos e sementes ricas em lipdeos20. Esta metodologia, apesar dos inconvenientes como interferncia de substncias oxidantes ou redutoras no ensaio amplamente usada, pois uma vez que no necessita de elevadas temperaturas durante sua execuo, permite a determinao do poder antioxidante em produtos termossensveis5. Este modelo na avaliao da capacidade antioxidante de extratos de canola, girassol e mostarda28, tambm foi empregado na avaliao da capacidade antioxidante dos extratos aquoso e etreo do cotildone da semente rajada de girassol, observando-se uma correlao positiva da atividade
265

Mtodos Para Determinao da Atividade Antioxidante de Frutos

antioxidante com os mtodos ORAC, DPPH e FRAP29. 2.8 Mtodo do radical ABTS O radical ABTS+ produzido a partir de um precursor, o cido 2,2-azino-bis(3-etilbenzotiazolin)-6-sulfnico. O radical ABTS um composto cromforo quimicamente estvel, apresenta alta solubilidade em gua e um mximo de absorbncia a 414 nm, e de medidas secundrias de absorbncia a 645, 734 e 815 nm30. O radical ABTS+ deve ser gerado por reaes enzimticas ou qumicas, podendo ser solubilizado em meios orgnicos e aquosos nos quais a atividade antioxidante pode ser determinada, dependendo da natureza dos compostos antioxidantes31. O mtodo do ABTS (2,2-azino-bis(ethylbenzo-thiazoline6-sulfonic acid) diammonium salt) est baseado na habilidade dos antioxidantes em capturar o ction ABTS+. Esta captura provoca um decrscimo na absorbncia, que lida a partir da mistura do radical com o antioxidante em diferentes tempos, sendo representadas gracamente32. Este mtodo apresenta vantagem em relao a outros, pois pode ser utilizado tanto para amostras hidrossolveis quanto lipossolveis20. Tem sido utilizado em vrios tipos de frutos como acerola, goiaba, camu-camu, aa, maracuj, pitanga, entre outros. O mtodo ABTS+ apresenta excelente estabilidade, sendo um dos testes mais rpidos de atividade antioxidante e que oferece resultados reprodutveis, alm de oferecer vrios mximos de absoro e uma boa solubilidade, permitindo anlises de compostos tanto de natureza lipoflica como hidroflica33. Novos mtodos de gerao do radical ABTS foram desenvolvidos, como a partir da oxidao do sal por persulfato de potssio, cuja reao ocorre na ausncia de luz, por um perodo 12 a 16 horas. A energia de ativao requerida baixa e a reao comea imediatamente, mas no alcana um mximo de absorbncia at o transcurso de 6 horas. O ABTS reage estequiometricamente a uma relao 1:0,5 com o persulfato de potssio34. Esse mtodo baseia-se na gerao do ABTS+, que apresenta cor azul esverdeado, por meio da reao do ABTS com persulfato de potssio que possui absoro mxima em 645, 734 e 815 nm. Com a adio de um antioxidante, ocorre a reduo do ABTS+ a ABTS promovendo a perda da colorao do meio reacional. Com a perda de cor, a porcentagem de inibio do ABTS+ determinada em funo do Trolox, um padro submetido s mesmas condies de anlise do antioxidante. O mtodo aplicvel ao estudo de antioxidantes hidrossolveis e lipossolveis, compostos puros e extratos vegetais. 2.9 Mtodo do radical DPPH O DPPH um mtodo qumico, aplicado para determinar a capacidade antioxidante de um composto em sequestrar
266

radicais livres, sendo um dos mais utilizados, pois ele considerado um mtodo rpido, prtico e com boa estabilidade. O DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil) um radical de nitrognio orgnico, estvel, de cor violeta, que possui absoro na faixa de 515-520 nm. A reduo do radical DPPH monitorada pelo decrscimo da absorbncia durante a reao19. O sequestro de radicais livres um dos mecanismos reconhecidos pelo qual ocorre a ao dos antioxidantes. O mtodo de sequestro do radical livre DPPH pode ser utilizado para avaliar a atividade antioxidante de compostos especcos ou de um extrato em curto perodo de tempo19. O mtodo DPPH tem sido muito utilizado para avaliar a capacidade antioxidante de frutas. O mtodo apresenta vantagens quando os antioxidantes analisados so mais solveis em solventes orgnicos, e por ser um radical livre estvel est disponvel comercialmente, o que evita sua gerao por distintas formas (como ocorre com o mtodo ABTS), alm de facilitar seu uso20. Na presena de um doador de hidrognio ou eltron a intensidade de absoro diminui e a soluo com o radical perde cor, tornando-se amarela, de acordo com o nmero de eltrons capturados, ou seja, quando o eltron desemparelhado do tomo de nitrognio no DPPH recebe um tomo de hidrognio proveniente de compostos antioxidantes, ocorre a mudana de cor19. Analisando polpa congelada de acerola, Kuskoski et al.35 obtiveram 959,1 mg/100g (VCEAC - atividade antioxidante equivalente em vitamina C) aos 30 minutos de reao, usando o mtodo de sequestro do radical DPPH e atividade antioxidante de 1,33 mg/100g TEAC - atividade antioxidante equivalente ao Trolox), expressa em matria fresca. Foi observado que os frutos in natura de acerola tinham a maior capacidade de sequestro de radicais livres, em relao aos extratos de amora, aa e morango. Os autores comentam que esta capacidade deve-se, em grande parte, ao alto teor de cido ascrbico presente na fruta, comprovando a capacidade antioxidante do cido ascrbico4. 2.10 Mtodo ORAC (Capacidade de Absoro de Radicais de Oxignio) O mtodo consiste na medida do decrscimo da fluorescncia das protenas, como consequncia da perda de sua conformidade ao sofrer dano oxidativo36. Utiliza como molcula alvo dos radicais livres de oxignio as cobiliprotenas -coeritrinas ou R- coeritrina (PE), altamente fluorescentes, que contm um pigmento vermelho fotorreceptor (34 grupos prostticos tetrapirrlicos unidos covalentemente). Essas protenas derivam de espcies de algas roxas e cianobactrias e possuem um peso molecular de 250.000 daltons36. Os radicais peroxila diminuem a fluorescncia da coeritrina e da fluorescena. O antioxidante adicionado reage rapidamente com os radicais, doando tomos de hidrognio e
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

Sucupira NR, Silva AB, Pereira G, Costa JN

inibindo a perda da intensidade da fluorescncia. Essa inibio proporcional atividade antioxidante37. O ensaio ORAC usando fluorescena pode medir a atividade antioxidante dos componentes hidroflicos e lipoflicos de uma amostra, usando -ciclodextrina metilada, que aumenta a solubilidade em gua dos compostos lipossolveis, pois uma molcula anptica37. O mtodo ORAC possui uma vantagem muito importante com relao aos outros mtodos de determinao da capacidade antioxidante que usam a absorbncia, que o uso da fluorescncia como medida do dano oxidativo, pois, assim, ocorre menor interferncia dos compostos coloridos presentes nas amostras. Isso fator importante a se considerar quando se analisam alimentos que possuem cor (especialmente frutos e hortalias), suplementos de produtos naturais e vinho tinto. Outra vantagem o uso de radicais peroxila ou hidroxila como pr-oxidantes, conferindo maior signicado biolgico em relao aos mtodos que usam oxidantes no,,necessariamente, pr-oxidantes siolgicos20. 2.11 Mtodo FRAP O mtodo FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) tambm utilizado para medir a capacidade antioxidante de frutos. Neste mtodo, o complexo frrico-tripiridiltriazina (FeIII-TPZ) reduzido ao complexo ferroso (FeII-TPZ), na presena de um antioxidante e em condies cidas. O complexo formado por esta reao possui uma colorao azul intensa, com absoro mxima a 593 nm38. 2.12 Avaliao da atividade antioxidante em frutos Comparando-se os mtodos ABTS e ORAC para a determinao da atividade antioxidante de diferentes espcies frutferas tropicais e ctricas do Estado do Cear, Pereira39 observou que dentre os frutos estudados, o que apresentou maior atividade antioxidante foi a goiaba Paluma, com mdia de 21 M Trolox/g de polpa. O mesmo fruto tambm apresentou maior atividade antioxidante total pelo mtodo ORAC. A maior diferena entre os mtodos utilizados foi para o pomelo, que apresentou a segunda maior atividade antioxidante pelo mtodo ORAC e a oitava posio em ordem decrescente pelo ABTS. Estes resultados sugerem que o mtodo ORAC apresentou-se mais sensvel, sendo capaz de quanticar compostos no determinados pelo mtodo ABTS. A atividade antioxidante de polpas de frutas de grande consumo no mercado sul brasileiro (amora, uva, aa, goiaba, morango, acerola, abacaxi, manga, graviola, cupuau e maracuj) foi determinada aplicando-se o mtodo ABTS. Os valores de atividade antioxidante equivalente ao Trolox obtidos oscilaram entre valores mnimos e mximos de 2,0 e 67,6 Mol TEAC g-1 em peso fresco33. Estudos com goiaba em diferentes estdios de maturao demonstraram que as goiabas de vez apresentaram atividade FRAP de 46,62 M sulfato ferroso/g de fruta, que foi reduzida para 35,00 M sulfato ferroso/g de fruta, nas maduras40.
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

Ao estudar os compostos bioativos e a capacidade antioxidante total de dezoito frutas tropicais no tradicionais brasileiras pelo mtodo ABTS, Runo41 observou valores de atividade antioxidante, desde 6,3M Trolox.g-1de polpa para o umbu, a 152,7M Trolox. g-1 de polpa para o camu-camu, demonstrando a grande variao existente para capacidade antioxidante entre as frutas. Frutos de acerola analisados pelos mtodos DPPH, ABTS e FRAP, apresentaram atividade antioxidante total de 670 64,5 EC50 (g/g DPPH); 96.6 6.1 mol trolox/g; 148 16 mol Fe2SO4. g-1, respectivamente42. Estudos avaliando a capacidade antioxidante de frutas pelo mtodo DPPH, com resultados expressos em percentual de sequestro deste radical, obtiveram atividade antioxidante na seguinte ordem decrescente, goiaba > mamoFormosa > laranja Pera > abacaxi Prola > manga Rosa2. Avaliando-se diferentes frutas nativas, observou-se que a capacidade de sequestro do radical DPPH foi superior para o camu-camu, em relao aos frutos de cambuci, tucum e uxi. Os frutos ara e ara-boi, que no se mostraram muito ecientes atravs dos outros mtodos, apresentaram valores acima da mdia pelo mtodo com - caroteno. Os frutos camu-camu e man-cubiu foram os que apresentaram maiores valores de capacidade antioxidante pelo mtodo de ORAC. Atravs do teste de correlao, obteve-se um r = 0,93, podendo-se armar que houve correlao positiva entre a capacidade antioxidante determinada por meio do mtodo de ORAC e os teores de fenlicos totais43. Foi analisada a correlao de Pearson entre os compostos bioativos e a atividade antioxidante total pelo mtodo ABTS de dezoito frutas tropicais, obtendo-se coecientes de correlaes positivas e signicativas para o teor de vitamina C (0,70) e para o contedo de compostos fenlicos (0,92)41. Quando avaliada a atividade antioxidante total pelo mtodo DPPH, em frutos de dezenove clones comerciais de aceroleira, observou-se correlao positiva signicativa a 1% de probabilidade entre a atividade antioxidante total, polifenis (0,73) e vitamina C (0,78)5. Estudos com varidades de goiabas cultivadas na Colmbia demonstraram correlao signicativa entre os compostos fenlicos totais, o mtodo FRAP e o mtodo DPPH44. Os mtodos utilizados para determinao da atividade antioxidante de frutos, quando aplicados isoladamente, podem no fornecer resultados seguros, devido principalmente complexidade dos compostos com capacidade antioxidante presente nesses vegetais. A escolha desses mtodos deve ser feita rigorosamente, de acordo com os tipos de antioxidantes a serem testados19. 3 Concluso Os mtodos de anlises de atividade antioxidante in vitro tm se tornado relevantes, uma vez que auxiliam na busca por substncias bioativas, bem como na seleo de matria-prima para estudo. A escolha do mtodo importante para comprovar a presena de compostos antioxidantes, que
267

Mtodos Para Determinao da Atividade Antioxidante de Frutos

previnem o ataque de radicais livres e doenas degenerativas. Cada mtodo de anlise possui particularidades, portanto testes preliminares devem ser realizados a m de adequar o ensaio a ser adotado. Devido aos diversos tipos de radicais e aos diferentes stios de ao, dicilmente haver um nico mtodo capaz de representar de forma segura e precisa a verdadeira atividade antioxidante de uma substncia. Referncias
1. Alves DE, Brito EA, Runo MSM, Sampaio CG. Antioxidant activity measurement in tropical fruits: a case study with acerola. Acta Horticulturae 2008;773:299-305. 2. Melo EA, Maciel MIS, Lima VLAG, Nascimento RJ. Capacidade antioxidante de frutas. RBCF Rev Bras Cinc Farm 2008;44(2):193-201. 3. Sanchez-Moreno C, Larrauri JA, Saura-Calixto F. A procedure to measure the antiradical e fcient of poly phenols. J Sci Food Agric 1998;76:270-6. 4. Duarte-Almeida JM, Santos RJ, Genovese MI, Lajolo FM. Avaliao da atividade antioxidante utilizando sistema -caroteno/cido linolico e mtodo de seqestro de radicais DPPH. Cinc Tecnol Aliment 2006;26(2):446-52. 5. Silva WS. Qualidade e atividade antioxidante em frutos de variedades de aceroleira. Dissertao [Mestrado em Tecnologia de Alimentos] - Universidade Federal do Cear; 2008. 6. Halliwel B, Aeschbach R, Loliger J, Arouma OI. The characterization of antioxidants. Food Chem Toxicol 1995;33(7):601-17. 7. Manach C, Scalbert A, Morand C, Remesy C, Jimenez L. Polyphenols: food sources and bioavailability. Am J Clin Nutr 2004;79(5):727-47. 8. Shahidi F. Natural antioxidants: an overview. In: Shahidi F. Natural antioxidants: chemistry, health effects, and applications. Newfoundland: Aocs; 1996. p.1-11. 9. Weber P, Bendich A, Schalch W. Vitamin C and human health: a review of recent data relevant to human requeriments. Int Z Vitam 1996;66:19-30. 10. Rodriguez-Amaya DB, Kimura M. Harvestplus handbook for Carotenoid analysis. Washington: International Food Policy Research Institute; 2004. 11. Podsedek A. Natural antioxidants capacity of brassica vegetables: a review. J Food Compos Anal 2007;40:1-11. 12. Karakaya S. Bioavailability of phenolic compounds. Crit Rev Food Sci Nutr 2004;44(6):453-64. 13. Bianchi MLP, Antunes LMG. Radicais livres e os principais antioxidantes da dieta. Rev Nutr 1999;12(2):123-30. 14. Cerqueira FM, Medeiros MHG, Augusto O. Antioxidantes dietticos: controvrsias e perspectivas. Quim Nova 2007;30(2):441-9. 15. Kyngmi MS, Ebeler E. Flavonoid effects on DNA oxidation at low concentrations relevant to physiological levels. Food Chem Toxicol 2008;46:96-104. 16. LIU F. Antioxidant activity of garlic acid from rose flowers in senescence accelerated mice. Life Sci 2005;77:230-40. 17. Talcott ST, Percival SS, Pittet-Moore J, Celoria C. Phytochemical composition and antioxidant stability of fortied yellow passion fruit (passiflora edulis). J Agric Food Chem 2003;51:935-41. 18. Faller Alk, Fialho E. Disponibilidade de polifenis em frutas e hortalias consumidas no Brasil. Rev Sade Pblica 2009;43(2):211-8
268

19. Prado A. Composio fenlica e atividade antioxidante de frutas tropicais. Dissertao [Mestrado em Cincia e Tecnologia de Alimentos] - Universidade de So Paulo; 2009. 20. Lima A. Caracterizao qumica, avaliao da atividade antioxidante in vitro e in vivo, e identicao dos compostos fenlicos presentes no pequi (caryocar brasiliense, camb.). Tese. [Doutorado em Bromatologia] - Universidade de So Paulo; 2008. 21. Prior RL, Cao G. In vivo total antioxidant capacity: comparison of different analytical methods. Free Radic Biol Med 1999;27(11/12):1173-81. 22. Antolovich M, Prenzler PD, Patsalides E, Mcdonald S, Robards K. Methods for testing antioxidant activity. Analyst 2002;127:183-98. 23. Frei B. Ecacy antioxidants to prevent oxidative damage and inhibit disease. J Nutr 2004;134:3196-8. 24. Snchez-Moreno C. Review: methods used to evaluate the free radical scavenging activity in foods and biological systems. Food Sci Technol Int 2002;8:121-37. 25. Miller HE. Simplied method for evaluation of antioxidants. J Am Chem Soc 1971;48(2):91. 26. Huang LH, Wang BG. Antioxidant capacity and lipophilic content of seaweeds collected from the Qingdao coastline. J Agric Food Chem 2004;58:4993-7. 27. Silva FAM, Borges MFM, Ferreira MA. Mtodos para avaliao do grau de oxidao lipdica e da capacidade antioxidante. Qum Nova 1999;22(1):94-103. 28. Matthaus B. Antioxidant activity of extracts of isolated from residues of oilseeds, such as rapessed or sunflower. Agr Food Ind Hi-Tech 2002;13(4):22-5. 29. Giada MLR. Avaliao da capacidade antioxidante dos compostos fenlicos do cotildone da semente de girassol (Helianthus Annuus L) rajada. Tese. [Doutorado em Cincias Farmacuticas] - Universidade de So Paulo; 2006. 30. Miller NJ, Rice-Evans CA, Davies MJ, Gopinathann V, Milner A. A novel method for measuring antioxidant capacity and its application to monitoring the antioxidant status in premature neonates. Clin Sci 1993;84(4):407-12. 31. Arnao MB. Some methodological problems in the determination of antioxidant activity using chromogen radicals: a pratical case. Trends Food Sci Tech 2000;11(11):419-21. 32. Prez-Jimnez J, Saura-Calixto F. Effect of solvent and certain food constituents on different antioxidant capacity assays. Food Res Int 2006;39:791-800. 33. Kuskoski EM, Asuero AG, Troncoso AM, Mancini Filho J, Fett R. Aplicacin de diversos mtodos qumicos para determinar actividad antioxidante em pulpa de frutos. Cien Tecnol Aliment 2005;25(4):726-32. 34. Henriquez C, Aliaga C, Lissi E. Formation and decay of the ABTS derived radical cation: A comparison of different preparation procedures. Int J Chem Kin 2002;34(12):659-65. 35. Kuskoski EM, Asuero AG, Morales MT, Fett R. Frutos tropicais silvestres e polpas de frutas congeladas: atividade antioxidante, polifenis e antocianinas. Cinc Rural 2006;36(4):1283-7. 36. Prior RL, Cao G. In vivo total antioxidant capacity: comparison of different analytical methods. Free Radic Biol Med 1999;27:1173-81 37. Wu X, Beecher GR, Holden JM, Haytowitz DB, Gebhardt SE, Prior RL. Lipolix and hidrolic antioxidant capaciies os common foods in the united states. J Agric Food Chem 2004;52(12):4026-37. 38. Benzie IFF, Strain JJ. The ferric reducing ability of plasma
UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

Sucupira NR, Silva AB, Pereira G, Costa JN

(Frap) as a measure of antioxidant power: the frap assay. Anal Biochem 1996;239:70-6. 39. Pereira ACS. Qualidade, compostos bioativos e atividade antioxidante total de frutas tropicais e ctricas produzidas no Cear. Dissertao [Mestrado em Cincia e Tecnologia de Alimentos] - Universidade Federal do Cear; 2009. 40. Morgado CMA, Durigan JF, Santos LO. Avaliao da atividade antioxidante em frutos de goiaba de vez e maduros. Anais do 20 Congresso Brasileiro de Fruticultura 54th Annual Meeting of the Interamerican Society for Tropical Horticulture.Vitria-ES; 2008. 41. Runo MSM. Propriedades funcionais de frutas tropicais brasileiras no tradicionais. Tese [Doutorado em Fitotecnia] -

Universidade Federal Rural do Semi-rido; 2008. 42. Runo MSM, Alves RE, Brito ES, Prez-Jimnez J, SauraCalixto F, Mancini-Filho J. Bioactive compounds and antioxidant capacities of 18 non-traditional tropical fruits from Brazil. Food Chem 2010;121:996-1002. 43. Gonalves AESS. Avaliao da capacidade antioxidante de frutas e polpas de frutas nativas e determinao dos teores de flavonides e vitamina C. Dissertao [Mestrado em Bromatologia] Universidade de So Paulo; 2008. 44. Rojas-Barquera D, Narvez-Cuenca CE. Determinacin de vitamina C, compuestos fenlicos totales y actividad antioxidante de frutas de guayaba cultivadas en Colombia. Qum Nova 2009;32(9):2336-40.

UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9

269

Mtodos Para Determinao da Atividade Antioxidante de Frutos

270

UNOPAR Cient Cinc Biol Sade 2012;14(4):263-9