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CURSO TCNICO INTEGRADO EM BIOTECNOLOGIA

Apostila de Bacteriologia Clnica


Aulas Prticas

Disciplina: Microbiologia Aplicada 6 Perodo (BM-161) Prof.: Eliezer Menezes Pereira

2010

AULA 01 Coleta de espcimes das vias areas superior


1) Introduo:

Com exceo dos membros da famlia Enterobacteriaceae, as bactrias Gram-positivas, principalmente os cocos, so os microrganismos isolados com mais freqncia a partir de amostras biolgicas humanas em laboratrios de microbiologia. Essas bactrias esto amplamente distribudas na natureza, e podem ser isoladas de ambientes ou como habitantes comensais da pele, mucosas e outros stios. Os cocos Gram-positivos produzem uma variedade de doenas, incluindo foliculite, furnculo, carbnculo, erisipela e celulite (estreptococos), alm de pneumonia e bacteremia (pneumococos). Portanto, o isolamento e identificao desses microrganismos, a partir de amostras clnicas, sempre deve ser correlacionado com o quadro clnico do paciente. 2) Metodologia: Semeadura em agar sangue.

EXECUO: A. Aos alunos so fornecidos dois swabs para colheita de material ao nvel de loja e superfcie das amgdalas, nariz, conjuntiva ou pele. Um dos swabs passado em um segmento da placa de agar sangue, completando-se a semeadura por esgotamento total, com auxlio da ala de nquel-cromo. Com o outro swab faz-se um esfregao em lmina para posterior colorao pelo mtodo de Gram. B. Todas as placas so identificadas com o nmero da turma, o nome do executor, e o material incubado 37C.

MATERIAL: swabs estreis abaixadores de lngua placas de agar sangue.

FIGURA: Esquema exemplificando os swabs nasal e de orofaringe

3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

AULA 02 Isolamento de microbiota das vias areas superiores: Staphylococcus e Streptococcus.


II-Caractersticas morfo-tintoriais, coloniais, hemolticas e obteno de cultura pura. 1) Introduo:

As bactrias do gnero Staphylococcus, usualmente se apresentam agrupadas em forma de cachos de uva (estafilococos). As espcies de maior importncia mdica so: Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus e Staphylococcus epidermidis. So bactrias piognicas e causam, por exemplo: osteomielite, furunculose, hordolo (terol), impetigo, infeces urinrias, toxi-infeces alimentares. As bactrias do gnero Streptococcus, formam cadeias (estreptococos). As espcies de maior importncia mdica so: S. pyogenes, S. pneumoniae, S. agalactiae, S. mutans. Dependendo da espcie podem causar doenas como: faringite, otite mdia, pneumonia, meningite, septicemia puerperal, endocardite, erisipela. Podem causar, tambm, doenas no supurativas como glomerulonefrite e febre reumtica, que so consideradas seqelas de algumas infeces anteriores. 2) Metodologia:

A- Caractersticas culturais:

De acordo com a exposio realizada pelo instrutor, observar as caractersticas das colnias obtidas em agar sangue, anotando:

a) tamanho aproximado: em mm ou colnias puntiformes. b) produo de pigmento: amarelo ou branco. c) transparncia e brilho: opacas, translcidas, leitosas, brilhantes ou foscas. d) consistncia: quebradias, membranosas, butirosas (como manteiga), viscosas. e) ao sobre o sangue: hemlise total, parcial (esverdeada) ou ausncia OBS: Procurar observar outras colnias encontradas pelos colegas. B- Repique: de hemlise.

De acordo com a orientao do instrutor, proceder:

i. ii. iii.

As colnias maiores (2mm ou mais), repicar para um tubo de gar casoy (TSA). As colnias menores, repicar para caldo glicosado com extrato de levedura. Identificar todos os tubos e incubar 37C, at o dia seguinte (24 horas).

MATERIAL tubos de TSA, inclinado, com extrato de levedura. tubos de caldo TSB placas de agar sangue semeadas no dia anterior. 3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

AULA 03: Isolamento de microbiota de vias areas superiores.


III - Identificao de Streptococcus e Staphylococcus.

1) Introduo:

Para a diferenciao bsica e confirmatria entre os gneros Staphylococcus e Streptococcus, utiliza-se a prova da catalase. A catalase uma enzima produzida pelos Staphylococcus e no produzida pelos Streptococcus. Esta enzima desdobra o perxido de hidrognio (gua oxigenada) em gua e oxignio livre e sua prova positiva pode ser facilmente verificada pela simples visualizao de bolhas que so formadas quando se adiciona gua oxigenada cultura. Uma vez diante de bactrias do gnero Staphylococus, utiliza-se a prova da coagulase para caracterizar Staphylococus aureus, espcie de grande importncia mdica. Esta espcie coagula o plasma pela ao da coagulase. Uma vez diante de bactrias do gnero Streptococus, a capacidade de colnias isoladas de hemolizar hemcias de carneiro presentes em meio slido Agar sangue considerada para iniciar a identificao das espcies, independentemente da atividade biolgica destas hemolisinas. As hemolisinas so enzimas ou toxinas que destroem os glbulos vermelhos e outras clulas. Existem hemolisinas, com diferentes propriedades, que so produzidas no somente pelas bactrias patognicas como tambm pelas no patognicas. Estas bactrias podem produzir halos claros em volta da colnia (halo de hemlise). No que diz respeito s bactrias do gnero Streptococcus, quando o halo totalmente claro, diz-se que a hemlise do tipo beta (-destruio total das hemcias); quando esverdeado, diz-se hemlise do tipo alfa ( destruio parcial das hemcias); e, quando no h hemlise, esta chamada do tipo gama (ausncia de hemlise). Em se tratando de uma bactria beta-hemoltica, utiliza-se a prova da bacitracina que caracteriza Streptocococus pyogenes, (Streptococcus beta-hemolticos do grupo A (sorogrupo A). Um disco de papel filtro contendo 0,05 unidades de bacitracina depositado na superfcie de uma placa com gar sangue semeado previamente com a bactria em estudo. Os estreptococos beta-hemolticos do grupo A so sensveis a bacitacina e, portanto, apresentam zona de inibio de 12 a 17 mm; enquanto que, os demais grupos de estreptococos geralmente no so inibidos. Em se tratando de estreptococos alfa-hemolticos, utiliza-se de maneira semelhante a prova da optoquina (cloreto de etil-hidrocupreina). Se o estreptococo em estudo for o Streptococus pneumoniae (pneumococo) haver, uma zona de inibio de crescimento de 15 a 30 mm.

2) Metodologia: Microscopia de cultura pura:

- Fazer um esfregao da cultura obtida em meio lquido e em meio slido a partir dos repiques realizados na aula anterior. - Corar pelo mtodo de Gram. - Observar e descrever o aspecto morfo-tintorial dos microrganismos. Caracterizao do gnero Staphylococcus

A - Produo da Enzima Catalase A produo da enzima catalase verificada em lmina de microscopia, tocando-se em uma colnia bacteriana, com auxlio de uma agulha bacteriolgica e, posteriormente em uma gota de soluo de perxido de hidrognio a 3%. A formao de bolhas indicativa de reao positiva.

B - xido-Fermentao da Glicose (OF) A utilizao da glicose de modo fermentativo ou oxidativo verificada pela inoculao por picada vertical de uma colnia da amostra, com auxlio de uma agulha bacteriolgica, at 2/3 do meio de Hugh Leifson com 1% de glicose. Para cada amostra devem ser inoculados 2 tubos e um dos tubos deve ser coberto com leo mineral. A leitura deve ser realizada diariamente at 72 h de incubao a 35oC. A mudana da cor do meio de verde para amarelo indicativo da presena de microrganismo sacaroltico. Quando ocorre nos dois tubos indicativa de metabolismo fermentativo (MF), enquanto que a modificao da cor do meio somente no tubo sem leo indicativo de metabolismo oxidativo (MO). A ausncia de alterao na cor do meio indica presena de microrganismo assacaroltico. B Resistncia Bacitracina A resistncia bacitracina verificada utilizando-se discos contendo 0,04U do antibitico em gar Meller-Hinton. A amostra deve ser inoculada de forma a se obter crescimento confluente e o disco deve ser colocado sobre este inculo. O resultado obtido em 24h de incubao, a 35oC. Amostras resistentes bacitracina no apresentam halo de inibio.

Identificao de espcies de Staphylococcus

A- Crescimento das culturas crescidas em meio slido gar-manitol: - Colnias de cor amarela = fermentao positiva de manitol (Staphylococcus aureus) -Connias de cor rosa = fermentao negativa de manitol (SCN) B- Produo de Hemlise A verificao da produo de hemlise realizada por inspeo visual da cultura realizada em meio de gar contendo 5% de sangue desfibrinado de carneiro, aps 24, 48 e 72 h de incubao a 35 C. O aparecimento de zona de hemlise intensa ao redor das colnias at 72 h de incubao indicativo de hemlise positiva, enquanto zona de hemlise fraca ou ausente indicativo de hemlises fraca ou negativa, respectivamente.
o

C- Produo de Coagulase Este teste realizado a partir de 3 colnias isoladas repicadas para tubo contendo plasma de coelho diludo (v/v) em soluo salina a 0,85% (0,2 mL de plasma em 0,2 mL de salina). Aps incubao por 4 h a 37oC, em banho-maria, verificada a produo ou no de cogulo. Resultados negativos devem ser confirmados com 24 h de incubao.

D- Resistncia Novobiocina A resistncia novobiocina verificada utilizando-se discos contendo 5g do antibitico em gar Meller-Hinton. A amostra deve ser inoculada de forma a se obter crescimento confluente e o disco deve ser colocado sobre este inculo. O resultado obtido em 24h de incubao, a 35oC. Amostras resistentes novobiocina apresentam halo de inibio menor ou igual a 16mm. Identificao de espcies de Streoptococcus

A- Hemlise em Agar sangue B- Teste da bacitracina Identificao presuntiva de Streptococcus pyogenes (estreptococos beta hemoltico do grupo A de Lancefield), uma vez que 95% destas amostras so sensveis bacitracina. um teste de mais fcil execuo para os laboratrios de anlises clnicas do que a identificao definitiva feita atravs da grupagem sorolgica. Teste da resistncia a optoquina: colnias alfa-hemolticas de cocos catalase-negativos (caracterizao de S. pneumoniae)

C- Teste da optoquina (para alfa-hemolticos)

Proceder da mesma forma que o anterior. Caso haja resistncia ao antimicrobiano, caracteriza-se amostra de Streptococcus pneumoniae. D Prova do CAMP Utilizado para caracterizao de Streptococcus agalactiae. Em placa de agar sangue, fazer uma estria central com bacterias da especie S. aureus hemoltica usando a ala de platina flambada e, em seguida, fazer estrias perpendiculares a estria central com bactrias do gnero Streptococcus a ser identificada. A prova e considerada positiva quando so formadas regies de hemlise em formato de seta prximo ao crescimento das duas espcies.

3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

AULA 4 Urinocultura quantitativa I


I. Semeadura das diluies da urina

1) Introduo As infeces urinrias esto entre as enfermidades mais freqentes na pratica medica, sendo que o sexo feminino e o mais afetado devido a proximidade do anus com a abertura urinaria e ao fato da uretra feminina ser mais curta do que a masculina entre outros fatores, o que proporciona a predominncia de enterobactrias neste sitio anatmico, sobretudo Escherichia coli uropatognica (UPEC). Outro agente causador de infeco urinria comunitria o Staphylococcus saprophyticus, um SCN. Dentre os germes isolados de infeces urinrias hospitalares, temos diversas enterobactricas, como Proteus, Enterobacter e Citrobacter e tambm os no-fermentadores Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp. Para esta prtica utiliza-se isolamento e contagem em Agar CLED (cystine lactose eletrolyte deficient), que um meio de cultura que inibe crescimento em swarming de cepas de Proteus, alm de isolar e quantificar os microorganismos da urina. um meio de colorao azul clara onde apresenta colorao amarelada para colnias de

microorganismo lactose positivos e colorao azul para lactose negativos. 2) Metodologia Partindo-se de uma amostra de urina colhida em frasco estril e mantida em geladeira at a hora do uso, fazer diluies de 1:10, 1:100 e 1:10.000, conforme abaixo especificado. Anotar nas placas de Agar CLED as diluies 1:100 e 1:10.000. Com nova pipeta estril, aspirar 0,1ml da diluio mais alta, isto , 1:10.000 e semear, espalhando bem com a prpria ponta da pipeta na superfcie da placa indicada. Esgotar bem a pipeta e, com a mesma aspirar igualmente 0,1ml da diluio seguinte (1:100) semeando, do mesmo modo, na placa correspondente. Incubar todas as placas na estufa. Manter por alguns minutos com a parte que contm o agar para baixo 3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

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AULA 5 Urinocultura quantitativa II e Coprocultura I

1) Introduo

Os bacilos Gram-negativos pertencentes s Enterobacteriaceae so as bactrias isoladas com mais freqncia de amostras biolgicas, principalmente fezes. Distribudos amplamente na natureza, esses microrganismos sao encontrados no solo, gua, plantas e no trato intestinal de seres humanos e animais. Portanto, os membros dessa famlia podem ser suspeitos em virtualmente qualquer tipo de doena infecciosa e isolados de qualquer amostra recebida no laboratrio. As Enterobacterias sao bacilos anaerbios facultativos e nao produtores de esporos, so fermentadores de glicose e produtores de endotoxinas e exotoxinas, alm de serem oxidase negativa. Devido ao grande numero de espcies, uma bateria de provas bioqumicas deve ser feita, a fim de caracterizar definitivamente um membro. 2) Metodologia

A- Semeadura de fezes

- A partir de fezes lquidas (diarricas) ou de suspenso de fezes slidas semear, sobretudo os fragmentos de muco e/ou sangue, na superfcie de uma placa de agar-eosinaazul de metileno (EMB ou Teague), procurando fazer semeadura por esgotamento. Incubar a 37C.

MATERIAL Placas com EMB agar (Teague) Tubos com suspenso de fezes

B - Urinocultura quantitativa II. II- Contagem das colnias. Fazer a contagem de colnias nas placas semeadas com as diversas diluies de urina, considerando sobretudo os resultados obtidos em placas que oferecem entre 30 a 300 colnias. Fazer o clculo do nmero de colnias por mL, multiplicando o nmero de colnias contadas por 10 (relao de inculo para 1,0 mL) e pela diluio. Assim, sendo n o nmero de colnias, temos:

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Urina diluida a 1:100: nx10x100 = n de colnias/ml. Urina diluida a 1:10.000: nx10x10.000 = n de colnias/ml.

- Inocular as colnias suspeitas em gar McConkey, Agar manitol-salgado e TSA

3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

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AULA 6 Coprocultura II e Urinocultura III Identificao bioqumica de Enterobacterias


1) Introduo

A diferenciao das bactrias desta famlia realizada com provas bioqumicas (biotipagem). Para a identificao das espcies ou dos tipos bacterianos, podem ser utilizadas provas complementares, que consistem em: testes sorolgicos (sorotipagem: antgenos somticos-O, antgenos capsulares-K, antgenos flagelares-H); e/ou, anlise da reao frente a bacterifagos especficos (fagotipagem). Este conjunto de testes muito utilizado na prtica, principalmente no que diz respeito identificao das categorias de E. coli enteropatognicas para o homem: EPEC, EIEC, ETEC, EHEC, EAEC, etc 2) Metodologia:

- PARA GRAM - : Os alunos examinaro as placas do meio de EMB-agar (coprocultura) anotando a diferena entre colnias lactose positivas (escuras ou somente com centro escuro) e lactose negativas (claras). Da mesma forma, analisar as amostras no gar McConkey correspondente a urinocultura (transparentes no fermentadoras; rosas fermentadoras). - PARA GRAM + : Verificar no gar manitol salgado a fermentao do carboidrato, como j visto. Proceder a testes de coagulase e resistncia a novobiocina (provveis: S. aureus, S. saprophyticus, Enterococcus faecalis - Repicar uma colnia Lac+ e uma Lac- para os meios de TSI, LIA e Citrato. - Identificar os tubos e incubar na estufa a 37C. A - TSI ( Triple Sugar Iron) A utilizao do gar TSI inclinado permite a verificao da produo de gs, de H2S (cido sulfdrico) e fermentao dos acares: lactose, glicose e sacarose. Inculo: a partir de uma colnia isolada, com auxlio de uma agulha bacteriolgica fazer picada central at o fundo do tubo e estriar a superfcie inclinada do gar. A leitura do teste deve ser realizada aps incubao por 24 h a 37oC, com observao da fermentao dos acares pela modificao parcial ou total da cor do meio para amarelo, produo de gs pela formao de bolhas e produo de H2S pelo surgimento de precipitado negro. Os resultados de cada teste devem ser considerados de acordo com o esquema apresentado na tabela a seguir. B - LIA (Lisine Iron gar) A utilizao do meio LIA inclinado permite a verificao da descarboxilao da lisina, deaminao da fenilalanina e a produo de H2S. Inculo: a partir de uma colnia isolada, com auxlio de uma agulha bacteriolgica fazer picada central at o fundo do tubo e estriar a superfcie do gar. A leitura do teste deve ser realizada aps incubao por 24 h a 37oC. A modificao da cor do meio para prpura indicativo de reao positiva de descarboxilao da 13

lisina, enquanto que para amarelo indicativo de reao cida pela utilizao da glicose. A produo de H2S verificada pela formao de precipitado negro. Uma reao avermelhada na superfcie do meio indicativa de reao positiva para deaminao da fenilalanina. C Citrato A utilizao do citrato como nica fonte de carbono verificada em gar citrato inclinado. Inculo: a partir de uma colnia, com auxlio de uma agulha bacteriolgica fazer um risco central na superfcie da poro inclinada do gar. Aps incubao por 24 h, a 37 C, o desenvolvimento de uma colorao azul indicativo de reao positiva. OBS.: Os trs testes (TSI, LIA e Citrato) devem ser inoculados nesta ordem a partir de uma colnia isolada. D - Produo da Enzima Urease A produo de urease verificada pela inoculao de 5 colnias da amostra em 3 mL de caldo uria de Rustigian & Stuart (pH 6,8) acrescido de 2% de uria, por 48 h de incubao a 35oC. A mudana de colorao do meio de amarelo para vermelho ou rosa indicativa de resultado positivo. E Caractersticas bioqumicas nos meios TSI, LIA, Citrato e Uria das principais espcies de Enterobactrias envolvidas em Infeces Humanas. Gneros ou Espcies Escherichia Shigella Salmonella Citrobacter Klebsiella Enterobacter Serratia marcescens Proteus vulgaris Proteus mirabilis Morganella morganii Superfcie A K K K (A) A A K K K K TSI Base A A A A A A A A A A Gs H2S + + + ++ ++ + +/+ + + + + + Superfcie K K K K K ou N K ou N K ou N V V K ou V LIA Base K ou N A K ou N A K ou N A ou K K ou N A A A H2S + + + + + + + + + -/+ +/+/+/-/+ + + + Citrato Uria
o

+/Yersinia K A K A o Adaptado de Diagnostic Microbiology, 5 Ed, 1997. K reao alcalina, A reao cida, N reao neutra, V vermelho (deaminao oxidativa da fenilalanina); ++, reao fortemente positiva; +, 90% ou mais de amostras positivas,-, 90% ou mais de amostras negativas; +/-, 50-90% de amostras positivas; -/+, 50-90% de amostras negativas. Interpretao: TSI: K/K nofermentador, K/A fermentao positiva para glicose e negativa para lactose e/ou sacarose, A/A fermentao positiva para glicose, lactose e/ou sacarose; LIA K/K ou K/N ou N/N descarboxilao da lisina positiva, K/A descarboxilao da lisina negativa e V/A descarboxilao da lisina negativa e deaminao da fenilalanina positiva. 14

3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

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AULA 7 Bacilos Gram-negativos no-fermentadores (BGNNF)


1) Introduo

Os bacilos Gram negativos classificados como no fermentadores (BNFs) so microrganismos aerbios, no esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia atravs de fermentao, degradando-os pela via oxidativa. A identificao dos BNFs sempre foi um desafio para os laboratrios de rotina em microbiologia, considerando que a maioria deles no realiza este tipo de identificao, ou o faz de maneira elementar em virtude da pouca incidncia em amostras ambulatoriais, assim como pela complexidade e elevado custo dos esquemas completos de identificao. A caracterizao deste grupo de bactrias de grande importncia nos casos de infeco hospitalar. Embora a sua incidncia, mesmo em hospitais, seja pequena quando comparada a outros agentes etiolgicos, geralmente eles apresentam resistncia elevada a vrios antibiticos e so capazes de causar infeces graves. Estas bactrias colonizam e causam infeces, em especial, em pacientes graves oriundos de CTI e submetidos procedimentos invasivos, sendo importante classific-los at o nvel de gnero e espcie. Os principais representantes do grupo so: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp, Stenotrphomonas maltophilia, Burkolderia cepacia. 2) Metodologia A Caracterizao de BGNNF A.1 Ausncia de alterao no meio de TSI. A.2 - Crescimento discreto ou ausente em gar MacConkey B Identificao presuntiva das espcies de BGNNF mais freqentes B.1 Teste da produo de oxidase

A produo da enzima citocromo oxidase verificada pela inoculao de uma colnia bacteriana sobre papel de filtro (Whatman no1), utilizando-se uma esptula de plstico. Posteriormente, adiciona-se 1 gota do reagente dimetil--fenilenodiamino a 1% (p/v) em gua destilada esterilizada sobre a colnia. O surgimento de uma colorao prpura at 10 segundos indicar teste positivo.

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B.2 xido-fermentao da glicose (OF) Verificar metabolismo oxidativo, conforme o item 2.1.1.B. B.3 Crescimento a 42oC O crescimento visvel do microrganismo verificado em 3 mL de meio TSB aps um perodo de incubao de 24 h a 42oC em banho-maria. Inculo leve: tocar em uma colnia bacteriana e o inculo no deve deixar o meio turvo. B.4 Meio motilidade Inoculao em Agar semi-slido na forma de espcula. B.5 Descarboxilao da lisina. Idem ao item 2.1.2.H utilizando caldo base Moeller (pH 6,0) com 1% de L(+)-lisina. B.6 Susceptibilidade a Polimixina B Idem ao item 2.1.1.E utilizando disco de polimixina B (300UI). C - Caractersticas bioqumicas gerais das principais espcies de BGNNF encontradas em Infeces Hospitalares. OX Espcie Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannii Acinetobacter haemolyticus Stenotrophomonas maltophilia Burkolderia cepacia + w
o

MOT

PIG

LIS

PB

C42oC

PROD HEM ND + ND ND

+ + +

+ -

ND ND + +

S S S S R

+ ND ND ND ND

Adaptado de Diagnostic Microbiology, 5 Ed, 1997. OX teste da produo de oxidase, MOB mobilidade, PIG produo de pigmento, LIS descarboxilao da lisina, PB O o susceptibilidade a Polimixina B, C42 C crescimento a 42 C / +, 90% ou mais de amostras positivas,-, 90% ou mais de amostras negativas, w, reao fraca, ND no determinado 3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

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AULA 8 Antibiograma
1) Introduo O antibiograma e um teste que oferece como resultado padres de resistncia ou susceptibilidade de uma bactria especifica a vrios antimicrobianos (antibiticos ou quimioterpicos). Seu objetivo e tanto a analise do espectro de sensibilidade/resistncia a drogas de uma bactria quanto a determinao da concentrao mnima inibitria, esta e definida como a concentrao mais baixa de um agente antimicrobiano que impede crescimento visvel de um microorganismo no teste de sensibilidade por diluio em Agar ou caldo. A tcnica de disco-difusao (Kirby-Bauer) e de diluio em caldo so exemplos de Testes de sensibilidade e resistncia a antimicrobianos. Para esses testes deve ter padronizao do meio de cultura, inoculo (escala 0,5 Mc Farland 108 bactrias/mL) e antimicrobianos. Estes ltimos so de acordo com a bactria isolada e fornecido pelo Manual do Clinical and Laboratory Sandards Institute (CLSI). Nele podem-se identificar os grupos de drogas sugeridas para os antibiogramas. A tcnica de disco-difusao e a mais utilizada, padronizada pelo CLSI, e realizada no agar Mueller-Hinton ou sangue. Esta tcnica ainda possibilita a flexibilidade na escolha dos discos, e de baixo custo, fcil execuo e interpretao e tem ainda boa reprodutibilidade. E um teste qualitativo, dando como resultado se o microorganismo e sensvel, intermedirio ou resistente. E necessrio ainda para realizar a tcnica: o inoculo, os discos impregnados com antimicrobiano e a difuso da droga. A ausncia do halo de inibio indica que o microorganismo e resiste a tal antimicrobiano. A presena do halo de inibio indica que o microorganismo pode ser sensvel, intermedirio ou resistente, dependendo do tamanho deste halo. A tcnica de diluio em caldo e a considerada padro ouro, no Brasil e pouco utilizado, e de baixo custo, difcil execuo e tambm e padronizada pelo CLSI. Para realiz-la deve-se determinar a CIM (Concentrao inibitria mnima), dada em g/mL. Este mtodo e quantitativo (breakpoints), dando como resultado que o microorganismo pode ser sensvel, intermedirio ou resistente ao antimicrobiano. 2) Metodologia

- Tcnica de difuso a partir dos discos

- Repicar os bastonetes Gram negativos e/ou Cocos Gram positivos para a soluo salina fazendo uma suspenso prxima ao tubo 0,5 da escala de MacFarland.

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- Umedecer um swab, em condies asspticas, a partir da suspenso microbiana em salina obtida acima e com este swab semear toda a superfcie do meio de cultura na placa de Petri, visando a obteno de crescimento confluente. - Aps a semeadura, pegar os discos de antibiticos com pina estril e coloc-los em espaos eqidistantes. Incubar 37C at o dia seguinte.

3) RESULTADOS E ANOTAES DO GRUPO

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