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Agrupamento de Escolas Lindley Cintra Escola Secundria do Lumiar Biologia

Extraco e Observao de ADN de clulas vegetais do kiwi

OBJECTIVOS: Conhecimento e compreenso de tcnicas e processos de extraco do ADN das clulas. INTRODUO: A informao que programa todas as actividades celulares, e que transmitida de gerao em gerao, encontra-se codificada no ADN contido no ncleo das clulas. O ADN (cido desoxirribonucleico) o suporte universal da informao gentica que define as caractersticas de cada organismo vivo. uma molcula biolgica universal estando presente em todas as molculas vivas. A sua unidade fundamental o nucletido.

Fig.1- molcula de ADN

A localizao do material gentico nas clulas varia consoante os seres. Nos seres procariontes o ADN encontra-se no hialoplasma, constituindo um nucleide. Os seres eucariontes, j apresentam um ncleo individualizado por um invlucro nuclear, que possui inmeros poros, permitindo a comunicao entre o interior e o exterior da clula. No ncleo contm nucleoplasma, onde se encontram massas de material facilmente corvel, a cromatina, que constituda por ADN e protenas. No cido desoxirribonucleico podem identificar-se trs constituintes fundamentais: cido Fosfrico que confere molcula caractersticas cidas. Pentose, a desoxirribose (C5H10O4) tem este nome porque possui menos um tomo de oxignio do que a ribose. Bases azotadas, que se dividem em dois tipos, as bases pricas que so bases de anel duplo, como a adenina e a guanina e as bases pirimdicas que so bases de anel simples, como so o exemplo da timina e citosina;

Fig.2- Nucletido de ADN

O cido desoxirribonucleico possui uma estrutura helicoidal. Na formao de cada nucletido estabelecem-se ligaes entre o grupo de fosfato e o carbono 5l da pentose e entre o carbono 1l da pentose e a base azotada. Por sua vez os nucletidos podem unir-se, formando cadeias polinucletidicas, ligando-se atravs de ligaes covalentes do tipo fosfodister, em que o grupo de fosfato de um novo nucletido liga-se ao carbono 3l da pentose da pentose do ltimo nucletido da cadeia. O crescimento da cadeia polinucletidica efectua-se na direco 5l >3l. O ADN constitudo por duas cadeias de polinucletidos, enrolados em espiral, formando uma hlice dupla. As pentoses e os grupos fosfatos esto orientados para o exterior das cadeias, e as bases azotadas emparelham no interior da hlice, onde se ligam por pontes de Hidrognio. A adenina emparelha com a timina e a guanina associa-se citosina. As duas cadeias de ADN so antiparalelas pois orientam-se em direces opostas. A sequncia nas cadeias nucleotdicas muito importante, pois nelas que est codificada a informao gentica que define as caractersticas de um indivduo.

RESULTADOS:

Camada gelatinosa - ADN

Fase do lcool

Fase de Soluo aquosa

Fig.3 Preparado de kiwi com detergente, NaCl e gua

Fig.4 Ascenso do ADN ao longo das fases (tubo A)

INTERPRETAO e CONCLUSO: Na preparao da soluo foi necessrio um bom e eficiente esmagamento, do kiwi, este processo mecnico foi necessrio para destruir as paredes celulares desta clula vegetal. Aps o esmagamento foi adicionado detergente pasta formada, devido capacidade do detergente de emulsionar lpidos, ajudando na rotura da bicamada de fosfolpidos existente na membrana celular e nuclear permitindo a libertao e disperso do material celular, entre eles o ADN. Foi tambm muito importante a adio Cloreto de Sdio (sal), pois este dissolve-se muito facilmente, dissociando-se em ies Na+ e Cl-. A molcula de ADN possui carga negativa devido ionizao do grupo fosfato, e o sal vai contribuir com ies positivos que neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do ADN, permitindo assim a agregao das molculas de ADN. A gua importante pois serve como meio de soluo. Separao e Observao do ADN (Fig.3): Para a separao do ADN da soluo aquosa preparada, foi utilizado Etanol a 5 oC, o lcool teve uma grande importncia para ser possvel esta extraco de cido desoxirribonucleico, pois este insolvel no lcool, o que permite que o ADN se separe da fase de soluo aquosa e passe para fase de etanol, pois menos denso que a soluo previamente preparada. tambm muito importante que a temperatura em que se encontra o lcool seja baixa (por exemplo nos 5oC) assim o lcool, continuando menos denso que a soluo aquosa, ter uma maior densidade em comparao com a do ADN, permitindo a existncia de um gradiente de densidade. O facto de o etanol ser completamente transparente, permite uma melhor visualizao da ascenso do ADN. Tubo A: Quando foi adicionado o etanol a 5oC (aproximadamente) ao tubo de ensaio que continha a soluo aquosa (fig) o ADN rapidamente se separou da soluo acumulando-se na parte superior desta formando uma camada com um aspecto gelatinoso, essa camada foi depois ascendendo para a fase do lcool, mas agora mais lentamente, acumulando-se na parte superior da fase alcolica. Esta ascenso deve-se diferena de densidades. O etanol ascende devido sua baixa densidade em relao soluo inicial, e o ADN acompanha (fisicamente) este movimento de ascenso do etanol, pois tambm possui uma menor densidade relativamente soluo inicial. O ADN vai relacionar-se com a densidade a que se encontra o lcool. Tubo B: No tubo B (fig)o processo foi idntico, e os acontecimentos tambm, apenas a camada gelatinosa formada, foi maior, isto talvez devido temperatura do Etanol, este deveria estar mais frio aquando utilizado no tubo A, tornando-se mais denso em relao ao do tubo A, permitindo uma melhor ascenso do ADN.

Observao do tubo B com a adio de Fucsina: A Fucsina Bsica uma mistura de rosanilina e pararosanilina, podendo conter tambm Magenta II e neofucsina, tambm um indicador e tem como funo corar o material gentico. No tubo B, aps se ter adicionado o etanol, deixou-se a preparao a repousar para que o ADN ascende-se. Quando a camada de aspecto gelatinoso se encontrava maioritariamente na parte superior da fase do lcool, colocou-se Fucsina, e esperou-se para ver o que aconteceria ao corante. Este no se misturou com todo o preparado, permanecendo,

quase na sua totalidade, na parte superior da fase do etanol, o corante que no se encontrava na zona superior, estava ainda numa zona intermdia da fase do etanol, provavelmente por o ADN se encontrar ainda em ascenso. O permanecimento do corante na zona superior do tubo permitiu comprovar que a camada gelatinosa formada era de facto ADN.

Observao microscpica do ADN: Quando vista ao microscpio a preparao no estava muito clara, e embora se destacassem alguns aglomerados, que se julgava serem de ADN, no se podia ter a certeza de que seriam mesmo, pois aquando a realizao da preparao a Fucsina no foi bem aplicada no se tendo fixado no local onde se encontrava o material gentico e migrando para uma das zonas da lmina, por conseguinte o a Fucsina corou o ADN no nos permitindo saber, com certeza, que agregados seriam aqueles visualizados ao microscpio. Devido falta de clareza da preparao, foi nos permitido comparar a nossa preparao com outras. Ao visualizarem-se novas preparaes viam-se agregados com uma tonalidade rosa forte sobre um fundo rosa mais claro, estes agregados seriam de ADN visto que a Fucsina corou essas estruturas. Esta visualizao permitiu-nos comparar e inferir acerca das estruturas vistas previamente, concluindo que em princpio os agregados visualizados na primeira preparao seriam de ADN.

BIBLIOGRAFIA: http://www.notapositiva.com/pt/trbestbs/biologia/11extrdnacelveg.htm http://www.notapositiva.com/pt/trbestbs/biologia/11extrdnacelveg.htm http://www.slideshare.net/anabzizou/extraco-do-dna-do-kiwi http://www.notapositiva.com/pt/trbestbs/biologia/11extrmoladn.htm http://biologiageologia11b.blogspot.com/2008_09_01_archive.html http://pt.wikipedia.org/wiki/Fucsina_b%C3%A1sica