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Neurofarmacología


Liberación del Ácido γ-aminobutírico (GABA)
Reporte Práctico

Abdieel Esquivel Aguilar, M. Sc.

Sección Externa de Farmacología, Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN, México, D.F.

1.- Introducción compacta, la pars reticulata y a pars lateralis, en la

primera predominan las neuronas dopaminérgicas, en
Los aminoácidos son los componentes de las
tanto la segunda predominan las GABAérgicas. La
proteínas, pero algunos de ellos actúan en el SNC
última es una mezcla de ambos.
como neurotransmisores, entre los cuales se encuentra
Otro neurotransmisor importante es la
el ácido γ-aminobutírico, mejor conocido como GABA,
dopamina (3,4-dihidroxifenil-β-etilamina), una
que se diferencia de los neurotransmisores clásicos
catecolamina intermedia en la biosíntesis de la
(catecolaminas, serotonina, acetilcolina, etc.) en dos
noradrenalina Se han identificado cinco subtipos de
aspectos principales. En primer lugar, su acción se
receptores dopaminérgicos, que se han agrupado hasta
limita al SNC, por lo que, al carecer de efectos
ahora en dos clases, los D1 (que incluyen los subtipos
periféricos, puede esperarse que su toxicidad sea baja,
D1 y D5) y D2 (subtipos D2, D3, y D4). Solo los
por otra parte se concentración es bastante más
receptores D1 y D2 se encuentran expresados en todas
elevada. El GABA pertenece al grupo de
las áreas dopaminérgicas del cerebro, los restantes se
neurotransmisores inhibitorios a nivel del SNC, como
encuentran en áreas restringidas. Y todos están
consecuencia de una hiperpolarización de la membrana
acoplados a proteínas G. Hasta ahora, por regla
neuronal que provoca que la misma sea incapaz de
general, se dice que los receptores D1 son
excitarse.
postsinápticos, mientras los D2, son presinápticos.
Hasta ahora se conocen tres tipos de
Entonces la estimulación de los receptores D2 que se
receptores para éste neurotransmisor, los GABAA; que
encuentran en las terminaciones nerviosas presinápticas
están directamente asociados con un canal de Cl-,
modula negativamente la liberación de la enzima
GABAB; que suelen ser receptores postsinápticos
tirosinhidroxilasa (TH), lo que provoca la disminución
acoplados a las proteínas G que regulan la liberación de
de la liberación de DA. Por el contrario, el bloqueo de
neurotransmisores a través de la regulación de los
los receptores D2 presinápticos equivale a la
canales de Ca+2 o K+ por un segundo mensajero y los
estimulación de los receptores D1 postsinápticos,
GABAC asociados también a un canal de Cl-.
entonces un antagonista postsináptico equivaldría a un
La sustancia nigra, que es el núcleo más
agonista presináptico para estimular la liberación de
grande del mecencéfalo y localiza bilateralmente en la
DA.
parte dorsal de los pedúnculos cerebrales y tiene el
Específicamente el receptor D4 (acoplado a las
contenido más alto de GABA en el SNC. Esta
proteínas Gi) ha demostrado una alta afinidad por
sustancia, que debe su nombre al contenido
antipsicoticos atípicos y una distribución restringida en
considerable de melanina se divide en 3 áreas: la pars

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el cerebro, principalmente en las áreas hipotalámica, (burbujeada con una mezcla de O2-CO2 para evitar
talámicas, bulbo olfatorio, corteza frontal y aglomerados).
recientemente en estriado.
La dopamina parece tener un papel importante
como neurotransmisor en la sustancia nigra. La mayor
cantidad se encuentra en la pars compacta y aunque la
sustancia nigra no forma parte de los ganglios basales
(núcleos derivados del telencéfalo) existe una relación
estrecha entre ambos. Entonces, el GABA y la
dopamina son parte importante en la fisiología de la
sustancia nigra, sin embargo los receptores
Figura 1: Bloque de cortes coronales a nivel cerebral.
presinápticos que regulan la liberación de GABA en
éste núcleo no está del todo estudiado.
Después de este procedimiento se obtuvo la
sustancia nigra, por disección bajo un microscopio
estereoscópico con escapelo oftálmico, siguiendo el eje
2.- Hipótesis
anteroposterior (Figura 2)

La liberación del neurotransmisor GABA está

influenciada por la activación/bloqueo del receptor
dopaminergico D4 en la sustancia nigra pars compacta.

3.- Objetivo

Demostrar que la liberación de GABA puede

verse influenciada por agonistas y antagonistas
dopaminérgicos D4.

4.- Método

Se usaron ratas macho de peso controlado que

oscilaban entre 250-300 g, mismos que se sacrificaron
por dislocación cervical para obtener los cerebros
completos de la cavidad craneal y después se Figura 2: Fotografía y esquema que representa la ubicación de la
sustancia nigra pars compacta.
sumergieron en la solución de KREBS-HANSELEIT.
Del mismo cerebro, se cortaron bloques que incluía el
núcleo a disecar, mismo que se fijó en un soporte Se estabilizaron las rebanadas a 37oC por 20

metálico que se montó en un vibrátomo (Oxford minutos aplicando burbujeo (mezcla de CO2-O2). Se

modelo G) donde se obtuvieron rebanadas por corte realizó el marcaje de las rebanas con ácido γ-

coronal del cerebro con 300µ de espesor (Figura 1) aminobutírico (GABA) tritiado (10 µl en 2 ml de

que se mantuvieron en la solución de KREBS KREB a 370C por 30 minutos. Se lavaron las rebanadas
con KREBS conteniendo ácido nipecótico y

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posteriormente se transfirieron a las cámaras de
perfusión, dejando 20 minutos. El sistema de perfusión
consta de cámaras en paralelo y la componen la bomba
peristáltica, sistema regulador de temperatura, las
cámaras de perfusión y un sistema colector de
fracciones. Una vez transcurrido el tiempo, se
recolectaron las soluciones de cada 2 ml por 3 minutos
cada una, realizando 10 colectas por cada cámara. Las
rebanadas se colocaron al azar en las cámaras de
perfusión después del período de marcaje. Se introdujo
la sustancia nigra. Las muestras fueron tratadas con
soluciones “bajo potasio 1.5mM” y “alto potasio 3.5
mM” para inducir la despolarización y por lo tanto la
liberación de GABA radiactivo.
adicionaron en el mismo sistema de pefusión, el
agonista PD-168077 (100 nM) y el antagonista L-
745870 (10 nM) del receptor D4. Los líquidos
recolectados se transfirieron a viales d vidrio y se les
adicionó el líquido especial para el centelleo.
Finalmente se realizó el monitoreo de la reactividad en
el contador de centelleo.
5.- Resultados y Discusiones
En la Figura 3 se muestran los resultados
obtenidos en el monitoreo de la liberación de GABA
radiactivo y su respuesta al utilizar el agonista
dopaminérgico PD-168077 y en antagonista L-745870.
4.0
3.5
3.0
liberación fraccional
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
0 1 2 3 4 5 6 7
Fracción
Figura 3: Influencia en la liberación de GABA por PD-168077 y L-
745870 en la sustancia nigra.
Luego de la perfusión con “alto potasio” se
observa una clara inducción en la liberación de GABA
radiactivo en todas las recolectas, esto se explica por el
hecho de que la despolarización originada abre canales
de Ca2+ produciendo la liberación de GABA de las
terminales presinápticas. La liberación basal de GABA
declina gradualmente (aunque siempre se encuentra por
encima del valor cero) con el tiempo en todos los
casos. Se observa que al administrar el agonista PD-
168077, la tendencia de liberación de GABA es similar
a la del control, no siendo así al administrar el
antagonista L-745870 que provoca un aumento en la
liberación. Lo cual explicaría que al inhibir la
Además se liberación de dopamina en las terminales sinápticas,
ésta repercute aumentando la liberación de GABA, es
decir, que partiendo del hecho de que la
despolarización por “alto potasio” no sólo induce la
liberación de GABA de las terminales nerviosas
correspondientes, sino también de la dopamina, ambos
presentes en la sustancia nigra, lo cual hace suponer
que podría existir de circuito de regulación entre la
liberación de estos neurotransmisores.
6.- Conclusión
La liberación de GABA se ve influenciada por
la liberación/bloqueo de dopamina, presuntamente por
receptores ubicados en la presinápsis (D4), lo cual hace
control
suponer que ésta ubicación funciona como un circuito
PD
PD+L
L
de regulación entre éstos neurotransmisores.
7.- Referencias
Feldman, R., Meyer, J., Quenzer, L., Principles of
Neurophycopharmacology, SINAUER Ass. Inc., (1997).
Avendaño, C., Introducción a la Química Farmacéutica, Mc Graw
Hill, (2005).
8 9 10 11 Goodman & Gilman, The Pharmacology Basis of Therapeutics, Mc
Graw Hill, (2006).
Neve, K., The Dopamine Receptors, HUMANA Press, (1997)
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