1.

Objetivo da Prtica:

A partir de uma soluo amostra contendo quatro diferentes solventes orgnicos, identificar cada composto de acordo com a anlise do cromatograma da amostra, associando a ordem de sada das substncias com o tipo de coluna utilizada (polar ou apolar) e seus pontos de ebulio, confirmar esta composio utilizando-se de coinjees de mistura de amostra+solvente, e por fim, verificar possibilidades de melhora da resoluo de cromatogramas, com alterao nas rampas de temperatura.

2.

Descrio da Amostra: Componentes Amostra Acetona Metanol Etanol Cicloexano da MM (g/mol) 58,08 32,04 46,07 84,16 P.E (oC) 56 65 78 81

Tabela 1: Caractersticas fsico-qumicas dos solventes

Acetona

Metanol

Etanol

Cicloexano

3. 3.1.

Materiais e Mtodos: Materiais:

- 2 seringas de 10 uL - Solues de Metanol, Etanol, Hexano e Acetona - Soluo Amostra 3.2. Equipamentos Utilizados:

- Cromatgrafo Gasoso HP 6890 Plus - Coluna HP5 - Coluna DB WAX

4.

Metodologia:

Primeiramente, limparam-se as duas seringas com soluo de metanol e rinsouse cada uma seis vezes com a soluo de amostra, que foi a primeira soluo a ser ingetada.

Com o cromatgrafo j ligado e configurado com os parmetros e mtodos necessrios para esta prtica, realizou-se a injeo simultnea de 1L da soluo de amostra nas duas colunas (DB WAX e HP5), utilizando-se o mtodo de injeo aramostra-ar e ao final da corrida, observou-se os cromatogramas para anlise de ordem de sada das substncias e identificao das mesmas. Para confirmao da ordem definida anteriormente, foram feitas co-injees. Para isto, foi injetado tambm simultaneamente nas duas colunas 0,5L de amostra mais 0,5 L de um dos solventes mais 3 L de ar divididos em 3 partes de tal forma que a injeo seguisse o padro de ar-amostra-ar-solvente-ar, para 3 solventes, de forma que, com a adio do solvente juntamente a amostra, fosse possvel a identificao do mesmo na soluo de amostra, devido ao aumento da rea de seu pico no cromatograma. Identificadas todas as substncias componentes da amostra, observou-se novamente o cromatograma da mesma a fim de redefinir parmetros que pudessem melhorar sua resoluo ou tempo de corrida, e estes parmetros foram alterados e testados para verificar se houve ou no, otimizao do cromatograma. Especificaes do Mtodo CG Quali 2"

5.

Nome do mtodo: CG Quali 2 Temperatura de injeo: 250 C Temperatura dos detectores: Ionizao por chama (DIC): 300C Condutividade Trmica (TCD): 250C Posies: Front inject --- coluna DB WAX --- DIC Back Inject --- coluna HP5 --- TCD Programao de Temperatura do Forno: Temperatura inicial de 40C e mantm por 2 minutos. Aps os 2 minutos a temperatura aumenta em uma taxa de 35C por minuto at chegar aos 120C.

6.

Resultados

Em todos os cromatogramas: FID2B, Back Signal corresponde coluna DB WAX. TCD1 A, Front Signal corresponde coluna HP5.


pA 25000 20000 15000 10000 5000

Injeo da amostra
F 2B B S (20112-01\T S E ID , ack ignal E T 000017.D )

2.562

3.012

3.110

2.379 2.431

2.749 2.823

0 0.5 T D A F S (20112-01\T S E C 1 , ront ignal E T 000017.D ) 25 V 200 150 100 50 1 1.5 2

3.292

3.466 3.497

3.744

4.155
3.5 4 m in

2.5

2.653 2.792 2.857

-50 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 m in

Cromatograma 1: Injeo da amostra

Solvente Ciclohexano Acetona Metanol Etanol

pA 25000 20000 15000 10000

Tempo de reteno (minuto) Coluna DB WAX 2,562 3,012 3,744 4,155

2.606

Tempo de reteno (minuto) Coluna HP5 3,701 2,857 2,653 2,792

Tabela 2: Tempos de reteno da injeo da amostra

1 Co-injeo: amostra mais ciclohexano

F 2B B S (20112-01\T S E ID , ack ignal E T 000019.D )

2.563

3.701

2.970

2.386

0 0.5 T D A F S (20112-01\T S E C 1 , ront ignal E T 000019.D ) 25 V 80 60 40 20 0 -20 -40 -60 0.5 1 1.5 2 1 1.5 2

2.739 2.788

5000

3.409 3.440 3.511

3.785

2.5

3.5

m in

2.681 2.801

2.632

2.881

3.743

2.5

3.5

m in

Cromatograma 2: Co-injeo da amostra mais ciclohexano

Solvente Ciclohexano Acetona Metanol Etanol

Tempo de reteno (minuto) Coluna DB WAX 2,563 2,970 3,511 3,785

Tempo de reteno (minuto) Coluna HP5 3,743 2,881 2,681 2,801

Tabela 3: Tempos de reteno da co-injeo amostra mais ciclohexano

3 Co-injeo: amostra mais acetona

F 2B B S (20112-01\T S E ID , ack ignal E T 000020.D )

20000 15000 10000 5000 0 0.5 T D A F S (20112-01\T S E C 1 , ront ignal E T 000020.D ) 25 V 100 80 60 40 20 0 -20 -40 -60 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 m in 1 1.5 2 2.5

2.533

2.979

pA 25000

3.394 3.428

2.719

3.231

3.515

3.799

3.5

m in

2.675

2.808

2.883

Cromatograma 3: Co-injeo da amostra mais acetona

Solvente Ciclohexano Acetona Metanol Etanol

Tempo de reteno (minuto) Coluna DB WAX 2,533 2,979 3,515 3,799

2.627

Tempo de reteno (minuto) Coluna HP5 3,720 2,883 2,675 2,808

Tabela 4: Tempos de reteno da co-injeo amostra mais acetona

3.720


pA 4000 3500 3000

4 Co-injeo: amostra mais etanol

F 2B B S (20112-01\T S E ID , ack ignal E T 000021.D )

2.533

2000 1500 1000

2.955

2500

0 0.5 T D A F S (20112-01\T S E C 1 , ront ignal E T 000021.D ) 25 V 80 1 1.5 2 2.5 3

3.396 3.426

500

3.484

3.774

3.5

m in

40 20

2.884

2.681

60

2.816

-40 -60 0.5 1 1.5 2 2.5

2.634

-20

3.718

3.5

m in

Cromatograma 4: Co-injeo amostra mais etanol

Solvente Ciclohexano Acetona Metanol Etanol

Tempo de reteno (minuto) Coluna DB WAX 2,533 2,955 3,484 3,774

Tempo de reteno (minuto) Coluna HP5 3,718 2,884 2,681 2,816

Tabela 5: Tempos de reteno da co-injeo amostra mais etanol

Tentativa de aprimoramento do mtodo

Programao: Temperatura inicial de 60C, mantm por 2 minutos, aps esse tempo a temperatura aumenta numa taxa de 35C por minuto at os 120C, e nesta temperatura permanece por mais um minuto. Solvente Ciclohexano Acetona Metanol Etanol Tempo de reteno (minuto) Coluna DB WAX 2,277 2,485 2,888 3,201 Tempo de reteno (minuto) Coluna HP5 3,170 2,650 2,534 2,599

Tabela 6: Tempos de reteno da tentativa de aprimoramento do mtodo

F 2B B S (20112-01\T S E ID , ack ignal E T 000022.D )

2.277

40000 30000 20000 10000 0 0.5 1 T D A F S (20112-01\T S E C 1 , ront ignal E T 000022.D ) 25 V 200 150 100 50 0 -50 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 m in 1.5 2

2.577

2.888

3.201

50000

2.485

pA

3.702 3.736

2.786

3.467 3.542 3.605

2.179 2.208

2.385

2.681

3.906

4.026

4.340 4.397 4.448

2.5

3.5

4.5

m in

2.650

2.534 2.599

Cromatograma 5: Tentativa de aprimoramento do mtodo

7.

Tarefas

a) Relacionar a polaridade dos componentes da amostra com os tempos de reteno, e com a polaridade da fase? Na coluna HP5 de carter apolar, o esperado que os compostos mais polares saiam primeiro e os menos polares saiam por ltimo, j na coluna DB WAX de carter polar, esperasse justamente o contrrio. Por co-injees, determinou-se a ordem de sada da amostra nas duas colunas, como mostra a tabela abaixo: CICLOHEXANO ACETONA 1 2 4 3 METANOL 3 1 ETANOL 4 2

DB WAX HP5

Analisando a estrutura qumica das substncias vemos que na ordem crescente de polaridade temos: Ciclohexano<Acetona<Etanol<Metanol Conforme o esperado, o ciclohexano por ser o menos polar, foi o ltimo a sair na coluna HP5 e o primeiro a sair na DB WAX, assim como a acetona que foi a penltima a sair na HP5 e a segunda na DB WAX. O comportamento inesperado veio na ordem dos lcoois. Na coluna DB WAX, era esperado que o metanol, por ser mais polar que o etanol , sasse primeiro, mas isso no foi observado. A explicao para isso, que essas duas substncias apresentam a mesma funo qumica (sries homlogas), logo, a de maior ponto de ebulio sempre sair por ltimo independentemente da coluna utilizada.

2.508

3.170

b) Relacionar o ponto de ebulio e a massa molecular dos componentes da Amostra com os tempos de reteno obtidos para uma dada temperatura. O ponto de ebulio uma caracterstica muito importante em cromatografia gasosa. Uma substncia com alto PE demora mais tempo para evaporar, e entrar na coluna, logo, esperado que quanto maior o PE, maior o tempo de reteno no cromatograma. Porm este fenmeno s acontece quando se trata de sries homlogas, na prtica realizada o principal parmetro influenciador no foi a temperatura, e sim a polaridade das substancias e das colunas, logo, analisando-se os PEs, o esperado no aconteceu. Apenas quando comparado o metanol e o etanol, o fator do ponto de ebulio foi levado em conta j que apresentam a mesma funo qumica. c) Qual o efeito da polaridade dos componentes da amostra sobre o tempo de reteno? Est coerente com o esperado? Com o aumento da polaridade das substncias, em uma coluna polar, cresce a interao com a fase estacionria, logo, o tempo de reteno cresce com o aumento da polaridade, j em uma coluna apolar o contrrio ocorre, com o aumento da polaridade, diminuem-se os tempos de reteno. Os resultados obtidos foram coerentes, exceto os tempos de reteno dos lcoois na coluna DB WAX. Por ser uma coluna polar, era esperado que o metanol, composto mais polar que o etanol, tivesse o maior tempo de reteno, e isso no foi observado. d) Qual o efeito da temperatura do forno das colunas sobre a resoluo do cromatograma? A temperatura em cromatografia gasosa um dos principais parmetros influenciadores sobre o cromatograma. Com o aumento da temperatura, aumentasse a energia cintica das molculas e isto as dificulta de serem adsorvidas pela fase estacionria, ou seja, o aumento da temperatura desloca o equilbrio para a fase mvel e com isso os tempos de reteno diminuem. Esse aumento de temperatura pode provocar uma melhora na resoluo, na medida em que com a diminuio do tempo de reteno o espalhamento menor, ou uma piora na resoluo, devido ao um aumento na probabilidade de co-eluio. e) Discutir as vantagens do mtodo de anlise qualitativa utilizado nessa prtica Como vantagem, pode-se citar a eficincia na determinao do tempo de reteno de uma dada espcie em uma amostra. Ao injetar-se uma amostra, a co-injeo de certa substncia presente na amostra se mostra o mtodo mais eficiente para a contestao de seu tempo de reteno. A injeo de um padro pode levar o analista ao erro, uma vez que existem substncias com tempo de reteno muito prximos. Utilizando uma co-injeo, teremos certeza que o pico que aumentar sua rea, o pico referente substncia co-injetada.

8.

Discusso

Para identificar qualitativamente cada composto da amostra, injetou-se a amostra pura e depois uma mistura da amostra com o padro de um composto. Assim, o sinal

que sofresse um aumento na resposta comparado ao cromatograma da amostra pura, seria o sinal do analito. Dessa forma foi possvel identificar o tempo de reteno de cada componente da amostra. A partir dos tempos de reteno obtidos, observamos que na coluna HP5 a ordem de sada dos compostos foi primeiro os mais polares e por ltimo os menos (ordem decrescente de polaridade). O metanol o composto mais polar e foi o primeiro a chegar ao detector, j o ciclohexano, que o composto menos polar, foi o ltimo a alcanar o detector. Tal ordem explicada pela natureza apolar da fase estacionria, que retm durante um maior tempo os compostos menos polares. Na coluna DB WAX ocorre praticamente o inverso, por ser tratar de uma coluna com a natureza da fase estacionria apolar, o esperado era que o mais apolar sasse primeiro (ciclohexano) e o mais polar (metanol) sasse por ltimo. Porm tnhamos duas substncias que possuam a mesma funo qumica (sries homlogas) com polaridades prximas, e neste caso o fator para determinar a ordem de sada no mais polaridade e sim o ponto de ebulio. Como o etanol apresenta maior ordem de ebulio este composto chegou ao detector depois do metanol. Com isso a ordem de sada foi respectivamente: ciclohexano, acetona, metanol e etanol. A primeira varivel a interferir no tempo de reteno a polaridade, a segunda a massa molecular e ponto de ebulio dos componentes da amostra. O metanol e o etanol possuem polaridade parecida e, assim, o que determina os seus tempos de reteno a massa molecular e ponto de ebulio. Por possuir uma menor massa e um menor ponto de ebulio, o metanol possui um menor tempo de reteno comparado ao etanol, mesmo em colunas com polaridades diferentes. Outro caso importante de relatar a presena de gua na amostra, j que a mesma absorveu umidade devido ao perodo de exposio atmosfera ambiente. Porm, a gua s foi detectada no detector de condutividade trmica que estava ligado coluna HP5. A gua no foi detectada no cromatograma da coluna DB WAX, pois ela estava conectada a um detector de ionizao por chama e este no consegue detectar produtos de combusto, como no caso a gua. Na tentativa de aprimoramento do mtodo, analisamos o cromatograma 1. Para melhorar o cromatograma da coluna HP5, resolvemos aumentar a taxa de aquecimento aps a sada do terceiro pico (acetona), para assim acelerar a corrida e aproximar o pico relacionado ao ciclohexano, j que o mesmo estava muito afastado dos demais picos. J para o cromatograma da coluna DB WAX, como os picos apresentavam uma boa separao entre eles, resolvemos no alterar a rampa de aquecimento, pois essa alterao poderia piorar o cromatograma. Optamos ento em apenas aumentar a temperatura inicial, para assim diminuir o tempo da corrida. Devido falta de tempo, escolhemos tentar apenas aprimorar o cromatograma da coluna DB WAX e como se pode observar pelo cromatograma 5, conseguimos no s melhorar o cromatograma alvo, como o relacionado coluna HP 5. A mudana da temperatura inicial de 40C para 60C fez com que os tempos de reteno de todos os compostos diminussem, aproximou os picos sem haver co-eluio, alm de afin-los, deixando-os mais altos, melhorando assim a relao sinal rudo. A anlise qualitativa atravs da cromatografia gasosa convencional se mostra eficiente por ser simples, rpida e confivel, pois necessita apenas de padres dos componentes os quais se quer identificar.

9.

Concluso

A cromatografia gasosa clssica um mtodo muito utilizado para anlises quantitativas e qualitativas. Em relao qualitativa, esta se torna muito eficiente e rpida quando utilizada a tcnica de co-injeo. Pela simplicidade, esta tcnica possibilita tranquilamente a identificao e a determinao dos tempos de reteno dos compostos em uma amostra, necessitando apenas de padres das substncias as quais se quer identificar.

10.

Bibliografia

Disponvel em: http://www.scielo.br%2Fscielo.php%3Fpid%3DS010040422008000800047%26script% 3Dsci_arttext&h=vAQEL7_W4 Acessado em 10/06/2012. APOSTILA, Cromatografia Gasosa- Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia verso 2011.

Cromatografia Gasosa Anlise Qualitativa

Grupo: Clara Mello Gabriela Duarte Pedro Raychtock Thalmo Uriel Thyago Andrade Turma: QM 381 Professores: Ademrio Iris Ana Paula