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Cincia e Tecnologia de Alimentos

ISSN 0101-2061

Validao de uma metodologia analtica para determinao de clcio em produtos crneos


Validation of a analytical methodology for calcium determination in meat products
Rafael BURIN1, Vivian Maria BURIN1, Patrcia TAHA1, Marilde Terezinha BORDIGNON-LUIZ1*
Resumo
O objetivo deste trabalho consiste em validar uma otimizao para uma metodologia tradicional de determinao de clcio em produtos crneos. No Brasil, esta metodologia descrita pelo Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento e utiliza como elemento filtrante, em uma das etapas de filtrao, fibras mdias de amianto, um material txico. Na metodologia proposta neste trabalho, estas fibras foram substitudas por papel filtro quantitativo. Os testes realizados foram: linearidade, sensibilidade, limite de deteco e de quantificao, preciso, exatido, especificidade, robustez e incerteza da medio. A metodologia otimizada proposta neste trabalho mostrou-se sensvel, precisa, exata, especfica e robusta. Pode-se considerar esta metodologia adequada para determinar a concentrao de clcio em produtos crneos. Palavras-chave: validao de metodologia; clcio; produtos crneos.

Abstract
The aim of this study was to validate an optimization of a traditional methodology of calcium determination in meat products. In Brazil, the method of calcium determination described by the Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento uses asbesto fibers in a stage of filtration, which is toxic. In the methodology proposed in this work, we replaced these asbestos fibers with quantitative filter paper. To evaluate the analytical methodology proposed, we considered: linearity, sensitivity, detection, quantification limits, precision, accuracy, specificity, robustness, and inaccuracy of measurements. The optimized analytical method proposed in this work proved sensible, accurate, exact, robust, and linear. Considering the determination of the calcium content in meat products was considered suitable. Keywords: validation methods; calcium; meat products.

1 Introduo
Em produtos crneos, a concentrao de clcio depende do tipo de embutido e da quantidade de carne mecanicamente separada (CMS) utilizada para a sua fabricao. A legislao brasileira limita o uso de CMS nestes produtos (SOUZA et al., 2003). A metodologia analtica para determinao de clcio em produtos crneos recomendada pelo Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento (MAPA), descrita em Brasil (1999), descreve em uma das etapas de filtrao, a utilizao de cadinho de Gooch e, como elemento filtrante, fibras mdias de amianto. Estas so material txico que, segundo Dacri (2003), pode causar asbestose pulmonar, cncer de pulmo, mesoteliomas e doenas pleurais benignas, como placas pleurais e limitaes crnicas de fluxo areo. fundamental que os laboratrios disponham de meios e critrios objetivos para demonstrar, por meio da validao, que as metodologias de ensaio que executam conduzem a resultados confiveis e adequados qualidade pretendida (RIBANI, 2004). Se uma metodologia for modificada para atender aos requisitos especficos ou um mtodo novo for desenvolvido, o laboratrio deve assegurar que as caractersticas de desempenho do mtodo atendam aos requisitos para as operaes analticas pretendidas (INMETRO, 2003). Os termos validao e garantia da qualidade so extensamente usados. Segundo a Associao Brasileira de Normas Tcnicas (NBR ISO/IEC 17025), validar um mtodo confirmar - por exame e fornecimento de evidncia objetiva - que os requisitos especficos para um determinado uso pretendido so atendidos. Validao de metodologias analticas o primeiro passo para a garantia da qualidade em um laboratrio. A garantia da qualidade analtica o conjunto completo das medidas que um laboratrio deve assegurar, a fim de conseguir dados de alta qualidade. Alm do uso da validao e/ou das metodologias padronizadas, h outras medidas que devem ser seguidas, como: procedimentos eficazes de controle da qualidade interno (uso de materiais de referncia, calibrao de equipamentos, controle de documentos, etc.); participao em testes de proficincia, e acreditao a um organismo internacional, normalmente NBR ISO/IEC 17025 (TAVERNIERS; LOOSE; BOCKSTAELE, 2004). Os critrios de seleo para o procedimento apropriado de validao dependero das condies do laboratrio, do mtodo utilizado, do tipo de amostra, dos componentes do mensurando, da calibrao dos equipamentos e da disponibilidade de materiais de referncia certificados.

2 Material e mtodos
2.1 Material Para a determinao de clcio, foi utilizada uma amostra de salsicha, adquirida em mercado local. O padro utilizado foi

Recebido para publicao em 15/10/2007 Aceito para publicao em 27/5/2008 (002917) 1 Departamento de Cincia e Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal Santa Catarina UFSC, CEP 88034-001, Florianpolis - SC, Brasil, E-mail: bordign@cca.ufsc.br *A quem a correspondncia deve ser enviada

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Validao de metodologia para clcio

Material De Referncia Certificado (MRC), carbonato de clcio (FLUKA) pureza de 99,70% e incerteza expandida de 0,13%, com nvel de confiana de 95%. A concentrao da soluo padro foi de 1,0013 mg de clcio/mL. Os demais reagentes utilizados foram de qualidade p.a. e os equipamentos e vidrarias foram calibrados segundo a Rede Brasileira de Calibrao (RBC). 2.2 Mtodos Procedimento para anlise A determinao de clcio para produtos crneos foi realizada em amostra de salsicha, segundo metodologia proposta por Brasil (1999) com modificaes. Uma das etapas de filtrao deste mtodo utiliza cadinho de Gooch e, como elemento filtrante, fibras mdias de amianto, que foram substitudas por papel filtro quantitativo. A amostra (5 g) foi pesada (Balana analtica Shimadzu AY-220, Japo) em cadinho, carbonizada em placa aquecedora (Tecnal, Brasil), incinerada em forno mufla (Quimis, Brasil) (550 5 C) e esfriada a temperatura ambiente. Em seguida, foi adicionado cido clordrico concentrado (5,0 mL) e este foi evaporado em chapa aquecedora (100 C). Nova adio de cido clordrico concentrado (2,0 mL) foi realizada e o cadinho foi coberto com vidro relgio e aquecido em placa aquecedora (100 C) durante 5 minutos. Aps resfriamento da amostra, o cadinho foi lavado com gua deionizada, seguido de uma filtrao em papel filtro qualitativo. O filtrado foi recolhido em um balo volumtrico de 100 mL. Esse material foi denominado como soluo estoque. Foram transferidos 50,0 mL da soluo estoque para um erlenmeyer de 250 mL e adicionadas 3 gotas de soluo alcolica de vermelho de metila (0,1% m/v) e 50 mL de gua deionizada. A soluo foi neutralizada com a utilizao de hidrxido de amnio (1 + 1) v/v, ajustado o pH (5,5) com HCl (1 + 9) v/v, e mantida em ebulio (1 minuto) em placa aquecedora. Posteriormente, foi adicionado oxalato de amnio 4,2% m/v (10,0 mL). No repouso (12 horas), foi observada a formao do precipitado de oxalato de clcio por meio de uma reao qumica entre o clcio e o oxalato. Aps este perodo, o precipitado obtido foi filtrado em papel filtro quantitativo (Vetec - cd. 050150). Nesta etapa da metodologia proposta por Brasil (1999), utilizado o amianto como elemento filtrante. O papel filtro foi lavado com hidrxido de amnio 2% v/v (50 mL), para retirar o excesso de oxalato. Os filtrados foram descartados. O papel filtro contendo o precipitado de oxalato de clcio foi transferido para um funil de vidro e lavado, cuidadosamente, com cido sulfrico (5 + 125) v/v (130 mL). O cido oxlico formado foi titulado com permanganato de potssio 0,01 M, a 75 C (banho termostatizado (Tecnal, Brasil). O teor de clcio foi calculado, considerando-se que cada mililitro da soluo padronizada de permanganato de potssio gasto na titulao corresponde a 1,0 mg de clcio. 2.3 Validao da metodologia proposta Faixa de trabalho e linearidade A faixa de trabalho e a linearidade foram determinadas de acordo com especificaes do Inmetro (2003). Para o clculo
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da faixa de trabalho, foi construda uma curva utilizandose soluo padro de clcio com seis nveis de calibrao (1, 3, 5, 10, 15 e 20 mg de clcio). O nmero de replicatas para cada nvel de calibrao foi sete. A linearidade do mtodo foi determinada a partir da curva da faixa de trabalho e calculada a partir da equao da regresso linear (Equao 1) (EUROPEAN AGENCY FOR THE EVALUATION OF MEDICINAL PRODUCTS, 2007).
y = ax +b (1)

sendo: y = resposta medida; x = concentrao; a = inclinao da curva de calibrao (sensibilidade); b = interseo com o eixo y Sensibilidade, limite de deteco (LD) e limite de quantificao (LQ) A sensibilidade foi determinada a partir da inclinao da curva na faixa de trabalho (TAVERNIERS; LOOSE; BOCKSTAELE, 2004) e calculada de acordo com a Equao 2.
S= dx dy (2)

sendo: S = sensibilidade; dx = variao da resposta; e dy = variao da concentrao O LD foi determinado pela anlise do branco (todos os reagentes utilizados na anlise sem a adio do analito) com 10 repeties, sendo calculados a mdia e o desvio padro. O LD foi calculado pela soma das mdias dos brancos mais trs vezes o desvio padro dividido pela sensibilidade do mtodo (Equao 3) (FEINBERG; RAGUNS, 1998).
LD = x + 3.s S (3)

sendo: x = mdia dos valores dos brancos da amostra; s = desvio padro dos brancos da amostra; e S = sensibilidade Para a determinao do Limite de Quantificao (LQ) (Equao 4), foram analisados 10 brancos e calculados a mdia e o desvio padro (FEINBERG; RAGUNS, 1998).
LQ = x + 10.s S (4)

sendo: x = mdia dos valores dos brancos; s = desvio padro dos brancos; e S = sensibilidade do mtodo Preciso A preciso foi avaliada a partir da repetitividade dos resultados, utilizando-se a curva da faixa de trabalho (MOHAMED et al., 2005). A preciso da metodologia foi expressa em termos de desvio padro relativo (NEVADO et al., 2005).
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Burin et al.

Exatido Para a avaliao da exatido da metodologia, foi calculado o erro relativo de acordo com a Equao 5. O ndice Z foi calculado segundo a Equao 6. A avaliao dos resultados do ndice Z foi realizada de acordo com a seguinte escala de pontuao: |Z| 2 = satisfatrio; 2 < |Z | 3 = questionvel; |Z | > 3 = insatisfatrio (INMETRO, 2003). A recuperao do analito tambm foi avaliada em amostras fortificadas: amostras de salsichas foram adicionadas de material de referncia certificado em 3 diferentes concentraes (2, 5 e 10 mg clcio). As anlises foram realizadas em triplicata (GARBERLOTTI; TORRES; MARSIGLIA, 2003).
ER = Xlab X v 100 Xv (5)

Robustez Para avaliar a robustez da metodologia, foi utilizado o teste proposto por Youden e Steiner (TAN; XU; ZHENG, 1995) conforme a Tabela 1. Este teste permite avaliar a robustez e tambm ordenar a influncia de cada uma das variaes nos resultados finais, indicando qual o tipo de influncia que cada variao exerce. Para determinar a variao de um fator, foram encontrados os quatro valores correspondentes s letras maisculas e minsculas, comparando-se as mdias dos dois grupos. Para calcular as variaes de A para a, foi usada a Equao 7.
A (s + t + u + v ) (x + y + w + z ) = a 4 4 (7)

sendo: Xlab = mdia dos valores obtidos na anlise da soluo padro; Xv = valor terico aceito como verdadeiro Material de Referncia Certificado (MRC)
Z= Xlab X v s (6)

A Tabela 1 mostra quais os fatores que foram modificados para a determinao da robustez. Foram denominados os fatores nominais por letras maisculas de A a G e as variaes, por letras minsculas correspondentes. Estes fatores e suas variaes foram escolhidos pelo analista de acordo com testes preliminares. Incerteza de medio A incerteza da medio foi avaliada de acordo com Ellison, Rosslein e Willians (2002), em quatro etapas: 1)etapa foi a especificao do mensurando; 2) identificao das fontes de incerteza; 3) quantificao dos componentes de incerteza; e 4) clculo da incerteza combinada. 2.4 Anlise estatstica A anlise estatstica foi realizada utilizando-se o software STATISTICA verso 6.0 (2001) com a aplicao do teste ANOVA. Para realizao da curva de regresso linear na faixa de trabalho, mdia, desvio padro e varincia, foi utilizado o programa Excel 2000 for Windows.

sendo: Xlab = mdia dos valores obtidos experimentalmente; Xv = valor terico aceito como verdadeiro (MRC); s = unidade de desvio (incerteza do MRC). Especificidade A anlise da especificidade da metodologia foi realizada com soluo padro de clcio (MRC) adicionada de impurezas (PLATZER; WHITE, 2006). Foram pipetadas alquotas de 5,0 mL do padro de clcio em 10 cadinhos de porcelana: 5 cadinhos foram contaminados com 2,0 mL de uma soluo de magnsio (6 mg de Mg2+/mL) e nos outros 5 cadinhos foram adicionados 0,5 mL de soluo de sulfato de sdio (33,5 mg de SO42/mL), realizando-se todo o procedimento analtico.

3 Resultados e discusso
3.1 Faixa de trabalho e linearidade Os resultados da faixa de trabalho esto indicados na Tabela 2 e na Figura 1. O mtodo demonstrou uma boa lineari-

Tabela 1. Modelo experimental para teste de robustez.


Variveis V1 V2 V3 V4 V5 V6 V7 Resultados 1 A B C D E F G s 2 A B c D e f g t 3 A b C d E f g u Experimentos 4 5 A a b B c C d d e e F G v F g x 6 a B c d E f G y 7 a b C D e f G u 8 A b c D E F g v Efeito A/a B/b C/c D/d E/e F/f G/g z Variaes dos fatores Nominal 75 C 130 mL 2% v/v 12 horas Aps 1 minuto de ebulio 5,5 Leve agitao Nominal Variao 90 C 100 mL 4% v/v 2 horas Incio da ebulio 4,0 Forte agitao Variao

V1 = temperatura de titulao; V2 = volume da soluo de cido sulfrico (5 + 125) v/v; V3 = concentrao da soluo de hidrxido de amnio; V4 = tempo de precipitao; V5 = tempo de adio da soluo de oxalato de amnio 4,2% m/v; V6 = pH de precipitao; e V7 = agitao durante a titulao.

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dade, R2 = 0,9999, na medida em que, segundo a FDA (2007), o critrio mnimo aceitvel para o coeficiente de correlao linear deve ser maior ou igual a 0,995. A equao da reta obtida foi y = 1,0106x 0,0527. Os resultados da linearidade da metodologia na faixa de trabalho no dependem apenas da sensibilidade do equipamento utilizado, pois outros aspectos devem ser observados: a complexidade do mtodo, os reagentes utilizados, a extrao do analito, as condies do equipamento e do meio ambiente, alm da habilidade do analista. No desenvolvimento e validao de mtodos para determinar traos de ftalatos (steres de cido ftlico) em vegetais, Sablayrolles et al. (2005) utilizaram o mtodo da cromatografia gasosa com espectroscopia de massa, obtendo coeficientes de correlao linear na faixa de 0,7247 a 0,9742 para baixas concentraes e 0,8840 a 0,9852 para concentraes altas. Gaberlotti, Marsiglia e Torres (2003) validaram um mtodo enzimtico gravimtrico para determinao de fibras dietticas em alimentos, sendo o coeficiente de correlao linear igual a 0,9999 indicativo de uma boa linearidade do mtodo e a curva de calibrao construda com 3 nveis de concentrao. Pinho et al. (2000), na quantificao de antioxidantes sintticos em pats de fgado por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), utilizando-se uma curva de calibrao com 5 nveis de concentrao, obtiveram uma linearidade superior a 0,99. Nestas pesquisas, evidenciou-se uma melhor linearidade para o mtodo gravimtrico quando comparado ao mtodo por cromatografia.
Tabela 2. Resultados corrigidos da faixa de trabalho, com o desvio padro e o Coeficiente de Variao (CV)
Massa de clcio esperada* (mg) 0,993 2,997 4,995 9,990 14,991 19,980 Massa de clcio obtida (mg) 1,001 2,891 4,863 10,160 15,141 20,088 Repetitividade** (desvio padro) 0,028 0,046 0,028 0,039 0,042 0,091 CV% 2,75 1,60 0,56 0,38 0,28 0,45

3.2 Sensibilidade, limite de deteco e limite de quantificao A sensibilidade da metodologia calculada utilizando-se a curva de regresso linear foi de 1,0057 mg de clcio. A mdia (n = 10) dos valores do branco (reagentes utilizados na anlise sem a adio do analito) foi de 0,40 mL de soluo de permanganato de potssio, apresentando um desvio padro de 0,04. O limite de deteco observado para o mtodo foi de 0,52 mg de clcio/5 g de amostra ou 11 mg de clcio/100 g de amostra. O limite de quantificao observado foi de 0,80 mg de clcio/5 g de amostra ou 16 mg de clcio/100 g de amostra. 3.3 Preciso A preciso na faixa de trabalho apresentada na forma de repetitividade (Tabela 2) sendo avaliado o desvio padro dos resultados obtidos. Ainda nesta tabela pode-se notar que os resultados dos coeficientes de variao (% CV) foram aceitveis, pois no foi observado valor superior a 5%, que o limite mximo admitido por Brasil (2003). O FDA (2007) estabelece como critrio de aceitao para o coeficiente de variao valor menor ou igual a 2%, sendo que somente o primeiro nvel de concentrao (1,00 mL) da curva de calibrao ficou acima do limite. 3.4 Exatido Os resultados da recuperao do analito em amostras fortificadas com soluo padro de clcio esto apresentados na Tabela 3. Foi obtida uma boa recuperao, pois de acordo com a FDA (2007) os limites para recuperao do analito so de 80 a 120%. A mdia dos resultados do ndice Z e o erro relativo do mtodo esto descritos na Tabela 4. O erro relativo do mtodo apresentou uma variao menor que 5% para todos os nveis de concentraes. Os resultados do ndice Z foram satisfatrios (menor que 2) para todas as concentraes da soluo padro de clcio. A forma mais utilizada pelos pesquisadores para avaliar a exatido de mtodo por meio da porcentagem de recuperao do analito. Garda, Macedo e Fourlong (2004) determinaram tricotecenos em cerveja pela anlise de duas toxinas (DON e T-2). Utilizando-se a cromatografia gasosa, obtiveram a re-

*O valor terico o valor corrigido da quantidade de clcio na alquota; e **para cada nvel de concentrao n = 7.

Valor encontrado (mg de clcio)

25 20 15 10 5 0 5 0 5 10 y = 1,0106x R2 = 0,9999 15 20 25 0,0527

Tabela 3. Mdias (n = 7) dos resultados de recuperao do analito em amostras fortificadas.


Amostra (g) 6,038 6,051 6,046 6,040 mg de clcio terico 0,000 2,997 4,995 9,990 mg de clcio detectado 6,532 9,635 11,546 16,492 Recuperao do analito (%) 0,00 101,01 100,17 99,80

Valor nominal (mg de clcio) Figura 1. Linearidade e faixa de trabalho para o mtodo de determinao de clcio.
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Clcio terico = clcio adicionado.

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Tabela 4. Exatido do mtodo avaliada pelo erro relativo (%) e ndice Z (z score) a partir dos resultados obtidos na faixa de trabalho.
Massa de clcio esperada* (mg) 0,993 2,997 4,995 9,990 14,991 19,980 Massa de clcio obtida (mg) 1,001 2,891 4,863 10,160 15,141 20,088 ndice |Z| 0,06 0,81 1,01 1,31 1,16 0,83 Erro relativo (%) 0,78 3,52 2,64 1,71 1,00 0,54

Tabela 5. Mdias (n = 5) de recuperao do clcio com interferncia de ons Mg+2 e SO42.


Padro de Padro de Padro de Ca++ Recuperao Erro clcio* magnsio** sulfato*** detectado (%) relativo (mL) (mL) (mL) (mg) (%) 5,0 2,0 0,0 5,018 100,50 0,47 5,0 0,0 0,5 4,968 99,45 0,54
*5,0 mL de padro de clcio = 4,9948 mg de clcio; **padro de magnsio = 6 mg.mL1; e ***padro de sulfato = 67 mg.mL1.

cuperao da toxina DON de 81,5 a 84,6% e da toxina T-2 de 101,0 a 105,0%. De acordo com Garberlotti, Torres e Marsiglia w(2003), na validao do mtodo enzimtico gravimtrico para determinao de fibras dietticas em alimentos, os percentuais de recuperao do padro foram de 101, 108 e 110%, admitindose uma escala de tolerncia de 70 a 120%. 3.5 Especificidade Os resultados da contaminao com soluo de magnsio e soluo de sulfato esto descritos na Tabela 5. As contaminaes da soluo padro no interferiram na recuperao do analito (Ca2+), indicando que o oxalato tem preferncia pelo clcio no pH utilizado para precipitao. Tal ocorrncia era esperada, uma vez que o produto de solubilidade do oxalato de magnsio cerca de 10 mil vezes maior que o do oxalato de clcio. Este fato muito importante na determinao de clcio por mtodos titrimtricos, os quais freqentemente sofrem interferncia do magnsio. 3.6 Robustez

Tabela 6. Resultados das recuperaes dos fatores nominais e das variaes.


Variveis* V1 V2 V3 V4 V5 V6 V7 Nveis 75 C (A) 90 C (a) 130 mL (B) 100 mL (b) 2% v/v (C) 4% v/v (c) 12 horas (D) 2 horas (d) Aps 1 de ebulio (E) No incio da ebulio (e) 5,5 (F) 4,0 (f) Leve (G) Forte (g) Recuperao (%) 100,67 99,31 100,67 99,51 100,67 95,31 100,67 98,74 100,67 99,90 100,67 99,76 100,67 100,34

*As variaes intencionais no mtodo foram: V1 = temperatura de titulao; V2 = volume da soluo de cido sulfrico (5 + 125) v/v; V3 = concentrao da soluo de hidrxido de amnio; V4 = tempo de precipitao; V5 = tempo de adio da soluo de oxalato de amnio 4,2% m/v; V6 = pH de precipitao; e V7 = agitao durante a titulao.

Porcentagem recuperao

Os resultados dos ensaios das combinaes das variaes esto descritos na Tabela 6, que indica tambm os resultados das recuperaes. A Figura 2 apresenta graficamente as influncias das variaes no mtodo. Nota-se que a variao na concentrao da soluo de hidrxido de amnio soluo utilizada para retirar o excesso de oxalato do papel filtro foi a que apresentou a menor porcentagem de recuperao do analito, com 95,31%. Observa-se que a variao da concentrao utilizada foi o dobro da recomendada pelo mtodo proposto, o que pode ter influenciado para a baixa recuperao obtida. Esta ocorrncia pode ser justificada, pois o clcio deslocado do oxalato para formar hidrxido de clcio, o qual apresenta solubilidade aproximadamente mil vezes maior que o oxalato de clcio, sendo este eliminado na filtrao. O resultado da avaliao de cada uma das variveis foi observado pelos efeitos A/a = 0,0188; B/b = 0,0033; C/c = 0,0633; D/d = 0,0280; E/e = 0,0086; F/f = 0,0132 e G/g = 0,0045. Como pode ser observado na Figura 2, o maior efeito foi o C/c = 0,0633, que teve a maior influncia no resultado. 3.7 Incerteza da medio Esta fase compreendeu quatro etapas: 1) especificao do mensurando; 2) identificao das fontes de incerteza; 3) quantiCinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 28(4): 973-978, out.-dez. 2008

102 100 98 96 94 92 a b c d Variaes Figura 2. Porcentagem de recuperao do analito para cada variao, a = temperatura de titulao; b = volume soluo de cido sulfrico; c = concentrao da soluo de hidrxido de amnio; d = tempo de precipitao; e = adio da soluo de oxalato de amnio; f = pH de precipitao; e g = agitao durante a titulao. e f g

ficao dos componentes de incerteza, e 4) clculo da incerteza combinada. Na primeira etapa, o mensurando especificado foi a concentrao de clcio (%). Na segunda etapa, foram identificadas as principais fontes de incerteza, utilizando-se um diagrama de causa efeito. Para a massa da amostra, as componentes de incerteza foram: a repetitividade na pesagem; a incerteza na calibrao da balana; a estabilidade com o tempo; o efeito da
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temperatura; a linearidade, e a resoluo da balana. Para o volume gasto na titulao da amostra, as componentes de incerteza foram: a repetitividade na titulao; a incerteza da calibrao da bureta; o efeito do menisco; o efeito da temperatura, e a resoluo da bureta. No volume da diluio, as componentes de incerteza foram: a repetitividade; a incerteza na calibrao do balo volumtrico; o efeito do menisco, e o efeito da temperatura. As componentes relacionadas com o volume da alquota foram: a repetitividade na transferncia do volume da pipeta; a incerteza na calibrao da pipeta; o efeito temperatura, e o efeito do menisco. As componentes relacionadas com a concentrao da soluo de permanganato de potssio foram: as incertezas da massa de permanganato de potssio, as incertezas da massa molar do permanganato de potssio e o volume da diluio. Na terceira etapa, foi realizada a quantificao dos componentes de incerteza. Os resultados das incertezas expandidas em um nvel de confiana de 95% foram: 0,0005 g com k = 2,20 para massa da amostra; 0,1884 mL com k = 2,52 para o volume gasto na titulao da amostra; 0,0474 mL com k = 2,00 para a diluio da soluo estoque; 0,0131 mL com k = 2,00 para a alquota e 0,0041 mol.L1 com k = 2,37 para a concentrao da soluo de permanganato de potssio. O resultado final da incerteza de medio para o mensurando (% Ca++) foi de 0,00904 g, com um nvel de confiana de aproximadamente 95% e k = 2,87. O resultado corrigido da anlise de clcio em salsichas foi de 0,108 0,009 g de clcio/100 g da amostra.

4 Concluses
A metodologia analtica proposta para quantificao de clcio, utilizando-se papel filtro quantitativo para a recuperao do precipitado de oxalato de clcio, mostrou-se sensvel, especifica, precisa, exata, robusta e linear na faixa de trabalho, sendo adequada para determinar a concentrao de clcio em produtos crneos.

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