HIDRLISE DE FLAVONIDES EM PLACA DE CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

1. INTRODUO

Os flavonides so molculas de baixo peso molecular que se encontram amplamente distribudas no reino vegetal, ento presentes em toda a parte area das plantas. Todos tm por base a estrutura da flavona (2-fenil-benzopirona). Os flavonides incluem um enorme grupo de molculas que divergem em pequenas partes da sua estrutura bsica. Dependendo das suas estruturas qumicas, os variados flavonides tm diferentes atividades farmacolgicas, de tal forma que uma simples comparao das quantidades no suficientes para avaliar a sua atividade biolgica. Os flavonides tm inmeras funes na natureza e formam um vasto grupo de metabolitos secundrios com atividades biolgicas muito diversas. Os principais compostos fenlicos, onde se integram tambm os flavonides, no se encontram livres na natureza, mas sob a forma de steres ou, mais geralmente, sob a forma de hetersideos. Convm ainda no esquecer alguns polmeros, como as ligninas e os taninos. At muito recentemente os flavonides eram referidos como constituintes vacuolares ou aparecendo nas ceras das folhas e nos exudatos, mas, nos ltimos anos, descobriu-se que tambm podem estar ligados parede celular, pelo menos nos tecidos das gimnospmicas. Neste caso, os flavonides quando so apresentados como compostos de superfcie so, normalmente, muito metilados e possuindo oses como substituintes. Os flavonides tambm foram encontrados no polen, muito embora os trabalhos sejam escassos. As antocianinas, outra forma estrutural de flavonides, podem ocorrer em outros rgos das plantas, tal como razes e folhas, acumulando em vacolo das clulas epidrmicas ou subepidermais. Na ausncia de vacolos, as antocianinas podem ser localizadas em organelas esfricas conhecidas como antocianosplastos (MATOS, 1997). Os flavonides podem ocorrer na forma de genina (aglicona), glicosdica ou como derivados metilados, como j foi referido. A posio dos substituintes benznicos divide a classe destas molculas em flavonides e isoflavonides. Os flavonis diferem das favonas por possurem o grupo hidroxila na posio 3 e ambos tm uma dupla ligao entre C2-C3. As catequinas so muitos

semelhantes aos flavonis, mas distinguem-se destes por no possurem o grupo carbonila caracterstico no anel. Os flavonides esto muitas vezes hidroxilados nas posio 3,5,7,3,4 e 5. Quando se formam hetersidos, a ligao glicosdica est normalmente localizada na posio 3 ou 7 e as oses so usualmente a L-ramnose, a Dglucose, a ou di-holsidos de glucose e ramnose. (MATOS, 1997). Um flavonide que intensamente pesquisado a rutina, sendo este um flavonide de grande interessea para a indstria farmacutica devido s suas diversas atividades farmacolgicas. Entre as atividades teraputicas da rutina, est a melhora nos sintomas de insuficincia dos vasos linfticos e venosos associados com algumas doenas hemorrgicas ou de hipertenso, por promover a normalizao da resistncia e permeabilidade da parede destes vasos. Outros sintomas de fragilidade capilar tambm so melhorados, entre eles, a perda da acuidade visual e alteraes do campo visual. Estes efeitos podem ser da rutina isoladamente, ou associada ao cido ascrbico, cuja absoro melhora quando administrado junto com a rutina (BRECHO, 2009). A rutina um flavonide encontrado em vrias fontes alimentares como cebola, uva, trigo serraceno, feijo vermelho, mas, tomates e bebidas como vinho tinto e ch preto. A rutina um flavonol que apresenta um dissacardeo (raminose + glicose) ligados a posio 3 do anel pirano. A afinidade dos glicosdeos pela membrana das clulas epiteliais exerce um importante papel na absoro dos compostos lipoflicos. A absoro no intestino delgado dificultada devido aos acares ligados a sua molcula.

2. OBJETIVO

Evidenciar hidrlise de flavonoides em placa de CCD analisando uma amostra aleatria de rutina.

3. MATERIAIS E METODOLOGIA

3.1. Materiais

Rutina; Etanol 55%; Bquer 50 mL; Cubas cromatogrficas; Capilares de vidro; Proveta de 100 mL; Proveta de 50 mL; Pipetas graduadas; Micropipeta 5-50 L com ponteiras; Placa cromatogrfica previamente preparada; Cmara escura com lmpada UV; Borrifador pressurizado; Bomba pressurizada; Soluo de AlCl3; Estufa a 100C; Placas de vidro; Cronmetro; Acetato de etila; cido frmico; gua destilada; HCl 3 N.

3.2. Mtodo

Tomar 25 L da soluo de rutina com capilar de vidro; Aplicar sobre a placa de slica gel; Aplicar sobre cada amostra aplicada de 5 L de HCl 3 N; Cobrir a placa cromatogrfica com a placa de vidro; Manter as placas em estufa a 100C por 15 minutos;

Aplicar na placa soluo de rutina e quercetina sem adio do cido; Eluir a placa em acetato de etila / cido actico / cido frmico / gua / acetona na proporo de 100:27:27:10; Borrifar soluo de AlCl3 a 10% em etanol e deixar secar; Expor a luz ultravioleta em comprimento de onda de 366nm.

4. RESULTADOS E DISCUSSO

A proposta da prtica inclua a escolha entre rutina ou calndula como alvo de observao. Este grupo efetuou a prtica com a rutina. A rutina foi aplicada na placa cromatogrfica com o capilar, como descrito no mtodo, e posteriormente colocado o cido concentrado por cima do local onde foi adicionado a rutina a fim de promover a hidrlise. Quando o conjunto foi colocado na estufa, uma placa de vidro foi colocada por cima, visando manter a presena de gua na placa, impedindo sua evaporao e perda, o que seria indesejado j que se trata de hidrlise. Aps os 15 minutos de estufa foram adicionados os parmetros de comparao, a rutina, um flavonol que apresenta um dissacardeo, e a quercetina, uma genina; sem o cido. A fim de se calcular o fator de reteno (Rf), todos os envolvidos so aplicados de forma retilnea e uniforme na placa e o clculo foi feito aps visualizao no UV. Se o Rf se igualasse ao da rutina, isso seria evidncia da no hidrlise da amostra; caso o Rf se igualasse ao da quercetina, isso seria evidncia da hidrlise da mesma. O resultado observado foi a comprovao da hidrlise da rutina associada ao cido, pois o resultado do Rf foi compatvel com a quercetina.

5. CONCLUSO

Portanto, o proposto pela aula prtica de hidrolisar flavonoides em placa de Cromatografia de Camada Delgada (CCD) foi alcanado com xito, uma vez que a hidrlise cida da rutina produziu um Rf igual ao da quercitina.

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS BRECHO M. R. J.; MACHADO H.; GUERRA O. M.. metabolismo e Potencial Farmacolgico. Rutina Estrutura,

Artigo de reviso; Revista

Interdisciplinar de Estudos Experimentais, v. 1, n. 1, p. 21 - 25, 2009. MATOS, F. J. Introduo Fitoqumica Experimental. 2 ed. Fortaleza: Edies UFC, 1997.