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Rev Bras Reprod Anim, Belo Horizonte, v.32, n.2, p.83-92, abr./jun. 2008. Disponvel em www.cbra.org.

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Brucelose eqina: aspectos da doena no Brasil


Equine brucellosis: aspects of the disease in Brazil Mrcio Garcia Ribeiro1, Rodrigo Garcia Motta, Carlos Augusto Scacchetti de Almeida
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia (FMVZ), UNESP, Botucatu, SP, 18618-000, Brasil. 1 Correspondncia: mgribeiro@fmvz.unesp.br

Resumo A brucelose uma doena infectocontagiosa, com potencial zoontico, incomum em eqinos e causada predominantemente pela Brucella abortus. A doena em eqinos no caracterizada por transtornos reprodutivos como em outras espcies domsticas. Leses abscedantes em regio cervical, bursas, tendes e articulaes so as principais manifestaes clnicas. A transmisso ocorre pelo consumo de gua e de pastos contaminados, principalmente em propriedades endmicas para a brucelose bovina. No se recomenda a terapia, e os animais positivos devem ser encaminhados para abate sanitrio. O diagnstico microbiolgico definitivo, e o sorolgico realizado utilizando basicamente as mesmas provas recomendadas para bovinos e bfalos. As descries da brucelose eqina geralmente se apresentam sob a forma de relatos de casos ou estudos soroepidemiolgicos regionais. Pouca preocupao tem sido dispensada com os achados epidemiolgicos e com a caracterizao dos biotipos de Brucella spp na doena em eqinos. O reconhecimento das caractersticas de patogenicidade e dos mecanismos de transmisso podem contribuir nas aes de controle e profilaxia da doena em eqinos. O presente estudo revisou os principais aspectos da brucelose eqina no Brasil. Palavras-chave: Brucelose, Brucella abortus, eqinos, Brasil. Abstract Brucellosis is an infectious disease recognized as zoonosis uncommon in equine, caused predominantly by Brucella abortus. The disease in horses is not associated with reproductive problem. Fistulous withers are most common clinical sign of equine brucellosis. The transmission occurs by consumption of contaminated water and grassland, mainly in bovine livestock endemic for brucellosis. No therapy procedures are recommended and sanitary slaughteris recommended for infected animals. Microbiological identification of microorganism is definitive for diagnosis. Serological diagnosis is performed using the same tests for bovine and buffaloes. Equine brucellosis is mainly divulgated in case reports or by regional sero-epidemiological studies.Llittle attention has been dispended to biotype the agents and to study the epidemiology of the equine brucellosis, considering that it is very important to know the virulence and transmission mechanisms of this microorganism. These studies could contribute to raise control measures of equine brucellosis and also to built successful control and eradication programs against the disease. The aim of present study was to review more important aspects of equine brucellosis in Brazil. Keywords: Brucellosis, Brucella abortus, equine, Brazil. Introduo Os eqinos representam uma importante espcie entre os animais domsticos em virtude da utilizao destes como meio de transporte, trao, entretenimento, esporte, na recuperao de crianas especiais ou mesmo para o consumo humano de produtos e subprodutos crneos. Estima-se que a populao de eqinos no Brasil seja da ordem de 10 milhes de animais, concentrados principalmente na regio Nordeste do pas, seguido das regies Sul e Sudeste. Diversas enfermidades infecciosas acometem a espcie eqina, entre as quais, a brucelose. Nesta espcie, a brucelose reconhecida como doena infecciosa de evoluo crnica, de potencial zoontico, causada predominantemente pela Brucella abortus (B. abortus; Acha e Szyfres, 2003). Nos ruminantes domsticos, em sunos e em ces, a brucelose considerada doena da esfera reprodutiva (Corra e Correa, 1992). Entretanto, na espcie eqina, os prejuzos econmicos decorrentes da brucelose so considerados inferiores quando comparados s outras espcies de interesse zootcnico, visto que so raros os transtornos reprodutivos em eqinos (Ribeiro et al., 2003). Os programas de controle e erradicao da brucelose em ruminantes domsticos tm obtido xito em vrios pases, reduzindo, significativamente, a prevalncia da enfermidade (Santellano et al., 2004). Porm, a presena dos reservatrios silvestres, a cohabitao de espcies animais, a resistncia do microrganismo em condies adversas no ambiente (Poester et al., 2002) e a ausncia de protocolos efetivos no tratamento da doena em animais so fatores que favorecem a manuteno do microrganismo no ambiente e em criatrios de animais domsticos, inviabilizando, por vezes, sua erradicao em determinadas regies ou pases (Castro et al., 2005).
_________________________________________ Recebido: 14 de fevereiro de 2008 Aprovado para publicao: 12 de novembro de 2008

Ribeiro et al. Brucelose eqina: aspectos da doena no Brasil.

A Organizao Internacional de Epizootias (OIE) classifica a brucelose como doena da Lista B, na qual esto includas enfermidades que possuem significativo impacto scioeconmico e/ou para sade pblica, e que determinam graves conseqncias no comrcio de animais e seus produtos (Office Internacional des Epizooties - OIE, 2002). A grande maioria dos estudos soroepidemiolgicos para brucelose tm sido realizados em bovinos, ovinos, caprinos, sunos e ces, com destaque para os ruminantes (Gonzalez et al., 2006). Em contraste, pouca nfase tem sido dada epidemiologia da brucelose em eqinos, tendo em vista que grande parte das descries, disponveis na literatura, restringirem-se s notificaes de casos clnicos (Robertson et al., 1973; Carrigan et al., 1987). Em 2001, foi deflagrado o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) bovina e bubalina, regulamentando as metodologias diagnsticas, estratgias de controle e profilaxia, entre outros procedimentos (Brasil, 2006). No entanto, o PNCEBT no dispe de normas detalhadas para a brucelose eqina, o que dificulta, sobremaneira, as aes de controle e profilaxia da doena nesta espcie. Ademais, a ausncia de padronizao e interpretao dos mtodos sorodiagnsticos na brucelose eqina gera dificuldades quanto conduta sanitria na doena. O presente estudo tem como objetivo revisar os principais aspectos da brucelose eqina, com nfase na epidemiologia, principais manifestaes clnicas, mtodos diagnsticos, aes de controle e profilaxia, e implicaes em sade pblica. Etiologia e propriedades gerais A brucelose causada por bactrias pertencentes ao gnero Brucella, que se apresentam microbiologicamente como cocobacilos Gram-negativos, aerbios ou microaeroflos, no capsulados, imveis, no formadores de esporos, desprovidos de plasmdeos (Nielsen et al., 2004). Possuem metabolismo oxidativo baseado na utilizao de nitratos. Nos testes bioqumicos, so classificadas como catalase e oxidase-positivos e no fermentadores de lactose (Paulin, 2003). So reconhecidos como microrganismos intracelulares facultativos, estando a patogenia e a natureza da resposta imune fortemente relacionadas presena do microrganismo no interior de fagcitos (Gonzalez et al., 2006). A B. abortus isolada em trs a cinco dias no gar-Brucella ou no meio convencional de gar enriquecido com sangue ovino, bovino ou eqino a 5% (desfibrinado), em condies de microaerofilia a 37oC. A partir de trs dias de incubao, as colnias apresentam 2 a 3 mm de dimetro, so opacas, lisas, no hemolticas (Nielsen., 1990). Bioquimicamente, B. abortus urease-positivo (reao em poucos minutos) e indol-negativo (Quinn et al., 1994). Na vigncia de cultura microbiana de materiais suspeitos, sujeitos contaminao bacteriana secundria, podem ser utilizados meios seletivos como o meio de Farrel, constitudo de vrios antimicrobianos impedientes para outros microrganismos (Nielsen e Duncan, 1990). Classicamente, as brucelas podem ser dividias em dois grupos antigenicamente distintos, denominadas lisas (B. abortus, Brucella melitensis e Brucella suis) e rugosas (Brucella ovis e Brucella suis) (Metcalf et al. 1994), com base nas caractersticas de multiplicao em meios de cultura no primo-isolamento e na estrutura da parede bacteriana (Nielsen et al. 2001). Assume-se que as espcies de Brucella possuem vrios biotipos (biovares), que demonstram diferenas quanto predileo de espcies e/ou rgos-alvo (Nielsen, 1990). A classificao dos diferentes biotipos fundamentada no requerimento de CO2, na produo de H2S, na multiplicao na presena de tionina e fucsina bsica, na aglutinao com anti-soros monoespecficos (A, M, R) e na lise por bacterifagos (Nielsen e Duncan, 1990; Quinn et al., 1994). Considera-se que B. abortus possua sete biotipos, embora maior nmero tenham sido descrito at o momento, mas no reconhecidos na rotina de caracterizao atual da espcie. Assume-se tambm que Brucella suis (B. suis) possua cinco biotipos e Brucella melitensis (B. melitensis) trs, enquanto Brucella ovis (B. ovis), Brucella canis (B. canis) e Brucella neotomae (B. neotomae) no apresentariam biovariantes (Quinn et al., 1994). Nielsen e Duncan (1990) postularam que todas as espcies de Brucella reconhecidas atualmente teriam derivado de B. abortus biotipo 2. Estudo realizado em 37 pases visando ao isolamento de B. abortus das principais espcies domsticas constatou que, das 266 linhagens isoladas, 241 (90,6%) foram provenientes de vacas pertencentes predominantemente aos biotipos 1, 2 e 3, reforando a espcie bovina como principal reservatrio de B. abortus (Nielsen e Duncan, 1990). No Brasil, Megid et al. (2005) investigaram recentemente a caracterizao de biotipos em quatro fetos bovinos e um bubalino. Os autores identificaram biotipo 1 (um feto bovino e um feto bubalino), biotipo 2 (um feto bovino) e biotipo 3 (um feto bovino), ressaltando para a primeira caracterizao de biotipo em linhagem de B. abortus isolada de feto bubalino no pas e para a predominncia dos biotipos 1, 2 e 3 nos abortamentos nestas espcies animais. Em contraste, pouca ateno tem sido dispensada na caracterizao de biotipos isolados de eqinos. Ekers (1987) relatou maior prevalncia do biotipo 1 de B. abortus em eqinos na Austrlia. Robertson et al. (1973) reportaram ocorrncia rara de abortamento em gua por B. abortus biotipo 1, enquanto Cook e Kingston (1988) descreveram caso incomum da doena em eqinos, causada por B. abortus biotipo 1. No entanto, a maioria das descries dos biotipos em eqinos limita-se a relatos de casos, o que dificulta esclarecer o impacto dos diferentes biovares na virulncia e na cadeia epidemiolgica da brucelose nos eqinos. Os microrganismos do gnero Brucella resistem inativao em condies adversas do ambiente (Gonzalez et al. 2006), incluindo extremos de pH, temperatura e luminosidade (Nielsen, 1995). Podem resistir

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por seis meses ou mais na gua, nos fetos abortados, em restos de placenta, nas fezes, na l, no feno ou no solo (Lucero et al., 2008). No leite e derivados, mantm-se viveis por vrios meses (Omer et al., 2000). O microrganismo destrudo pela fervura e temperaturas usuais de pasteurizao (Paulin, 2003). Desinfetantes clorados (2,5% de cloro ativo), solues de formaldedo (2%) e compostos fenlicos (2,5%) inativam o microrganismo a partir de 15 minutos de exposio (Castro et al., 2005). lcool 70% destri prontamente a bactria (Paulin, 2003). J sob ao do carbonato de clcio (1:10) destruda aps 30 minutos de exposio (Omer et al., 2000). Brucelose nos eqinos Epidemiologia A brucelose figura entre as enfermidades infecciosas mais difundidas em todo o mundo (Viana et al., 1981; Paulin, 2003). A doena possui ocorrncia elevada especialmente na bacia do Mediterrneo, Pennsula Arbica, ndia, Mxico, Amrica Central e do Sul (Vasconcellos et al., 1987; Acha e Szyfres, 2003). Determinados pases obtiveram xito na erradicao da enfermidade, incluindo Noruega, Finlndia, Sucia e Dinamarca (Vasconcellos et al., 1987). Estima-se que no Brasil a ocorrncia da brucelose bovina seja em torno de 4 a 5% do rebanho (Poester et al., 2002). A brucelose eqina merece preocupao em virtude da debilidade orgnica que provoca nos animais, pelos prejuzos decorrentes da eutansia dos eqinos infectados, alm de constiturem fonte de infeco para outras espcies domsticas e, inclusive, para o homem (Ribeiro et al., 2003; Radostits et al., 2007). Ainda que o mecanismo de transmisso da brucelose eqina no esteja bem esclarecido, considera-se que a infeco seja resultante da coabitao dos eqinos com outras espcies domsticas, em especial bovinos, bubalinos e sunos, visto que os eqinos compartilham da infeco preferencialmente por B. abortus (Acha e Szyfres, 2003) e, secundariamente, por B. suis (Cook e Kingston, 1988; Acha e Szyfres, 2003). No h espcie-especificidade do microrganismo quanto aos hospedeiros que infectam, mas existe certa seletividade por determinadas espcies animais (Paulin et al., 2002). Assim, B. abortus acomete principalmente bovinos, bubalinos e eqinos; B. suis, os sunos; B. melitensis, os caprinos (extica no Brasil); B. ovis, os ovinos; B. canis, os candeos e B. neotomae, roedores do deserto norte americano (Nielsen et al., 2001). Recentemente, foi diagnosticado Brucella spp. em animais marinhos (focas, golfinhos) que, provisoriamente, receberam a denominao de B. maris (Castro et al., 2005). Acredita-se que a transmisso para os eqinos ocorra pela ingesto de gua e alimentos contaminados pelo microrganismo proveniente de descargas vaginais, lquios de abortos e restos placentrios de fmeas infectadas (Langenegger e Szechy, 1961; Castro et al., 2005). Brucella spp pode permanecer vivel por vrios meses em fetos, pastos e gua contaminada, favorecendo a manuteno do patgeno no ambiente e a endemicidade nos plantis (Cohen et al.; 1992, Paulin, 2003; Rosa et al., 2006). Releva-se notar que os estudos direcionados brucelose eqina usualmente so descritos sob a forma de relatos de caso ou estudos soroepidemiolgicos regionais. A restrita literatura sobre a doena na espcie dificulta o esclarecimento da prevalncia, dos mecanismos de transmisso, da predominncia dos biotipos e suas inter-relaes com a virulncia na brucelose eqina, bem como a relevncia da co-habitao de espcies na ocorrncia da doena, que permitiriam esclarecer a epidemiologia e o real impacto da enfermidade na espcie (Cohen et al., 1992; Ribeiro et al., 2003; Lucero et al., 2008). Cohen et al. (1992) descreveram que nove eqinos com bursite de cernelha soropositivos para brucelose mostraram significncia estatstica para o pastoreio consorciado com a espcie bovina, o que refora a prtica de co-habitao de espcies domsticas como fator de risco na brucelose eqina. A soroprevalncia da doena em 393 eqinos do Iraque constatou 16,28% de animais reagentes (Ali et al., 1985). Castro et al. (2005), na Argentina, revelaram 2,8% de ocorrncia de brucelose em eqinos com predomnio nas fmeas com mais de 10 anos de idade. Na Amrica Latina, Lucero et al. (2008) investigaram a brucelose em 320 eqinos que possuam histrico de co-habitao com bovinos e observaram 5,63% de ocorrncia da doena. No Brasil, Oliveira et al. (1973) encontraram 5,3% de reagentes em 75 eqinos em Santa Maria, RS, utilizando as provas de soroaglutinao rpida em placa e lenta em tubos. Langoni e Silva (1997) detectaram 1,77% de animais reagentes na soroaglutinao rpida e 0,82% na prova lenta em tubos em 734 eqinos procedentes do Estado de So Paulo. No Par, estudo soroepidemiolgico conduzido em diversas espcies domsticas revelou prevalncia de 17,85% da brucelose em eqinos. No mesmo estudo, os autores ressaltaram para a prevalncia de 19,14% em bovinos, que pouco diferiu dos eqinos, manifestando a provvel co-habitao interespcies na disseminao da doena (Lopes et al., 1999). Recentemente, Almeida et al. (2007) avaliaram 875 amostras de soro de eqinos abatidos nas regies Sul e Sudeste utilizando a prova do antgeno acidificado tamponado e observaram 15 (2%) animais reagentes.

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Patogenia A infeco por Brucella spp nos animais domsticos pode ocorrer pela via oral, mucosas, conjuntivas, venrea e, ocasionalmente, pela formao de aerossis e via transcutnea (Nielsen e Duncan, 1990). Nos eqinos, B. abortus ingressa nos animais susceptveis predominantemente por via oral (Radostitis et al. 2007). Atingem inicialmente a mucosa oro-nasal e linfonodos regionais onde se multiplicam e permanecem por semanas a meses (Paulin, 2003). Aps a multiplicao inicial, ganham a corrente sangnea preferencialmente no interior dos fagcitos (macrfagos) ou livres no plasma (Acha e Szyfres, 2003), estabelecendo bacteremia por volta de uma a duas semanas (Santellano-Estrada et al., 2004). Em seguida, via linfo-hematgena, difundem-se para todo o organismo animal, localizando-se principalmente no sistema mononuclear fagocitrio, como bao, fgado e linfonodos, induzindo formao de granulomas difusos e hiperplasia linfide (Paulin, 2003). A viabilidade de Brucella spp no interior das clulas fagocitrias creditada inibio da fuso dos lisossomos com os grnulos secundrios, impedindo a formao dos fagolisossomos (Poester et al., 2002). No entanto, a resistncia lise intracelular dependente da espcie de Brucella spp e, tambm, da espcie animal (Carter e Chengappa, 1991). Apesar da induo de resposta imune tanto celular como humoral, a imunidade dos susceptveis ao gnero Brucella predominantemente de origem celular (Nielsen et al., 2004). Nos ruminantes domsticos e sunos, aps a bacteremia, o microrganismo apresenta tropismo pela placenta (Metcalf et al., 1994) e, posteriormente, pelo feto, levando necrose da juno carncula-cotildone (Nielsen, 1990) e/ou infeco fetal. A invaso fetal resulta usualmente em lquido sero-sanginolento em cavidades, pneumonia, hepato-esplenomegalia e sofrimento fetal (m nutrio e oxigenao), que geralmente culminam com a expulso do produto no tero final da gestao (Paulin, 2003, Castro et al., 2005). Nestas espcies, a predileo do gnero Brucella atribuda, em parte, presena de compostos que favoream o metabolismo bacteriano (Poester et al., 2002), como o eritritol (lcool polihdrico), presente no tero gravdico, glndula mamria, tecidos steo-articulares e rgos do sistema reprodutor masculino (Carter et al., 1991). Eqinos, seres humanos, coelhos, ratos e outros roedores possuem ausncia ou baixa produo do eritritol, o que justificaria, em tese, o reduzido impacto da brucelose como doena da esfera reprodutiva nestas espcies. Com efeito, nos eqinos, o microrganismo tem predileo por bursas, tendes, ligamentos, sinvia e articulaes, acarretando severa inflamao nestes locais (Nielsen e Duncan, 1990). MacMillan et al. (1990) investigaram os efeitos da infeco experimental por B. abortus em cinco guas e um garanho. Os autores submeteram o colostro, sangue de potros -antes e depois da amamentao-, e fragmentos de placenta cultura microbiolgica e no obtiveram xito no isolamento do microrganismo, concluindo no haver evidncias da transmisso vertical na espcie eqina. Clnica A brucelose eqina classicamente uma doena de evoluo crnica que, embora seja mais prevalente e grave na espcie bovina, pode acometer seriamente os eqinos (Thomassian, 2005). Os prejuzos advindos com a infeco nos criatrios de eqinos so menores se comparados s outras espcies de interesse zootcnico, visto que nos eqinos so incomuns os transtornos da esfera reprodutiva (Robertson et al., 1973). No entanto, a doena nos eqinos merece preocupao em face no s das leses debilitantes que limitam ou inviabilizam o uso dos animais, com indicao de eutansia dos animais acometidos, como tambm do conseqente prejuzo para o plantel e do potencial de contgio do microrganismo para os eqinos, outras espcies domsticas e para o homem (Ribeiro et al., 2003). Na espcie eqina, as leses mais sugestivas da doena so representadas por inflamaes, de carter purulento em bursas, ligamentos, tendes, sinvias e articulaes, preferencialmente na regio da cernelha (local de juno das duas escpulas; Fig. 1) ou na espinha da escpula (bursite supra-espinhosa), com presena ou no de fstulas (Vasconcellos et al., 1987; Paulin, 2003), popularmente denominadas Mal da Cernelha, Mal da Cruz, Bursite Cervical ou Abscesso de Cernelha (Ribeiro et al., 2003). O perodo de incubao varivel, perdurando de uma semana at quatro meses. A fase inicial de bacteremia extremamente fugaz na primoinfeco, e os animais tornam-se assintomticos por meses, manifestando tardiamente os processos lesionais (Riet-Corra et al., 2003, Thomassian, 2005). A infeco por B. abortus e, ocasionalmente, por B. suis em eqinos provoca intensa inflamao na regio escapular, atlantal ou nucal. palpao, a rea lesional mostra-se distendida, endurecida, hipermica e com pontos de flutuao, que tendem abscedao de material purulento (Castro et al., 2005; Tomassian, 2005). O contedo composto predominantemente por lquido branco-amarelado, viscoso, seroso a seropurulento, o qual contm milhares de bactrias viveis (Paulin, 2003). Ocasionalmente, o processo lesional pode evoluir para tecidos conjuntivos mais profundos da regio interescapular, atingindo as apfises espinhosas das primeiras vrtebras cervicais e torcicas (Thomassian, 2005). Raramente so observados quadros de infeco generalizada nos animais, os quais se manifestam por febre intermitente, rigidez, letargia, inapetncia e dificuldade de locomoo, geralmente secundrio ao desenvolvimento de bursite cervical (Riet-Corra et al., 2003). Nos casos

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crnicos, articulaes e tendes podem estar comprometidos, incluindo os ligamentos vertebrais dorsais (Cohen et al., 1992). So raras as descries de abortamentos na espcie eqina atribudos infeco pelo gnero Brucella (Castro et al., 2005). Em virtude disso os eqinos usualmente so considerados hospedeiros acidentais de B. abortus, de importncia relativa na cadeia epidemiolgica de transmisso intra ou entre-plantis de eqinos e para outras espcies. No entanto, na presena de fstula de cernelha, o contedo do exsudato altamente rico em brucelas viveis, e isso deve ser levado em considerao como fator de contaminao ambiental para outras espcies domsticas, assim como para a infeco humana (Ribeiro et al., 2003).

Figura 1. Abscesso em regio de cernelha em eqino causado por Brucella abortus. Botucatu, SP, 2005. Diagnstico O diagnstico de rotina da brucelose eqina fundamentado nos achados clnico-epidemiolgicos, apoiado nos exames laboratoriais subsidirios (Castro et al., 2005). Na anamnese, faz-se necessrio questionar a procedncia do animal, com o intuito de reconhecer se provm de reas endmicas para brucelose, bem como se co-habita com outras espcies domsticas, especialmente bovinos, bubalinos e sunos. Soma-se a esta conduta o exame clnico rigoroso, com especial interesse na presena de aumento de volume e/ou fstulas em regio de cernelha (Smith, 1994). Dentre os achados clnico-laboratoriais, os eqinos com brucelose revelam geralmente leucocitose por neutrofilia e, ocasionalmente, monocitose. A brucelose eqina pode ser diagnosticada por mtodos diretos ou indiretos (Nielsen et al., 1998). Diferentes procedimentos tm sido utilizados na deteco da brucelose em eqinos. O diagnstico inequvoco firmado a partir do isolamento da bactria procedente das leses cervicais (Ribeiro et al., 2003). O exame bacteriolgico realizado a partir de material oriundo do contedo de abscessos de cernelha, ligamentos, articulaes e, excepcionalmente, casos de abortamentos (Langenegger e Szechy, 1961; Ribeiro et al., 2003). B. abortus pode ser isolada em meios convencionais como o gar-sangue ovino (5%) desfibrinado, em condies microaerofilia, a 37o C, entre trs a cinco dias (Carter e Chengappa, 1991; Ribeiro et al., 2003). Para materiais com suspeita de contaminao por microrganismos oportunistas, recomenda-se o meio de Farrel que contm vrios antimicrobianos (cido nalidxico, bacitracina, ciclohexamida, nistatina, polimixina B e vancomicina) que minimizam a contaminao bacteriana secundria (Quinn et al., 1994; Nielsen et al., 1998). No gar sangue ovino as colnias so pequenas, translcidas, opacas, convexas, com bordos arredondados, aps quatro a cinco dias de incubao. microscopia, Brucella spp apresenta-se como cocobacilo Gram-negativo pela colorao clssica de Gram (Castro et al., 2005). Entretanto, outros mtodos tintoriais podem ser utilizados no diagnstico incluindo o Ziehl-Neelsen modificado e Kster (Carter e Chengappa et al., 1991, Quinn et al., 1994). O diagnstico microbiolgico diferencial nos casos de abscessos em regio de cernelha e sinovites em eqinos deve ser procedido para Arcanobacterium pyogenes, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e para os gneros Staphylococus e Streptococus (Corra e Corra, 1992; Smith, 1994; Reed et al., 2000; Ribeiro et al. 2003). Alternativamente, na presena exclusiva de abscesso em regio de cernelha, deve ser aventado no plano diagnstico o diferencial para o parasita Oncocerca cervicalis (Radostits et al., 2007). Em anos recentes, o diagnstico direto tambm tem sido realizado utilizando a tcnica de reao em cadeia pela polimerase (PCR), que identifica, com alta sensibilidade e especificidade, pequenas seqncias do DNA bacteriano de Brucella spp nas amostras analisadas (Nielsen et al., 1998, 2004). Entretanto, a dificuldade de isolamento de Brucella spp em

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determinadas leses, a contaminao por microrganismos oportunistas (Cohen et al., 1992) e o uso emprico de antimicrobianos na terapia de animais infectados so fatores que podem limitar o diagnstico direto da brucelose eqina ou mesmo contribuir para o subdiagnstico na espcie (Ribeiro et al., 2003; Radostitis et al., 2007). Frente s dificuldades do diagnstico microbiolgico, o diagnstico sorolgico tem sido recomendado (Acha e Szyfres, 2003). Os testes sorolgicos no diagnstico da brucelose animal apresentam, como peculiaridades, simplicidade de execuo, de interpretao, custo acessvel, uso massal, boa sensibilidade e especificidade (Nielsen, 1995). Apesar da disponibilidade de vrios testes sorolgicos, diferentes autores tm alertado para a ocorrncia de reaes inespecficas e para a falta de padronizao na interpretao dos mtodos de sorodiagnstico da doena em eqinos (Langenegger e Szechy, 1961; Ribeiro et al., 2003). A pesquisa de anticorpos anti-Brucella em animais domsticos pode utilizar, como material soro sangneo, plasma, smen e leite (Nielsen e Duncan, 1990). Os testes empregados no diagnstico da brucelose foram desenvolvidos com base na dinmica de formao de anticorpos, em resposta ao estmulo antignico (Alton et al., 1975). A produo de imunoglobulinas (IG) em animais de produo, aps infeco por brucelas patognicas, caracteriza-se pelo aparecimento de quatro isotipos: IgM, IgG1, IgG2, IgA (Nielsen, 2004). As Ig so dirigidas em sua grande maioria contra o lipopolisacardeo (LPS) de membrana de Brucella spp, mais especificamente a frao polissacardica (POLI O). A resposta de IgM aparece poucos dias aps a exposio, aumentando rapidamente, atingindo valor mximo ao redor da segunda semana. Em seguida, declina permanecendo em nveis detectveis (Nielsen et al., 2001). O isotipo IgG1 segue padro semelhante, com picos mais tardios que IgM (4quatro a seis semanas), tendendo a permanecer detectvel por longos perodos (Nielsen et al., 2004). A classe IgG a mais importante do ponto de vista diagnstico em virtude de sua especificidade de ligao com os eptopos do gnero Brucella (Macmillan et al., 1990). Os isotipos IgG2 e IgA aparecem em torno de duas semanas ps-infeco, aumentam gradualmente, mas permanecem em nveis baixos (Carter e Chengappa, 1991). Ao contrrio, fmeas bovinas e bubalinas, vacinadas entre trs e oito meses de idade com a cepa atenuada B 19, apresentam resposta de produo de Ig muito similar dos animais infectados. Porm, tendem a manter predominantemente nveis persistentes de IgM at 24 meses de idade, o que permite diferenciar, aps este perodo, as reaes vacinais das de infeco natural, cujas ltimas caracterizam-se pela persistncia da classe IgG (Macmillan et al., 1990; Nielsen et al., 2004). A classe IgM possui grande capacidade aglutinante nas provas de soroaglutinao e tambm fixao de complemento (Paulin et al., 2002). Predominam na resposta humoral ps-vacinal e em infeces agudas para a maioria dos antgenos bacterianos. Entretanto, determinam reaes cruzadas e indesejveis com outras bactrias Gram-negativas que possuem constituio de parede bacteriana similar ao gnero Brucella (Nielsen et al., 1998), incluindo Yersinia enterocolitica (09), Escherichia coli, Salmonella spp, Pseudomonas aeruginosa (Macmillan et al., 1990). Com efeito, a maioria das modificaes introduzidas nos testes diagnsticos de brucelose visa reduzir a atividade destes anticorpos e detectar, preferencialmente, a classe IgG (Nielsen et al., 2004). No Brasil, so escassos os estudos sobre a brucelose eqina, o que limita delinear claramente a situao da enfermidade no pas (Langenegger e Szechy, 1961; Godoy e Barg, 1976; Viana et al., 1981; Langoni e Silva, 1997; Rosa et al., 2006). Nas ltimas dcadas, os inquritos sorolgicos direcionados ao diagnstico da brucelose eqina no Brasil tm utilizado as provas de soroaglutinao rpida em placa, lenta em tubos e 2 mercaptoetanol (Ribeiro et al., 2003). Em 2001, foi implantado o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT), que coordenado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento do Brasil MAPA, com o intuito de diminuir a prevalncia e o impacto negativo da brucelose animal no pas, com vistas a assegurar a competitividade da pecuria nacional, assim como diminuir o risco dessa grave zoonose. O PNCEBT introduziu em todo o territrio nacional a imunizao obrigatria de bezerras e bfalas entre trs e oito meses de idade, utilizando a vacina atenuada B19, e tambm definiu estratgias de certificao de propriedades livres e monitoradas. Ademais, instituiu a obrigatoriedade da habilitao dos mdicos veterinrios para o diagnstico dessa doena em cursos ministrados por professores e pesquisadores de Instituies de Ensino e Pesquisa credenciadas, bem como definiu os mtodos de diagnstico e destino sanitrio de animais positivos, entre outros procedimentos. Os testes sorolgicos indicados no diagnstico da brucelose bovina e bubalina no PNCEBT so classificados em testes de rotina (triagem), vigilncia epidemiolgica e confirmatrios. De acordo com o programa, o diagnstico indireto da brucelose bovina e bubalina feito pelas tcnicas do antgeno acidificado tamponado corado pelo Rosa Bengala (ATA), 2 mercaptoetanol (2-ME), fixao de complemento e teste do anel em leite ou Ring Test (Brasil, 2006). O teste do ATA possui o antgeno de B. abortus acidificado a pH 3,65, que limita a aglutinao com imunoglobulinas (Ig) da classe IgM, priorizando reaes com a classe IgG, que considerada a Ig especfica de doena (Nielsen et al., 1998). A prova do ATA considerada de rotina (triagem) e substituiu o teste de soroaglutinao rpida que, apesar da boa sensibilidade, apresentava dificuldades de interpretao em virtude das vrias diluies do soro (Nielsen et al., 2004). No ATA so utilizados 30 l do soro e 30 l do antgeno e, aps 4 minutos, os animais que apresentarem reao de aglutinao so considerados positivos (Nielsen et al., 1998). A critrio do mdico veterinrio, os animais positivos nesta prova podem ser conduzidos ao abate sanitrio em abatedouros inspecionados ou terem seu status positivo confirmado nas provas de 2-ME ou FC

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(confirmatrias; Brasil, 2006). O 2-ME realizado em tubos com vrias diluies (1:25, 1:50, 1:100, 1:200) com leitura em 48 horas, confrontando os resultados com a prova de soroaglutinao em tubos, com vistas a dirimir eventuais reaes inespecficas de origem vacinal, geralmente ocasionadas por IgM (Nielsen et al., 2004). Entretanto, qualquer que seja a reao de aglutinao (completa) nas diferentes diluies no teste de 2-ME, o animal qualificado como positivo e, semelhana dos reagentes no ATA, deve ser destinado ao abate sanitrio (Brasil, 2006). A Fixao de Complemento uma tcnica altamente especfica que identifica anticorpos fixadores de complemento das classes IgM e IgG, amplamente utilizada em vrios pases para o diagnstico e para o trnsito internacional de animais em importao e exportao (Brasil, 2006). No entanto, extremamente laboriosa e necessita de padronizao entre os laboratrios, em virtude de pequenas variaes do mtodo (Nielsen et al., 2004). Desta forma, no PNCEBT foi reservada para o diagnstico de animais destinados ao trnsito internacional ou como confirmatria ao ATA, e tem sido realizada somente em laboratrios oficiais do MAPA ou credenciados em certas Instituies de Ensino e Pesquisa do pas (Brasil, 2006). O Ring Test identifica IgM, IgG e IgA no leite provenientes do lato ou tanque, em rebanhos com vacas infectadas, no possuindo, portanto, aplicao prtica no diagnstico da brucelose eqina. Em que pese o impacto positivo na pecuria nacional do PNCEBT e o rigor adotado para a brucelose em bovinos e bubalinos desde a deflagrao do programa, a normativa no apresenta detalhamento sobre os mtodos diagnsticos na brucelose para outros animais de produo (eqinos, sunos, caprinos, ovinos). Epidemiologicamente, estas espcies poderiam atuar como fontes de infeco e reservatrios para o gnero Brucella para infeces interespcies, dificultando, em parte, o prprio sucesso do PNCEBT e o estabelecimento de conduta sanitria especfica nas demais espcies de interesse zootcnico. Dawson e Durrant (1975) assinalaram alta sensibilidade nas provas de fixao de complemento e antiglobulina de Coombs, em contraste com a baixa sensibilidade do ATA no diagnstico da brucelose eqina. Os autores salientaram tambm a falta de padronizao dos testes sorolgicos no diagnstico da brucelose eqina. Macmillan e Cockren (1986) avaliaram a resposta humoral na infeco experimental por B. abortus em eqinos utilizando diferentes mtodos sorolgicos. Os autores observaram que, nas provas de soroaglutinao rpida, ATA e fixao de complemento, os ttulos declinaram a partir de um ms, desaparecendo ao redor de 18 meses ps-infeco. Em contraste, os ttulos para 2-ME atingiram pico semelhante, embora tenham negativado mais precocemente entre seis e oito meses. Ribeiro et al. (2003) centrifugaram o contedo de secreo da bursite cervical em eqinos com sintomas clnicos de brucelose, e utilizaram o sobrenadante - ao invs do soro sangneo - nos testes de ATA, soroaglutinao em tubos e 2-ME. Os resultados desta prova modificada foram comparados com os ttulos sricos dos animais, nos mesmos testes. Foram observados ttulos iguais ou superiores no teste modificado utilizando o material das secrees -, comparativamente aos obtidos nos testes convencionais. Os autores afirmam que os altos ttulos encontrados nas secrees cervicais poderiam ser atribudos alta produo local de IgM e IgG, sugerindo este mtodo modificado como alternativa de diagnstico, diante da impossibilidade de isolamento de B. abortus em animais suspeitos. No diagnstico post-mortem, os achados antomopatolgicos da brucelose eqina caracterizam-se por leses piogranulomatosas em ligamentos, tendes, bursas, sinvias e articulaes (Acha e Szyfres, 2003; RietCorra et al., 2003). necropsia, o contedo das leses purulento, de colorao branco-amarelada e de aspecto viscoso, do qual possvel o isolamento do microrganismo (Riet-Corra et al., 2003). Histologicamente, pode-se notar vasculite difusa nas pores serosas, edema com infiltrado leucocitrio (macrfagos, neutrfilos e linfcitos), exsudato fibrinoso no tecido conjuntivo e proliferao de clulas histiocitrias (Paulin, 2003). Tratamento semelhana das demais espcies de animais de produo e de companhia, no se recomenda a terapia da brucelose em eqinos. Tal conduta justificada pela manuteno intracelular do microrganismo e a pela induo de leses piogranulomatosas, que dificultam a obteno de nveis teraputicos dos antimicrobianos no interior dos fagcitos e no foco infeccioso na presena de material purulento, justificando, em tese, a baixa efetividade da terapia antimicrobiana convencional. Em que pese a no recomendao da terapia, esto descritos na literatura ensaios teraputicos experimentais na brucelose em eqinos e em outros animais de produo, de alto valor zootcnico, sob estrito controle e responsabilidade mdico-veterinria (Corra e Corra, 1992). Neste contexto, Thomassian (2005) indicou a associao entre estreptomicina e tetraciclina por vrias semanas, concomitante a drenagem cirrgica e/ou excises dos abscessos. Contudo, estes ensaios foram conduzidos em situaes controladas, com pequeno nmero de animais e no mostraram efetividade que justificasse a manuteno dos eqinos tratados no plantel, ou mesmo os riscos para o homem no manejo dos animais tratados, permanecendo a recomendao de eutansia para eqinos com diagnstico microbiolgico e/ou sorolgico de brucelose.

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Controle e profilaxia No existem medidas especficas de controle e/ou profilaxia na brucelose eqina. No Brasil, as aes esto voltadas ao controle da brucelose em bovinos e bfalos, devido maior prevalncia da doena nestas espcies, presena de normativa oficial de conduta do PNCEBT e, tambm, ao fato de que a doena nos eqinos causada preferencialmente por B. abortus, que predomina nas infeces em bovinos e bfalos. Com efeito, a vacinao sistemtica de bezerras entre trs e oito meses de idade com vacina atenuada B19 auxilia no controle da brucelose em eqinos, especialmente em propriedades nas quais ocorre a co-habitao entre bovinos, bfalos e eqinos. A aquisio de eqinos de propriedades livres ou no-endmicas para brucelose e a adoo de quarentena para animais recm-adquiridos tambm so procedimentos indicados no controle e na profilaxia. Na vigncia de animais suspeitos, faz-se importante isolar o animal, submeter material clnico para o diagnstico microbiolgico, e tambm fazer exames sorolgicos. Na presena de animais com isolamento microbiano e/ou sorolgico, recomenda-se a eutansia dos animais em frigorfico ou abatedouro inspecionado, alm de investigao soroepidemiolgica de animais contactantes. B. abortus pode permanecer vivel por seis meses ou mais em pastos contaminados por fetos e lquidos de placenta de fmeas bovinas ou bubalinas que abortaram (Lucero et al., 2008). Assim, em pastos ou piquetes de criao de bovinos ou bfalos com abortamento recente pelo microrganismo, aos quais os eqinos tm acesso, recomenda-se impedir o ingresso de eqinos e ruminantes por no mnimo seis meses, cortar a da pastagem, bem como o destinar corretamente as carcaas e os lquidos fetais. Em face do reduzido estudo do sorodiagnstico da brucelose em eqinos, faz-se prudente adotar os mesmos mtodos sorolgicos recomendados no PNCEBT, quais sejam: ATA, 2-ME e Fixao de Complemento. Brucelose no homem As principais espcies de Brucella spp. patognicas para o homem so, em ordem decrescente, B. melitensis, B. suis, B. abortus e B. canis (Corra e Corra, 1992). A Organizao Mundial da Sade estima em aproximadamente 500.000 casos/ano de brucelose humana, embora se acredite que este nmero seja subestimado (OIE, 2002). A doena no homem descrita principalmente no Mediterrneo, na sia, na ndia e na Amrica Latina (Castro et al., 2005). A ocorrncia da brucelose humana est intimamente relacionada com o consumo de alimentos contaminados, com o contato estreito com animais domsticos (Acha e Szyfres, 2003), e/ou como doena ocupacional para magarefes, criadores e veterinrios (Metcalf et al., 1994). Mandell et al. (1995) relataram que as principais formas de infeco por Brucella spp no homem decorrem da transmisso direta do patgeno mediante contato com solues de continuidade ou com a pele lesada, inoculao acidental em conjuntivas, inalao em abatedouros e/ou consumo de produtos e derivados contaminados de origem animal. No Brasil, Oliveira e Ribeiro (2000) investigaram a soroprevalncia da brucelose em funcionrios de abatedouros em Uberlndia, MG. Os autores verificaram que 10,89% de indivduos reagentes so predominantemente do sexo masculino (81,82%), entre 21 e 35 anos de idade (72,72%), com baixo grau de escolaridade e baixa renda familiar mensal (65,34%). Recentemente, Gonalves et al. (2006) estudaram a ocorrncia da brucelose em 150 trabalhadores de frigorfico da regio norte do Paran utilizando ATA e 2-ME, e encontraram 0,66% de indivduos reagentes. A preveno da brucelose humana pode ser alcanada pela educao sanitria dos profissionais, que inclui utilizao de luvas e vestimentas apropriadas no manuseio de animais suspeitos, desinfeco de utenslios, cuidados no uso da vacina atenuada, destino correto de abortamentos, placentas e secundinas de animais domsticos, pasteurizao de produtos lcteos, assim como adoo de procedimentos oficiais previstos no PNCEBT, como a eutansia dos animais infectados. Para humanos, eqinos, sunos e ces no h, at o momento, a disponibilidade de vacinas comerciais (Paulin, 2003; Castro et al., 2005). Consideraes finais A brucelose considerada doena de potencial zoontico, de evoluo crnica, incomum em eqinos, causada predominantemente por B. abortus. A doena em eqinos no caracterizada por transtornos reprodutivos, manifestada principalmente por leses abscedantes em regio cervical, bursas, tendes e articulaes. A transmisso ocorre provavelmente pelo consumo de gua e pastos contaminados, principalmente em propriedades endmicas para brucelose bovina. No se recomenda a terapia, e os animais infectados devem ser encaminhados para abate sanitrio. O diagnstico microbiolgico definitivo, e o sorolgico realizado utilizando, basicamente, as mesmas provas recomendadas para bovinos, apesar de no haver padronizao de interpretao para a espcie eqina. As descries sobre a brucelose eqina geralmente se apresentam sob a forma de relatos de casos ou inquritos soroepidemiolgicos regionais. Pouca preocupao tem sido despendida com os achados epidemiolgicos na brucelose eqina e a caracterizao dos biotipos do microrganismo, que poderiam contribuir no melhor

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