3. Reacciones de fase II.

Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un gasto energtico (formacin de enlaces qumicos); por lo tanto, son reacciones enzimticas que aparte de requerir de ciertos cofactores, necesitan de substratos de alta energa como es el ATP. Las reacciones de fase II tambin se denominan como reacciones de conjugacin, involucran la adicin a los compuestos xenobiticos de molculas endgenas, las cuales generalmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos grupos endgenos son adicionados a grupos funcionales presentes ya en los compuestos xenobiticos, o que fueron introducidos o expuestos en la fase I del proceso de biotransformacin. El propsito final es de obtener molculas polares y con bajo coeficiente de particin lpido/agua, para que se facilite su excrecin al disminuir substancialmente su carcter lipoflico (Klaassen et al, 1986;Manahan, 1990). 3.1. Glucuronidacin. La principal reaccin de conjugacin que se presenta en la mayora de las especies animales es la incorporacin de cido glucurnico a travs del cido uridn difosfo glucurnico (UDPGA). La obtencin del anterior complejo donador proviene de precursores disponibles del metabolismo normal; o sea, que el UDPGA es formado en la fraccin soluble de las clulas hepticas a partir de la glucosa-1-fosfato como se observa en la Figura 3.1.1 (Timbrell, 1985; Manahan, 1990).

La conjugacin del UDPGA con los xenobiticos involucra un ataque nucleoflico de estos compuestos a travs de los tomos de oxgeno, nitrgeno o azufre al carbono C-1 del cido glucurnico, y se observa una inversin de dicho enlace ya que pasa de forma a , como se puede observar en la Figura 3.1.2, donde se ilustra el ataque nucleoflico del fenol sobre el cido uridn difosfo glucurnico.

La enzima responsable de la catlisis del proceso de conjugacin con UDPG, es la UDPglucuronosil-transferasa, la cual se encuentra en la fraccin microsomal de varios tejidos como hgado, rin, piel, intestino y cerebro, siendo cuantitativamente de mayor importancia en el hgado. En si, la glucuronidacin es el principal proceso de conjugacin de las reacciones de fase II, tanto para compuestos endgenos como exgenos, y el resultado es la obtencin de conjugados polares solubles en fase acuosa, que puedan ser eliminados del organismo a travs de la orina o bilis. Debido a la amplitud de substratos que pueden ser aceptados y la suficiente disponibilidad del donador (UDPGA), hace que la conjugacin con cido glucurnidico tanto cualitativa como cuantitativamente sea la ms importante reaccin de conjugacin; as, en la Figura 3.1.3. se muestran los principales tipos de glucurnidos que se pueden formar a partir de diferentes grupos funcionales de los agentes xenobiticos (Burchell and Coughtrie, 1989).

Aunque el proceso de conjugacin generalmente disminuye la actividad biolgica del agente xenobitico original o biotransformado, hay casos excepcionales en donde se observa tambin una bioactivacin, como es la glucuronidacin del acetilamino fluoreno, (Figura 3.1.4,Timbrell, 1985).

3.2.- Sulfatacin. En los mamferos, una importante conjugacin para varios tipos de grupos hidroxilo es la formacin de steres de sulfato. Esta misma reaccin tambin se puede presentar con grupos amino; as, pueden ser substratos de esta conjugacin: alcoholes alifticos, aminas aromticas, fenoles y compuestos endgenos tales como esteroides y carbohidratos. En este proceso de conjugacin el donador del compuesto endgeno (sulfato) es el 3-fosfoadenosin-5-fosfosulfato (PAPS), el cual a su vez requiere ATP para su formacin, como se observa en la Figura 3.2.1. El sulfato inorgnico precursor del PAPS puede ser agotado cuando concentraciones significativas son requeridas para este proceso de conjugacin.

El proceso de sulfatacin es un efectivo proceso de destoxificacin, ya que los conjugados formados, son sulfatos orgnicos ionizados que son relativamente fcil de excretar, principalmente a travs del rin. Sin embargo, debido a que el sulfato inorgnico requerido para la sntesis del PAPS parece provenir de la cisteina, este aminocido es un factor limitante de dicho proceso de conjugacin; as, tenemos que la sulfatacin de fenoles o aril-alcoholes tiene una baja capacidad y por consiguiente la mayor alternativa para este tipo de compuestos es la glucuronidacin. Para llevar a cabo la conjugacin con sulfato se requiere de la participacin de una sulfotransferasa, de la cual hay una amplia variedad para diferentes substratos y estas se encuentran en la fraccin soluble de las clulas de varios tejidos, particularmente del hgado, mucosa intestinal y rin. En la Figura 3.2.2 se tiene ilustrado la sulfatacin de alcoholes aromticos y alifticos (Klaassen et al, 1986; Mulder, 1990).

3.3. Conjugacin con glutatin. Cierto tipo de compuestos xenobiticos son excretados como conjugados de N-acetilcisteina (conjugados del cido mercaptrico). Estos conjugados, generalmente son el resultado de la ruptura enzimtica de los conjugados con glutatin. La conjugacin inicial con glutatin para los diferentes substratos (ya sean alifticos o aromticos), requiere de una variedad de enzimas del tipo glutatintransferaras. Estas enzimas son localizadas en la fraccin soluble de las clulas (Jakoby, 1980; Manahan, 1990). En la Figura 3.3.1 se muestra esquemticamente el proceso completo de conjugacin con glutatin, en donde en primera instancia est la participacin de la glutatin-transferasa para el substrato respectivo; a continuacin se lleva a cabo la ruptura metablica de los residuos glutamil y glicinil del glutatin y por ltimo la acetilacin del conjugado con cisteina para formar el correspondiente derivado del cido mercaptrico. En este proceso generalmente el grupo sulfidrilo (tiol) del glutatin acta como un nucleoflico, atacando el centro electroflico reactivo del componente extrao.

La conjugacin con glutatin, es con frecuencia un proceso muy importante en la destoxificacin de diferentes compuestos. Sin embargo, debido al amplio rango de substratos que se pueden conjugar, el mecanismo de formacin de conjugados puede variar un poco; as, los hidrocarburos aromticos, los haluros de alquilo, los haluros de arilo, los aril-epxidos, los alquilepxidos y los nitroaromticos, pueden todos ellos ser conjugados con glutatin y excretados como derivados del cido mercaptrico. No obstante que la eliminacin va conjugacin con glutatin es por medio del cido mercaptrico, en ocasiones conjugados del propio glutatin o de cistenil-glicina pueden ser excretados por la bilis (Timbrell, 1985; Klaassen et al, 1986; Manahan, 1990). Precisamente a travs de la conjugacin con glutatin se pueden eliminar los epxidos, como es el ejemplo clsico de la conjugacin del naftaleno que es un hidrocarburo aromtico, y que se observa en la Figura 3.3.2. Tambin, la conjugacin con glutatin se ha observado que se presenta con los hidrocarburos aromticos policclicos y las aflatoxinas

3.4. Otros procesos de conjugacin Hay otros procesos de conjugacin; sin embargo, la conjugacin con cido glucurnico es la de mayor capacidad en los animales superiores. Dentro de otros procesos de conjugacin cabe destacar la acetilacin, ya que es un proceso importante en el metabolismo de las aminas aromticas, sulfonamidas e hidrazinas. Las enzimas que cataliza la acetilacin de aminas se designa como Acetil CoA: amina Nacetil-transferasa, teniendo como cofactor a la acetil coenzima A. La enzima responsable de esta conjugacin se encuentra en el citosol de las clulas de diversos tejidos; un dato importante es que los perros y especies relacionadas, son deficientes en este sistema de conjugacin y por lo tanto son incapaces de acetilar a un amplio nmero de substratos. En la figura 3.4.1 se ilustra el tipo de aminas que pueden sufrir la acetilacin (Klaassen et al, 1986; Gorrod et al, 1988).

Otra reaccin importante de fase II, es la conjugacin de compuestos con un grupo carboxilo; en este caso, hay una amplia variedad de aminocidos para llevar a cabo la conjugacin, y consecuentemente son excretados como pptidos. El aminocido ms comnmente utilizado es la glicina, pero tambin se observan conjugados con ornitina, taurina y glutamina. La reaccin involucra la acilacin del grupo amino del aminocido por parte del compuesto extrao; a su vez, el grupo carboxilo del compuesto xenobitico tiene que formar un derivado con la coenzima A, como puede observarse en la Figura 3.4.2 donde se ilustra la conjugacin del cido benzico con glicina (Klaassen et al, 1986).

4. Integracin del proceso de biotransformacin.

Si bien el propsito del proceso de biotransformacin es la eliminacin de sustancias extraas que llegan a penetrar al organismo, por lo cual es un proceso detoxificante al evitar su acumulacin, tambin se pueden presentar fenmenos de bioactivacin, siendo, estos ltimos ms bien casos excepcionales. El proceso de biotransformacin es muy complejo, donde tiene gran relevancia el factor gentico; as, tenemos que sobre un mismo agente xenobitico hay diferencia tanto cualitativa como cuantitativa de los metabolitos formados por diferentes especies. Por lo tanto, la Toxicologa Comparativa, nos indica las similitudes y diferencias de la respuesta hacia un agente xenobitico, por las diferentes especies animales y el hombre. Como ejemplo de lo anterior, tenemos el proceso de biotransformacin del fenol que se muestra en la Figura 4.1, complementandose ste, con los datos del Cuadro 4.1; donde se observa la gran diferencia tanto cualitativa como cuantitativa de los metabolitos formados (Nerbert and Felton, 1976; Hodgson and Guthrie, 1980).

Del proceso de biotransformacin del fenol ilustrado con anterioridad en las diferentes especies, se puede deducir que es de suma importancia poder conocer las similitudes y diferencias en el metabolismo hacia los diferentes agentes xenobiticos. Precisamente, esta informacin sustenta a la Toxicologa Comparativa, de tal manera se puede seleccionar el modelo biolgico ms adecuado para su extrapolacin al humano (Williams, 1974; Hodgson and Guthrie, 1980). El comportamiento anterior es probablemente debido a un proceso evolutivo de los organismos, ya que se puede considerar que la distribucin y funcionalidad de la Citocromo P-450, tanto en plantas como en animales es de remota aparicin, y actualmente se conoce que hay una gran variedad de isoenzimas agrupadas por familias, siendo las CYP 1, 2 y 3 que se involucran ms en el metabolismo de xenobiticos, en particular la CYP2 que es la que presenta mayor variabilidad inter e intraespecie (Klaasen et al, 1986; Nebert and Gonzlez, 1987). Finalmente, en los Cuadros 4.2 y 4.3 se tienen algunas consideraciones generales del proceso de biotransformacin en el humano en condiciones normales de salud, donde cabe mencionar que es de suma importancia el aspecto alimenticio (Netter, 1994). De los cuadros mencionados, se puede deducir que la mayora de los xenobiticos son eliminados como glucurnidos y el rin es la va de eliminacin mayoritaria (Klaasen et al, 1986).