Prof.

Augusto Dinis

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Trfego das protenas de secreo

A maior parte das protenas destinadas ao Retculo Endoplasmtico (RE), complexo de Golgi, lisossomas, membrana plasmtica e exterior celular (exportao) so sintetizadas em ribossomas que aderem ao RE mecanismo de transporte co-traducional

Via da Secreo ou Via Secretora

O transporte de molculas entre os compartimentos desta via (compartimentos topologicamente equivalentes mas sem continuidade espacial) feito por vesculas transportadoras mecanismo de transporte vesicular
Alberts et al., 2008

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Tipos de Retculo Endoplasmtico

Retculo Endoplasmtico em microscopia de fluorescncia

Microfotografias TEM do Retculo Endoplasmtico Rugoso (RER) e Retculo Endoplasmtico Liso (REL)

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REL

RER

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Sntese das protenas de secreo

Representao esquemtica da sntese de protenas em ribossomas livres e em ribossomas ligados ao retculo endoplasmtico (protenas de secreo) e microfotografias TEM de uma seco transversal ( direita) e uma seco tangencial (encaixe superior) do Retculo Endoplasmtico Rugoso

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O que determina a sntese das protenas de secreo em ribossomas que aderem ao Retculo Endoplasmtico?

Sequncia-sinal de endereamento para o Retculo Endoplasmtico

Extremo amina

Sequncia de 16 a 30 a.a. localizados no terminal N da cadeia peptdica e que inclui um ou mais a.a. carregados positivamente adjacentes a um segmento contnuo de 6 ou mais a.a. hidrofbicos (ncleo hidrofbico). A sequncia sinal reconhecida e ligada por uma Partcula de Reconhecimento do Sinal (PRS). A sequncia sinal clivada por uma peptidase durante a translocao para o lmen do RER.

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A Partcula de Reconhecimento do Sinal (PRS)

Partcula ribonucleoproteica que liga simultaneamente a sequncia sinal para o RER, a subunidade maior do ribossoma e o recetor proteico localizado na membrana do RER (recetor PRS). Consiste de seis polipeptdeos diferentes, dos quais cinco ligam uma pequena molcula de RNA (RNA da PRS) que medeia a interao com o RNA ribossmico:
P54 liga a sequncia sinal e o recetor PRS. P68/P72 necessrias para a translocao da protena. P9/P14 interagem com a subunidade maior do ribossoma e provocam a interrupo temporria da sntese da protena.

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O recetor da Partcula de Reconhecimento do Sinal (recetor PRS) Protena transmembranar integral formada por duas subunidades (subunidade e subunidade ). A subunidade interactua com o complexo PRS + Sequncia sinal + Ribossoma e possui, juntamente com a unidade P54 da PRS, actividade GTPsica essencial para o ciclo de ligao e dissociao da PRS com o seu recetor. A subunidade interactua com o complexo translocador por onde ocorre a passagem da protena.
mRNA

SRP

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Caractersticas do transporte de protenas para o Retculo Endoplasmtico (RE):

A sntese da protena precursora ocorre em ribossomas ligados membrana do retculo endoplasmtico A sntese e a translocao ocorrem geralmente em simultneo (translocao co-traducional) A protena translocada na sua conformao distendida A sequncia sinal (localizada no extremo N) clivada durante a translocao da protena para o lmen do RE A translocao co-traducional requer GTP e a translocao ps-traducional requer ATP

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Translocao co-traducional de uma protena para o lmen do RE

Lodish et al., 2008

Etapa 2 traduo da protena interrompida

Etapa 4 traduo da protena retomada

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Translocao ps-traducional de uma protena para o lmen do RE

Nas leveduras, algumas poucas protenas

so transferidas para o RE aps a sua completa traduo no citosol. A incorporao destas protenas no RE no requer PRS. A sequncia sinal reconhecida por receptores proteicos distintos complexo Sec62/63 associado ao translocador Sec61 da membrana do RE. Chaperonas Hsp70 citoslicas mantm a cadeia polipeptdica numa conformao distendida para poder entrar no translocador. Chaperonas Hsp70 do RE, designadas BiP (binding proteins), auxiliam a cadeia peptdica a atravessar o canal funcionando como roquetes (com gasto de ATP).

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Insero de protenas na membrana do RE

As protenas destinadas integrao na membrana dos organelos da via da secreo so inseridas inicialmente na membrana do RE em vez de serem libertadas no lmen. Da membrana do RE, estas protenas so transportadas at ao seu destino final como componentes membranares e no como protenas solveis. Durante o transporte, a orientao da protena membranar sempre preservada.

A orientao final das protenas membranares estabelecida durante a sua sntese na membrana do RER

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Categorias das protenas integrais de acordo com a sua topologia

Classes I, II e III protenas com uma s -hlice na membrana (unitransmembranares ou single-pass): Tipo I protena ancorada com o segmento do terminal N na face luminal (exoplasmtica) e o segmento do terminal C na face citoslica sequncia sinal presente no terminal N, a qual clivada. Tipo II protena ancorada com o segmento do terminal N na face citoslica e o segmento do terminal C na face lumenal protenas sem sequncia sinal no terminal N. Tipo III protenas com orientao similar s do Tipo I, mas sem a sequncia sinal clivvel. Classe IV protenas com mltiplos segmentos hidrofbicos inseridos na membrana protenas multipass.

Lodish et al., 2008

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Insero de protenas na membrana do RE

As diferentes topologias das protenas membranares refletem mecanismos distintos usados pela clula para estabelecer a orientao dos segmentos peptdicos na bicamada lipdica durante a sntese da protena no RER

(S TA)

Lodish et al., 2008

Sntese e integrao de uma protena transmembranar (Tipo I) na membrana do RE

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Processamento Proteoltico no RE Clivagens proteolticas especficas (remoo de sequncias peptdicas)

Algumas enzimas e hormonas formam-se a partir de
precursores de grandes dimenses (preproprotenas) Exemplo: insulina - O precursor inicial (preproinsulina) contm uma sequncia sinal no terminal N que a enderea para o RE. - A clivagem desta sequncia durante a translocao na membrana do RE origina um segundo precursor (proinsulina). - Este precursor convertido em insulina aps a unio das duas cadeias atravs de ligaes dissulfureto e remoo proteoltica de um segmento peptdico interno.

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Processamento Proteoltico no RE Formao de ligaes dissulfureto (S-S)

A formao de pontes S-S entre as cadeias laterais de cistenas importante para o enovelamento correcto das protenas de secreo e manuteno da sua estrutura. No citosol, os resduos de cistenas so mantidos no estado reduzido (SH). No RE, o ambiente oxidativo a encontrado promove a formao de ligaes SS. A formao de ligaes S-S catalisada pela enzima dissulfureto isomerase, uma das protenas residentes do lmen do RE.

Insulina

RNAse

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Processamento Proteoltico no RE Enovelamento correcto das cadeias polipeptdicas e montagem das subunidades de protenas multimricas
As protenas translocadas para o RE atingem a sua conformao final por aco sequencial de chaperonas presentes no lmen do RE. As chaperonas BiP ligam-se cadeia logo que ela atravessa a membrana, mediando o enovelamento da protena e a montagem de protenas com vrias subunidades. Outras protenas importantes so as calnexinas e calreticulinas (chaperonas glicoproteicas).

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Processamento Proteoltico no RE Adio e processamento de carbohidratos (glicosilao)

Tipos de oligossacardeos nas glicoprotenas:
Oligossacardeos N-linked ligao ao grupo amdico da cadeia lateral da Asparagina (Asn) duma sequncia-sinal de glicosilao (Asn-X-Ser/Thr) formados no retculo endoplasmtico e complexo de Golgi. Oligossacardeos O-linked ligao ao grupo hidrxilo (OH) da cadeia lateral dos aminocidos Serina (Ser) ou Treonina (Thr) formados no complexo de Golgi.

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Glicosilao de Protenas no RE
A maior parte das protenas de secreo (solveis ou ligadas a membranas) so glicosiladas. Neste processo, um precursor oligossacardico transferido em bloco para as protenas do RE. Este precursor consiste de14 resduos de acar (2 x N-acetilglucosamina, 9 x manose e 3 x glucose). O precursor transferido para a cadeia lateral de um grupo NH2 de uma asparagina (Asn) que integra um sinal de glicosilao oligossacardeos N-linked ou asparagine-linked.
Lodish et al., 2008 Alberts et al., 2008

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Glicosilao de Protenas no RE

Biossntese do complexo precursor dos oligossacardeos N-linked

(Lodish et al., 2008)

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Glicosilao de Protenas no RE

Cooper & Hausman, 2009

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Glicosilao de Protenas no RE
Funes das cadeias laterais oligossacardicas nas glicoprotenas: Intervm na conformao tridimensional das glicoprotenas Ajudam a proteger as protenas da protelise Participam no reconhecimento e na adeso celular Funcionam como antignios (ex.: nos grupos sanguneos ABO)

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Sntese de Lpidos no REL

As reaes qumicas necessrias sntese dos lpidos membranares so catalisadas por enzimas presentes no REL
Sntese de fosfolpidos derivados do glicerol (glicerofosfolpidos)
Fosfatidil-colina Fosfatidil-serina Fosfatidil-etanolamina Fosfatidil-inositol

Sntese de colesterol Sntese de ceramida (precursor dos esfingolpidos)

Por serem extremamente hidrofbicos, os lpidos so sintetizados na membrana do REL (folheto citoslico), embora os seus precursores provenham do citosol

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Sntese de fosfoglicerdeos no REL

Etapa 1: dois cidos gordos previamente ativados com coenzima A so, sequencialmente, esterificados a uma molcula de glicerol-3-fosfato, originando-se cido fosfatdico

Lodish et al., 2008

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Sntese de fosfoglicerdeos no REL

Etapa 2: formao dos fosfodisteres nos quais um dos steres o 1,2-diacilglicerol e o outro uma molcula hidrossolvel como a colina, etanolamina, serina, inositol, etc

Lodish et al., 2008

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Sntese de fosfoglicerdeos no REL

Grande parte dos fosfoglicerdeos sintetizados de novo no folheto citoslico so translocados para o folheto lumenal por ao de flipases especficas

ane

Lodish et al., 2008

Cooper & Hausman, 2009

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Como so distribudos os lpidos pelos diversos compartimentos intracelulares?

1. Lpidos membranares que se destinem a outras zonas do RE e ao invlucro nuclear difundem lateralmente ao longo da membrana. 2. Lpidos membranares que se destinem a outros compartimentos da via da secreo so transportados em vesculas transportadoras. 3. Lpidos membranares que se destinem s mitocndrias, plastdeos ou peroxissomas so transportados por protenas solveis no citosol protenas de intercmbio ou transferncia de fosfolpidos.

Alberts et al., 2008

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