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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE TECNOLOGIA E GEOCINCIAS DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA CURSO DE QUMICA INDUSTRIAL

Relatrio N 01 Isolamento de bactrias mesoflicas de amostra de sorvete

Curso: Qumica Industrial Disciplina: Microbiologia Industrial Professora: Snia Albuquerque Aluno: Iago Jos Santos da Silva

Recife, abril de 2012

1- INTRODUO Os microrganismos esto presentes na natureza em comunidades mais ou menos complexas. No entanto, o estudo das propriedades e caractersticas dos microrganismos tornou necessrio o desenvolvimento de tcnicas que permitissem a obteno de organismos separados (ou isolados) dessas comunidades, em culturas puras. A cultura e o isolamento de microrganismos so duas operaes bsicas em Microbiologia. O crescimento de populaes microbianas em meios de cultura no laboratrio permite a obteno de culturas puras culturas que contm apenas um tipo de microrganismo ou de culturas mistas culturas que tm mais do que um tipo de microrganismo. O isolamento promove a separao de um microrganismo a partir de populaes mistas. As culturas puras podem ser obtidas atravs dos seguintes mtodos: Mtodo das estrias ou de riscado em placa: um mtodo de isolamento bastante rpido. Consiste na diluio de uma pequena poro de inculo, colhida com uma ala, a qual sucessivamente riscada na superfcie de um meio de cultura slido. A execuo do riscado pode ser feita por vrios processos. Mtodo das diluies sucessivas: consiste na realizao de diluies sucessivas da amostra, em condies de esterilidade, e posterior sementeira de quantidades conhecidas das mesmas em placas de Petri. A sementeira (operao que consiste em distribuir uniformemente o inculo em meio de cultura apropriado) pode ser feita superfcie (pelo mtodo do espalhamento em placa), em camada dupla e por incorporao.

Em qualquer dos casos visa-se o desenvolvimento de uma populao a partir de uma nica clula inicial e ser importante fazer subculturas a partir de uma colnia isolada, para certificao da pureza das culturas. O crescimento dos microrganismos em meio slido d origem formao de colnias (crescimento macroscopicamente visvel resultante da multiplicao celular). Se as clulas microbianas estiverem completamente dispersas, cada colnia corresponde a uma bactria inicial em estado vivel e cultivvel. Se os microrganismos estiverem agregados ou aderentes a pequenas partculas no h correspondncia entre o nmero de colnias obtido e o nmero inicial de microrganismos. Desta forma, relativamente origem de uma colnia, ou ao teor de microrganismos determinado por contagem de colnias, fala-se em Unidades Formadoras de Colnias (UFC). Aps a obteno de uma cultura pura, a sua manuteno em laboratrio deve garantir que os microrganismos permaneam viveis, geneticamente homogneos e protegidos de posteriores contaminaes. As culturas podem ser mantidas por refrigerao (4C), congelamento (-20C, -70C ou em nitrognio lquido: -180C) ou liofilizadas. Para conservao em longo prazo devero usar-se substncias crioprotetoras, por exemplo, glicerol. Nesta prtica realizou-se o isolamento de microrganismos presentes numa amostra de sorvete. A tcnica usada foi a de diluies sucessivas. Aps o isolamento realizou-se o cultivo das culturas puras e por fim fez-se a observao e identificao dos microrganismos encontrados, usando as tcnicas adequadas.

2- MATERIAIS E MTODOS 2.1 Materiais Amostra de sorvete; 1 erlenmeyer com 90 mL de gua estril; 4 tubos de ensaio contendo 9 mL de gua estril cada; 1 balo com meio de Agar Nutritivo (AN); Placas de Petri esterilizadas; Tubos de ensaio com meio AN.

2.2 Procedimento experimental 2.2.1 Dia 1 Pipetou-se 10 mL da amostra de sorvete e preparou-se uma suspenso no erlenmeyer que continha 90 mL de gua estril. Agitou-se para obter-se uma suspenso bem homognea dos microrganismos existentes. Transferiu-se com pipeta estril, 1 mL da suspenso para um dos tubos de gua estril. Agitou-se bem e deste tubo retirou-se 1 mL e transferiu-se para outro tubo com gua e assim sucessivamente tendo sido realizada uma srie de diluies 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5. De cada diluio, transferiu-se para duas placas estreis amostras de 1 mL. Depois se adicionou a cada placa cerca de 15 mL de meio AN fundido e resfriado a 45C. A Figura 1 ajuda a entender melhor o procedimento explicado acima. Agitou-se para homogeneizar. Esperou-se o meio solidificar em repouso por mais ou menos 3 minutos, inverteu-se as placas e incubou-se temperatura ambiente durante 48 horas.

Figura 1 Mtodo das diluies sucessivas. 2.2.2 Dia 2 Observou-se as colnias que cresceram e escolheu-se as tpicas de bactrias. Na escolha da colnia foram anotados aspectos macroscpicos, tais como: tamanho, cor,

forma, bordos, consistncia, caractersticas da superfcie da colnia, brilho e presena de pigmento solvel. Com uma ala de platina foi transferida parte da colnia para um tubo com AN e incubou-se temperatura ambiente. 2.2.3 Dia 3 Observou-se o crescimento no tubo de cultura com AN. Fez-se lmina in vivo para observar se havia movimento. Realizou-se uma colorao de Gram e uma de esporos. 3 RESULTADOS E DISCUSSO A colnia escolhida foi uma formada na placa de Petri referente terceira diluio. Os aspectos macroscpicos desta colnia esto relacionados na Tabela 1: Aspecto macroscpico Descrio Tamanho Mdio Cor Laranja Forma Redonda Consistncia Cremosa Brilho Presena Pigmento solvel Ausncia, pois o meio no mudou de cor Tabela 1 - Aspectos macroscpicos da colnia. Relativamente aos testes microscpicos, os resultados obtidos foram os seguintes, mostrados na Tabela 2: Teste microscpico Resultado Lmina in vivo para verificar mobilidade Imvel Colorao de Gram Bacilos Gram Negativos Colorao de Esporos Ausncia de Esporos Tabela 2 - Testes microscpicos com o microrganismo. 4 CONCLUSO 5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS