Aplicao de um composto de HRP / PANI / PEG-MWCNT como uma plataforma para a deteco de perxido de hidrognio com uma elevada

sensibilidade ao baixo potencial: Efeitos da dopagem / dedoping processos no desempenho compsito

Jussara Vieira da Silva, Rita de Cssia Silva Luz um, e Flavio Santos Damos um
um

Departamento de Qumica, UFVJM, MGT Rodovia 367, 583 km, o n 5000, Alto da Jacuba, 39100-000,

Diamantina, MG, Brasil

Polianilina

O,

O'-bis

(2-aminoetil)-polietileno-glicol-funcionalizado nanotubos

de

carbono

multicamadas (PANI / PEG-MWCNT) compostas eletrodos modificados com sucesso preparado por eletropolimerizao utilizando a tcnica de voltametria cclica.Microscopia electrnica de varrimento (SEM) e Fourier Transform Infrared (FT-IR), espectroscopia foram utilizados para confirmar a presena de O, O'-bis (2-aminoetil)-polietileno-glicol, aps a modificao de nanotubos. O transporte inico em PANI / PEG-MWCNT filme e os seus efeitos sobre o desempenho do composto so apresentados. Os estudos foram realizados in situ e em tempo real, utilizando a digitalizao J microscopia eletroqumica (SECM), eletroqumica ressonncia plasmon de superfcie(ESPR) e electroche mical microbalana de cristal de quartzo (EQCM). Tanto a participao protnico e aninicos nos processos de compensao de carga, foram calculados e indicaram que a presena do PEG-MWCNT no filme PANI suprimir o transporte aninico. Chemical imagiologia da resposta electroqumica de PANI / PEG-MWCNT filmes foi realizada por SECM. Finalmente, a adsoro entre a PANI negativamente carregado / PEG-MWCNT nanocompsito e a carga positiva da peroxidase de rbano (HRP) resultou em sensibilidade elevada (1,01 uM Acm -2 -1) em perxido de hidrognio. Este sensor exibiram uma boa reprodutibilidade e estabilidade a um potencial aplicado de -100 mV vs Ag / AgCl. Palavras-chave: peroxidase; Polianilina; polietileno glicol; nanotubos de carbono; perxido de hidrognio; microscopia de varredura eletroqumica.

1. Introduo Nanoestruturados de polmeros condutores tm sido amplamente investigadas devido s suas propriedades especiais para aplicaes em eletrocatlise, capacitores, clulas de combustvel, proteo contra corroso, e sensores [1, 2]. Em particular, a polianilina (PANI) tm recebido muita ateno devido s suas propriedades interessantes, tais como a sntese fcil, boa condutividade eltrica, estabilidade, eletroqumica e propriedades pticas [3-5]. Na verdade, PANI tambm apresenta mudanas dramticas na sua estrutura eletrnica e propriedades fsicas com o estado protonao [6]. Entre as aplicaes mais promissoras da PANI o desenvolvimento de Biointerfaces cujas aplicaes inclui o desenvolvimento de plataformas para eletroqumica biosensoriamento [7]. PANI pode proporcionar um ambiente adequado para a imobilizao de biomolculas para garantir uma boa acessibilidade para o reconhecimento dos stios catalticos, bem como fornecer uma orientao espacial dos bimolecules para facilitar a sua interaco com o alvo. Na verdade, PANI modificados elctrodos tm vrias vantagens, tais como a amplificao impressionante e eliminao do sinal de incrustao no elctrodo [8]. Deposio de biomolculas sobre polmeros condutores tem sido feito de diferentes

maneiras. Considerando-se que a maior parte dos substratos utilizados para a construo biointerface so constitudos por superfcies condutoras, a electropolimerizao confere na fase de imobilizao de biomolculas as vantagens de um controlo fcil sobre a morfologia, a espessura ea forma da superfcie condutora [9]. Alm disso, a qualidade das pelculas eletropolimerizado uma vantagem atraente para a regularidade na funcionalizao da pelcula de polmero. Neste sentido, um modo interessante de imobilizao de biomolculas a sua incluso no filme eletropolimerizado uma vez que esta abordagem pode ser acoplado com o processo electroqumico do polmero dopagem contribuindo para a estabilidade da enzima a incorporao [10]. O desenvolvimento de materiais compsitos de polmero pode proporcionar um maior controlo da dopagem / dedoping processos em PANI polmeros condutores, contribuindo para a indstria qumica e a flexibilidade estrutural de polmero que podem facilitar a absoro e incorporao de

biomolculas. Recentemente, orgnico-inorgnicos nanomateriais hbridos tm sido amplamente investigadas. A razo principal obter materiais compsitos com novo tipo de comportamentos sinrgicos ou complementares [11]. Desde a descoberta dos nanotubos de carbono (CNT) por Iijima [12], tem atrado grande interesse devido s suas caractersticas nicas, incluindo propriedades eltricas, excelente resistncia mecnica, eletrnica e propriedades qumicas [13]. A sua rea de superfcie e geometria oca, combinado com a condutividade electrnica e as propriedades mecnicas sugerem que os nanotubos de carbono possuem a capacidade de promover reaces de transferncia de carga, quando utilizado como um material de elctrodo para reaces electroqumicas [14]. Estas propriedades notveis de nanotubos de carbono se tornaram um atrativo para muitas aplicaes, especialmente para a fabricao de sensores e biossensores, melhorando sua sensibilidade e seletividade e, agindo como catalisadores para o processo de muitas substncias [15-17].

Assim, a fabricao de compsitos de polianilina / carbono nanotubos tem atrado muita ateno por causa das propriedades individuais dos dois componentes podem ser combinados para produzir novos nanomateriais hbridos com um efeito sinrgico. Eles melhoram a resistncia mecnica, a condutividade, e o transporte de carga do material de que altamente desejvel em aplicaes de sensores de deteco de um nmero de molculas de [18,19]. O perxido de hidrognio (H 2 O 2) desempenha um papel importante como mediador essencial na alimentao, biologia, medicina, indstria e indstrias ambientais e de sade [20-23]. Portanto, a deteco de perxido de hidrognio tem um grande significado nas reas de monitoramento ambiental, segurana alimentar e anlise industrial. O desenvolvimento de mtodos para a deteco de H 2 O 2 com elevada sensibilidade e selectividade altamente desejada para as aplicaes prticas.Atualmente, vrias tcnicas analticas, incluindo fluorescncia, [24] quimioluminescncia, [25], espectrofotometria [26]

electroqumica e [27 ] foram aplicadas para a determinao de H 2 O 2. Entre eles, a anlise electroqumica tem sido amplamente utilizada, devido vrias vantagens, que incluem uma resposta rpida e de alta sensibilidade. [28] Em particular, biossensores electroqumicos que utilizam elctrodos de peroxidase modificados so uma alternativa promissora, devido s vantagens intrnsecas associadas sua elevada actividade cataltica e a selectividade da enzima para os seus substratos. Assim, a tcnica de imobilizao da enzima sobre a superfcie do elctrodo um dos aspectos fundamentais no desenvolvimento de biossensores electroqumicos fiveis com actividade elevada e a sensibilidade da enzima. Aqui, relatado um processo simples e eficaz para a construo do composto de HRP / PANI / PEGMWCNT via polimerizao in situ e tambm a sua aplicao para a deteco altamente sensvel para o perxido de hidrognio. A J estrutura, morfologia, fluxos inicos, e impedncia de PANI / PEGMWCNT nanocompsitos foram investigados. Finalmente, o nanocompsito HRP / PANI / PEGMWCNT foi usado para construir uma electroqumico de H 2 O 2 por meio da imobilizao do sensor dentro de um HRP PANI / PEG-MWCNT elctrodo compsito modificado para melhorar a eficincia da imobilizao da enzima e a sua estabilidade. 2 Experimental 2,1 Reagentes, materiais e procedimentos Todos os produtos qumicos foram de grau analtico. Multi-walled nanotubo de carbono (pureza> 95%, 7-15 mm de dimetro, 0,5-10 m de comprimento), foi adquirido a partir de Nanolab, Inc (Brighton, MA, EUA). Dissdico e fosfato monossdico (Na 2 HPO 4 e NaH 2 PO 4) foram adquiridos a partir de sintetizador, So Paulo, Brasil e O, O'-bis (2-aminoetil)-polietileno-glicol (PM 2000) (PEG-NH 2), foi adquirido a partir de Aldrich (Milwaukee, EUA). Anilina J (98%) a partir de Aldrich (Milwaukee, EUA) foi destilado antes da utilizao. A soluo de anilina aquosa foi armazenada num frasco escuro temperatura baixa. O cido sulfrico (H 2 SO 4) a partir de Synth (So Paulo, Brasil), e perxido de hidrognio (H 2 O 2) adquirido da Merck (Darmstadt, Alemanha) foram utilizados como foram

recebidos. gua desionizada foi utilizado aps purificao em um sistema Millipore Milli-Q e o pH real das solues tampo foi determinada com um pH / Ion Analyser Corning 350 modelo.

Um sensor de disco de ouro composto por uma superfcie de ouro de deteco (espessura de 50 nm) depositada sobre uma lmina de vidro para microscpio usando uma camada de adeso de titnio (espessura de 1,5 nm) foi adquirida a partir de Xantec Bioanalytics (Muenster, Alemanha). O disco ptico sensor foi anexado ao prisma usando um fluido ndice de correspondncia (25 o C) = 1,518, Cargille Laboratories (Cedar Grove, NJ, EUA J ). Os cristais de quartzo, AT-cortado
com uma freqncia fundamental de 6 MHz imprensado entre eletrodos de ouro, foram adquiridas de Metrohm Autolab BV, da Holanda. 2,2 caracterizao de materiais e medidas eletroqumicas, EQCM e SECM Microscopia eletrnica de varredura (MEV) foram obtidas utilizando um JEOL JSM-6510LV microscpio eletrnico de varredura. Os espectros de Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR) foram realizadas em um UV-Vis-NIR espectrmetro Cary 5000. Voltametria cclica, de impedncia eletroqumica e experimentos de microbalana de cristal de quartzo foram realizadas com um potenciostato / galvanostato AUTOLAB 128N equipado com EQCM e FRA2 mdulos. Todas as imagens SECM e curvas de abordagem foram realizadas utilizando o modo de realimentao do SECM com um microscpio CHI 920C (CH Instruments) com uma configurao de quatro elctrodos, temperatura ambiente, que utiliza uma combinao de posicionadores de motores de passo da resoluo de 8 nanmetros, com 50 mm de curso distncia e um bloco de XYZ piezo, a fim de posicionar a ponta. A clula electroqumica empregada foi construdo em Teflon, com uma abertura de dimetro 8 mm. Dicas SECM foram ultramicroeletrodos (UMEs) de Pt com o raio, a, de 5 um e RG ~ 5 (RG a relao entre o raio de vidro isolante, rg, ao de um, assim RG = rg / a), que foram construdas e caracterizados como descrito anteriormente [29,30].Abordagem curvas foram gravadas, movendo a ponta para a superfcie do elctrodo modificado com a velocidade de 2 m s -1, enquanto a ponta foi realizada a um potencial constante de uma corrente de difuso limitada de fase de soluo de sonda electroqumica na ponta. 2,3 Preparao de HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado A J preparao de HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado foi realizado em dois passos. No primeiro passo, um filme de PANI / PEG-MWCNT foi electrodepositado sobre a superfcie do elctrodo de ouro por voltametria cclica. A fabricao de PEG-NH2 modificado MWCNT foi realizada como descrito na literatura 31. Resumidamente, os grupos carboxlicos foram inseridos atravs do refluxo de 30 mg de MWCNT em 4 mL HNO3 durante 24 horas e filtrada atravs de papel de filtro.O resduo (Mwnt-COOH), foi submetida a refluxo em 10 ml de cloreto de tionilo a 65 C durante 24 h para se obter Mwnt-COCl, seguido por lavagem com THF, e seco temperatura ambiente. Finalmente, a amina funcionalizada Mwnt foi inserida por meio de refluxo com COCl Mwnt-O, O'-bis (2-aminoetil)-

polietileno-glicol em THF a 60 C durante 24 h. O MWCNT PEG funcionalizado (PEG-MWCNT) foi separado por filtrao e seco temperatura ambiente. Em seguida, 3 mg mL -1 PEG-MWCNT foi

L -1 soluo de anilina e a polimerizao foi levada a cabo por voltametria cclica. Na segunda etapa, foi realizada a imobilizao de HRP no PANI/PEG-MWCNT32 modificado. Desta forma, 1,7 mg de HRP foram suspensos em 3 ml de 0,1 mol L -1 tampo PBS (pH 5,6), que HRP foi carregado positivamente porque o seu ponto isoelctrico (pi) de 7,2. A PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado foi ento transferida para a soluo de HRP e -0,5 V foi aplicada ao elctrodo durante 20 minutos para imobilizar HRP sobre o elctrodo. O elctrodo foi lavado com tampo PBS (pH 5,6) por cinco vezes, estabilizada por deixar cair uma soluo de glutaraldedo a 2,5% (v / v) a fim de evitar a lixiviao de HRP, e incubou-se a 4 C durante a noite para formar as ligaes covalentes. Depois disso, o elctrodo construdo (HRP / PANI / PEG-MWCNT) foi lavado com tampo PBS (pH 5.6) completamente.
disperso em 0,05 mol 3 Resultados e discusso 3.1 Caracterizao Composite A caracterizao do MWCNT no modificado e PEG-MWCNT foi realizada por SEM e FT-IR e os resultados so apresentados nas Figs. 1 e 2, respectivamente. As imagens SEM do no modificada (Fig. 1a) e o PEG-MWCNT (Fig. 1b) mostram que o PEG-NH 2 molculas esto distribudos sobre a superfcie, sem qualquer agregao MWCNT grande escala detectvel de molculas de polietilenoglicol, indicando uma boa disperso na superfcie do nanotubo de carbono. Aqui Figura 1 Para confirmar a modificao de MWCNT, a composio qumica de superfcies MWCNT no modificados e modificados foram caracterizados por FT-IR. A Fig. 2 mostra os espectros de FT-IR de no modificado e PEG-modificados MWCNTs. Aqui a Figura 2 A J espectro do MWCNT no modificada (Fig. 2, a curva a) mostra um largo pico de C-H alquilo alongamento no 2850-3000 cm-1, um pico acentuado C = O que se estende desde os grupos COOH em 1700 cm1 e uma O-H amplo alongamento pico entre 3400 e 3600 cm -1. No caso do PEG modificado MWCNT, um pico de C-O-C que se estende a partir de grupos de PEG aparece em 1100 cm-1 (Fig. 2, a curva b). Estes espectros de FT-IV indicam que as cadeias de PEG foram quimicamente ligado ao MWCNT carboxilado [33,34].

3,2 eletropolimerizao de PANI / PEG-MWCNT filme composto Fig. 3 mostra a taxa de (a) e de massa (b) curvas registadas durante o crescimento da pelcula potenciodinmica PANI / PEG-MWCNT sobre a superfcie de ouro. O electropolimerizao foi realizada por ciclos de potencial entre -0,1 e 1,1 V em 0,05 Vs -1e a soluo electroltica constituda por 0,05 mol L -1 anilina e 3 mg mL -1 PEG-MWCNT em 0,1 mol L -1 H 2 SO 4 . Figura 3 aqui Como pode ser visto, a massa comea a aumentar na mesma regio do grande carga visto no final do primeiro exame positivo (Fig. 3a e 3b), devido oxidao do monmero e, subsequentemente, a polimerizao [35,36]. Para a anlise catdica no primeiro ciclo, a massa (Fig. 3b) continuou a aumentar at 0,50 V e, em seguida, mostrou uma ligeira diminuio at ao limite catdica. O aumento de massa com a varredura catdica (de 1,1 at 0,50 V) pode ser associada pelcula de crescimento [37], uma vez que o potencial ainda suficientemente elevada para promover o crescimento do filme, devido existncia de oligmeros na soluo aps a andica verificar que so mais fceis de serem oxidados do que o monmero. Finalmente, o filme PANI / PEG-MWCNT foi investigada em uma soluo de monmero livre para se obter informao sobre a absoro de agentes tensioactivos aninicos e protnico / libertao durante os processos redox. 3,3 PANI / PEG-MWCNT propriedades dos filmes compsitos Aps a polimerizao PANI / PEG-MWCNT, os efeitos dos processos de compensao de carga e resistncia de transferncia de carga desses filmes foram investigados (Fig. 4 e Fig. 5.). Fig. 4a mostra a (linha cheia) e de corrente de massa (linha tracejada) para uma curva PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado, respectivamente. Aqui Figura 4 Estes dados so para verificaes de estado estacionrio, isto , forma voltamtrico invarivel em relao ao nmero de ciclos. Como pode ser visto, o aumento da massa monotonicamente na verificao positiva e diminuio da varredura negativa para PANI / PEG-MWCNT modificado elctrodo. As parcelas de massa (a partir de microbalana de cristal de quartzo) versus carga (de voltamogramas cclicos) para PANI / PEG-MWCNT foram construdos (dados no mostrados). A partir do declive dos grficos, a massa aparente molar (M app) de espcies de compensao de carga, foram calculados de acordo com a lei de Faraday modificada [38]: (1) em que M a massa app aparente molar das espcies inicas, F representa a constante de Faraday e z a carga elctrica das espcies compensadores. A massa molar aparente obtido para a PANI / PEG-MWCNT foi de 76 g mol-1, que compatvel com a troca protnica e aninicos simultneo durante os processos redox do filme. Como pode ser visto, o valor da massa molar, que foi obtida menor do que poderia existir no caso de puro SO
2 -, 4

assim como

maior do que no caso de puro H + transporte. Uma possvel explicao para este valor obtido aplicativo M os ies que participam nestes processos redox ter alguma camada de hidratao, assim como os dois ons e transporte solvente acontecer durante a oxidao / reduo da PANI / PEG-MWCNT filme. A massa molar aparente de 76 gmol -1 compatvel com a absoro simultnea de SO 4 2 - (M = 96 g mol-1) e a libertao de H 3 O + (M = 19 g mol -1). Assim, o nmero de hidratao igual a 1 para o H + para o valor da massa molar aparente que foi obtido. A fim de obter uma melhor informao sobre o fluxo de ies de PANI / PEG-MWCNT filmes, tramas de nmero de moles dos protes trocados () e os anies (a) contra potenciais nestes processos redox foram obtidos da seguinte forma [38]: (2) (3) onde, M A -, M + H e M S so massa molar do anio de protes, e de solvente, e um nmero de moles de caties e anies,, a carga de protes, representa a carga aninica, e o nmero de moles de molculas de solvente envolvidos nestes processos redox. Fig. 4b, apresenta os valores de (linha cheia) e (linha a tracejado), como uma funo potencial para o filme PANI / PEG-MWCNT. Como pode ser visto, a ejeco protnico predominaram sobre a troca aninica para o intervalo investigado potencial. De facto, a caracterstica principal do filme PANI / PEGMWCNT o aumento do transporte protnico e diminuio do transporte aninico durante os processos redox, quando comparado com polianilina no dopado com PEG-MWCNT [39-41]. Por diferenciao da equao (2) e (3), obtm-se os fluxos molares de proto e anies com uma contribuio de solvente, como uma funo da densidade de corrente e fluxo de massa (Figura 4-C) [41]: (4) (5) Como pode ser visto, o transporte protnico predominaram sobre toda a gama potencial investigado por PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado e o fluxo do proto / gua molar foi semelhante ao do fluxo electrnico (densidade de corrente). No entanto, os fluxos protnicos e eletrnicos apresentaram sinais diferentes, j que ambos os processos so complementares e fazem parte de todo o processo de carga de compensao. bem conhecido que sofre PANI intrnsecas processos redox electroquimicamente. Quando o valor do potencial negativo para deslocar 0.20V, PANI est num estado de completa reduzida (leucoemeraldine, LE), LE sofre oxidao parcial de cerca de 0.20V e muda a sua estrutura para emeraldina (EM); EM sofre oxidao e produz pernigraniline (PE) se o potencial ainda mais positivamente deslocado para cerca de 0.60V [42]. Est provado que a condutncia da PANI mxima entre PE e Estados EM e da condutncia vai diminuir quando PANI transforma para o estado LE. Aqui, observa-se a impedncia plano complexo de PANI e PANI / PEG-MWCNT compsitos de 0.4V, como PANI est no estado semi-xido (EM).

As parcelas tpicas complexo de plano de impedncia para PANI e PANI / PEG-MWCNT compsitos medidos a 0,2 V e 0,6 V so mostrados como Figo. 5. Note-se que todos os espectros so quase semelhantes, que contm um semicrculo distorcida na regio de alta frequncia, devido ao comportamento da interface do polmero / soluo. Por outro lado, ele contm uma parte linear de baixa frequncia devido dopagem difuso controlada e dedoping de anies que resultem de um comportamento Warburg. Aqui Figura 5 A intercepo de alta frequncia do semicrculo com o eixo real d o valor da resistncia interna do sistema de trs elctrodos para a soma da resistncia da soluo de electrlito, a resistncia intrnseca do material activo, e a resistncia de contacto na parte activa da interface material / eletrodo de ouro. A resistncia interna do puro PANI e PANI / PEG-MWCNT composto foi estimada como sendo quase o mesmo. A altas frequncias, o semi-crculo devido resistncia de transferncia de carga e da capacitncia de dupla camada. Aqui, como se esperava, a resistncia de transferncia de carga de PANI / PEG-MWCNT compsitos muito menor do que PANI pura [42]. Este comportamento pode ser atribuda a uma boa disperso do Mwnt em PANI matriz, devido formao do revestimento de PANI em cada PEG-MWCNT o que reduz a distncia de intercalao de ies e facilita a transferncia de carga e baixa resistncia tal. 3.5. SECM imagens da PANI e PANI / PEG-MWCNT modificado eletrodo O Scanning Microscopy Eletroqumica (SECM) uma tcnica de sonda de varrimento, em que as interaces difusivos de uma espcie electroactivos entre um ultramicroeletrodo (a sonda ou a ponta SECM) e um elctrodo de substrato so medidas sob a forma de uma corrente electroquimica. Tanto a topografia e natureza condutora do substrato pode ser sondado [43], de modo que o SECM pode ser usado para examinar as diferenas na actividade electroqumica de superfcies de alta resoluo [44]. SECM experimentos foram realizados utilizando um 5 um raio de ponta de Pt realizada em E t = -0,1 V vs Ag / AgCl, uma potencial seleccionado pelo ponta-cclico voltamograma com a ponta Pt, a d> 200 um. Neste caso, i T, em solues aquosas contendo 1 mmol L-1 [Fe (CN) 6] 3 - como o mediador redox e 0,1 mol L 1

tampo fosfato KCl como eletrlito suporte foi de 2,6 nA.

A Figura 6a mostra um exemplo representativo da ponta de corrente em funo da posio da ponta ao

longo do eixo X para a PANI e PANI / PEG-MWCNT filmes. Como pode ser visto, a corrente registada por ambos os filmes mostra diferenas como resultado das caractersticas do substrato. Para o filme PANI ponta da corrente quase constante, indicando que o filme PANI undopped lisa. Para PANI / PEGMWCNT filme, flutuaes significativas no actual gravado pode ser visto que podem ser atribudas rugosidade de PANI / PEG-MWCNT superfcie da pelcula. Alm disso, foi escolhido vrias posies na superfcie da pelcula para digitalizar horizontalmente quase que conduziu ao mesmo resultado. As imagens do SECM PANI e PANI / PEG-MWCNT so mostrados na Fig. 6b e 6c, que mostrou os resultados de uma anlise mais de 500 mm 500 uM regio da pelcula como uma ponta de Pt foi

digitalizada em estreita proximidade com a superfcie do elctrodo modificado com o potencial da ponta e do substrato (filme) realizada no potencial + 0.5V, vs. Ag / AgCl, respectivamente. Aqui a Figura 6 A resposta plana na fig. 6b indica que a superfcie da PANI basicamente uniformemente activo sem caractersticas topogrficas. Em contrapartida, as regies brilhantes surgido na fig. 6c representam correntes mais altas ponta nos locais PEG MWCNT. Como resultado desta composio heterognea, h uma grande quantidade de variao topogrfica da condutividade da pelcula de PANI / PEGMWCNT. Quando a ponta se aproxima do substrato condutor, a reduo de [Fe (CN) oxidao, na ponta) ocorre, ou seja, a regenerao de [Fe (CN) 6] 3 correntes de retorno na ponta. A taxa de [Fe (CN) 6] 3 - regenerao nos locais MWCNT PEG-se mais rapidamente do que com os PANI devido s propriedades de electres facilitados comunicao do MWCNT-PEG, o que resulta nas correntes mais elevadas da ponta. A comparao das fig. 6b e 6c implica que existem mais stios activos no PANI / PEG-MWCNT superfcie do que a superfcie PANI devido incorporao uniforme do MWCNT. Assim, considerando as propriedades condutoras do nanocompsito, foi empregado na imobilizao de HRP para o desenvolvimento de um sensor de perxido de hidrognio. 3,5 reduo eletroqumica de H 2 O 2 em MWCNT-PEG HRP / PANI / modificado eletrodo Em J para alm das vantagens nicas de imobilizar uma enzima, mantendo a sua actividade, a PANI / PEG-MWCNT elctrodo compsito modificado pode tambm actuar para melhorar a transferncia de electres directa entre os locais activos das enzimas e do elctrodo. Neste sentido, a HRP foi imobilizado na nanocompsito PANI / PEG-MWCNT explorando as grandes diferenas nos valores de pontos isoelctricos de HRP e nanocompsitos PANI base [32]. Assim, as propriedades eletrocatalticas da HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado foram investigados para a deteco de H 2 O 2 em condies fisiolgicas (pH 7,4), explorando a transferncia electrnica directa (DET) mecanismo de HRP. No DET, a reduo do perxido realizada pela enzima de acordo com a Equao de reaco. (6a) e a reduo do centro activo da enzima ocorre directamente sobre o elctrodo (Eq. 6-B), como se segue [45]: (6) (6 b) onde [heme (Fe III), R] a enzima nativa e frrico HRP [heme (O = Fe IV), R *
+] - realiza-se, 4 6]

(produto da

conduzindo positiva

o seu composto

intermedirio oxidado I, k 1 e k s representam as constantes de velocidade referem as Eqs. ( 7a) e (7b), respectivamente. Fig. 7 mostra as respostas em variadas amperomtricos H 2 O 2 concentraes variando de 4,98 a 43,10
molL-1

em tampo fosfato pH 7,4, por (a) HRP / PANI, e (b) elctrodo de HRP / PANI / PEG-

MWCNT modificado. Para o potencial aplicado (E app)de -0,1 V, o aumento da [H 2 O 2] resultou em um

aumento negativo em steady-state presente catalisador, tpico de reduo de perxido eletrocataltica usando HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado ( Figura 7a). Aqui Figura 7 Aps sucessivas adies de H 2 O 2 a PBS, em condies optimizadas, a resposta do sensor amperomtrico aumentou simultaneamente. Com o aumento da H 2 O 2, concentrao do amperomtrico aumentou linearmente no intervalo de 4,98-43,10 uM, com um coeficiente de correlao de 0,998 (n =

([H 2 O 2] / uM) - 0,21, com o declive de (1.01) Acm ^ M O limite de deteco do biossensor foi estimada como 0,5 uM a uma relao sinal-para-rudo de 3. O limite de sensibilidade de deteco e observado com HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo modificado foi mais elevada do que os da maior parte dos elctrodos modificados relatados na literatura (Quadro 1) [ 22, 24, 52-55 J 4653 ]. Quando os mesmos sensores foram utilizados para fazer medies repetidas de 20 uM de H 2 O 2, o desvio padro relativo (RSD, n = 10) foi de 2,5% para o HRP / PANI / PEG-MWCNT elctrodo biossensor indicando que a nossa proposta mostra um desempenho excelente em termos de estabilidade elevada. Finalmente, testou-se a estabilidade do sensor durante o armazenamento prolongado a 4 C, medindo a corrente em resposta a 20 uM de H 2 O 2. Mesmo aps 10 dias de armazenamento, as correntes manteve-se em cerca de 95% da sua resposta inicial para a HRP / PANI / PEGMWCNT. Com efeito, o biossensor operado a um potencial de-100mV, em que a maioria das interferncias possveis so electroquimicamente inactivo. Este resultado provavelmente atribuvel s vantagens sinrgicas da PANI protonada e MWCNT, o que faz com que apenas uma quantidade diminuta de enzima a ser necessria para H 2 O 2 a deteco.
9). A equao de regresso foi expressa como j / Acm -2 = 1,01
-2 @ 1.

4 Concluses Estes J resultados mostram que a PANI ultrafina / PEG-MWCNT filme electroquimicamente obtido comporta-se como uma camada rgida uma vez que a alterao de frequncia de cristal est relacionada apenas com o crescimento de polmero e no com as propriedades viscoelsticas do filme PANI / PEG-MWCNT bem como contribuio rugosidade. J As medies de SPR tambm indicaram que o filme no sofre os efeitos da aspereza da superfcie uma vez que a utilizao de modelos de montagem para superfcies speras no eram necessaries J . A utilizao do EQCM mostrou que o transporte protnico dominante sobre a varredura inteiro intervalo para PANI / PEG-MWCNT filmes e transporte aninico dominante para filmes de PANI. Assim, a caracterstica principal dos filmes PANI / PEGMWCNT o aumento do transporte protnico durante os processos redox, quando comparado com polianilina no dopado com PEG-MWCNT. Experimentos de impedncia eletroqumica mostraram que o

PEG-MWCNT dopado PANI apresenta menor resistncia transferncia de carga, bem como maior coeficiente de difuso inica. Finalmente, o elctrodo de compsito modificado um material excelente para a imobilizao de HRP, que era altamente eficaz na reduo de perxido de hidrognio com uma alta sensibilidade. Agradecimentos Os autores so gratos ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) ea Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) pelo apoio financeiro e bolsas de estudo. Referncias

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Legendas das Figuras Fig. 1 SEM images of (a) unmodified MWCNT and (b) PEG-MWCNT . Fig. 2 FT-IR spectra of (a) unmodified MWCNT and (b) PEG-MWCNT . Fig.3 (a) Charge/potential and (b) Mass/potential curves recorded during potentiodynamic growth of the PANI/PEG-MWCNT film in a solution containing 0.05 mol L -1 of aniline, 3 mg mL -1 of PEG-MWCNT and 0.1 mol L -1 H 2 SO 4 . Scan rate: 0.05 Vs -1. Fig. 4 (a) Current density (full line) and mass (dashed line) profiles, (b) Moles of protonic (full line) and anionic (dashed line) species exchanged as a function of the potential, and (c) Molar fluxes of proton (dashed line), anion (dotted line), and electron (full line) for PANI/PEG-MWCNT film. For (b) and (c) data were calculated from (a). Fig. 5 Nyquist plots of the PANI film and the PANI/PEG-MWNT composite film prepared from the growth solution measured at 0.2 V and 0.6V potentials. Fig. 6

(A) SECM steady-state 5-m-diameter tip current as a function of

relative tip position over 20-m-thick PANI and PANI/PEG-WMCNT films prepared potentiostatically, (blue line) z=600M and (black line) z= 200M. SECM images of the surface of PANI ( b um ) and PANI/PEGMWCNT ( c b ) Utilizando um 5 10 m diameter Pt microelectrode in aqua solution of ferricyanid 1 mmolL -1 in the presence KCl 0.1M as redox mediator.
Fig. 7 Amperometric response of the modified electrodes at 0.1 V for the successive addition of 50 LH 2 O 2 (1mmolL -1 stock solution) in 0.1 M PBS (pH 7.4) (a) HRP/ PANI , (b) HRP/ PANI/PEGMWNT and (c) plot of current vs concentration of H 2 O2

(A)
(B)
Figura 1 Figura 2

Figura 3

Figura 4

Figura 5
PANI PANI/PEG-MWCNT J

(B) (c)**
Figura 6

Figura 7 Table 1 Comparison of the analytical performance of different H 2 O 2 biosensors Different H 2 O 2 biosensors Faixa linear Sensitivity (slope) DetectionLimet Eletrlito Au -SPA N/HRP/GCE Ti/TiO2/Au/HRP 10 - 2000 M 20.27 A mM 1 4.40 A mM 12.20 A mM 1.01 Acm 2 M1 Ou -1 31.7 A mM
-1

1.6 M 2 mol l 1 6.4 10 7 mol/L 1.1 mol/L 2 M 0.5 M 8 M 12.89 M 0.5 M

5 M 410 4M HRP/ nano-Au/Thi/p-ABSA 2.6 M8.8 mM HRP/ nano-Pt3.6 M PNR/MWCNTs/GCE 4.3mM HRP ZrO2/Au 0.02 - 9.45 mM MWCNTs/MG/HRP/GCE 0. 5 0.02 mM ITO/APTMS/colloidal Au/HRP 20.0 M-8.0 mM HRP/SGCCN ? HRP/PANI/PEG-MW CNT 4.98 -43.10 M

pH 7 PBS 0.1M pH 6 PBS 0.1M pH 7 ABS 0.1M pH 7 PBS 0.1M pH 7 PBS 0.1M pH7.2 PBS 0.1M pH 7.0 PBS50mM pH 7 PBS 0.1M pH 7.4 PBS 0.1M

Applied Referncia potential 0.15 [ 2 46 ] V 0.6 V [ 3 47 ] 0.45 V 0.22 V -0.3V 0.18 V [ [ [ [

5 48 ] 6 49 ] 7 50 ] 8 51 ]

-1

-0.250 [ 9 52 ] V 0.25 V [ 10 53 ] - 0.1V Present work

Corresponding author. Tel.: +55-38-3532-1283; fax: +55-38-3532-1200

E-mail address: flavio.damos@ufvjm.edu.br (F . S. Damos)

Fala logo abaixo Era para falar sobre as imagens SECM? H2SO4 e Ferri? Dados do SPR No consegui colocar recuo de 0.36cm RECUO DE 0.36cm no consegui colocar Recuo de .36 ************************************************ recuo 0.36cm Esses dados no esto escritos no texto. No comentou sobre as imagens de SECM. Retirar dados SPR. Dvda nessa referncia PANI PANI/PEG-MWCNT (os nomes esto errados, no consigo abrir) Conferir Legenda .