INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA DESNATURALIZANDO PROTEINAS

DANNY PINEDA DIANA MARCELA FUQUENE GUSTAVO EMILIO CAMACHO GUILLERMO VILLAMIL

TUTOR: WILFRIDO PEREA CUESTA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA CEAD CHIQUINQUIRA 2007

OBJETIVOS

Analizar los efectos de los solventes en el proceso de desnaturalizacin de las protenas Aplicar las diferentes tcnicas de cromatografa. Observar los cambios de las protena despus de efectuada la desnaturalizacin. Comparar los cambios de las sustancias

MARCO TEORICO

La desnaturalizacin de una protena se refiere a la ruptura de los enlaces que mantenan sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservndose solamente la primaria. En estos casos las protenas se transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan hasta formar compuestos fibrosos e insolubles en agua. Los agentes que pueden desnaturalizar a una protena pueden ser: calor excesivo; sustancias que modifican el pH; alteraciones en la concentracin; alta salinidad; agitacin molecular; etc... El efecto ms visible de ste fenmeno es que las protenas se hacen menos solubles o insolubles y que pierden su actividad biolgica. La mayor parte de las protenas experimentan desnaturalizaciones cuando se calientan entre 50 y 60 C; otras se desnaturalizan tambin cuando se enfran por debajo de los 10 a 15 C. La desnaturalizacin puede ser reversible (renaturalizacin) pero en muchos casos es irreversible.

La solubilidad de las protenas es sensible a la composicin y al pH del medio, as como a la presencia de otros solventes. Asimismo, las protenas presentan

comportamiento de electrolitos simples en solucin, por lo que son susceptibles a la concentracin inica del medio. Las protenas globulares hidrosolubles muestran un mnimo de solubilidad, aunque el pH al que ello ocurre vara de una protena a otra, siendo ste un pH isoelctrico, definido como el valor de pH al que la molcula no posee carga elctrica y es incapaz de desplazarse en un campo elctrico. En estas condiciones no existe repulsin electrosttica entre molculas de protenas vecinas tienden a coalescer y precipitar.

CROMATOGRAFIA Se llama cromatografa a una tcnica que permite separar (o fraccionar, en lenguaje de laboratorio) los componentes de una mezcla de substancias biolgicas. El trmino deriva de chrma, color, ya que los primeros ensayos del mtodo tuvieron por objeto separar compuestos que eran naturalmente coloreados. En un principio se utiliz la cromatografa para fraccionar e identificar molculas pequeas, como aminocidos o azcares. En estos casos, se us la cromatografa de particin, que consiste en aplicar una gota de la solucin con la mezcla de substancias a separar en la parte inferior de una tira de papel (cromatografa en papel) o en una delgada capa de un material inerte, como silicagel o celulosa (cromatografa en capa delgada). Luego, el papel o material inerte (los denominaremos soportes) se colocan en un recipiente con

un solvente, de manera que, poco a poco, este los vaya impregnando. Dicho solvente es una mezcla de dos lquidos (por ejemplo, agua y etanol), que se eligen de manera tal que uno de ellos se adsorba ms al soporte que el otro; as, a medida que el solvente avance a lo largo del soporte -los lquidos suben espontneamente por capilaridad-, aquellos componentes de la muestra que sean ms solubles en el lquido que queda adsorbido sern retenidos, y los que tengan mayor afinidad por el que no se adsorbe sern arrastrados por este. Una vez finalizado el proceso, el soporte se seca y se tie con un colorante conveniente, para revelar los compuestos separados, los que se identifican colocando, sobre el mismo soporte, muestras de substancias conocidas.

SOLUCION DE LAS PRCTICAS

Experimento 1 Material Necesario La clara de un huevo Un vaso con alcohol Procedimiento

o o

Echa la clara del huevo en el interior del vaso con el alcohol. Tapa el vaso y espera al menos media hora.

o o

A medida que pasa el tiempo observa lo que sucede en el vaso. Tapa el vaso y vuelve a observarlo al da siguiente.

Descripcin de resultados: Al cabo de unos segundos, la clara del huevo deja de ser transparente y se vuelve slida, opaca y blanca. Las protenas se han desnaturalizado, es decir rompen su estructura terciaria dejando de ser solubles, se coagulan y se han precipitado, pero en vez de suceder por efecto del calor, ha sido por efecto del alcohol. Esto sucede porque el alcohol tiene el mismo efecto sobre la clara,
hace que las cadenas de protena se desenrollen y se formen enlaces que unen unas cadenas con otras. La desnaturalizacin total se dar al cabo de una hora aproximadamente.

Graficas:

Huevo en desnaturalizacin:

Para hacernos una idea clara de la imagen del huevo en desnaturalizacin debemos ver un huevo frito.

Experimento 2 Material Necesario Dos vasos con un fondo de leche a temperatura ambiente Un poco de vinagre Medio limn Procedimiento Aade el vinagre a uno de los vasos. Exprime el limn en el otro. Agita ambos vasos para que se mezclen sus contenidos. Espera unos minutos. Observa lo que sucede en cada uno de los vasos.

o o o o o

Descripcin de resultados: De forma similar a lo que ocurre con el huevo, el cido presente en el vinagre (cido actico) o en el limn (cido ctrico) es capaz de producir la desnaturalizacin de la protena denominada casena que hay en la leche.

Al aplicar el vinagre y el limo producen en la leche, una coagulacin a la cual se le llama lactosuero, se produce por que se separa la casena y la grasa. Esto se por qu se ven como especie de grumos slidos de color claro.

La leche en estado natural

La leche Desnaturalizada

La leche se convierte en un slido que se industrializa en diferentes presentaciones en el mercado. Experimento 3 Material Necesario

Una tira de papel poroso. Se puede usar el papel de filtro de una cafetera o el extremo de una hoja de peridico.

Bolgrafos de colores. Un vaso. Alcohol

Procedimiento:

Recorta una tira del papel poroso que tenga unos 4 cm de ancho y que sea un poco ms larga que la altura del vaso.

Enrolla un extremo en un bolgrafo (puedes ayudarte de cinta adhesiva) de tal manera que el otro extremo llegue al fondo del vaso. (ver dibujo)

Dibuja una mancha con un rotulador negro en el extremo libre de la tira, a unos 2 cm del borde. Procura que sea intensa y que no ocupe mucho. (ver dibujo)

Echa en el fondo del vaso alcohol, hasta una altura de 1 cm aproximadamente.

Sita la tira dentro del vaso de tal manera que el extremo quede sumergido en el alcohol pero la mancha que has hecho sobre ella quede fuera de l.

Puedes tapar el vaso para evitar que el alcohol se evapore. Observa lo que ocurre: a medida que el alcohol va ascendiendo a lo largo de la tira, arrastra consigo los diversos pigmentos que contiene la mancha de tinta. Como no todos son arrastrados con la misma velocidad, al cabo de un rato se ven franjas de colores.

Repite la experiencia utilizando diferentes tintas.

Descripcin de resultados: Al introducir el papel en la solucin (alcohol), este empieza a subir a travs de este, por capilaridad, al pasar por la mancha de tinta provoca que se separen los componentes de la tinta y se visualiza como barras de diferentes colores. Esto ocurre porque la separacin de los pigmentos (molculas), que se encuentran mezclados en las tintas est conformada por combinaciones de dos o ms pigmentos.

CONCLUCIONES La desnaturalizacin de las protenas no solo la realizan medios fsicos sino que tambin la podemos lograr por medios qumicos, como lo demostramos en las prcticas. Los elementos qumicos apropiados aplicados a las protenas pueden generar las mismas reacciones de desnaturalizacin. La desnaturalizacin del huevo y la leche son similares pues deshidratan la protena.
Se aprendi a manejar la tcnica de cromatografa en capa delgada.

El proceso de extraccin con solventes es empleado generalmente en el aislamiento de productos naturales y purificacin de mezclas.

BIBLIOGRAFIA

Cromatografa. Browning.

es.wikipedia.org/wiki www.educa.aragob.es

www.elergonomista.com