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AGRONOMIA

OBTENO DE CURVA DE CALIBRAO DOS ESPECTROFOTMETROS PARA DETERMINAO DE AUCARES TOTAL

Disciplina: Bioqumica Professora: Samara Ernandes Data da experincia: 30/12/2012 Nomes: Jessica Varjo Jhessica Bortolotti Larissa Corradi Voss

Turma: 2AG2 Grupo1 Data da entrega: 22/02/2013 n: Aula 4

NOTA:

Dois Vizinhos 1 semestre/2013

RESUMO Na presente experincia foi nos dada introduo sobre o que espectrofotmetro, como utiliza-lo, e como ele nos auxilia na obteno da curva de calibrao, pois a partir dos resultados dessa curva, possvel observamos uma reta que nos diz da linearidade do resultado. Essa curva padro a relao grfica entre a absorbncia e a concentrao. Como resultado desse experimento o grupo 1, no obteve sucesso pois a curva teve um grande desvio, o que nos mostra um resultado no confivel, mesmo diante do problema foi possvel termos noo do objetivo proposto. E a partir do resultado esperado conseguimos ter ideia da concentrao da glicose.

INTRODUO Fotometria o ato de medir a intensidade da luz, para esse tipo de medida usado o espectrofotmetro que se baseia na absoro de radiao entre os comprimentos ultravioletas e infravermelhos. O espectrofotmetro emite uma faixa de luz monocromtica atravs da soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida pela soluo, sendo assim possvel saber qual a quantidade absorvida a cada comprimento de onda. Como diferentes substancias tem diferentes padres de absoro, a espectrofotometria nos permite identificar e quantificar substancia a em seu espectro de absorbncia. A quantificao realizada da seguinte maneira, faz-se a relao entre a quantidade de luz absorvida e a concentrao da substancia. A absoro da luz ser maior quando houver maior for a concentrao por ela atravessada e quanto maior for a distancia percorrida pelo feixe luminoso atravs da amostra. Para determinao da concentrao de um soluto em uma amostra espectrofotomtrica, temos a comparao da absorbncia da amostra com uma soluo padro, na qual j conhecida a concentrao a absorbncia da amostra com uma soluo padro, na qual j conhecida a concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo padro com diferentes

concentraes, que tem absorbncia determinada. Esses padres so preparados diluindo-se a soluo-padro na proporo necessria para a obteno das concentraes desejadas. E com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, podese traar um grfico cujo perfil conhecido como curva-padro, onde a reta indica a proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a curva corresponde ao limite de sensibilidade do mtodo

espectrofotomtrico para o soluto em questo.

OBJETIVO Determinar a curva de absoro das solues Elaborar uma curva de calibrao Montar a curva de referncia com auxlio do programa EXCEL no computador Atravs da curva determinar a concentrao de glicose das solues.

MATRIAS E MTODOS Materiais:

Tubo de ensaio Pipeta Balo volumtrico Micropipeta Cubeta para espectrofotmetro Espectrofotmetro

Reagentes Utilizados:

Soluo de glicose Soluo de Fenol Acido sulfrico concentrado

Procedimentos experimentais

Com os 6 tubos de ensaio devidamente enumerados adicionamos a soluo padro de glicose, a gua destilada, fenol e cido sulfrico nas medidas descritas na tabela 1 utilizando a micropipeta. Agitamos o tubo e aps entrarem em equilbrio, a soluo foi transferida para a Cubeta e depois para o espectrofotmetro, o espectrofotmetro foi calibrado para o comprimento de onda de 490nm ( cor amarela) As medidas de absorbncia obtidas dos dois grupos esto descritas na tabela 1

Resultados e discusses

Contida na tabela 1 esto descritas os valores obtidos pelo espectrofotmetro

Nmero do tubo 01 02 03 04 05 06

Glicose 100 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

Massa de Glicose 0 10 20 30 40 50

H2O

Fenol

Acido sulfrico 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5

Absorbncia 490nm Grupo1 0 0,160 0,085 0,298 0,466 0,471 Grupo2 0 0,022 0,193 0,395 0,545 0,703

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Para determinar a curva de absoro, foi ligado o espectrofotmetro e colocado o contedo dos tubos 1 e 6 em cubetas diferentes que foram inseridas no interior do equipamento. O tubo 1 (branco) foi usado para calibrar/zerar o equipamento em 490nm . De acordo com os resultados da tabela acima, foi montado um grfico correlacionando comprimento de onda com absorbncia dos tubos, pelo grfico pudemos perceber que os resultados do grupo 1 fugiu da expectativa obtendo uma curva no esperada, pois seu valos de R= 0,8646 onde o aceitvel acima de R= 0,95. Muitas hipteses foram levantadas e a mais aceita foi que houve uma troca de tubos, o que causou a alterao dos resultados.

QUESTES Questo 1: Quais o outros mtodos de determinao de aucares baseados na produo de furfural e hidrometilfurfural? Explique e represente a reao qumica. R: A hidrlise enzimtica, catalisada pela enzima invertase e a hidrlise cida, catalisada por um cido Uma hidrlise enzimtica consiste em uma reao qumica catalizada por uma enzima (uma hidrolase) que utiliza gua (H2O) para quebrar uma molcula em duas outras molculas. Um dos produtos da reao catalizada receber um grupo OH- e, o outro produto, um prton de hidrognio que sero incorporados suas estruturas qumicas.

2) Construa a curva padro.

curva de absorbncia

concentrao de Glicose

curva de absorbncia

concentrao de Glicose

CONCLUSO Conclumos a partir da analise dos resultados, que a

espectrofotometria, apesar do erro cometido em nossa pratica j mencionada nas discusses de resultados, um mtodo que permite analisar compostos atravs de comprimento de onda, comprovou-se experimentalmente que a absoro da luz tanto maior quanto mais for concentrada a soluo por ela atravessa como descrito na lei de Lambert-Beer Beer H uma correlao direta entre a Absorbncia (A) e a concentrao de determinada substncia, num dado comprimento de onda, desde que o caminho ptico e a espessura da soluo sejam constantes. Pelo grfico obtido foi possvel tambm analisar a concentrao de glicose, antes desconhecida. Os erros existentes nos serviram de alerta para que nos prximos experimentos seja dada mais ateno aos tubos para que no haja mais troca e assim no haja alterao do resultado esperado.