INFLUENCIA DE DIVERSOS FACTORES EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Jeison Rosero, Anghy Ruiz, Danilo Tapia Departamento de qumica (Universidad de Nario)

Pasto (Nario-Colombia) anghy-r@hotmail.com 2 210

RESUMEN : En este laboratorio se van a observar las diferentes situaciones en la que se afecta la actividad enzimtica de la a-amilasa, la cual se encuentra en la saliva y en el pncreas pero en este caso utilizaremos la amilasa salival (1,4-glucano-glucanohidrolasa). Se realizo varios procedimientos como lo fueron la temperatura, el pH, la concentracin optima, la especificidad de la enzima y los metales pesados que actuan sobre esta, para observar en cul de estos se miraba ms afectada la enzima. En la temperatura se tomo en 4 fases, se agregaron 3 tipos diferentes de pH, diferentes medidas de pH y amilasa para la concentracin, para la especificidad de la enzima se utilizo la pepsina y la ureasa y para la actividad con metales pesados se utilizo el Hg y el Pb.

INTRODUCCION: Lo primero que se realizo fue la obtencin de la amilasa salival de uno de los integrantes de cada grupo, luego se completamos con agua destilada en una probeta hasta obtener 100 ml y as poder trabajar en los diferentes procesos. Rotulamos todos los tubos de ensayo que se utilizaran con los diferentes reactivos, tambin preparamos un mechero con su respectivo trpode y placa, en este aremos el bao mara de algunos de los elementos que lo requieran, un termmetro para controlar la temperatura del almidn en los tubos de ensayo que sern calentados en bao mara a 38C la cual es la temperatura optima a la que acta la enzima.

RESULTADOS: INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL P ara realizar este proceso lo hicimos desde 4 temperaturas diferentes las cuales fueron a 0,20, 40,y90C . En el tubo uno se puso en bao se hielo por 10 minutos hasta que alcance la temperatura de cero grados, el segundo se dejo a temperatura ambiente, el tercero se llevo a bao mara al igual que el cuarto llevando el uno hasta los 40 y al otro hasta los 90C. luego de este proceso a cada uno de los tubos se les agrego 0,5 de amilasa salival agitndolo dejndolos a su respectiva temperatura por un minuto ms, despus de esto se agregan 5 gotas del contenido en una placa previamente con lugol y se espera los respectivos colores A 0C se inhibe la actividad de la enzima dando una coloracin oscura con lugol a 20C da un color ms claro pero aun as la enzima no trabaja de una manera optima, a 40C el coloe es una amarillo ocre el cual es el adecuado cuando la enzima trabaja adecuadamente, por ltimo a los 90C tambin se inhibe la accin de la enzima dando un color oscuro con el lugol. INFLUENCIA DEL PH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Tubo 1 2 Solucion almidn 2 ml 2 ml Amortiguador pH 3.0 4 ml Amortiguador pH 5.0 4 ml Amortiguador pH 7.0

3 2 ml

4 ml

Amilasa salival

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

En la primera reaccin mesclamos en 3 tubos de ensayo con 2ml de almidn en donde a cada uno se le agrego 4 ml de un amortiguador de pH diferente 3, 5 y 9 y llevndolos a bao mara hasta alcanzar la temperatura optima (38C) . siguiendo en bao mara agregamos la amilasa salival sacamos 5 gotas de cada uno de los tubos en una placa ya con lugol. la actividad de la enzima es buena a pH 3 en el cual se observara el color amarillo ocre, los dems pH darn un color oscuro. CONCENTRACION OPTIMA DE LA ENCIMA Tubo Solucin Almidn 0.5% Amortiguador de ph optimo Amilasa salival 1 4ml 5.9ml 0.1ml 2 4ml 5.7ml 0.3ml 3 4ml 5'1ml 0.9ml 4 4ml 3.3ml 2.7ml

Este factor que afecta a la enzima, le agregaremos distintas concentraciones de amortiguador de pH y amilasa salival para observar en cul de estas trabaja la enzima de manera adecuada. primero agregamos el almidn en el tubo de ensayo lo llevamos a bao mara hasta que alcance la temperatura optima , luego se agrego diferentes cantidades de amortiguador de pH como lo fueron 5.9, 5.7,5.1, 3.3. y tambin diferentes cantidades de amilasa salival 0.1, 0.3, 0,9,2,7. se observo que a pH 3 y 2.7 el color con el lugol es un color ocre claro sabiendo as que la enzima trabajara, en los dems resultados nos dio un color oscuro en donde la enzima no trabajara. ESPECIFICIDAD DE LA ENZIMA TUBO AMILASA Solucion Almidon 0.5% 2ml Amortiguador de pH 4ml optimo Amilasa salival 1ml Pepsina Ureasa PEPSINA 2ml 4ml UREASA 2ml 4ml

1ml 1ml

En diferentes tubos se puso amilasa, pepsina y ureasa se los llevo a bao mara hasta que alcance la temperatura optima, aqu se agrego 2ml de almidn y 4ml de amortiguador luego se saco 5 gotas en una placa con lugol la enzima solo trabajar con la amilasa salival dando con el lugol un color amarillo ocre. EFECTO DE LOS IONES METALICOS PESADOS SOBRE LA ACCION DE LA AMILASA Tubo Amilasa Solucion Almidon 0.5% 2ml Amortiguador de pH 3ml Hg 2ml 2ml Pb 2ml 2ml

optimo HgCl2 1% Pb(NO)2 Amilasa salival

1ml 1ml 1ml 2ml 1ml

se rotulo tres tubos de ensayo en los cuales se puso amilasa, Hg, Pb, llevndolos a bao mara hasta que alcanzara la temperatura optima, ah se agrego 2ml de almidn, 3 ml de amortiguador en la amilasa y 2 ml en los dems, y a cada uno 1 ml de amilasa salival luego se sacaron 5 gotas en una placa con lugol dando un color amarillo ocre solo en la amilasa salival, con Pb dio un amarillo mas oscuro. DISCUCION: Los diferentes resultados en la prctica fueron la variedad de factores los diferentes factores que afectaron la enzima y como estos procesos fueron realizados por nosotros los estudiantes en donde pudo haber errores en la temperatura o en el agregado de los diferentes reactivos, ahora se tiene claro que estos factores son especficos y que tienen una enzima trabaja con una respectiva temperatura y un determinado pH.