CAPTULO I Microscopa.

El microscopio es uno de los instrumentos bsicos para el trabajo del Qumico Farmaceuta, por lo que es necesario conocer cules son los fundamentos de su mecnica y desarrollar gran destreza en su manejo. El microscopio (de micro= pequeo, y scopio= observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa. Historia. Es difcil determinar quien fue en realidad el inventor del microscopio, pues para los italianos fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo, mientras que para los holandeses lo hicieron Hans y ZachariasJanssen en 1590. Los antiguos griegos conocieron que los vidrios curvos y las esferas de cristal aumentaban el tamao de los objetos que eran observados a travs de ellos. El primer microscopio con dos lentes convergentes del que se tiene referencia es el elaborado por los hermanos Janssen fabricantes de anteojos, era simplemente un tubo dentro de otro, de 45 cm de largo y 5 cm de dimetro con una lente convexa en cada extremo, que se enfocaba deslizando los tubos hacia adelante y hacia atrs. Este instrumento lleg a tener entre 3 y 9 aumentos, dependiendo del tamao de la abertura del diafragma. 1611 Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto. 1665 Robert Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de corcho y describe los pequeos poros en forma de caja a los que l llam "clulas". Publica su libro Micrographia. 1674 Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios a los que en ese entonces denomin animaliculosretozantes. Observar bacterias por primera vez 9 aos despus. 1828 W. Nicol desarrolla la microscopa con luz polarizada. 1838 Schleiden y Schwann proponen la teora de la clula y declaran que la clula nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales. 1849 J. Quekett publica un tratado prctico sobre el uso del microscopio. 1

1876 Abb analiza los efectos de la difraccin en la formacin de la imagen en el microscopio y muestra cmo perfeccionar el diseo del microscopio. 1881 Retzius describe gran nmero de tejidos animales con un detalle que no ha sido superado por ningn otro microscopista de luz. En las siguientes dos dcadas l, Cajal y otros histlogos desarrollan nuevos mtodos de tincin y ponen los fundamentos de la anatoma microscpica. 1886 Carl Zeiss fabrica una serie de lentes, diseo de Abb que permiten al microscopista resolver estructuras en los lmites tericos de la luz visible. 1908 Khler y Siedentopf desarrollan el microscopio de fluorescencia. 1930 Lebedeff disea y construye el primer microscopio de interferencia. 1932 Zernike inventa el microscopio de contraste de fases. 1937 Ernst Ruska y Max Knoll, fsicos alemanes, construyen el primer microscopio electrnico. COMPONENTES DEL MICROSCOPIO. Se agrupan principalmente en 4 sistemas: 1. 2. 3. 4. Sistema de soporte Sistema de aumento Sistema de iluminacin Sistema de ajuste.

1.- SISTEMA DE SOPORTE: Es el armazn para los dems sistemas y esta compuesto por algunas partes como: a) b) c) d) e) Base Bastidor o brazo Revolver portaobjetivos Platina Tornillo carro mvil

2.- SISTEMA DE AUMENTO Consiste en un conjunto de lentes que amplifican la imagen de lo que se observa, estos lentes estn montados en dos grupos, el primer grupo conocido como lentes objetivos ubicados en el extremo cercano al objeto que se observa y el segundo conocido como ocular que es por donde mira el operador.

Lentes Objetivos. Representan el componente ptico ms importante del microscopio. Su principal funcin consiste en colectar la luz proveniente del espcimen y proyectar una imagen ntida, real, invertida y aumentada hacia el cuerpo del microscopio. Constituyen un sistema ptico formado por una o varias lentes, las cuales deben estar centradas y los ejes pticos de cada una deben coincidir exactamente para formar el eje ptico del sistema. Sus lentes estn hechas a partir de cristales (espatos, fluorita, entre otros) con un alto grado de calidad y funcionamiento; su precio depende del poder de aumento, resolucin y de la correccin de las aberraciones. Muchos fabricantes elaboran objetivos que pueden ser intercambiados y empleados en microscopios de otras marcas comerciales. Algunas de sus caractersticas son estudiadas a continuacin: a) Aumento El poder de aumento de cada objetivo se indica por un nmero grabado en la manga de la lente que indica el nmero de aumentos que brinda ste: 4X aumenta 4 veces 10 X aumenta 10 veces 40X aumenta 40 veces 100 X o de inmersin, aumenta 100 veces El lente 100X se denomina de inmersin precisamente por que para utilizarlo es necesario colocar una gota de aceite de inmersin sobre el porta objetos para lograr mayor resolucin que ayuda a los usuarios a enfocar objetos muy pequeos que no se resolvera usando objetivos secos. Los objetivos de aceite de inmersin son usados para la observacin objetivos muy pequeos, como las bacterias individuales y aplicaciones de alta resolucin. b) Apertura numrica Es la medida de la capacidad de captacin de la luz por la lente. Se encuentra grabada en la manga de la lente, junto a la indicacin del poder de aumento. 0.10 en el objetivo 4X 0.25 en el objetivo 10X 0.65 en el objetivo 40 X 1.25 en el objetivo 100X

En microscopa, la apertura numrica es importante porque indica el poder de resolucin de una lente. El tamao del detalle ms pequeo que puede ser visualizado es proporcional a la longitud de onda de la luz empleada. Una lente con una apertura numrica grande ser capaz 3

de visualizar ms detalles que una lente con una apertura numrica ms baja no podr. Adems, las lentes con aperturas numricas grandes aceptan ms luz y dan una imagen ms brillante. c) Otros nmeros en la manga del objetivo El grosor recomendado para el cubre objeto ej. 0.17 d) Distancia de operacin del objetivo Es la distancia que hay entre el lente objetivo y el portaobjetos cuando la imagen se encuentra enfocada. A medida que el poder de aumento del objetivo es mayor, disminuye la distancia de operacin. 10X entre 5-6 mm 40X entre 0.5 1.5 mm 100X entre 0.15 0.20 mm e) Poder de resolucin. Cuanto mayor sea el poder de resolucin de los lentes objetivos, mas clara ser la imagen, lo que redundar en un aumento de la capacidad para poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos, separndolos y acercndolos. El poder de resolucin mximo de un buen microscopio de laboratorio es de 0.25 m, mientras que el del ojo humano es de 0,25 mm, es decir mil veces menor que el del microscopio.

Clasificacin: Los microscopios modernos poseen un ensamble complejo de lentes, espejos y prismas que transmiten la luz desde el objetivo al ocular y actualmente casi todos los fabricantes estn elaborando microscopios que puedan aceptar objetivos diseados para realizar una correccin infinita. Tales objetivos proyectan una imagen al infinito la cual es captada por otra lente que se introduce en el tubo y que a su vez la proyecta al punto focal del ocular. Los objetivos con esta correccin poseen el smbolo infinito grabado en la parte externa. Tomando en cuenta el grado de correccin de las aberraciones hay dos categoras de objetivos para el microscopio, los objetivos acromticos y los objetivos apocromticos. En cada categora se distinguen an dos grupos, los objetivos secos y los objetivos de inmersin Objetivos acromticos: Presentan correccin cromtica para la luz azul y roja. Correccin de esfericidad para el verde. Dan mejores resultados con filtro de luz de color verde y son ideales para microfotografa blanco y negro. Se asume que un objetivo es acromtico cuando no posee ninguna denominacin. Objetivos semi-apocromticos: Elaborados a partir de cristales de fluorita. Corrigen para el azul, el rojo y en cierto grado para el verde. La correccin de esfericidad es para dos colores, el verde y el azul. Dan buenos resultados con luz blanca y estn mejor diseados para la microfotografa en colores. Objetivos apocromticos: Poseen el ms alto nivel de correccin de aberraciones y por ello, son ms costosos. Presentan correccin cromtica para cuatro colores (azul oscuro, azul, rojo y verde); correccin de esfericidad para dos o tres colores. Son los mejores objetivos para microfotografa y video a color. Debido a su alto grado de correccin, estos objetivos poseen mayores aperturas numricas que los acromticos y las fluoritas. Esto puede ser un inconveniente puesto que el campo de observacin se presenta un poco curvo. Tipos de objetivos. (a) Objetivo acromtico que contiene una lente frontal y dos pares internos, (b) objetivo semiapocromtico o fluorita, con cuatro pares de lentes y (c) objetivo apocromtico que contiene un triplete, dos pares, un menisco y una lente esfrica frontal

Los tres tipos de objetivos proyectan imgenes con cierta distorsin que se manifiesta como curvaturas y al ser corregidos para este defecto se denominan plan-acromticos, planfluoritas o plan-apocromticos. Objetivos secos y objetivos de inmersin: Estos objetivos difieren entre s por la naturaleza del medio interpuesto entre el cubre-objeto de la lmina histolgica y la lente frontal del objetivo. En los objetivos secos el medio interpuesto es el aire cuyo ndice de refraccin (n=1) es muy diferente del ndice del vidrio porta y cubre-objeto (n=1,5). Por el contrario, en los objetivos denominados de inmersin el medio que separa al cubre-objeto de la lente frontal del objetivo es un lquido cuyo ndice de refraccin es lo ms prximo al del vidrio. Este lquido puede ser agua destilada (n=1,33) o mejor an aceite de cedro, que posee un ndice de refraccin (n=1,515) casi idntico al del vidrio. La ventaja de los objetivos de inmersin consiste en la disminucin o eliminacin de la refraccin de los rayos luminosos entre el aire y el objetivo, en consecuencia la luminosidad de la imagen est aumentada, mientras que en los objetivos secos, est disminuida. El empleo de la inmersin aumenta el ngulo de apertura del objetivo y permite mayor resolucin gracias a la captura de una mayor cantidad de rayos luminosos refractados y solo puede utilizarse con objetivos de mayor aumento.
Cdigo de color de inmersin Negro Naranja Blanco Rojo Cdigo de color de aumento Negro Marrn Rojo Amarillo Verde Azul turquesa Azul celeste Azul cobalto Blanco, crema 1x, 2.5x 2x, 2.5x 4x, 5x 10x 16x, 20x 25x, 32x 40x, 50x 60x, 63x 100x, 250x, 200x Medio de inmersin Aceite Glicerol Agua Especial o multiuso Aumento

LENTES OCULARES Estn formados por lentes que generalmente son separadas por un diafragma, montadas en las extremidades de un cilindro que va introducido en la parte superior del tubo. El ocular sirve para observar la imagen real e invertida que produce el objetivo, ejerciendo dos funciones: Aumenta la imagen y la transforma en una imagen virtual, derecha con respecto a la imagen del objetivo, pero aun invertida, con respecto al objeto. Posteriormente el ojo endereza la imagen. Aplana y aclara el campo ptico o plano circular en el que aparece el objeto. La lente superior se denomina lente ocular y es la que produce el aumento de la imagen real del objetivo; la lente inferior tambin se denomina colectora y es la que aplana y aclara el campo

Clasificacin: Oculares de Huygens: Empleados con los objetivos acromticos y formados por dos lentes plano-convexas cuya convexidad est dirigida hacia el objetivo y el diafragma se ubica entre ambas. Tambin denominado ocular negativo porque la imagen se forma entre las dos lentes. Muy comn en modelos de microscopios antiguos. Oculares de Ramsden: Conocido como ocular positivo, formado por varias lentes unidas entre s y colocadas por encima del diafragma. Generalmente corrigen aberraciones y funcionan de manera ptima con los objetivos corregidos al infinito. Oculares compensadores: Son oculares que corrigen la diferencia de aumento para los diversos colores (diferencia cromtica de aumento) que se aprecia en los objetivos apocromticos. No tiene buen rendimiento con objetivos acromticos secos. Modelos de oculares. (a) Ocular de Huygens, (b) ocular compensador y (c) ocular de Ramsden. Los oculares negativos (a y b) poseen el diafragma entre las dos lentes (colectora y ocular) y los oculares positivos poseen el diafragma por debajo de las lentes (c)

Aumento El poder de aumento se encuentra marcado en el lente, un ocular de 10X significa que ste aumenta 10 veces la imagen previamente aumentada por el lente objetivo. Para calcular el aumento total de la imagen del objeto que se observa, hay que multiplicar el poder de aumento del objetivo por el del ocular.

Sin la lente colocada en fg el ojo ver la flecha con el ngulo formado por las lneas punteadas b y c, formando la imagen bc. Los rayos bf y cg emanados de las extremidades de la flecha son refractados por la lente hacia el ojo en direccin f y g, los cuales crean un ngulo visual mayor que hace que la fecha se vea ms grande (d-e).

3.- SISTEMA DE ILUMINACIN

El sistema de iluminacin est constituido por las partes del microscopio que producen o captan, reflejan y regulan la intensidad de la luz que se utiliza para la observacin microscpica. Uno de los aspectos crticos a considerar en la microscopa ptica es la fuente de luz que se emplea para iluminar el espcimen. Si la muestra es iluminada de manera inadecuada, la calidad

de la imagen que se obtiene se ver afectada, aun cuando se disponga de un excelente sistema ptico. La iluminacin ptima debe ser brillante, sin resplandores y en lo posible debe dispersarse de manera uniforme en el campo de observacin. El sistema de iluminacin est constituido por la fuente de luz, el condensador y un diafragma o iris. Como regla general, el sistema de iluminacin est colocado debajo de la platina. La fuente de luz emite una radiacin que es recogida por un dispositivo denominado condensador, que a su vez forma un cono luminoso necesario para la visualizacin con objetivos de mayor aumento. a) Fuente Luminosa Los microscopios modernos usan como fuente luminosa la energa elctrica pues es ms fcil de ajustar. Generalmente lo proporciona un bombillo de tungsteno contenido en la base del microscopio.Algunos modelos de microscopios actuales, desde los ms sencillos y econmicos hasta los ms sofisticados, poseen un espejo que sirve para desviar la luz producida por la bombilla, en el caso que sta no se encuentre alineada con la platina. b) Condensador Este lleva los rayos luminosos a un foco comn sobre el objeto que se va a examinar. Se encuentra colocado entre la fuente de luz y la platina, este se puede elevar para iluminacin mxima y bajar para disminuir la iluminacin, se lo debe centrar y ajustar adecuadamente. Es un dispositivo que tiene por finalidad formar conos luminosos grandes, con aperturas mayores, necesarios para ver con los objetivos de mayor aumento. El trmino condensador puede considerarse inadecuado, ya que no produce una condensacin de los rayos luminosos, por el contrario, produce un aumento de la seccin del cono luminoso que a su vez forma una imagen ms clara. El condensador est conformado por una o varias lentes situadas debajo de la platina del microscopio, colocadas entre la fuente de luz y el espcimen. c) Diafragma Se encuentra dentro del condensador, se utiliza para reducir o ampliar el ngulo, y por lo tanto, la cantidad de luz que ingresa en el condensador. Cuanto ms se abre el diafragma, ms se ampla el ngulo y en consecuencia aumenta la apertura numrica, y se pueden observar detalles ms pequeos, sin embargo al mismo tiempo se reduce el contraste. Debe permitir cambios en la apertura y con dimetros variables cuya finalidad es la de obtener conos luminosos cada vez ms estrechos y eliminar los rayos de luz sobrantes. Los primeros diafragmas consistan en un disco de metal con agujeros de diferente dimetro, el cual se rotaba segn la necesidad. Estos discos fueron substituidos por el iris, otro dispositivo ms elaborado y con un diseo que le permite cambiar de dimetro. La apertura del diafragma se regula en relacin con el tipo de objetivo que se est utilizando. El diafragma o iris est pintado de negro con la finalidad de eliminar los rayos de luz reflejada que pueden interferir con la iluminacin del objeto 9

DIAFRAGMA

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a) Filtros En algunos microscopios se ajustan filtros de colores (principalmente azules), debajo del condensador. Se puede dejar en su sitio o retirarlos de acuerdo al tipo de preparacin que se vaya a observar.

4.- SISTEMA DE AJUSTE.

Este sistema comprende de: a) Tornillo macromtrico: utilizado para lograr un acercamiento o alejamiento grosero del enfoque. b) Tornillo micromtrico: Hace que los movimiento de acercamiento o alejamiento sean ms finos, por lo que se utiliza para obtener una imagen perfecta del objeto en observacin. c) Tornillo de ajuste del condensador: con este tornillo podemos elevar o bajar el condensador para aumentar o disminuir la iluminacin. d) Tornillos para centrar el condensador: pueden haber 2 o 3 tornillos, generalmente uno al frente y los otros dos a los extremos, para centrar el condensador exactamente en relacin al objetivo. e) Regulador del diafragma o iris: es un pequeo elevador que se encuentra fijo al condensador y abre o cierra el diafragma, reduciendo o aumentando el ngulo e intensidad de la luz. f) Reguladores de la Platina mecnica: para movilizar la platina que sujeta la placa portaobjetos, de adelante o atrs y de izquierda a derecha, til para examinar toda el rea con muestra.

Poder de resolucin. Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se encuentran muy prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del otro. La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcan en la imagen como puntos separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, ms finos sern los detalles. La distancia entre esos dos puntos se conoce como Lmite de Resolucin, el cual es tambin referido como el Poder de Resolucin y puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del microscopio.

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El poder de resolucin puede calcularse dividiendo la longitud de onda de la luz empleada, para, la Apertura Numrica (AN). Debido a que normalmente se utiliza una fuente de luz visible, la longitud de onda promedio es constante, por lo tanto el poder de resolucin depender de la apertura numrica. Segn su definicin la apertura numrica est relacionada con el ndice de refraccin del medio, que hay entre la muestra y el lente objetivo. Debido a que el ndice de refraccin del aire es menor al del vidrio, los rayos luminosos se refractan o se desvan cuando pasan de la placa portaobjetos al aire. Si la mayora de los rayos de luz se refractan en un ngulo muy grande, se pierden para el objetivo. Para evitarlo cuando utilizamos el lente de 100X, colocamos una gota de aceite de inmersin (que tiene un ndice de refraccin muy cercano al del vidrio) en la placa portaobjetos, con lo que logramos que la mayora de los rayos de luz no se refracten en un ngulo muy grande y lleguen al lente objetivo consiguiendo una mayor resolucin por lo tanto una imagen ms clara.

En conclusin, Para obtener la imagen ms grande y ntida, se debe: a) b) c) d) Disponer de lentes de ptima calidad. Disponer de oculares con gran aumento. Trabajar con el objetivo de inmersin. Utilizar aceite de inmersin de buena calidad.

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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES:
a) Al finalizar el trabajo se debe dejar puesto el objetivo de menor aumento, en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mvil de la platina no sobresalga del borde de la misma, y dejarlo cubierto con su funda. b) Cuando no se est utilizando el microscopio hay que mantenerlo con su funda para evitar que se ensucien y daen sus lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe de guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. c) Nunca tocar las lentes con las manos. Si se ensucian hay que limpiarlas muy suavemente con papel filtro o mejor con papel de ptica. d) No dejar puesto el portaobjetos sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. e) Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que o limpiar el aceite con pauelos especiales para ptica o con papel filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite llegara a secarse, hay que removerlo con una solucin de alcohol-acetona (7-3) o con xilol. No se debe abusar de esta limpieza, pues se puede daar las lentes o desprenderlas. f) Nunca forzar los tornillos del microscopio. g) El cambio de objetivo se debe realizar girando el revlver y dirigiendo la mirada siempre a la muestra para evitar el roce con la misma. h) Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo inmediatamente con un pao, si se trata de aceite, limpiarlo con un pao humedecido en xilol. i) Es conveniente limpiar y revisar los microscopios al finalizar la jornada y peridicamente encargar la revisin y ajuste a un tcnico.

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TIPOS DE MICROSCOPIOS:
Microscopio de fluorescencia

La fluorescencia es la propiedad de una sustancia de emitir luz, al ser expuesta a la luz o a radiaciones electromagnticas. La funcin del microscopio de fluorescencia se basa en que una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte son estimulados por un haz de luz de una determinada longitud de onda, y la imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas fluorescentes que han absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Siendo escasas las molculas autofluorecentes, su aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos. Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o directamente en clulas y usarlas como marcadores.
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Aprovechando este fenmeno, se han creado los flurocromos. Para utilizarlos necesitamos una bombilla que emita luz ultravioleta y luz visible. Para excitar el flurocromo necesitamos un filtro de excitacin que seleccione la longitud de onda que excita nuestro flurocromo. Los ms comunes son el DAPI que tie el ncleo de las clulas y el GFP (Green Fluorescent Protein). FUNDAMENTO FISICO La luz de una fuente de longitud de onda mltiple se mueve a travs de un filtro excitador que solo permite que pase la radiacin excitada de la longitud de onda deseada. Esta radiacin es reflejada por el filtro dicromtico y enfocada por la lente del objetivo sobre la muestra, las molculas fluorescentes de la muestra se excitan y emiten luz (por fluorescencia) de una longitud de onda especfica y mayor. Esta luz es enfocada por el objetivo y la mayor parte pasa a travs del filtro dicromtico y no se refleja. Un filtro de barrera final bloquea toda la luz residual con la frecuencia de la radiacin de excitacin. Ejemplo: 1. Primer filtro de excitacin: selecciona la luz de la longitud de onda incidente. En el esquema est seleccionando luz de longitud de onda entre 450 y 490 nm (azul) 2. Espejo dicroico: Refleja la luz de ciertas longitudes de onda y de dejar pasar otras. En este caso refleja luz de longitud de onda menos de 510 nm (por ello refleja la luz incidente azul) y deja pasar la luz de longitud de onda superior a 510 nm, dejando pasar la luz verde emitida por el fluorocromo . 3. Segundo filtro de barrera: Es el filtro que selecciona la luz de longitud de onda fluorescente. En este caso deja pasar la luz de longitud de onda 520 a 560 nm.

Microscopio de campo oscuro

El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Por ello las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje ptico que conecta el espcimen con la pupila del
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observador. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia. El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa detrs de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas partculas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo. El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un proyector de diapositivas en una habitacin oscura. La luz reflejada por las partculas de polvo llega hasta la retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite incluso distinguir partculas ms pequeas que el poder separador del sistema ptico usado por transparencia. Los condensadores que se emplean en Microscopa de campo oscuro son de dos tipos: del tipo paraboloide (tiene una superficie espejada), y los del tipo cardioide, con dos superficies espejadas. El empleo de uno u otro es indistinto, mediante cualquiera de ambos, la luz no incide directamente en el objetivo (este es el objetivo de estos condensadores), sino que incide con una apertura numrica mayor al del objetivo

Microscopio de contraste de fases

El microscopio de contraste de fases permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial. Su inventor fue el fsico Frits Zernike

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Microscopio confocal

El microscopio confocal es un microscopio que emplea una tcnica ptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imgenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial (colimador de orificio delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de la lente en especmenes que son ms gruesos que el plano focal. El pinhole es una apertura localizada delante del fotomultiplicador que evita el pasaje de fluorescencia de las regiones de la muestra que no estn en foco, la luz que proviene de regiones localizadas por encima o por debajo del plano focal no converge en el pinhole y no es detectada por el fotomultiplicador. Esta tcnica ha ido adquiriendo cada vez mayor popularidad entre las comunidades cientfica e industrial. Se aplica tpicamente en las ciencias de la vida y en la inspeccin de semiconductores.

Concepto bsico
El concepto de imagen confocal fue patentado por Marvin Minsky en 1957. En un microscopio de fluorescencia convencional (p.ej., de campo amplio), el espcimen entero est sobresaturado de luz a partir de la fuente de iluminacin. Debido a la conservacin de la intensidad de la luz en su recorrido, todas las partes del espcimen a lo largo de su ruta ptica sern excitadas y la fluorescencia detectada por un fotodetector o una cmara. Por el contrario, un microscopio confocal utiliza iluminacin puntual y un "pinhole" en un plano ptico conjugado en frente del detector para eliminar la informacin que est fuera del plano focal. Slo la luz que est dentro de este plano puede ser detectada, de modo que la calidad de imagen es mucho mejor que las de campo amplio. Puesto que slo se ilumina un punto cada vez en el microscopio confocal, se requiere una exploracin (scanning) sobre un raster regular en el espcimen para obtener imgenes bi o tridimensionales. La delgadez del plano focal se define mayormente como el cuadrado de la apertura numrica de la lente del objetivo y tambin por las propiedades pticas del espcimen y el ndice de refraccin del ambiente.
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Microscopio electrnico

Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Los electrones atraviesan la muestra (debidamente deshidratada) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos slo se pueden ver en blanco y negro, puesto que no utilizan la luz, pero se le pueden dar colores en el ordenador.

Limitaciones del microscopio electrnico

El limitado dimetro de la apertura no permite que la informacin detallada alcance la imagen, limitando de este modo la resolucin. El contraste de amplitud (que radica en la naturaleza corpuscular de los electrones) se debe al contraste de difraccin, provocado por la prdida de electrones del rayo. Es un contraste dominante en especmenes gruesos. El contraste de fase (que radica en la naturaleza ondulatoria de los electrones) se debe al contraste de interferencia provocado por los desplazamientos en las fases relativas de las porciones del rayo. Es un contraste dominante en especmenes finos.

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Tipos de microscopios electrnicos

(1) Carcasa, (2) emisor de electrones, (3) electrones, (4) ctodo, (5) nodo, (6) inductor de enfoque, (7) muestra analizada, (8)Lente objetivo, (9) Lentes Proyectores, (10) detector (sensor o pelcula fotogrfica). Existen dos tipos principales de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin y el microscopio electrnico de barrido. Microscopio electrnico de transmisin El microscopio electrnico de transmisin emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto cuya imagen se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para utilizar un microscopio electrnico de transmisin debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de angstroms. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar la imagen de un objeto hasta un milln de veces. Microscopio electrnico de barrido (MEB) Imagen de una hormiga tomada con un MEB (microscopio electrnico de barrido). Artculo principal: Microscopio electrnico de barrido . En el microscopio electrnico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un can. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectadas en una imagen de TV. Su resolucin est entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. Aplicaciones en distintas reas

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En el estudio de los circuitos integrados se suele utilizar el microscopio electrnico debido a una curiosa propiedad: Como el campo elctrico modifica la trayectoria de los electrones, en un circuito integrado en funcionamiento, visto bajo el microscopio electrnico, se puede apreciar el potencial al que est cada elemento del circuito.

PRACTICAS DE MICROSCOPA.
1.- Campo de Visin

El campo de visin de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la preparacin bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visin de un microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; en otras palabras, hay 1000 micras en un milmetro. El dimetro de este campo es su medida. El campo de visinde un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la preparacin bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visin de un microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; en otras palabras, hay 1000 micras en un milmetro. El dimetro de este campo es su medida. Tcnica: Clculo del dimetro del campo de visin Para calcular el dimetro del campo de visin para un determinado aumento hay que seguir los siguientes pasos: a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado. b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos. c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la lnea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual. d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparacin quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observacin ntida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo 20

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las lneas del papel milimetrado con el borde del campo de visin. f) Contar el nmero de milmetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos lneas es un milmetro) y estimar aproximadamente la fraccin sobrante, si la hay. El resultado ser el dimetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular). g) Si queremos calcular el dimetro del campo de visin para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo ser menor, es decir, se ver menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo ser la mitad, si el aumento es el triple, el dimetro ser la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastar con realizar un sencillo clculo matemtico para saber el nuevo dimetro. Equivalencia mm en micras Medida en mm (escala del Equivalencia en m portaobjetos) 1mm 0.1 mm 0.01mm 1000 m 100 m 10 m

2.- Observacin de clulas en fresco (orina y heces) Tcnica: Orina: 1. 2. 3. 4. 5. Heces: 1.

Centrifugar aproximadamente 10 ml de orina Desechar la orina Resuspender el pellet del fondo del tubo Depositar cuidadosamente una gota de la suspensin en una placa portaobjetos Cubrir con un cubreobjetos y observar en el microscopio

Colocar una gota de lugol en un extremo de la placa y una gota se suero fisiolgico en el otro. 2. Con un palillo tomar una pequea muestra, diluirla en el lugol y descartar el palillo 3. Con otro palillo tomar nuevamente una muestra de las heces y diluirla en el suero fisiolgico. 4. Observar en el microscopio.

3.- Observacin de clulas fijadas y teidas (epidermis de la cebolla) Tcnica: 1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava. 2. Depositar el fragmento de membrana en un portaobjetos (con unas gotas de agua). Poner el portaobjetos sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los 21

3.

4. 5. 6.

colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo! Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio. Observar la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identificar las distintas clulas del tejido epidrmico.

4.- Observacin de las clulas sanguneas. Tcnica: a) b) c) d) Realizar una puncin en un dedo pulgar. Depositar la gota de sangre en la parte central de un extremo del portaobjetos Colocar un portaobjetos aproximadamente en 90o y realizar el extendido Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin e) Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar por 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms liquido. f) Lavar cuidadosamente en chorro fino la preparacin y agregar unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. g) Volver a lavar cuidadosamente hasta que no queden restos de colorante. h) Dejar secar a temperatura ambiente o al calor muy lento de la llama del mechero i) Observar al microscopio.

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CAPTULO II CENTRIFUGAS

Centrifuga es un equipo bsico de laboratorio, utilizado para la separacin de los componentes de una mezcla (generalmente slidos y lquidos), mediante la fuerza centrfuga, que acelera los efectos de la gravedad, es decir disminuye el tiempo de la decantacin o sedimentacin de los elementos, gracias a la diferencia de densidad de los mismos. Los ms densos precipitan ms rpidamente y se ubicaran al fondo del tubo de ensayo. La fuerza centrfuga es una fuerza que aparece cuando se describe un movimiento circular alrededor de un eje de rotacin, el calificativo de "centrfuga" significa que "huye del centro" as que la fuerza centrfuga hace que los elementos tiendan a ir en direccin contraria al centro o eje.

Existen varios tipos bsicos: centrfugas de separacin de sueros o plasma de baja velocidad (Macrocentrfuga, entre 2,000 y 6,000 R.P.M. aproximadamente), centrfugas para microhematocritos (Microcentrfuga entre 10,000 y 18,000 R.P.M. aprox.) y las ultracentrfugas (de 20,000 hasta 75,000 R.P.M.) para la separacin de protenas, generalmente las de gran velocidad traen consigo refrigeracin para evitar el sobrecalentamiento del rotor y las muestras por efecto de la friccin. En las Ultracentrfugas debido a las altas velocidades, se hace necesario un intenso vaco en la cmara de centrifugacin.

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Partes de la centrfuga Las partes principales de este equipo son las siguientes: 1. Tapadera 2. Cmara o gabinete 3. Rotor 4. Portamuestras 5. Base 6. Interruptor de encendido 7. Marcador de tiempo y Velocidad 8. Tacmetro 9. Freno Tapadera: impide el acceso a las muestras, mientras estn en movimiento. En la mayora de los modelos funciona en forma automtica, de modo que no pueda ser abierta mientras la centrfuga est en funcionamiento. Cmara o gabinete: es el espacio fsico donde se deposita los tubos con la muestras a ser centrifugadas. Dentro de esta cmara gira el rotor. Rotor: Es la parte en la que se colocan los portamuestras, se le conoce tambin como araa. Los rotores pueden ser de varios tipos, pero los ms comunes son: rotores basculantes y rotores de ngulo fijo. a) Rotor basculante: Los tubos se hallan dentro de unas carcasas que cuelgan. Estas carcasas estn unidas al rotor con un eje y cuando la centrfuga gira, se mueven de una posicin vertical a una posicin horizontal. Se usan partculas con un mismo o casi igual coeficiente de sedimentacin.

b) Rotor de ngulo fijo: Los tubos se alojan con un ngulo fijo respecto al eje de giro.

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Portamuestras: generalmente son canastillas en las que se colocan los tubos con las muestras a centrifugar. Base: Generalmente construida en materiales pesados, y con sistemas de fijacin a las superficies (ventosas) de modo que brinda estabilidad al equipo. A menudo los controles se colocan aqu. Interruptor de encendido: Permite controlar el suministro de energa al equipo. Control de tiempo y velocidad: Permite regular el tiempo y la velocidad de centrifugacin. Generalmente incluye una pantalla la que permite visualizar la velocidad a la que gira el rotor, en RPM, y el tiempo transcurrido o faltante para que finalice un proceso.El tiempo y velocidad de centrifugacin sern inversamente proporcionales a la diferencia de densidad y tamao de los corpsculos a separar. Freno: Algunas centrfugas, dependiendo del modelo, presentan este control, el cual permite ya sea hacer ms rpido el proceso de paro de la centrfuga, o detenerla en situaciones de emergencia. Estos elementos pueden variar, de acuerdo al modelo y complejidad de los equipos. CARGADO DE LAS MUESTRAS EN LA CENTRFUGA Cargar las muestras en la centrfuga correctamente es muy importante para el funcionamiento correcto y preservacin, pues una carga incorrecta de las muestras puede llevar a un desequilibrio y vibracin que finalmente terminara causando daos al rotor y las muestras. 1. Primero asegrese que la centrifuga este conectada aun toma corriente de manera correcta 2. Abra la tapadera de la centrifuga 3. Coloque las muestras de manera balanceada dentro de la cmara o gabinete, es decir de manera que tengan el mismo peso o masa y que queden colocadas de forma opuesta al rotor, si se tiene un numero impar de muestras se debe buscar otra muestra o tubo con agua de peso similar, de modo que siempre se forme pares opuestos de igual peso 4. Adems de tener la misma masa o peso, deben tener el mismo centro de gravedad, es decir no se debe colocar tubos contrapuestos de diferente forma, tamao, espesor, etc. 5. Cierre la tapadera y asegrese de que se cerr correctamente 6. Oprima el botn de encendido para poder as manipular el equipo 7. Ajuste la velocidad y el tiempo utilizando sus respectivas perillas o controles 8. Verifique la velocidad y el tiempo en las pantallas correspondientes y de ser necesario modifique 9. Inicie el proceso de centrifugado en caso de presentarse una situacin de peligro o mal funcionamiento utilice el freno para detener la operacin 10. Al terminar el proceso, espere a que la centrifuga termine de rotar
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11. Abra la tapadera y retire las muestras utilizando el equipo necesario tal como puede ser pinzas. PRECAUCIONES AL MOMENTO DE CENTRIFUGAR 1. Siga las instrucciones de uso del fabricante. 2. Fjese siempre antes de colocar las muestras que no existan otros tubos en las canastillas. 3. No colocar tubos mojados dentro de la centrfuga, podra ocasionar daos en el sistema elctrico y oxidacin en el rotor. 4. No colocar tubos con tapones, puede provocar que los tubos se rompan. 5. Revisar bien la tcnica de los elementos que necesita centrifugar para evitar colocar velocidades y tiempos diferentes a los requeridos. 6. No retirar la tapadera mientras el rotor est girando. 7. Jams intentar detener el rotor con la mano, podra provocarse cortes y contaminacin. RECOMENDACIONES DE USO 1. Mantenga la centrfuga limpia de restos de muestras, vidrio o polvo. 2. Si algo se rompe cuando se esta centrifugando, apague inmediatamente el equipo y no abra la tapa antes de que se detenga completamente el rotor o el indicador de apertura de la tapa lo indique. 3. Remplazar los recipientes metlicos deformados, pues producen una presin no uniforme sobre los tubos de muestra. 4. No utilice equipo de vidrio rallado o agrietado, porque la presin centrfuga puede producir una ruptura en estos puntos, pulverizando el vidrio y contaminando las muestras. 5. No colocar la centrfuga cerca de microscopios, pues su vibracin podra desprender los lentes objetivos. CUIDADOS DE UNA CENTRFUGA 1. Realice el mantenimiento del equipo fijndose siempre en las instrucciones del manual. 2. Realice un mantenimiento preventivo con un profesional por lo menos una vez al ao. 3. Si a pesar de estar bien distribuido los pesos, la centrfuga vibra exageradamente, hgala funcionar sin tubos y revise si no hay dao del rotor

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CAPTULO III BAO TERMICO O BAO MARA

El bao Mara o bao de Mara es un mtodo empleado en las industrias (farmacutica, cosmtica, de alimentos y conservas), en laboratorio de qumica para conferir temperatura uniforme a una sustancia lquida o slida que no puede ser expuesta al calor directo. Mediante el Bao Mara se logra calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro mayor con agua que se lleva a o est a la temperatura deseada. El bao de Mara es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar pruebas serolgicas y procedimientos de incubacin, aglutinacin, inactivacin, biomdicos, farmacuticos y hasta industriales. Por lo general, se utilizan con agua, pero tambin permiten trabajar con aceite. Los rangos de temperatura en los cuales normalmente son utilizados estn entre la temperatura ambiente y los 60 C. Tambin se pueden seleccionar temperaturas de 100 C, utilizando una tapa de caractersticas especiales. Los baos de Mara son fabricados con cmaras cuya capacidad puede seleccionarse entre los 2 y los 30 litros. El concepto de bao Mara implica el calentamiento indirecto, por conveccin trmica de un medio, generalmente es el agua que puede llevar hasta una temperatura no mayor de 100 C (ebullicin a nivel del mar), aun que son muy utilizadas tambin soluciones salinas, aceite mineral (que llevan las sustancias a temperaturas mayores), todo depende de la temperatura a la que se requiera llevar las sustancias que estemos trabajando. De este modo, lo que se calienta en primer lugar es el agua u otro medio contenido en el recipiente de mayor tamao y ste es el que poco a poco va calentando el contenido del recipiente menor, de un modo suave y constante. Es Indispensable que en todo tiempo el recipiente interior (ms pequeo), haga contacto con el agua; de otra forma no se producir la transmisin de calor. La invencin del bao Mara se atribuye a Mara la Juda, una de las principales figuras de la alquimia en el siglo III. Se dice que Mara estableci el mtodo del bao en agua para imitar las condiciones de la naturaleza y calentar lentamente mezclas de varias sustancias (elxires) y as germinar oro y metales preciosos. ESQUEMA BAO DE MARA Se presenta a continuacin un esquema bsico de un bao de Mara. En el mismo es posible diferenciar el control electrnico, la pantalla, la cubierta que es un accesorio opcional y el tanque. No se muestran algunos componentes que pueden instalarse en estos equipos como el termmetro y la unidad de agitacin, para mantener uniforme la temperatura.

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PRINCIPIOS DE OPERACIN Los baos de Mara estn constituidos por un tanque fabricado en material inoxidable, el cual tiene montado en la parte inferior del mismo un conjunto de resistencias elctricas, mediante las cuales se transfiere calor a un medio como agua o aceite, que se mantiene a una temperatura preseleccionada a travs de un dispositivo de control termo par, termostato, termistor o similar que permite seleccionar la temperatura requerida por los diversos tipos de anlisis o pruebas. Dispone de un cuerpo externo donde se encuentran ubicados los controles mencionados, el cual se fabrica en acero y se recubre generalmente con pintura electrosttica de alta adherencia y resistencia a las condiciones ambientales propias de un laboratorio. Las resistencias pueden ser las siguientes: De inmersin. Se caracterizan por estar instaladas dentro de un tubo sellado. Estn ubicadas en la parte inferior del recipiente y se encuentran en contacto directo con el medio a calentar. Externas. Se encuentran ubicadas en la parte inferior pero son externas al tanque; estn protegidas por un material aislante que evita prdidas de calor. Este tipo de resistencias transfiere el calor al fondo del tanque por medio de conduccin trmica. Dependiendo del tipo de bao, algunos disponen de una serie de accesorios como sistemas de agitacin, que imprimen al medio calefactor un movimiento cuidadosamente controlado para mantener la temperatura lo ms uniforme posible. Se muestra a continuacin una tabla que describe los principales tipos de baos de Mara.

Resistencias de inmersin y externa

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Tipos de baos de Mara

CONTROLES BAOS DE MARA Los baos de Mara tienen por lo general controles muy sencillos. Algunos fabricantes han incorporado en sus lneas de fabricacin controles con microprocesadores. Estos varan dependiendo del tipo de bao. A continuacin, se presenta el esquema del panel de control de un bao de Mara bsico. Como puede apreciarse el control dispone de estos elementos: 1. Un interruptor de encendido y apagado 2. Un botn de Men para seleccionar los parmetros de operacin: temperatura de operacin, temperatura accionamiento alarma, escala de temperatura (C, F) 3. Dos botones para ajuste de parmetros 4. Una pantalla 5. Piloto de encendido 6. Pilotos (2) para identificar escala de temperatura (C, F) OPERACIN DEL BAO DE MARA Instalacin 1. Instalar el bao de Mara en un lugar que se encuentre cerca de una toma elctrica, con la capacidad de suministrar energa elctrica de acuerdo con los voltajes y frecuencias que utiliza el equipo para su operacin normal. Dicha toma debe disponer de su respectiva conexin a tierra, para garantizar la proteccin y seguridad del operador y del equipo. Generalmente operan con 110 V o con 220 V. Asimismo, se facilita la instalacin y uso si el lugar seleccionado se encuentra cerca de un vertedero que disponga de los servicios de suministro y recoleccin de agua. 2. Verificar que el lugar seleccionado est nivelado y disponga de la resistencia requerida para sostener, con seguridad, el peso del bao de Mara cuando se encuentre lleno de fluido. 3. Observar que el lugar disponga de espacios libres adecuados, para colocar las muestras y accesorios requeridos para la normal operacin del bao de Mara.
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4. Evitar colocar el bao de Mara donde existan corrientes de aire fuertes que puedan interferir con su normal operacin. Por ejemplo: frente a una unidad de aire acondicionado tipo ventana. Seguridad 1. Evitar el uso del bao de Mara en ambientes en los que estn presentes materiales inflamables o combustibles. El equipo contiene componentes resistencias que generan temperaturas muy altas que podran iniciar un incendio o explosin accidental. 2. Conectar siempre el equipo a una toma elctrica que disponga de polo a tierra, para proteger al usuario y al equipo de descargas elctricas. La acometida elctrica debe cumplir con la normatividad exigida en el laboratorio y el pas. 3. Trabajar el bao de Mara exclusivamente con lquidos que no sean corrosivos ni inflamables. 4. Trabajar el bao de Mara utilizando elementos de proteccin personal. El bao tiene componentes elementos resistivos que podran causar quemaduras si se tocan desprevenidamente, incluso despus de transcurrido un perodo de tiempo considerable despus de apagar el equipo. 5. Trabajar las sustancias que generan humos colocando el bao de Mara dentro de una cabina extractora de humos o en un lugar muy bien ventilado. 6. Recordar que los lquidos que se trabajan dentro del recipiente del bao de Mara pueden producir quemaduras si inadvertidamente se coloca la mano dentro del mismo. 7. Tener en cuenta que el bao de Mara est diseado para ser utilizado con un lquido en el interior del recipiente. Si el mismo se seca, la temperatura del recipiente puede llegar a ser muy alta. Utilizar siempre la bandeja difusora para colocar los recipientes dentro del tanque del bao de Mara. a) Esta ha sido diseada para distribuir la temperatura de forma uniforme. 8. Evitar utilizar el bao de Mara si alguno de los controles falla: el de temperatura o el de lmite. Uso del bao de Mara Antes de usar el bao de Mara, se debe verificar que el mismo se encuentra limpio y que se encuentran instalados los accesorios que van a utilizarse. Los pasos que normalmente se siguen son: 1. Llenar el bao de Mara con el fluido que habr de utilizarse para mantener uniforme la temperatura agua o aceite. Verificar que, colocados los recipientes que van a calentarse, el nivel del mismo se encuentre entre 4 y 5 cm del borde superior del tanque. 2. Instalar los instrumentos de control que, como termmetros y agitadores, puedan ser requeridos. Utilizar los aditamentos de montaje que, para el efecto, suministran los fabricantes. Verificar la posicin del bulbo del termmetro o de la sonda trmica, para asegurar que las lecturas sean correctas.

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3. Si se utiliza agua como fluido de calentamiento, verificar que la misma sea limpia. Algunos fabricantes recomiendan aadir productos que eviten la formacin de algas. 4. Colocar el interruptor principal en la posicin de encendido. Algunos fabricantes han incorporado controles con microprocesadores que inician rutinas de autoverificacin, una vez que se acciona el interruptor de encendido. 5. Seleccionar la temperatura de operacin. 6. Seleccionar la temperatura de corte en aquellos baos que disponen de este control. Este es un control de seguridad que corta el suministro elctrico, si se sobrepasa la temperatura seleccionada. Esta se selecciona tambin a travs del botn de Men y se controla con los botones de ajuste de parmetros. 7. Evitar utilizar el bao de Mara con sustancias como las que se indican a continuacin: a) Blanqueadores. b) Lquidos con alto contenido de cloro. c) Soluciones salinas dbiles como cloruro de sodio, cloruro de calcio o compuestos de cromo. d) Concentraciones fuertes de cualquier cido. e) Concentraciones fuertes de cualquier sal. f) Concentraciones dbiles de cidos: hidroclrico, hidrobrmico, hidroidico, sulfrico o crmico. g) Agua desionizada, pues causa corrosin y tambin perforaciones en el acero inoxidable. Mantenimiento Los baos de Mara son equipos que no son muy exigentes desde el punto de vista de mantenimiento. Las rutinas recomendadas estn principalmente enfocadas a la limpieza de los componentes externos. A continuacin, se sealan las rutinas ms comunes. Limpieza Frecuencia: Mensual 1. Apagar y desconectar el equipo. Esperar a que el mismo se enfre para evitar riesgos de quemaduras accidentales.
2. Extraer el fluido utilizado para el calentamiento. Si es agua, puede verterse a un sifn. Si es aceite, recolectar en un recipiente con capacidad volumen adecuada. 3. Retirar la rejilla de difusin trmica que se encuentra ubicada en el fondo del tanque.

4. Limpiar el interior del tanque con un detergente suave. Si se presentan indicios de corrosin, existen en el mercado sustancias para limpiar el acero inoxidable. Frotar suavemente con esponjas sintticas o equivalentes. Evitar la utilizacin de lana de acero para remover manchas de xido, debido a que las mismas dejan partculas de acero que podran acelerar la corrosin. 5. Evitar doblar o golpear el tubo capilar del control de temperatura que generalmente se encuentra ubicado en el fondo del tanque. 6. Limpiar con agua limpia el exterior y el interior del bao de Mara.

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Lubricacin Frecuencia: Diaria Esta actividad es para baos de Mara que disponen de unidad o sistema de agitacin. Lubricar el eje del motor elctrico del agitador. Colocar una gota de aceite mineral en el eje, para que se mantenga una buena condicin de lubricacin entre los rodamientos del motor y el eje del mismo. Advertencia: Antes de efectuar cualquier actividad de mantenimiento, desconectar el equipo de la toma de alimentacin elctrica. Tabla de solucin de problemas

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CAPTULO IV ESTERILIZACIN
El autoclave es el equipo que se utiliza para esterilizar. Por esterilizar se entiende la destruccin o eliminacin de toda forma de vida microbiana, incluyendo esporas presente en objetos inanimados mediante procedimientos fsicos, qumicos o gaseosos. La palabra esterilizador proviene de la palabra latina sterilis que significa no dar fruto. Este captulo se enfocar exclusivamente en los autoclaves, dado que son los de mayor utilizacin en los establecimientos de salud, laboratorios clnicos y de investigacin y salud pblica. A dichos equipos se les conoce tambin con el nombre de esterilizadores. La temperatura utilizada para la destruccin de los mismos, es de 100 C en adelante. Es un trmino absoluto que implica la prdida de la viabilidad mediante la destruccin de todos los microorganismos contenidos en un objeto, rea especfica o sustancia, condicionando de tal modo la posterior propagacin o contaminacin a otros objetos o al medio ambiente. La esterilizacin debe ser considerada como un conjunto de procesos interrelacionados de enorme importancia para que puedan prestarse los servicios de salud esterilizacin de materiales, medios de cultivo, instrumentos dentro de condiciones rigurosas de asepsia. Los procesos asociados para lograr que un objeto inanimado est en condiciones estriles son los siguientes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Limpieza Descontaminacin Inspeccin Preparacin y empaque Esterilizacin Almacenamiento Entrega de materiales

AUTOCLAVE
El autoclave es un equipo diseado con el fin de eliminar, de forma confiable2, los microrganismos que de otra manera estaran presentes en objetos que se utilizan en actividades de diagnstico, tratamiento o investigacin en instituciones de salud hospitales, laboratorios; tambin es un equipo de amplio uso en las industrias procesadoras de alimentos y en la industria farmacutica. En el laboratorio los materiales y elementos se esterilizan con los siguientes fines:

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1. Preparar el equipo a ser usado en cultivos bacteriolgicos (tubos de ensayo, pipetas platos Petri, etc.), a fin de evitar que se encuentren contaminados. 2. Preparar elementos utilizados en la toma de muestras. (Todos deben estar en condicin estril: agujas, tubos, recipientes). 3. Esterilizar material contaminado. Los autoclaves se encuentran disponibles en muchos tamaos, los ms pequeos son los de sobremesa y los ms grandes, equipos complejos que requieren gran cantidad de preinstalaciones para su operacin. Para medir su tamao, por lo general, se toma como referencia el volumen de la cmara de esterilizacin, que se mide en decmetros cbicos [dm3] o en litros [l]. Dependiendo de la forma en que se controla su operacin, es posible encontrar manuales, semiautomticos o totalmente automticos. PRINCIPIOS DE OPERACIN Los autoclaves son equipos que trabajan aprovechando las propiedades termodinmicas del agua, la cual puede ser considerada como una sustancia pura. En condiciones normales (a nivel del mar, en fase lquida y con una presin atmosfrica de 1 atmsfera) el agua hierve y se convierte en vapor, fase gaseosa a 100 C. Si la presin se reduce, hierve a una menor temperatura. Si la presin aumenta, hierve a mayor temperatura. El autoclave es un equipo que en una cmara sellada, mediante el control de la presin del vapor de agua, puede lograr temperaturas superiores a los 100 C, o de forma inversa, controlando la temperatura, lograr presiones superiores a la atmosfrica. Los autoclaves utilizan vapor saturado (con calidad superior al 98 %) para transmitir su energa trmica a los elementos que se quieren esterilizar a presiones superiores a las de la atmsfera. Por lo general, este mtodo se conoce con el nombre de esterilizacin por calor hmedo. Este es el mtodo de mayor uso debido a su efectividad, rapidez y bajo costo. Sin embargo, no todos los materiales o elementos se pueden esterilizar con calor hmedo; para aquellos elementos que son afectados por el calor y la humedad, se han desarrollado mtodos alternos de esterilizacin. En el laboratorio, para efectuar procesos de esterilizacin, se utilizan autoclaves de calor hmedo y estufas de secado que emplean calor seco (sin presencia de humedad). Esquema tipo corte del autoclave a vapor La ilustracin que se muestra a continuacin es una sntesis de los principales componentes del sistema de vapor de un autoclave. Por claridad se han colocado, en la parte superior e inferior, aditamentos que en la realidad se encuentran ubicados alrededor del equipo en lugares seleccionados por cada fabricante.
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Descripcin de los componentes del esquema Se presenta a continuacin una descripcin breve de los elementos ms comunes que conforman un autoclave. Las configuraciones varan dependiendo del diseo de cada fabricante. 1. Vlvula de seguridad. Dispositivo que impide que la presin del vapor aumente por encima de determinado valor. Los fabricantes las instalan tanto en la cmara de esterilizacin como en la camisa. 2. Tapa del autoclave. Dispositivo que permite aislar la cmara de esterilizacin del ambiente exterior. Normalmente dispone de seguros que impiden su apertura cuando la cmara se encuentra presurizada; dispone tambin de empaques para evitar que el vapor salga de la cmara cuando el equipo est en operacin. Hay tapas de operacin manual y tapas, cuya apertura y cierre se controlan mediante mecanismos electromecnicos. 3. Manija tapa. Dispositivo que en algunos equipos permite al operador abrir o cerrar la puerta. Los equipos de gran capacidad, por lo general, disponen de mecanismos motorizados para accionar la tapa. 4. Cmara de esterilizacin. Espacio en donde se colocan los objetos o elementos a ser esterilizados. Cuando la tapa se cierra la cmara queda aislada del exterior. Cuando el proceso de esterilizacin est en marcha se llena y presuriza con vapor. 5. Termmetro. Instrumento que indica la temperatura a la que se realizan los procesos de esterilizacin en el autoclave. 6. Salida de vapor al final de ciclo . Cuando se termina un ciclo de esterilizacin el vapor es extrado del autoclave mediante procedimientos controlados. 7. Camisa. Espacio ubicado alrededor de la cmara de esterilizacin a travs del cual circula vapor, con el fin de transferir calor a la cmara y disminuir la formacin de condensado. Se encuentra conectada a la cmara y al desage a travs de lneas controladas mediante electrovlvulas. No todos los autoclaves disponen de camisa. Algunos fabricantes la sustituyen colocando alrededor de la cmara de esterilizacin resistencias elctricas. 8. Trampa de vapor. Dispositivo diseado para aprovechar al mximo la energa trmica del vapor. Su funcin es evitar que el vapor salga del sistema. La trampa solo deja salir el condensado que se forma en la cmara, camisa y conductos del autoclave.

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9. Desage. Lnea recolectora del condensado que produce el autoclave. Los autoclaves utilizan hoy en da sistemas controlados por microprocesadores y cada una de sus vlvulas y accesorios trabaja de acuerdo con programas preestablecidos de acuerdo con instrucciones almacenadas en la memoria del microprocesador. Produccin del vapor El vapor que utilizan los autoclaves se genera en dispositivos en los que se transfiere energa trmica al agua utilizando energa elctrica o combustibles fsiles. Los dispositivos que producen el vapor se denominan calderas o generadores de vapor y constituyen un elemento fundamental para el funcionamiento del autoclave. Dependiendo de los tamaos y la frecuencia de uso, los autoclaves disponen de sistemas de alimentacin de vapor que provienen de un sistema central de calderas, o de su propio generador de vapor, que funciona generalmente con resistencias elctricas y viene incorporado en el equipo o suministrado como accesorio por los fabricantes. FUNCIONAMIENTO DEL AUTOCLAVE A continuacin, se describe el funcionamiento general de un autoclave; algunos procedimientos cambiarn de acuerdo al grado de automatizacin incorporado en el equipo: 1. Verificar que el sistema de registro disponga de las plantillas y/o papel requerido para documentar el desarrollo del ciclo de esterilizacin. Proveer cualquier elemento faltante (tinta, plantilla, etc.). 2. Energizar el autoclave. 3. Abrir la puerta del autoclave. En los autoclaves de gran capacidad este proceso se realiza electromecnicamente. En los de media y baja capacidad, por lo general, es manual. 4. Colocar las canastas o recipientes de esterilizacin, que contienen el material previamente preparado limpiado, lavado, secado, clasificado y empacado que se va a esterilizar, en la cmara de esterilizacin, siguiendo las instrucciones de distribucin que recomienda el fabricante. 5. Cerrar la puerta del autoclave. 6. Seleccionar el ciclo de esterilizacin requerido, que depende del tipo de objetos o materiales que requieren ser esterilizados. Por lo general, se oprime un botn debidamente identificado que en forma automtica inicia el ciclo programado. A partir de este momento, el proceso transcurre como se indica a continuacin: a) Se inicia la fase de pretratamiento. En ella se efectan ciclos cortos alternativos de vaco e inyeccin de vapor a la cmara de esterilizacin, con el fin de extraer el aire de esta y de los paquetes que protegen el material a esterilizar. b) Cuando el aire ha sido retirado se inicia la inyeccin y presurizacin de la cmara de esterilizacin. c) En este momento, el vapor entra en contacto con los objetos a esterilizar y se inicia un proceso de transferencia de calor entre el vapor que se encuentra a temperatura ms alta y los artculos a esterilizar. Esto hace que una porcin del
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vapor, al transferir su energa trmica, se convierta en agua lquida condensado en las capas exteriores del material utilizado para empacar, disminuyendo simultneamente su volumen en forma significativa, por lo que ingresa ms vapor a la cmara de esterilizacin, que penetra cada vez ms dentro de los paquetes a esterilizar, hasta que el vapor los rodea integralmente y se estabilizan la presin y la temperatura. d) Una vez logradas estas condiciones, se contabiliza el tiempo requerido para completar la esterilizacin de acuerdo con el tipo de objetos o materiales que estn siendo procesados. Mientras ms alta la temperatura y la presin, menor el tiempo requerido para esterilizar. e) Al terminarse el tiempo programado de esterilizacin, se inicia el proceso de postratamiento. Este incluye la despresurizacin de la cmara, que se realiza normalmente con ayuda del sistema de vaco y el secado de los elementos mediante el suministro de calor transferido desde la camisa a la cmara de esterilizacin. Al disminuir la presin, lo hacen tambin las temperaturas requeridas, para evaporar cualquier residuo de fase lquida que pudiera haberse formado sobre los objetos que estn siendo esterilizados al momento de la despresurizacin. Nb xcx lb., ,El vaco que se efecta alcanza el 10 % de la presin atmosfrica y se mantiene por un perodo de tiempo controlado. Cuando se esterilizan lquidos no se efecta vaco, sino que se controla la extraccin de vapor, a travs de un mecanismo de efecto restrictivo, para evitar que el lquido hierva dentro de los recipientes que lo contienen. f) Finalmente, se permite el ingreso controlado de aire a travs de vlvulas, que disponen filtros de alta eficiencia, hasta que la presin de la cmara de esterilizacin sea igual a la presin atmosfrica. El ciclo de esterilizacin ha terminado. 7. Abrir la puerta del autoclave. 8. Descargar el material esterilizado. 9. Cerrar la puerta una vez descargado el material esterilizado, para conservar el calor de la cmara de esterilizacin y as facilitar el siguiente ciclo de esterilizacin que se realice. 10. Almacenar el material esterilizado apropiadamente. Nota: Los ciclos de esterilizacin deben ser supervisados y sometidos a procedimientos de control de calidad mediante la utilizacin de indicadores de tipo fsico, qumico y biolgico, para asegurar su efectividad. Advertencia: No todos los objetos pueden ser esterilizados con calor hmedo. Algunos requieren procedimientos de esterilizacin a baja temperatura. Verificar qu procedimiento debe seguirse de acuerdo con el material a esterilizar.

Ciclos de esterilizacin

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Los procesos de esterilizacin se realizan siguiendo ciclos predefinidos que varan de acuerdo al tipo de carga que se requiere esterilizar. Hay ciclos de esterilizacin diferentes para materiales porosos, instrumental quirrgico, lquidos o material sensible al calor. Los tiempos de los ciclos de esterilizacin se ajustan a la altura sobre el nivel del mar del lugar donde se encuentra ubicado el autoclave. Los fabricantes suministran las tablas de la compensacin a tener en cuenta. Por lo general, mientras ms alto est ubicado el equipo, ms prolongado ser el tiempo de esterilizacin. Control de calidad Para que un producto pueda considerarse estril, es necesario verificar que todas las etapas que conforman el proceso de esterilizacin se hayan realizado correctamente. Para verificar el cumplimiento de todas las condiciones, se ha desarrollado una serie de pruebas que evalan las caractersticas del proceso y su influencia sobre la actividad de los microorganismos. Hay evaluaciones sobre la temperatura, la presin, el tiempo, la humedad y el comportamiento general del equipo, a fin de certificar que cumpla y funcione de acuerdo con procedimientos que han demostrado su validez y confiabilidad. Existen tambin pruebas o indicadores que permiten certificar la muerte de los microorganismos. Para certificar la calidad de los procesos de esterilizacin, se ha desarrollado una serie de pruebas de distinta categora, entre las que se destacan las siguientes: 1. Indicadores del proceso de esterilizacin. Estn diseados para supervisar el funcionamiento de los autoclaves. Incluyen instrumentos que controlan parmetros como temperatura, tiempo y presin termmetros, manmetros y cronmetros y registran el desarrollo del proceso. Los sistemas de registro de los autoclaves modernos microprocesador registran todos los parmetros del ciclo de esterilizacin e inclusive rechazan el ciclo, en caso de presentarse alguna anomala. Finalmente, en esta categora se encuentra una prueba denominada test de Bowie-Dick, que evala la eficiencia de la bomba de vaco, utilizando una hoja que cambia de color de forma uniforme, si el proceso se ha realizado a satisfaccin. Caso contrario, el color en la hoja es desigual. 2. Indicadores qumicos. Son pruebas de tipo qumico que cambian de color o de estado cuando se exponen a las diversas fases del proceso de esterilizacin. Los indicadores qumicos permiten diferenciar aquellos artculos que han sido sometidos o expuestos a un proceso, de aquellos que no lo han recibido. Entre los ms conocidos se encuentran las cintas adhesivas o tiras que van dentro de un insumo o paquete. La Norma ISO N 11140-1 describe las categoras de los indicadores qumicos. Se debe tener presente que los indicadores qumicos, por s mismos, no garantizan que el proceso de esterilizacin cumpli con todos los requisitos. El personal que los utiliza debe recibir entrenamiento preciso que permita analizar si el resultado obtenido es coherente con el desarrollo integral del proceso de esterilizacin. 3. Indicadores biolgicos. Se consideran el mejor mtodo para controlar la calidad de un proceso de esterilizacin. Estn compuestos por microorganismos vivos que tienen

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una mayor resistencia a un determinado proceso de esterilizacin, o por reactivos qumicos que reaccionan ante protenas especficas de este tipo de microorganismo. Para controlar el proceso de esterilizacin por vapor saturado, plasma perxido de hidrgeno o formaldehdo, se utilizan, por lo general, esporas de bacillus stearothermophilus. Para controlar la esterilizacin por calor seco proceso que realizan las estufas de secado y por xido de etileno, se utilizan esporas de bacillus subtilis, variedad Nger. La muestra de esporas se coloca en la carga del esterilizador y, luego del proceso, se incuba, analiza y determina si se cumple con los requisitos de esterilizacin, generalmente, observando un cambio de color. Estas pruebas estn estandarizadas y los fabricantes sealan la forma de utilizarlas y de interpretar los resultados. Los indicadores biolgicos por s solos tampoco garantizan que el ciclo de esterilizacin cumple con todos los requisitos. La nica forma es controlar todos los parmetros del ciclo de esterilizacin. SERVICIOS REQUERIDOS Para funcionar los autoclaves requieren los siguientes servicios: 1. Un lugar de instalacin que disponga de buena ventilacin, para remover el calor y la humedad que genera el equipo mientras se encuentra en operacin. Asimismo, requiere de espacios libres en la parte posterior y lateral, para que se le puedan prestar los servicios tcnicos que requiera a lo largo de su vida til. Este espacio es de al menos 0,8 m. Dependiendo del diseo del autoclave, deber preverse la infraestructura complementaria, para que pueda operar a satisfaccin. El esquema que se incluye explica el requerimiento de espacio alrededor del autoclave. La temperatura en la vecindad inmediata del equipo puede ser superior a los 70 C cuando se encuentra en operacin. El piso deber estar bien nivelado y construido con materiales que resistan la humedad y el calor. 2. Acometida elctrica, dimensionada a los consumos del equipo. Si el autoclave es autnomo, es decir, dispone de su propio generador de vapor, la acometida elctrica debe estudiarse en detalle, pues la potencia requerida podra ser significativamente alta. Son tpicas demandas de potencia de 21 kw, 38 kw, 48 kw y superiores, para que funcione el generador de vapor. La acometida deber contar con las seguridades y protecciones requeridas. Los voltajes tpicos requeridos por los autoclaves son 220 V, 60 Hz, o 380 V, 60 Hz trifsico. 3. Acometida de agua, dimensionada a los consumos del equipo en volumen y presin. Mientras ms grande el equipo, mayor consumo. El agua que consume el autoclave debe haber recibido los tratamientos requeridos para eliminar los slidos en suspensin, que puedan afectar negativamente el funcionamiento de las electrovlvulas y dems dispositivos electrohidrulicos. 4. Sistema de desage diseado para recolectar agua caliente. 5. El autoclave debe ser operado exclusivamente por personal que haya recibido y aprobado capacitacin especializada en este tipo de procesos.

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RUTINAS DE MANTENIMIENTO El autoclave es un equipo que demanda supervisin y mantenimiento preventivo permanente, debido a la gran cantidad de componentes y tecnologas que lo integran. Se enfoca el mantenimiento hacia aquellas rutinas bsicas que pueden realizar los operadores del equipo. Para realizar el mantenimiento detallado, debern seguirse las instrucciones definidas en los manuales de servicio de los fabricantes. Verificaciones diarias Antes de iniciar los procesos de esterilizacin, debern realizarse las siguientes verificaciones: 1. Comprobar el estado de los manmetros y de los termmetros. 2. Controlar que no se presenten fugas de vapor en ninguno de los sistemas que operan en el autoclave. 3. Limpiar con un trapo hmedo el frente del autoclave: controles, indicadores, manijas. Mantenimiento semanal Responsable: Operador del equipo 1. Limpiar el filtro del drenaje de la cmara de esterilizacin. Retirar cualquier residuo retenido en l. 2. Limpiar internamente la cmara de esterilizacin, utilizando productos de limpieza que no contengan cloro. Incluir en la limpieza las guas de las canastas usadas para colocar los paquetes. 3. Limpiar con una solucin acetificada, si se esterilizan soluciones con cloro. El cloro causa corrosin incluso en implementos de acero inoxidable. Lavar a continuacin con agua abundante. 4. Limpiar las superficies externas inoxidables con un detergente suave. Eventualmente, podra utilizarse un solvente como el cloro etileno, procurando que este no entre en contacto con superficies que tengan recubrimientos de pintura, sealizaciones o cubiertas plsticas. 5. En autoclaves con puerta de accionamiento manual, verificar que los mecanismos ajustan bien y que su operacin es suave. 6. Nunca utilizar lana de acero para limpiar internamente la cmara de esterilizacin. Mantenimiento trimestral Responsable: Tcnico del autoclave 1. Revisin de las vlvulas de seguridad para verificar que se encuentran operando correctamente. 2. Lubricar el empaque de la tapa. 3. Verificar que los sellos de las vlvulas de seguridad se encuentren en buen estado.

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Advertencia: Si se permite que en la vlvula de seguridad queden escapes de vapor, estos deteriorarn rpidamente el sello y se tendr que sustituir toda la vlvula. Mantenimiento anual Responsable: Tcnico del autoclave 1. Limpiar todos los filtros. 2. Verificar y ajustar la tensin de los resortes de las vlvulas de diafragma. 3. Desmontar, limpiar y ajustar las vlvulas de seguridad. 4. Cambiar el filtro de aire. 5. Efectuar un proceso general de esterilizacin comprobando en detalle: presin, temperatura, tiempos requeridos para completar cada fase del ciclo, estado de las lmparas de sealizacin del proceso. Verificar que el funcionamiento se encuentre dentro de las tolerancias definidas por el fabricante. 6. Efectuar, adicionalmente, las mismas rutinas recomendadas cada tres meses.

ESTUFA DE SECADO
La estufa de secado es un equipo que se utiliza para secar y esterilizar recipientes de vidrio y metal en el laboratorio. Se identifica tambin con el nombre Horno de secado. Los fabricantes han desarrollado bsicamente dos tipos de estufa: las que operan mediante conveccin natural y las que operan mediante conveccin forzada. Las estufas operan, por lo general, entre la temperatura ambiente y los 350 C. Se conocen tambin con el nombre de Poupinel o pupinel. Se emplea para esterilizar o secar el material de vidrio y metal utilizado en los exmenes o pruebas, que realiza el laboratorio y que proviene de la seccin de lavado, donde se enva luego de ser usado en algn procedimiento. La esterilizacin que se efecta en la estufa se denomina de calor seco y se realiza a 180 C durante 2 horas; la cristalera, al ser calentada por aire a alta temperatura, absorbe la humedad y elimina la posibilidad de que se mantenga cualquier actividad biolgica debido a las elevadas temperaturas y a los tiempos utilizados.

PRINCIPIOS DE OPERACIN Las estufas de secado constan, por lo general, de dos cmaras: una interna y una externa. La cmara interna se fabrica en aluminio o en material inoxidable, con muy buenas propiedades para transmitir el calor; dispone de un conjunto de estantes o anaqueles fabricados en alambre de acero inoxidable, para que el aire circule
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libremente, all se colocan los elementos que requieren ser secados o esterilizados mediante calor seco. Se encuentra aislada de la cmara externa por un material aislante que mantiene internamente las condiciones de alta temperatura y retarda la transferencia de calor al exterior. La cmara externa est fabricada en lmina de acero. El calor interno es generado mediante conjuntos de resistencias elctricas (Las Resistencias. Son elementos calefactores que transforman la energa elctrica en energa trmica), que transfieren la energa trmica a la cmara interna. Dichas resistencias se ubican en la parte inferior de la estufa y en algunos modelos en las paredes laterales. La estufa tiene una puerta metlica que tambin dispone de su aislamiento trmico y est dotada de una manija fabricada igualmente en material aislante, para evitar que el calor del interior llegue a ser una amenaza para las manos del operador. La puerta est instalada sobre la parte frontal del cuerpo de la estufa, mediante un conjunto de bisagras que permiten su apertura logrando ngulos hasta de 180. La estufa moderna se controla mediante un mdulo con microprocesadores desde el cual es posible seleccionar los parmetros de operacin del equipo y sus alarmas, y programar la realizacin de ciclos o procesos trmicos, mediante los cuales se controlan no solo las temperaturas, sino tambin la forma como las mismas deben variar en el tiempo, a travs de fases o etapas de calentamiento/enfriamiento natural o sostenimiento de la temperatura dentro de ciertos lmites de tiempo. Las estufas operan normalmente desde condiciones de temperatura ambiente hasta los 350 C. Algunos fabricantes disponen de modelos con rangos no tan amplios de operacin. Las estufas antiguas disponen simplemente de un conjunto de resistencias cuya operacin es controlada mediante un termostato. En la tabla que se incluye a continuacin, se muestra la relacin de temperatura/tiempo requerida para efectuar procesos de esterilizacin con calor seco, como los que se pueden lograr en las estufas de secado.

SERVICIOS REQUERIDOS Para poder ser utilizada, la estufa de secado requiere lo siguiente: 1. Disponer de un mesn de trabajo bien nivelado y de contextura fuerte. 2. Acondicionar alrededor de la estufa un espacio libre de al menos 5 cm y de un espacio para colocar el material que deber ser procesado en el equipo. 3. Instalar una toma elctrica en buen estado con polo a tierra debidamente dimensionada, para suministrar la potencia elctrica que consume la estufa, que deber cumplir con la normativa elctrica nacional o internacional que
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utilice el laboratorio y no deber estar a ms de 1 m del equipo. El voltaje tpico utilizado es de 110 V o 220 V. 4. Verificar que el circuito elctrico disponga de los dispositivos de proteccin requeridos para garantizar una adecuada alimentacin elctrica. OPERACIN DE LA ESTUFA La operacin de la estufa requiere tener en cuenta una serie de precauciones para su correcta operacin. Entre las ms importantes se encuentran las siguientes: 1. No usar en la estufa materiales o sustancias que sean inflamables o explosivas. 2. Evitar derrames interiores de soluciones cidas o que formen vapores corrosivos, para evitar la corrosin de las superficies y estantes interiores. 3. Utilizar elementos de proteccin personal (guantes aislados, anteojos de seguridad y pinzas para colocar o retirar sustancias o elementos dentro de la estufa de secado).

CONTROL DE CALIDAD El control de calidad en las estufas es un poco difcil de realizar, por cuanto la tcnica de esterilizacin por calor seco tiene como parmetros crticos la temperatura y el tiempo. Por lo general, se usan como indicadores biolgicos esporas de Bacillus subtilis, variedad Nger, que deben incubarse por varias horas despus del proceso de esterilizacin. Su efectividad depende de la difusin del calor, la cantidad de calor disponible y la prdida de calor. La accin microbicida est condicionada por la presencia de materia orgnica o suciedad en el artculo. La esterilizacin por calor seco debe limitarse a materiales que no puedan esterilizarse en autoclaves.

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CAPTULO V BALANZAS
BALANZAS La balanza es un instrumento que mide la masa de un cuerpo o sustancia, utilizando como medio de comparacin la fuerza de la gravedad que acta sobre el cuerpo. La palabra proviene de los trminos latinos bis que significa dos y linx, plato. Se debe tener en cuenta que el peso es la fuerza que el campo gravitacional ejerce sobre la masa de un cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la masa por la aceleracin local de la gravedad. [F = m x g]. El trmino local se incluye para destacar que la aceleracin depende de factores como la latitud geogrfica, la altura sobre el nivel del mar y la densidad de la tierra, en el lugar donde se efecta la medicin. Dicha fuerza se mide en Newton. La balanza tiene otros nombres, entre los que destacan bscula y pesa. PROPSITO DE LA BALANZA La balanza se utiliza para medir la masa de un cuerpo o sustancia o tambin el peso de los mismos, dado que entre masa y peso existe una relacin bien definida. En el laboratorio se utiliza la balanza para efectuar actividades de control de calidad con dispositivos como las pipetas, para preparar mezclas de componentes en proporciones predefinidas y para determinar densidades o pesos especficos. PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO Las balanzas se diferencian entre s por el diseo, los principios utilizados y los criterios de metrologa que utilizan. En la actualidad podra considerarse que existen dos grandes grupos: las balanzas mecnicas y las balanzas electrnicas. Balanzas mecnicas Algunas de las ms comunes son las siguientes: 1. Balanza de resorte. Su funcionamiento est basado en una propiedad mecnica de los resortes, que consiste en que la fuerza que ejerce un resorte es proporcional a la constante de elasticidad del resorte
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[k] multiplicada por la elongacin del mismo [x] [F = -kx]. Lo anterior implica que mientras ms grande sea la masa [m] que se coloca en el platillo de la balanza, mayor ser la elongacin, siendo la misma proporcional a la masa y a la constante del resorte. La calibracin de una balanza de resorte depende de la fuerza de gravedad que acta sobre el objeto, por lo que deben calibrarse en el lugar de empleo. Se utilizan si no se requiere gran precisin. 2. Balanza de pesa deslizante. Dispone de dos masas conocidas que se pueden desplazar sobre escalas una con una graduacin macro y la otra con una graduacin micro; al colocar una sustancia de masa desconocida sobre la bandeja, se determina su peso deslizando las masas sobre las escalas mencionadas hasta que se obtenga la posicin de equilibrio. En dicho momento se toma la lectura sumando las cantidades indicadas por la posicin de las masas sobre las escalas mencionadas. 3. Balanza analtica. Funciona mediante la comparacin de masas de peso conocido con la masa de una sustancia de peso desconocido. Est construida con base en una barra o palanca simtrica que se apoya mediante un soporte tipo cuchilla en un punto central denominado fulcro. En sus extremos existen unos estribos o casquillos que tambin estn soportados mediante unas cuchillas que les permiten oscilar suavemente. De all se encuentran suspendidos dos platillos. En uno se colocan las masas o pesas certificadas y en el otro aquellas que es necesario analizar. Todo el conjunto dispone de un sistema de aseguramiento o bloqueo que permite a la palanca principal reposar de forma estable cuando no es utilizada o cuando se requieren modificar los contrapesos. Dispone de una caja externa que protege la balanza de las interferencias, como corrientes de aire, que pudieran presentarse en el lugar donde se encuentra instalada. En la actualidad, se considera que una balanza analtica es aquella que puede pesar diez milsimas de gramo (0,0001 g) o cien milsimas de gramo (0,00001 g); tienen una capacidad que alcanza generalmente hasta los 200 gramos. Para utilizarlas se requiere disponer de un juego de masas certificadas, el cual dispone de piezas con masa de diversa magnitud. El juego est por lo general compuesto por las siguientes piezas:

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4. Balanza de plato superior. Este tipo de balanza dispone de un platillo de carga colocado en la parte superior, el cual es soportado por una columna que se mantiene en posicin vertical por dos pares de guas que tienen acoples flexibles. El efecto de la fuerza, producido por la masa, es transmitido desde algn punto de la columna vertical o bien directamente o mediante algn mecanismo a la celda de carga. La exigencia de este tipo de mecanismo consiste en mantener el paralelismo de las guas con una exactitud de hasta 1 m. Las desviaciones de paralelismo causan un error conocido como de carga lateral que se presenta cuando la masa que est siendo pesada muestra diferencias, si la lectura se toma en el centro del platillo o en uno de sus extremos. El esquema que se incluye a continuacin explica el principio de operacin, el cual algunos fabricantes han introducido a las balanzas electrnicas. 5. Balanza de sustitucin. Es una balanza de platillo nico. Se coloca sobre el platillo de pesaje una masa desconocida que se equilibra al retirar, del lado del contrapeso, masas de magnitud conocida, utilizando un sistema mecnico de levas hasta que se alcance una posicin de equilibrio. El fulcro generalmente est descentrado con relacin a la longitud de la viga de carga y colocado cerca del frente de la balanza. Cuando se coloca una masa sobre el platillo de pesaje y se libera la balanza del mecanismo de bloqueo, el movimiento de la viga de carga se proyecta mediante un sistema ptico a una pantalla localizada en la parte frontal del instrumento. Balanzas electrnicas Las balanzas electrnicas involucran tres elementos bsicos: 1. El objeto a ser pesado que se coloca sobre el platillo de pesaje ejerce una presin que est distribuida de forma aleatoria sobre la superficie del platillo. De all, mediante un mecanismo de transferencia palancas, apoyos, guas, se concentra la carga del peso en una fuerza simple [F] que puede ser medida. [F = Pa] La integral de la presin sobre el rea permite calcular la fuerza. 2. Un transductor de medida, conocido con el nombre de celda de carga, produce una seal de salida proporcional a la fuerza de carga, en forma de cambios en el voltaje o de frecuencia.
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3. Un circuito electrnico anlogo digital que finalmente presenta el resultado del pesaje en forma digital. Las balanzas de laboratorio operan de acuerdo al principio de compensacin de fuerza electromagntica, aplicable a desplazamientos o torques donde se combina la exactitud de los componentes mecnicos con los sistemas automticos de lectura. Funcionamiento. Las partes mviles (platillo de pesaje, columna de soporte [a], bobina, indicador de posicin y carga [G] objeto en proceso de pesaje) son mantenidas en equilibrio en flotacin por una fuerza de compensacin [F] que es igual al peso. La fuerza de compensacin es generada por el flujo de una corriente elctrica, a travs de una bobina ubicada en el espacio de aire existente en un electroimn magneto cilndrico. La fuerza F es calculada mediante la ecuacin [F = I x l x B], donde: I = corriente elctrica, l = longitud total del alambre de la bobina y B = intensidad de flujo magntico en el espacio de aire del electroimn. Con cualquier cambio en la carga peso/masa, el sistema mvil mecnico responde, desplazndose verticalmente una fraccin de distancia, detectada por un fotosensor [e], que como resultado enva una seal elctrica al servoamplificador [f] que cambia el flujo de corriente elctrica que pasa por la bobina del magneto [c], de forma que el sistema mvil retorne a la posicin de equilibrio al ajustarse el flujo magntico en el electroimn. En consecuencia, el peso de la masa G se puede medir de forma indirecta, a partir del flujo de corriente elctrica que pasa por el circuito midiendo el voltaje [V], a travs de una resistencia de precisin [R]. [V = I x R]. A la fecha han sido desarrollados muchos sistemas que utilizan la electrnica para efectuar mediciones muy exactas de masa y peso. El esquema que se presenta a continuacin explica la forma en que funciona la balanza electrnica. Sistema de procesamiento de la seal El sistema de procesamiento de la seal est compuesto por el circuito que transforma la seal elctrica, emitida por el transductor de medida en datos numricos que pueden ser ledos en una pantalla. El proceso de la seal comprende las siguientes funciones: 1. Tara. Se utiliza para colocar en cero el valor de la lectura, con cualquier carga dentro del rango de capacidad de la balanza. Se controla con un botn ubicado generalmente en el frente de la balanza. 2. Control para ajuste del tiempo de integracin. Los valores de peso son promediados durante un perodo predefinido de tiempo. Dicha funcin es muy til cuando se requiere efectuar operaciones de pesaje en condiciones inestables. Por ejemplo: presencia de corrientes de aire o vibraciones.
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3. Redondeo del resultado. En general las balanzas electrnicas procesan datos internamente de mayor resolucin que aquellos que se presentan en la pantalla. De esta forma se logra centrar exactamente la balanza en el punto cero, cuando la balanza es tarada. El valor interno neto se redondea en la pantalla. 4. Detector de estabilidad. Se utiliza en operaciones de pesaje secuencial y permite comparar los resultados entre s. Cuando el resultado se mantiene, es liberado y puesto en pantalla, aspecto que se detecta al encenderse el smbolo de la unidad de peso seleccionada. 5. El procesamiento electrnico de las seales permite disponer de otras funciones tales como conteo de partes, valor porcentual, valor objetivo, entre otras. Dichos clculos son realizados por el microprocesador, de acuerdo con las instrucciones que el operador ingresa a travs del teclado de la balanza. SERVICIOS REQUERIDOS Para instalar y utilizar satisfactoriamente una balanza, se requiere lo siguiente: 1. Disponer de un ambiente que no presente corrientes de aire, cambios bruscos de temperatura y que est libre de polvo. 2. Tener un mesn perfectamente nivelado. Es ideal una plataforma de alta inercia, aislada de las estructuras ubicadas en la vecindad, para reducir el efecto de las vibraciones que emiten ciertos equipos como centrfugas y refrigeradores. La misma debe tener un rea suficiente para instalar la balanza y aquel equipo auxiliar con el que se interacta en los procesos de pesaje. De igual manera se debe prever el espacio requerido por los cables de interconexin, corriente elctrica, conexin al sistema de informacin, a la impresora, etc. 3. Evitar que en la vecindad se encuentren instalados equipos que produzcan campos magnticos elevados o vibraciones como centrfugas, motores elctricos, compresores y generadores. 4. Evitar que se encuentre bajo la influencia directa de los sistemas de aire acondicionado corrientes de aire y de la luz solar. 5. Disponer de una toma elctrica en buen estado, dotada con polo a tierra provista de interruptores, que cumpla con la normatividad elctrica vigente en el pas o el laboratorio. Operacin de la balanza electrnica La operacin de una balanza electrnica moderna est claramente definida en el manual de operacin que suministran los fabricantes.

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En general se debe cumplir el siguiente procedimiento: 1. Permitir que la balanza equilibre sus condiciones con las del ambiente donde se encuentra instalada. 2. Permitir que la balanza se precaliente antes de iniciar las actividades. Normalmente basta que la misma se encuentre conectada al sistema de alimentacin elctrico. Algunos fabricantes sugieren que se deje transcurrir un perodo de tiempo de al menos 20 minutos, desde el momento en que se energiza hasta el momento en que se inicia la utilizacin de la misma. Las balanzas analticas Clase I requieren al menos 2 horas antes de iniciar su utilizacin. 3. Verificar que la balanza se encuentre calibrada. Las balanzas electrnicas por lo general disponen de una calibracin hecha en fbrica, almacenada en la memoria, la cual puede utilizarse si no se dispone de masas de calibracin. Si se requiere realizar la calibracin, se debe disponer de masas calibradas para poder efectuar el procedimiento que indique el fabricante. RUTINAS DE MANTENIMIENTO La balanza se caracteriza por ser un instrumento de alta precisin. Por tal motivo las rutinas de mantenimiento a cargo del operador son mnimas y se encuentran limitadas a las siguientes: Actividades diarias 1. Limpiar el platillo de pesaje, para que este se encuentre libre de polvo o suciedad. La limpieza se efecta con una pieza de tela limpia que puede estar humedecida con agua destilada. Si es necesario retirar alguna mancha, se puede aplicar un detergente suave. Tambin se puede usar un pincel de pelo suave para remover las partculas o el polvo que se hubiesen depositado sobre el platillo de pesaje. 2. Limpiar externa e internamente la cmara de pesaje. Verificar que los vidrios estn libres de polvo. 3. Verificar que los mecanismos de ajuste de la puerta frontal de la cmara de pesaje funcionen adecuadamente. Muy importante: Nunca lubricar una balanza a menos que el fabricante lo indique expresamente. Cualquier sustancia que interfiera con los mecanismos de la balanza retarda su respuesta o alteran definitivamente la medida.

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