TcnicaHistolgica

Esunconjuntodepasosaseguirparalaobtencindepreparadoshistolgicosaptos parasuestudiomedianteelmicroscopioptico.

1Obtencindelmaterial: seefectamediantebiopsia,necropsiaoautopsia.
Biopsia: consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo. Este procedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo cuidado deasepsia,antisepsia,etc.,queseutilizaentodoactoquirrgicomenoro mayor. Necropsia: es el procedimiento en el cual se extrae material de un cadver Autopsia: consiste en el estudio analtico y sistemtico completo. macroscpico y microscpico de los rganos, aparatos y sistemas de un cadver.Serealizaparaestablecercausasdemuerte.

2Fijacin: una vez obtenido el material que se desea estudiar por cualquiera de
los procedimientos descriptos se procede a su fijacin con lo que se evita la destruccino lisiscelular.Esunprocesofsico qumicocomplejoporelcual se mantiene a las estructuras orgnicas en el estado ms parecido al que posean en vida. Losobjetosdelafijacinson: Mantenerlasestructurasenelestadomsparecidoalqueposean invivo. Evitarlalisiscelularylaproliferacinbacteriana Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin detiene los procesos vitales pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de algunos componentes moleculares, por ejemplo la actividad de algunas enzimas

Tiposdefijadores

Fsicos: Porebullicin.Porcongelacin:bajastemperaturasde 190Ca 70C(Nitrgenoliquido.dixidodecarbono)permitenexcelentesfijaciones. Qumicos: seusansolucionessimplescomoalcoholes(etanolometanolque puedenfijarclulasenextendidos)yclformolal10%.Elformolesunasolucin dealdehdofrmicoal40%enaguadestilada.Deestasolucinsetoman10mly se leagregan10 mldeaguadestilada(10%).Estaes la solucin msusada.Se puede agregar a esta acetato de calcio, el que evita la oxidacin del aldehdo frmicoocidofrmico,elqueperjudicalafijacin.Elformolpuededisolverse al10%enbufferdefosfatoenlugardeaguadestiladaparamantenerelpHa7.4.

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 Mezclas fijadoras. se usan diferentes fijadores en una sola mezcla para facilitarlafijacindeciertasestructuras. Ej.:lquidosdeBouin,Zenker.etc. Relacin del volumen del tejido a fijarse con el volumen del fijador : es necesarioquelostrozosafijarseandeunespesornomayorde0.5mm.Parauna buena fijacin es necesario que la relacin volumen del tejido volumen del fijadorseade1/40. Tiempos de fijacin: depende del tejido, su volumen y el fijador usado Cuandoseusaelformollaspiezaspequeasrequierenalgunashorasyyaalas24 horassefijanbien.Lafijacinsepuedecontrolarasimplevistaporelcambiode color del tejido y su consistencia (se endurece) pero una buena fijacin solo se apreciaenelcorteyapreparadoobservandoalmicroscopioptico. Lavado: despus de la fijacin el tejido debe ser convenientemente lavado conaguaobienconotrassustanciasqueeliminanrestosdefijadoresespeciales

3Deshidratacin: secolocalamuestraenalcoholesdeconcentracincrecientepara
eliminarelaguaquecontengayaquelaparafinanoesmiscibleconagua.Seutiliza etanol70%,80%,96%y100%.

4 Aclaracin: son solventes que producen transparencia en los tejidos, adems de

solubilizar laparafina.Entreellosseencuentran. xilol.toluol.acetona,benceno.El msusadoeselXilol.

5Inclusinenparafina: laparafinaesunamezcladehidrocarburossaturadosque
tienendiferentespuntosdefusin.Parafina blanda funde a4448C y laparafina duraa5658C.LAparafinaseponeenestufadecultivoaunosgradosporencima desupuntodefusin.Sesumergelamuestra,sellevaaestufaunosminutosparaque la parafina penetre en los tejidos. Luego se enfra bruscamente colocando el recipienteenhielo.

6 Preparacin del taco: se corta un trozo de parafina que contiene la muestra en

formadepirmidetruncada,demaneratalquelamismaquedesobrelabasemenor. Se pega la base mayora un taquito de madera que servir para sostenerlo en el micrtomo.

7 Corte: se realiza mediante el uso del micrtomo. El micrtomo de congelacin

permitecortareltejidodespusdefijarloporfro,congelacondixidodecarbonoy loendureceparaqueluegopuedasercortado.Esunmtodorpidoyporesoseusa paraeldiagnsticode biopsiasobtenidasenel actoquirrgicoparaque elcirujano procedasegnesteinforme.Selousatambinparavisualizacindelpidosyesmuy tilenelestudiodetejidonerviosoLosmicrtomosparacorteincluidosenparafina son:eldedeslizamiento,enelque lacuchillaes mvil yeltejidoquesecortaest fijosyeltipoMinot,enelqueeltejidosemovilizaylacuchillaestfija.Loscortes puedentenerunespesorde4a4a100 mmo ms,segn lostejidosquesedeseen estudiar.
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8Colocacinsobreportaobjeto: efectuadosloscortessecolocanenaguatibiapara
que se extiendan y luego se recogen con un pincel y se los extienden en el portaobjetosysedejansecarparasuposteriorcoloracin.

9Desparafinizacin: sedebeextraertodolaparafinadeltejidoyaclararlo nuevamente.SeutilizaXilol. 10Hidratacin: sedebehidratareltejidoyaquelamayoradeloscolorantesson

debaseacuosa.Paraellosecolocaelportaobjetoensolucionesdeetanolde concentracionesdecrecientes.Etanol100%,96%,80%,70%yAguadestilada

11Coloracin: esuncompletocomplejofsicoqumicoqueleconfierecoloralos
tejidosdurantetiemposprolongados.Lasmolculasdecolorantestienenungrupo queeselqueleconfiereelcolor:cromforoyotroquelofijaauxocromo.Los colorantessonsalesperoselosclasificaen: bsicos: endondelamolculadesalquecoloreaeslabasecomopor ejemploelazuldetoluidina,azuldemetileno,hematoxilina cidos: dondelamolculadesalquecoloreaeselcidocomoporejemplola eosina neutros: dondelasdospartesdelasolucinsalinaproporcionancolor,esun ejemplodeestaeleosinatodeazuldemetileno. Tiposdecoloracin: Comunes: hematoxilinayeosina,azuldemetileno. EspecificasmtododeRegaud.ImpregnacinargnticadeCajaloGolgi Vitales: lntravitales: La coloracin intravital consiste en inyectar una sustancia inocuaparaelanimalperoqueesfagocitada,porciertasclulas,comopor ejemplolosmacrfagosofagocitos. Supravitales:Lacoloracinsupravitaleslaquecoloreaalostejidosvivos peroseparadosdelorganismo.Ejemplo:verdejanoparalasmitocondrias. Metacromticas:Lacoloracinmetacromticaesaquellaqueconfierealtejidoun colordiferentealdelcoloranteutilizado.Porejemploalcolorear grnulosdelasclulascebadasdecolorrojo.

12 Deshidratacin: para preparar los preparados por tiempo prolongado. Se

sumergeelpreparadoensolucionesdeetanolde graduacincrecientes(70%,80%, 96%,100%).

13Aclaracin: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina adhesiva utilizadaparapegarelcubreobjeto. 14 Colocacin de cubreobjeto: se cubre el corte con un delgado vidrio (el
cubreobjeto) que se adhiere con resina (blsamo de Canad) y permite su uso prolongado.

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Ar tificiosdeTcnicas:
Son todas las alteraciones que se producen en los preparados histolgicos por defectosofallasenunaomsdelasetapasdelatcnica. Defectos de fijacin, deshidratacin, inclusin, pueden causar desgarros y retracciones. Si la acidez del formol no fue neutralizada, pueden aparecer grnulos coloreadosporinteraccindelcidofrmicoconlahemoglobina. Duranteelcortepuedenaparecerdesgarrospormelladurasenlacuchilla. Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden aparecer pliegues o arrugas. Defectos en la coloracin son inherentes a la calidad y preparacin de los colorantesascomoinsuficientecoloracin. Pasosdelatcnicahistolgica.

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Actividades 1. Enumerelospasosdelatcnicahistolgica. 2. Asucriterioculeselpasoclavedelamisma?porqu? 3. Cules son los colorantes ms usados? Qu estructuras celulares tien cada uno? 4. Porqudebedesparafinarseelpreparadoantesdecolorearlo? 5. Culoculespiensaustedquesonlosartificiosdetcnicasmsfrecuentesde encontrar? 6. Estatcnicahistolgicaseusaparatejidosvivosomuertos?

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