UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE QUMICA DEPARTAMENTO DE BIOLOGA MICROBIOLOGA EXPERIMENTAL 1515 GRUPO 10.

SEMESTRE 2013/1

EQUIPO: NOMBRE: NOMBRE:

#7 Merino Gonzlez Arturo Sols Vzquez Armando

PRCTICA No.

#7

NOMBRE DE LA PRCTICA:

Tcnicas de cuantificacin de microorganismos

25, 27/Septiembre/2012 y 02/Octubre/2012 09/Septiembre/2012

FECHA(S) DE REALIZACIN: FECHA DEL REPORTE:

CALIFICACIN DEL REPORTE: COMENTARIOS GENERALES:

REVISADO POR:

OBJETIVOS.
Explicar el fundamento de las tcnicas ms utilizadas en el recuento microbiano. Establecer la cantidad de microorganismos en una muestra mediante la aplicacin de las tcnicas ms adecuadas. Relacionar los resultados obtenidos y explicar las causas que determinan la variacin de stos.

RESULTADOS.
(Primera sesin) Para esta sesin se indico que se realizaran tinciones Gram para la muestra que se nos entrego que fue Saccharomyces cerevisiae. Esta muestra se ocupara ms adelante en la prueba del portaobjetos (5 campos). La imagen obtenida de la tincin fue la siguiente.
Microscopio: CZ - 03 Fecha: 25/Septiembre/2012 Muestra: Saccharomyces cerevisiae Aumento total: 1000 veces. Tincin: tincin Gram. Descripcin: En esta tincin se puede observar la forma ovalada que es caracterstica de las levaduras, estas presentan un color violeta, algunas de estas clulas presentan una coloracin ms tenue que otras. En esta tincin no se pueden apreciar muchas levaduras, esto porque la muestra analizada tiene una gran presencia de celulosa entre otros varios factores.

En esta misma sesin se dieron las indicaciones de las metodologas que se llevaron a cabo para las diferentes tcnicas de conteo de microorganismos; a continuacin se dar una breve explicacin sobre lo que se realizo en esta primera sesin. DILUCIONES SERIADAS. Tcnica que consiste en obtener una suspensin de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. Tras incubar se podrn obtener colonias aisladas. El recuento de estas colonias permitir conocer el nmero de clulas existentes en el cultivo original. Para esta tcnica se dio una muestra, la cual se deposito en un recipiente adecuado, seguidamente se tomo una alcuota de 1mL y se deposito en un tubo de ensaye en cual anteriormente contena 9mL de agar, despus de esta dilucin se hicieron 5 ms, las cuales contenan 1mL de la dilucin anterior; en el

siguiente esquema se explicarn las diluciones hechas para las posteriores determinaciones.

Despus estas diluciones se ocuparon para hacer otras determinaciones como son la siembra por vertido en placa, recuento en placa por extensin superficial, etc.

NEFELOMETRIA. La cual consiste en una suspensin microbiana, la cantidad de microorganismos est directamente relacionada con la turbiedad o densidad ptica de la misma, e inversamente relacionada con la cantidad de luz que pasa por la misma. A mayor turbidez mayor nmero de bacterias. Para hacer la determinacin del crecimiento por Nefelometra se tomaron en cuenta los siguientes aspectos: Se tomo que el valor mximo para la escala de Mc. Farland fueran de 20 unidades. Se tomo que el valor mximo de UFC fuera de 6000 unidades. Los resultados experimentales fueron obtenidos extrapolando en la grfica realizada. La grfica fue hecha como se indic en papel milimtrico y fue anexada en el reporte. Las concentraciones problemas se calcularon con la escala Mc Farland fueron:
Escala Mc. Farland 6.4 2.5 1.2 0.8 0.9 Clulas / mL

PORTAOBJETOS (5 CAMPOS).

Para la realizacin de este mtodo se dibujo un rectngulo de 1cm(ancho) x 2cm(largo) en el cual se depositaron 10L, este volumen se extendi a lo largo del rectngulo, se dejo secar y se fijo con la flama del mechero. Despus se procedi a observar con el microscopio y se contabilizaron las colonias que se ubicaron en cada una de las esquinas y en el centro del rectngulo.

Los resultados obtenidos en este mtodo fueron:

Parte del rectngulo Zona superior izquierda Zona superior derecha Zona inferior izquierda Zona inferior derecha Zona central Promedio Microorganismos contados 18 7 12 10 7 18.8

Zona superior izquierda: 18 Zona superior derecha: 7 Zona inferior izquierda: 12 Zona inferior derecha: 10 Zona central: 7

El clculo realizado para obtener los microorganismos totales fue:

PETROFF-HAUSER. TOTALES (NEUBAUER). El fundamento es que se pipetea una suspensin de clulas en el portaobjetos, en el borde del cubreobjetos, rellenando la cmara de recuento por capilaridad. Las clulas se sedimentan y se puede empezar el recuento. Tabla 1.

Frmula para estimar los microorganismos totales:

( ( ) ( )( ) )

Los microorganismos reportados por cada cuadro grande como se indica con un tringulo fueron:
Parte de la cuadrcula Esquina superior izquierda Esquina superior derecha Esquina inferior izquierda Esquina inferior derecha Parte central Promedio Microorganismos contados 92 91 89 96 90 91.6

En este parte del conteo se utiliz la dilucin de 1x10-3 mL y con base a este dato y a la formula ya indicada se procedi a hacer el clculo.
( ) ( ) ( ( ) )

BIBLIOGRAFA
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf