OBTENCIN DE ETANOL A PARTIR DE UN PROCESO BIOTECNOLGICO UTILIZANDO COMO MEDIO EL LACTOSUERO Quiones C.F.; Foronda J.A.; Varn H.A.

; Teatino D. Universidad Del Tolima, Facultad Agronmica Programa Ingeniera Agroindustrial Ibagu, Colombia felipeqpadi@live.com j.aforonda@hotmail.com haroldo20105_@hotmail.com dfta_gvp@hotmail.com

RESUMEN: El trabajo fue enfocado al proceso y produccin de etanol (OH) por medio de fermentacin del lactosuero o suero dulce de la leche cuantificando los azucares reductores presentes en el suero en cada etapa. Primero se determin la extraccin del lactosuero mediante la adicin de renina a la leche, con el fin de garantizar el control sobre todo el proceso. teniendo el lacto suero a las condiciones adecuadas de refrigeracin se determin la cantidad de azcares reductores por LA TCNICA DE MILLER (DNS)1 determinacin espectrofotomtrica a 540nm; para la siguiente parte se hidroliza la lactosa con la enzima Bgalactocidasa a 32c por 18 a 24 horas en proporcin 4,5ml por litro de lactosuero, cuantificamos la cantidad de azucares reductores obtenidos por la hidrolisis, seguido de la inmovilizacin de la enzima con alta temperatura a corto tiempo (85 c por 5 min); teniendo en cuenta la cantidad de azucares reductores se determin la cantidad de biomasa (s. cerevisiae) necesaria para la fermentacin de dicho medio ( 1gr/100ml por 24 horas de 24 a 30c); por ltimo se destila un alcuota en el roto evaporador a 75c teniendo como rendimiento el 11%. Palabras clave: DNS, suero o lactosuero, azucares reductores. ABSTRACT: The study was focused on the process and production of ethanol (OH) through fermentation of whey or sweet whey from milk quantifying reducing sugars present in the serum at each stage. First extraction was determined by adding whey rennet milk in order to ensure control over the entire process. taking the whey to the appropriate conditions of cooling determined the amount of reducing sugars by the technique of MILLER (DNS) spectrophotometric determination at 540nm, for the next part is hydrolyzed lactose with enzyme B-galactocidasa at 32 C for 1824 hours proportion of 4.5 ml per liter whey amount was quantified reducing sugars obtained by hydrolysis, followed by immobilization of the enzyme with high temperature short time (85 C for 5 min), taking into account the amount of reducing sugars was determined by the amount of biomass (S. cerevisiae) necessary for

the fermentation of the medium (1gr/100ml for 24 hours at 24 to 30 C) and finally distilled one aliquot in the roto evaporator at 75 C having as output the 11 %. Keywords: DNS, whey or whey, reducing sugars.

1 INTRODUCCIN El lactosuero de quesera es un subproducto lquido obtenido despus de la precipitacin de la casena durante la elaboracin del queso. Contiene principalmente lactosa, protenas como sustancias de importante valor nutritivo, minerales, vitaminas y grasa. La composicin y tipo de lactosuero vara considerablemente dependiendo del tipo de leche, tipo de queso elaborado y el proceso de tecnologa empleado. La lactosa es el principal componente nutritivo (4,5 % p-v), protena (0,8% p/v), y lpidos (0,5%). Si en la coagulacin de la leche se utiliza enzimas el lactosuero se denomina dulce, y si se reemplaza la enzima por cidos orgnicos se denomina cido. Para la industria alimentaria, el lactosuero constituye una fuente econmica de protenas que otorga mltiples propiedades en una amplia gama de alimentos. Los productos del suero, incluyendo la lactosa, mejoran la textura, realzan el sabor y color, emulsifican y estabilizan, mejoran las propiedades de flujo y muestran muchas otras propiedades funcionales que aumentan la calidad de los productos alimenticios. Basados en el valor nutricional del lactosuero, un nmero de usos comerciales se han obtenido como etanol, cidos orgnicos, bebidas no alcohlicas, bebidas fermentadas, biomasa, concentrados, aislados e hidrolizados de protena, pelculas comestibles, medio de soporte para encapsular sustancias, produccin de xantana, enzimas, separacin de la lactosa para fines endulzantes en alimentos entre otras aplicaciones.2 El suero de leche a partir de cido de casena no es adecuado para ser procesado a la lactosa en polvo debido a la presencia de cido lctico e iones de

sulfatos que interfieren con la cristalizacin proceso. Sin embargo, aunque el suero de leche es slo 4 -5% de lactosa, esto es todava suficiente para causar un impacto ambiental significativo. En Nueva Zelanda este suero se procesa para producir etanol, que se utiliza en productos farmacuticos, perfumes y tintes, as como bebidas.2.3.4 2 DIAGRAMA

4,2 Hidrolisis de la lactosa La enzima B-galactocidasa (Novozymes Lactozym) 18 a 24 hora a con temperatura controlada de 30C en la incubadora a un PH de 6,5, garantizndose la hidrolisis con rendimientos mayores al 95% para el lactosuero con una relacin de 4,5 ml de enzima por cada litro de suero. Despus de terminada la hidrolisis se neutraliza la enzima ya quE puede contaminar el suero, esto se hace por medio de un choque trmico.

3 MATERIALES Lactosuero a 4c en almacenamiento, lactozym pure2600l (B-galactocidasa), cultivo s. cereviceae, DNS cidodinitrosaliclico, incubadora, colormetro roto evaporador, Beaker, pipeta, tubos de ensayo, frasco hermtico. 4 METODOLOGA 4,1Extraccin y almacenamiento

Este paso no es indispensable ya que se puede conseguir comercial mente en la industria lctica, con un proveedor que garantice las condiciones deseadas para el proceso, para la prueba se realiz el suero en el laboratorio para poder tener control. Se hidroliza la casena por medio de la enzima renina a 60 C con rendimientos de 750 mililitros de suero por cada litro de leche entera. Realiza anlisis de azucares reductores por medio de la prueba DNS por triplicado en determinacin espectrofotomtrica a 540nm, Para le almacenamiento se en frascos de vidrio a una temperatura de 4C para evitar la contaminacin por microorganismos.

Lab.incuber power:110VAC, 60 HZ, 3,2 A.

FIGURA 1 Written by Ron Hamilton (AnchorProducts, Tirau) with editing and summary by Heather Wansbrough.

4,3 Determinacin de azucares reductores Se cuantific por medio de la prueba de azucares reductores (DNS) por triplicado. Utilizando acidodinitrosalicilico al 1% (DNS). Para el procedimiento primero se prepar la curva de calibracin tabla 1. Preparar la muestra en tobos de ensayo dos blancos con H2O destilada y tres pruebas para el suero, adicin del reactivo 0,5 ml de DNS, agitar los tubos a vortex, llevar a ebullicin durante 5 min, enfriar a temperatura ambiente 5 min agregar a cada tubo 5 ml de H2O destilada y agitar en vortex, dejar en reposo 15 min y leer a 540 nm, y por ultimo interpolar en la curva absorbancia vs concentracin. 4,4 Fermentacin y destilacion Se adiciono 1gr por litro de suero de levadura saccharomyces cerevisiae y se dej en fermentacin por 3 das con agitacin cada hora por 30 segundos a 30C, Posterior mente se realiz una destilacion en el roto evaporador a temperatura controlada de 75C y presin de 15 PSIA en una alcuota de 100mililitros y posterior mente se hall el porcentaje de etanol extrado. Debido a la exposicin del aire con la fermentacin se determin el 10 % de prdidas de etanol por evaporacin, GALACTOSE + GLUCOSE 4 ETHANOL + 4CO2 TABLA 1 Curva de calibracin DNS
n dilucin g-glucosa mil stock h2o destilada gr/ l de glucosa blanco 0 0,5 0 1 0,025 0,47 0,2 2 0,0 5 0,4 5 0,4 3 0,07 0,42 0,6 4 0, 1 0, 4 0, 8 5 0,12 0,37 1 6 0,15 0,35 1,2

Y = AX B Punto de Corte B y pendiente de la recta A. b= a= 0,0039 0,4415 Roto evaporador. 5 RESULTADOS Y DISCUSIN Determinacin de azucare reductores

Curva de calibracin DNS para azucares reductores; concentracin absorbancia p.p.m=gr/l nm x y Los resultados de la hidrolisis de la lactosa se pueden observar en la tabla 2 para antes de la hidrolisis condiciones normales del suero que llega a la planta y en la tabla 3 se presenta despus del proceso de hidrolisis. La cual muestra los resultados de la prueba

de DNS para azucares reductores aplicando el mtodo por triplicado tomando dos blancos. Tabla 2 Antes de la hidrolisis PRUEBA 1blanco 2blanco 3 4 5 longitud onda Y 0,033 0,029 2,879 2,986 3,098 de X=(Y+B)/A 0,08357871 0,07451869 6,52978482 6,77214043 7,02582106

Se estima que los resultados obtenidos son ms bajos de los obtenidos por mtodos ms eficientes, debido a la exposicin en la fermentacin, falta de agitacin en el proceso, errores de personal, y cantidad de factores que afectan los resultados como tambin los rendimientos de la prueba Los resultados obtenidos son buenos con respecto a la cantidad de azucares reductores presentes en la solucin hidrolizada.

RECOMENTDACIONES El suero presento una concentracin antes de la hidrolisis de 6,5 a 7 gr azucares reductores/ l de suero. Tabla 3 Despus de la hidrolisis prueb a longitu d de onda Y 3,717 5 4 5 3,544 3,666 factor de diluci n X=(Y+B)/ A x * factor de dilucin 42,139297 8 40,180068 41,561721 4 2. Para el proceso despus de la hidrolisis las muestras se tuvieron que diluir 5 veces 1:5 v/v ya que su concentracin era muy alta para la lectura. La concentracin despus de la hidrolisis se encuentra dentro de 40 a 42 gr de azucares reductores / litro de suero. Para la concentracin dada se tom la decisin de inocular el suero con 1 gr por litro. Para la fermentacin de 100ml de suero hidrolizado en el roto evaporador a 15psia se obtuvo un rendimiento del 11% de etanol. Optimizando el proceso se puede conseguir rendimientos mayores al 15 % como lo registran en pases como Australia y new zealand en el cual ya es industria debido a que son grandes productores de alimentos lcteos. CONCLUSIONES El proceso de obtencin de etanol a partir del lactosuero es un proceso de aprovechamiento de los recursos para la industria lctica Creacin de industria tanto como empresa. Analizar el producto, esto con el fin de saber adems de etanol que otro compuesto se encuentra en el destilado. Mirar la viabilidad del proyecto en cuanto a la oferta que se tiene del suero. Plantear como una nueva industria colombiana o complemento de la existente.

8,4278595 7 8,0360135 9 8,3123442 8

REFERENCIAS 1. determinacin de azcares reductores por latcnica de miller (dns).bibin l. m. e., rojas r. m. a. universidad de san carlos de guatemalacentro universitario del surescuintla informe finalseminario i evaluacin de la fermentacin demezclas de suero lctico y melazapara la obtencin de etanol tcnico en procesos agroindustriales selvyn ren cu gonzlez, 200740209 escuintla, noviembre de 2009 optimizacin de rendimientos de quesera lactosuero: importancia en la industria de alimentos whey: importance in the food industry ricardo adolfo parra huertas1 levin, richard i. y rubin, david s, (2004). estadstica para administracin yeconoma, pearson educacin, 7ma edicin, mxico. modler, h.w. (2000). milk processing. (food proteins). nakai s.y modler hw. newyork. montgomery c. douglas, (2004) diseo y anlisis de experimento. editorial limusawily, s.a. 2da. edicin. mxico n. potter, norman, (1973). la ciencia de los alimentos. harla mexico. 1ra. edicin.mxico.. quintero r. rodolfo, (1974). ingeniera bioqumica. editorial alhambra mexicana,s.a. 1ra. edicin. mxico

3. 4.

5.

6.

7. 8.