UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS LABORATORIOS DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ. RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS.

1 OBJETIVO: alimentos. 2 ALCANCE: alimentos. Determinar la presencia de hongos y levaduras en diferentes muestras de

Abarca la determinacin de hongos y levaduras en diferentes muestras de

3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer cumplir el procedimiento de anlisis es el docente del rea de microbiologa de alimentos, el cual debe tener una formacin de microbilogo o bacterilogo con una experiencia de 2 aos como mnimo. 4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA: 4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de tcnicas de anlisis para el control de calidad microbiolgico para consumo humano. Divisin de laboratorios de alimentos y bebidas alcohlicas INVIMA 2001. 4.2. LUNA, G. Manual Operativo de anlisis microbiolgico para alimentos universidad de Pamplona 1998. 5. CONTENIDO: 5.1. FUNDAMENTO: Este mtodo consiste en determinar y hacer el recuento de hongos y levaduras los cuales se ponen en evidencia en condiciones desfavorables para el crecimiento bacteriano como ph bajo, alto contenido de sales y azucares, bajo contenido de humedad y baja temperatura de almacenamiento. 5.2. DEFINICIONES: 5.2.1 Agar OGY(Agar oxitetraciclina glucosa extracto de levadura) medio que permite el crecimiento de mohos y levaduras y no de bacterias por la presencia de un antibitico como la oxitetraciclina. 5.2.2. Agar extracto de levadura glucosa cloranfenicol: medio que esta constituido de un azcar, levaduras y un antibitico el cual inhibe el crecimiento de bacterias y permite el crecimiento de hongos y levaduras. 5.2.3. UFC: Unidades formadoras de colonias. 5.3. CONDICIONES GENERALES: Los hongos son organismos eucariticos los cuales pueden ser unicelulares o pluricelulares. Las levaduras son unicelulares y crecen de forma sencilla en la naturaleza con algunas excepciones, los mohos son pluricelulares que forman hifas y que se pueden observar macroscpicamente de aspecto algodonoso y velloso sobre la superficie que contaminan. Los mohos y las levaduras tienen caractersticas similares a las bacterias cuando contaminan los alimentos, tales como la capacidad de alteracin y la produccin de metabolitos txicos. 5.4. 5.4.1. 5.4.2. 5.4.3. 5.4.4. 5.4.5. 5.4.6 5.4.7 5.4.8. MATERIALES Y REACTIVOS: Cajas de petri estriles Beaker estril Erlenmeyer estril Agar OGY Agar extracto de levadura glucosa cloranfenicol. Solucin de oxitetraciclina al 0.1% Solucin de gentamcina al 0.05% Pipetas

5.5. 5.5.1. 5.5.2. 5.5.3. 5.5.4.

EQUIPOS: Incubadoras Contador de colonias Incubadora a 35C +/- 2C. Estufa PROCEDIMIENTO: RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS Mezclar muy bien la muestra ( liquida) para asegurar su homogenizacin. Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra. Abrir aspticamente ( con el mechero en medio) y adecuadamente la muestra. Si es slida tomar porciones de diferentes sitios de la muestra. Pesar 11 gramos de la muestra en balanza analtica si es slida, sobre un papel graff estril o medir 11 mililitros si es liquida en recipiente estril. Macerar, picar o triturar. Aadir al recipiente de dilucin que contiene 99 ml de agua peptonada para obtener la dilucin de 10-1. Mezclar al agitar vigorosamente el recipiente para homogenizar. Preparar la dilucin 10-2 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-1 a un tubo de ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente. Preparar la dilucin 10-3 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-2 a un tubo de ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente. Transferir por duplicado alcuotas de 1 ml de cada una de las diluciones consecutivas en cajas de petri estriles. Verter en las cajas de petri, 15 ml de agar OGY fundido y mantenido a 45C Mezclar el inoculo con el medio de cultivo fundido . No debe transcurrir mas de 20 minutos entre la realizacin de las diluciones y el vertido del medio. La manera mas indicada de mezclar el inoculo con el medio es la siguiente: Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces Rotar la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj Mover la caja 5 veces haciendo Angulo recto sobre el movimiento Rotar la caja cinco veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.

5.6. 5.6.1. 5.6.1.1. 5.6.1.2. 5.6.1.3. 5.6.1.4. 5.6.1.5. 5.6.1.6. 5.6.1.7. 5.6.1.8. 5.6.1.9. 5.6.1.10. 5.6.1.11. 5.6.1.12. 5.6.1.13.

5.6.1.14. Hacer control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja que contenga Agar OGY. 5.6.1.15. Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1 % incubando una caja que contenga 1 ml de agua peptonada y agar OGY . 5.6.1.16. Una vez solidificado el medio de cultivo, invertir las placas e incubarlas a 22C +/- 2C ( temperatura ambiente) durante 5 -7 horas. 5.7. CALCULO E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS: Seleccionar las dos cajas correspondientes a la misma dilucin que presenten entre 20 y 100 colonias. Contar todas las colonias de cada caja. Hallar la media aritmtica de los dos valores y multiplicarlos por el factor de dilucin. Si las cajas de las diluciones consecutivas presentan recuentos menores de 20 y mayores de 100 colonias, contar las cuatro cajas, calcular el recuento para cada una de las diluciones y sacar el promedio entre las dos. Se reporta como unidades formadoras de colonias ( ufc) /g o ml. 5.8 ANEXOS: N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificacin y aprobacin.