Prctica 1 OBSERVACIN DE LEVADURAS AL MICROSCOPIO FUNDAMENTO Las levaduras son seres vivos unicelulares que se reproducen asexualmente mediante

un proceso conocido como gemacin que consiste en la formacin de brotes o yemas que luego se desprenden de la clula original para formar un organismo independiente. Es posible observar las levaduras al microscopio y en algunos casos detectar los brotes que estn en proceso de formacin. OBJETIVO Observar la morfologa de levaduras in vivo METODOLOGA Colocar en un vaso de precipitado de 25 mL, 500 mg, un gramo de sacarosa y aadir 3 mL de agua destilada a 45 C. Colocar la muestra sobre el portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos y observar al microscopio. Posteriormente dejar reposar 15 minutos y volver a observar bajo el microscopio. NOTA: En caso de no poder observar claramente se debe probar alternativas para mejorar el preparado, por ejemplo, variando la cantidad de levadura que se coloca en la muestra. OBSERVACIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

Prctica 2 FERMENTACION LCTICA FUNDAMENTO Se estima que los alimentos fermentados contribuyen aproximadamente con la tercera parte de la dieta mundial. El proceso de fermentacin, en su aceptacin estricta, se refiere a la obtencin de energa en ausencia de oxgeno. Pasteur denomino a la fermentacin como la vie sans lair o la vida sin aire. En otras palabras, es el proceso de transformacin de sustancias orgnicas por los microorganismos (bacterias, levaduras y otros hongos en condiciones anarobicas o por complejos enzimticos de origen animal, vegetal o microbiano. La leche es un alimento suceptible a descomponerse. Su composicin resulta especialmente apta para el desarrollo de microorganismos, por lo que es importante tener un conocimiento bsico de la microbiologa de la leche cuando se plane introducir alguna mejora en su procesamiento. La fermentacin lctica se produce en muchas bacterias (bacterias lcticas), tambin en algunos protozoos y en el musculo esqueltico humano. EL producto de la reaccin es el cido lctico responsable de la obtencin de productos lcteos acidificados como yogurt, quejos, cuajada, crema cida, etc. Piruvato + NADH + H -----------------> cido lctico + NAD+ El cido lctico posee excelentes propiedades conservantes de los alimentos. En las clulas musculares humanas, la acumulacin de cido lctico produce dolorosos calambres. OBJETIVO Establecer las condiciones para que una fermentacin se realice de forma ptima METODOLOGA Pasteurizar la leche si se trabaja con leche no comercial, calentar la leche hasta 70 C al bao Mara (nunca directamente) y mantener a esta temperatura de 1 a 3 minutos. Enfriar rpidamente introduciendo el recipiente de la leche en agua fra. Bajar la temperatura hasta los 30 C y diluir el fermento en la mnima cantidad posible de leche tibia. Del fermento se debe aadir una cucharita por cada litro de leche. El fermento se debe aadir mezclando suavemente. Dejar reposar la mezcla en un sitio tibio (nunca inferior a 20 C ni superior a 35 C) durante 8 a 24 hrs segn la temperatura ambiente. Es conveniente cubrir con una tela o trapo para permitir que la leche se airee pero evitar que se ensucie. La cuajada esta lista 2

para desuerar cuando al introducir el cuchillo y levantar la punta hacia arriba se produce una grieta en la superficie. Esto significara que la leche se ha coagulado o sea solidificado y por lo tanto la cuajada est a punto. Humedecer con agua la gasa de quesera y forrar con ella el colador. Sacar con cuidado la cuajada y depositarla sobre la tela. Si fuera necesario, tomar la tela por sus extremos y levantarla ligeramente para destaponar la parte de la gasa que est en contacto con la cuajada y dejar salir el suero. El tiempo de desuerado es muy variable y depende de la consistencia buscada y la temperatura ambiente. Llevar entre 4 y 8 horas y al enfriarse el queso se endurecer. Cuando el queso tenga la consistencia deseada es posible aadirle condimentos (sal pimienta, ajo, organo, finas hierbas, etc.) y luego se envasa en un recipiente hermtico para colocarlo en la heladrea donde se conservar hasta 10 das. OBSERVACIN __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

Prctica 3 EXTRACCIN DE ADN VEGETAL FUNDAMENTO La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados haca las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Las clulas comienzan a lisarse por la adicin de un detergente, vaciando su contenido molecular en una disolucin tampn, el tampn contiene ADN y diversos restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud se fraccionan en cadenas ms pequeas y separadas de l por accin del detergente el alcohol isoamlico o isopropilco se utilizan para extraer el ADN de la mezcla tampn y detergente. El detergente disuelve los lpidos (molculas grasas) y las protenas de membrana celular, rompiendo las uniones que mantienen la integridad de la misma. De sta forma se libera el contenido celular, permitiendo que los mismos estn separados del ADN por filtracin, liberando el ADN. La sal permite que el ADN precipite en una solucin fra de alcohol y que las cadenas de ADN no se corten. OBJETIVOS Extraer ADN de un tejido vegetal Comprender el fundamento de la extraccin de ADN Entender que con sustancias comunes se pueden estudiar fenmenos y molculas biolgicas. METODOLOGA Preparar la solucin tampn con los siguientes reactivos y mantener en un bao de hielo: 120 mL de agua destilada 1.5 g de cloruro de sodio 5 g de bicarbonato sdico 5 mL de detergente lquido Cortar en trocitos la muestra de la que se va obtener el ADN (pltano, cebolla, ajo, tomates, etc.) Colocar en la licuadora la muestra en 250 mL de agua destilada y licuar durante 15 segundos. Con este procedimiento se espera la ruptura de las clulas para que queden expuestas a la accin del detergente. Mezclar en un vaso de precipitado de 100 mL, 5 mL del triturado celular con 10 mL del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. 4

Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular por filtracin o centrifugar a baja velocidad por 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante. Retirar 5 mL del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 mL de alcohol isoamlico o isopropilo enfriado a 0 C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, el cual deber estar colocado de manera inclinada. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. Se introduce la punta de un asa de platino estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover el asa de platino hacia adelante y hacia atrs y poco a poco se enrollaran los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar el asa de platino atravesando la capa del alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. OBSERVACIN __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

Prctica 4 PRODUCCIN DE HIDROMIEL FUNDAMENTO La hidromiel, es una bebida alcohlica que se le reconoce como la ms antigua consumida por el hombre. Pensemos en un poco de miel abandonada a s misma, la que se diluye en forma casual (una lluvia por ejemplo) y que por efecto de las levaduras que estn presentes en ella (levaduras que traen las abejas junto con el poln) comienza el fenmeno de fermentacin (transformacin de los hidratos de carbono azcares de la miel en alcohol etlico y dixido de carbono). Como consecuencia de ella se forma una solucin hidro-alcohlica, de sabor agradable y que a lo largo del tiempo se la ha sabido apreciar en distintas partes del mundo. OBJETIVO Observar y comprender el desarrollo de la fermentacin alcohlica de importancia en la produccin de licor. METODOLOGA Mezclar 3 kg de miel con 6 litros de agua y mezclar perfectamente. Observar que no haya restos de abejas en la miel. Si las hay se retiran con cuidado con la ayuda de un colador. Colocar la mezcla en la placa de calentamiento y cuando alcance la temperatura de ebullicin se mantiene por 15 minutos (sin dejar de remover), se retira con el colador la espuma que se forma (son protenas desnaturalizadas que adoptan el aspecto de merengue. En un vaso de precipitado calentar 100 mL de agua destilada a 40 C, retirar del calentamiento y disolver 11 g de levadura para activarla. Pasados 15 minutos, agregamos el resto del agua (4L) para enfriar la mezcla lo ms rpido posible a una temperatura cercana a los 20 C. A esta temperatura debemos agregar 20 gr de cido tartrico disuelto en la mnima cantidad de agua, 10 gramos de fosfato diamnico y las levaduras activadas en agua. Depositar en el recipiente de 20 L permitiendo la formacin de espuma, para airear el cocimiento. Tapar el recipiente con un tapn horadado, mediante el cual pase una manguera la cual deber sumergirse dentreo del fermentado en un extremo y en el extremo externo en matraz con agua destilada. Con alcohol etlico esterilizar el extremo externo y mediante una perilla succionar 50 mL del fermento y medirle los parmetros fisicoqumicos. Cada vez que se tome muestra deber esterilizarse el extremo externo antes de sumergirlo de nuevo en agua destilada. La fermentacin puede llevar hasta 15 das, sin embargo dependiendo de los resultados de las mediciones de los parmetros fisicoqumicos, a partir del da 8 puede deternerse para la obtencin de vino dulce, semidulce o seco. Activar la bentonita 24 horas antes de detener la fermentacin. 6

Para clarificar el vino, se activa la bentonita (en 100 mL de agua a 40 C se disuelven 20 g). Para detener la fermentacin se hidratn 10 g de sorbato de potasio en 10 mL de agua purificada y se agregan al fermento en un cuba con hielo y agua. El recipiente debe estar sumergido por 2 horas, se trasiega el fermento por decantacin con ayuda de la manguera. Una vez trasegado se agrega la bentonita activada y se deja reposar por lo menos 3 das, el vino clarificado se trasiega directamente en las botellas para su aejamiento. Medir los parmetros fisicoqumicos y comparar. El aejamiento se recomienda en lugares oscuros hmedo, por lo menos durante 3 meses para obtener un vino con caractersticas enolgicas. PARAMETROS FISICOQUMICOS N. de la prctica Tipo de levadura Fisicoqumicos iniciales Alcohol Brix

Densidad

pH

OBSERVACIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________________________________________________________

Prctica 5 MUTACIN GENTICA FUNDAMENTO La mutacin gentica es una alteracin natural o inducida en la secuencia del ADN, que puede o no modificar alguna funcin del organismo. Una mutacin es heredable cuando se presenta en clulas reproductivas (gametos). Producir una mutacin gentica inducida por una condicin ambiental externa. Usaremos como modelo plantas de lechuga expuestas a una condicin salina extrema. OBJETIVO Familiarizar al estudiante con un mtodo bsico de manipulacin gentica. METODOLOGA Preparar una solucin de cloruro de sodio al 4%, colocar un disco de papel filtro en la caja petri y adicionarle una solucin de cloruro de sodio hasta que se humedezca, colocar 20 semillas separadas unas de otras, tapar la caja de petri, mantener las cajas a temperatura ambiente y observar la geminacin de las semillas cada tercer das y si el papel filtro est seco humedecer de nuevo. Repetir esta accin durante una semana. OBSERVACIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

Prctica N. 6 BIODIESEL A PARTIR DE ACEITE FUNDAMENTO El biodisel es un biocombustible que se fabrica a partir de cualquier grasa animal o aceites vegetales, que pueden ser ya usados o sin usar. Se suele utilizar girasol,canola, soja o jatropha, los cules, en algunos casos, son cultivados exclusivamente para producirlo. Se puede usar puro o mezclado con gasoil en cualquier proporcin en motores disel. El principal productor de biodisel en el mundo es Alemania, que concentra el 63% de la produccin. Le sigue Francia con el 17%, Estados Unidos con el 10%, Italia con el 7% y Austria con el 3%. El sistema ms habitual es la transformacin de estos aceites a travs de un proceso de transesterificacin. De este modo, a partir de alcohol metlico, hidrxido sdico (soda custica) y aceite vegetal se obtiene un ster que se puede utilizar directamente en un motor diesel sin modificar, obtenindose glicerina como subproducto. La glicerina puede utilizarse para otras aplicaciones. OBJETIVO Aprender la metodologa general para la obtencin de biodiesel a partir de aceite vegetal de cocina. METODOLOGA Tomar 1 litro de aceite vegetal y verterlo en un vaso de precipitado de 2000 mL (Si la temperatura es inferior a 21C o si el aceite vegetal se encentra en estado slido o espeso, ser necesario calentar los reactivos antes de mezclarlos.) Mezclar 3.5 g de NaOH y 200 mL de metanol (Se debe mezclar hasta que la completa disolucin del hidrxido de sodio. Anadir el metxido en aceite vegetal y mezclar vigorosamente aproximadamente durante una hora, manteniendo a una temperatura constante entre 45-50 C Dejar reposar la muestra durante 12 horas Transcurrido el tiempo se separan las fases con ayuda de un embudo de decantacin. Dejando que la glicerina, que aparece como capa oscura y espesa en la parte inferior del recipiente, se deposite en el fondo durante una semana. Pasado este tiempo se habr evaporado el resto de metanol y se obtendr un jabn de gliceria. Posteriormente se le realizan lavados con agua al biodisel para eliminar cualquier resto de glicerina u otras impurezas. Se mide el pH y se repite el proceso hasta que el pH sea de 6-7. Al final se ha de calentar lentamente para evaporar restos de agua. 9

OBSERVACIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

10