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CROMATOGRAFIA Cromatografia uma tcnica na qual os componentes de uma mistura so separados com base nas diferenas de velocidade nas

s quais so transportados atravs de uma fase fixa estacionria por uma fase mvel lquida ou gasosa. A cromatografia planar e a cromatografia em coluna so baseadas nos mesmos tipos de equilbrios. A cromatografia gasosa e a cromatografia com fluido supercrtico requerem o uso de uma coluna. Somente as fases mveis lquidas podem ser empregadas em superfcies planas. Um cromatograma um grfico de alguma funo da concentrao do soluto versus o tempo de eluio ou volume de eluio. A constante de distribuio para um soluto em cromatografia igual razo da sua concentrao na fase estacionria e sua concentrao na fase mvel. O tempo morto (tempo de reteno da fase mvel) tM o tempo necessrio para que um soluto no retido passe atravs de uma coluna cromatogrfica. Todos os componentes permanecem por esse intervalo de tempo na fase mvel. As separaes so baseadas nos tempos distintos tE que os componentes permanecem na fase estacionria. A resoluo de uma coluna cromatogrfica uma medida quantitativa da sua habilidade em separar os analitos A e B. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Defina (a) eluio. A eluio um processo no qual os solutos so lavados atravs da fase estacionria pelo movimento de uma fase mvel. (b) fase mvel. A fase mvel em cromatografia movimenta-se atravs da fase estacionria transportando a mistura dos analitos. A fase mvel pode ser um gs, um lquido ou um fluido supercrtico. (c) fase estacionria.

A fase estacionria em cromatografia imobilizada em uma coluna ou sobre uma superfcie plana. (e) tempo de reteno. O tempo de reteno tR o tempo decorrido entre a injeo da amostra e o aparecimento do pico do soluto no detector de uma coluna cromatogrfica. (f ) fator de reteno. O fator de reteno kA para o soluto A est relacionado velocidade com a qual A migra atravs da coluna. o intervalo de tempo que um soluto permanece na fase estacionria relativo ao tempo que este permanece na fase mvel. (g) fator de seletividade. O fator de seletividade a para os solutos A e B definido como a razo entre a constante de distribuio do soluto mais retido (B) e a constante de distribuio para o soluto menos retido (A). (h) eluente. Um eluente um solvente empregado para transportar os componentes de uma mistura atravs de uma fase estacionria. 2. Liste as variveis que levam ao alargamento de zona em cromatografia. Velocidade linear da fase mvel Coeficiente de difuso na fase mvel Coeficiente de difuso na fase estacionria Fator de reteno Dimetro das partculas do recheio Espessura da camada de lquido que recobre a fase estacionria

3. Qual a diferena entre as cromatografias gs-lquido e lquidolquido? Em cromatografia gs-lquido, a fase mvel um gs, enquanto na cromatografia lquido-lquido, ela lquida. 4. Identifique dois mtodos gerais para melhorar a resoluo de duas substncias em uma coluna cromatogrfica. Para as colunas recheadas, o alargamento de banda minimizado pelo dimetro

pequeno das partculas. Para as colunas capilares, dimetros pequenos da prpria coluna reduzem o alargamento de banda. A cromatografia uma ferramenta verstil e poderosa para separar espcies qumicas semelhantes. Alm disso, ela pode ser empregada para a identificao qualitativa e determinao quantitativa das espcies separadas.

CLAE A cromatografia lquida de alta eficincia, CLAE, um tipo de cromatografia que emprega uma fase mvel lquida e uma fase estacionria muito finamente dividida. Para se obter vazes satisfatrias, o lquido deve ser pressurizado a muitas centenas de libras por polegada quadrada. Na cromatografia por partio lquido-lquido, a fase estacionria um solvente que imobilizado por adsoro sobre a superfcie das partculas do recheio. Na cromatografia lquida por partio com fase ligada, a fase estacionria uma espcie orgnica que imobilizada na superfcie das partculas do material de recheio por meio de ligaes qumicas. Na cromatografia por partio de fase normal, a fase estacionria polar e a fase mvel, apolar. Na cromatografia por partio de fase reversa, a polaridade dessas fases so invertidas. A ordem de polaridade dos solventes comuns utilizados como fases mveis gua > acetonitrila > metanol > etanol > tetraidrofurano > propanol > cicloexano > hexano. Aplicaes Tpicas da Cromatografia por Partio de Alta Eficincia Campo Farmacutico Bioqumico Produtos alimentcios Industrial qumico Misturas Tpicas Separadas Antibiticos, sedativos, esterides, analgsicos Aminocidos, protenas, carboidratos, lipdeos Adoantes artificiais, antioxidantes, aflotoxinas, aditivos Aromticos condensados, tensoativos, propelentes, corantes

Poluentes Qumico forense Mdico clnico

Pesticidas, herbicidas, fenis, bifenilas policloradas (PCBs) Drogas, venenos, lcool no sangue, narcticos cidos blicos, metablitos de drogas, extratos de urina, estrgeno

Em cromatografia por adsoro, os analitos so adsorvidos sobre a superfcie de um recheio polar. Na cromatografia por adsoro, a fase mvel constitudageralmente por um solvente orgnico ou por uma mistura de solventes orgnicos; a fase estacionria composta por partculas finamente divididas de slica ou alumina. Na cromatografia de ons baseada em supressor, a coluna do trocador de ons seguida por uma coluna supressora ou por uma membrana supressora que converte um eluente inico em espcies no-inicas que no interferem com a deteco condutomtrica dos ons dos analitos. Na cromatografia por troca inica em coluna nica, os ons dos analitos so separados em um trocador de ons de baixa capacidade por meio de um eluente de pequena fora inica que no interfere com a deteco condutomtrica dos ons dos analitos. Na cromatografia por excluso por tamanho, o fracionamento baseado no tamanho das molculas. A filtrao em gel um tipo de cromatografia por excluso por tamanho na qual o recheio hidroflico. empregada para separar as espcies polares. A permeao em gel um tipo de cromatografia por excluso por tamanho na qual o recheio hidrofbico. utilizada na separao de espcies no-polares. Um agente de resoluo quiral um aditivo da fase mvel ou uma fase estacionria quiral que complexa preferencialmente um dos enantimeros. Comparao entre a Cromatografia Lquida de Alta Eficincia e a Cromatografia Gs-Lquido Caractersticas de ambos os mtodos Eficientes, altamente seletivos, amplamente aplicados

Necessitam de uma pequena quantidade de amostra Podem ser no destrutivos da amostra Prontamente adaptados anlise quantitativa Vantagens da CLAE Pode separar compostos no-volteis e termicamente instveis Pode ser aplicada de forma geral a ons inorgnicos Vantagens da CG Equipamento simples e de baixo custo Rpida Resoluo incomparvel (com colunas capilares) Fcil de ser interfaceada a espectrmetros de massas ------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Liste os tipos de substncias para as quais os seguintes mtodos cromatogrficos so mais adequados (a) gs-lquido. As substncias que so pouco volteis e termicamente estveis. (b) troca inica. Substncias inicas. (c) permeao em gel. Compostos de alta massa molecular que so solveis em solventes no polares. (d) gs-slido. Gases de baixa massa molecular 2. Defina (a) eluio isocrtica. Em uma eluio isocrtica, a composio do solvente mantida constante ao longo da eluio. (b) injeo com parada de fluxo. Na injeo com interrupo de fluxo, a vazo do solvente interrompida, uma conexo no topo da coluna removida e a amostra injetada diretamente na cabea da coluna. Ento, a conexo recolocada e o bombeamento, reiniciado. (c) recheio de fase reversa. Uma fase estacionria apolar e uma fase mvel polar. (d) recheio de fase normal. Em um recheio de fase normal, a fase estacionria muito polar e a fase mvel, relativamente no polar.

(c) cromatografia de ons. Na cromatografia inica, a fase estacionria uma resina trocadora de ons, e a deteco geralmente realizada por um detector de condutividade. (d) coluna supressora do eluente. A coluna do supressor recheada com uma segunda resina trocadora de ons que converte efetivamente os ons do solvente de eluio para espcies moleculares de ionizao limitada sem afetar a condutividade dos ons dos analitos. (e) filtrao em gel. Filtrao em gel um tipo de cromatografia de excluso por tamanho, na qual os recheios so hidroflicos e os eluentes, so aquosos. usada para separar compostos polares de alta massa molecular. (f) permeao em gel. Descreva a diferena fundamental entre as cromatografias por adsoro e por partio. 3. Descreva a diferena fundamental entre as cromatografias de adsoro e de partio. Na cromatografia de adsoro, as separaes so baseadas no equilbrio de adsoro entre os componentes de uma amostra e uma superfcie slida. Na cromatografia de partio, as separaes so baseadas no equilbrio de distribuio entre dois lquidos imiscveis.

4. Descreva a diferena entre as cromatografias por permeao em gel e por filtrao em gel. A filtrao em gel um tipo de cromatografia de excluso por tamanho na qual os recheios so hidroflicos e os eluentes aquosos. usada para separar compostos polares de alta massa molecular. A cromatografia por permeao em gel um tipo de cromatografia de excluso por tamanho, na qual os recheios so hidrofbicos e os eluentes no aquosos. usada para separar espcies no polares de alta massa molecular. 5. Descreva os diversos tipos de bombas empregados em cromatografia lquida de alta eficincia. Quais so as vantagens e desvantagens de cada um?

Bombas pneumticas so simples, baratas e livre de pulsao. Elas consistem em um recipiente flexvel de solvente alojado em um recipiente que pode ser pressurizado por um gs comprimido. Essa bomba tem capacidade limitada de presso e volume e no pode ser adaptada para eluio por gradiente. A vazo de bombeamento depende da viscosidade do solvente. As bombas de seringa acionadas por parafuso so compostas por uma grande seringa na qual o pisto movido por um parafuso acoplado a um motor. So livre de pulsao, e a vazo facilmente ajustvel. Sofrem de pequena capacidade e so inconvenientes quando os solventes precisam ser trocados. As bombas recprocas so versteis e amplamente usadas. So constitudas por uma pequena cmara cilndrica que preenchida e ento esvaziada pelo movimento de ida e vinda de um pisto. As vantagens incluem um pequeno volume interno, altas presses de sada, adaptabilidade a eluio por gradientes e vazes constantes que so independentes da viscosidade e da contra presso. A pulsao na sada deve ser amortecida. 6. A espectrometria de massas constitui um sistema de deteco extremamente verstil para a cromatografia gasosa. Contudo, o interfaceamento de um sistema CLAE com um espectrmetro de massas uma tarefa muito mais difcil. Descreva as razes principais pelas quais mais difcil combinar a CLAE com a espectrometria de massas do que a CG com a espectrometria de massas. Uma amostra em fase gasosa necessria para a espectrometria de massas. A sada da coluna de CL um soluto dissolvido em um solvente, enquanto a sada da coluna de CG um gs, portanto diretamente compatvel. Como primeiro passo em CL/MS, o solvente deve ser vaporizado. Quando vaporizado, entretanto, o solvente da CL produz um volume gasoso que 10 a 100 vezes maior que o gs de arraste na CG. Conseqentemente, a maior parte do solvente tambm deve ser removida.

7. Quais das oito caractersticas de um detector ideal para CG se aplicam aos detectores para a CLAE? Que caractersticas adicionais deveriam se adicionadas para descrever um detector ideal para a CLAE? O detector de CLAE deve apresentar todas as caractersticas listadas para o detector de CG ideal. Alm disso, o detector CLAE deve ter um baixo volume morto e ser compatvel com os lquidos e presses encontrados em CLAE.

AAS A espectroscopia de absoro atmica em chama (EAA) correntemente o mtodo atmico mais empregado em razo de sua simplicidade, efetividade e custo relativamente baixo. O problema criado pelas linhas de absoro estreitas foi contornado pelo uso de fontes de radiao que emitem no somente uma linha com o mesmo comprimento de onda selecionado para a medida de absoro, mas tambm uma linha que mais estreita. Absoro atmica de uma linha de emisso de uma fonte. A fonte de linhas em (a) muito estreita. Uma linha isolada pelo monocromador. A linha absorvida pela linha de absoro mais larga do analito na chama (b) resultando na atenuao (c) da radiao da fonte. Uma vez que a maior parte da radiao da fonte ocorre no pico da linha de absoro, a lei de Beer obedecida. A radiao de uma fonte de linhas focada no vapor atmico em uma chama ou em um atomizador eletrotrmico. A radiao atenuada da fonte entra ento em um monocromador, o qual isola a linha de interesse. Depois, a potncia radiante da fonte, atenuada pela absoro, medida pelo tubo fotomultiplicador (TFM). O sinal ento processado e dirigido para um sistema computacional para fornecer a sada. A modulao definida como a alterao de alguma propriedade de uma onda portadora pelo sinal que se deseja monitorar, de forma que a onda portadora possa ser empregada para transportar informao sobre o sinal. As propriedades que so tipicamente alteradas so a freqncia, a amplitude e o comprimento de onda. Na EAA, a fonte de radiao modulada em amplitude, porm a radiao de fundo e a emisso do analito no o so, sendo ento observados como sinais de cc. A modulao da fonte pelo uso de um recortador de feixe ou pulsando-a eletronicamente muito empregada para converter a radiao da fonte para a forma alternada.

A correo de fundo com fonte contnua emprega uma lmpada de deutrio para obter uma estimativa da absorbncia de fundo. Uma lmpada de ctodo oco obtm a absorbncia total. Ento a absorbncia corrigida obtida calculando-se a diferena entre as duas. A correo de fundo com lmpada de ctodo oco pulsada utiliza uma nica lmpada de ctodo oco pulsada com, primeiramente, uma baixa corrente e, em seguida, com uma corrente alta. O modo em baixa corrente obtm a absorbncia total, ao passo que a absorbncia de fundo estimada durante o pulso de corrente alta. Um tampo de radiao uma substncia que adicionada em grande excesso s amostras e aos padres para nivelar o efeito de espcies presentes na matriz, minimizando, assim, a interferncia. Classificao dos Mtodos Espectroscpicos Atmicos

Modelos de Atomizadores Os atomizadores eletrotrmicos comerciais so fornos tubulares pequenos e aquecidos eletricamente. A plataforma tambm feita de grafite e est localizada abaixo do orifcio de introduo de amostra. A amostra evaporada e calcinada sobre essa plataforma, da forma usual. Quando a temperatura do tubo se eleva rapidamente, contudo, atrasase a atomizao, uma vez que a amostra no se encontra mais em contato direto com a parede do forno. Em conseqncia, a atomizao ocorre em um ambiente no qual a temperatura no est se alterando to rapidamente. Como resultado, os sinais mais reprodutveis so obtidos.

Descreva o sistema de atomizadores eletromrticos. Amostra inserida em um tubo de grafite, aquecido eletricamente. Maior tempo de residncia do vapor atmico. Maior sensibilidade. Pequenos volumes de amostra. Amostras slidas e lquidas. Programa de temperatura do forno Secagem (50-200 oC) Eliminao do solvente Pirlise (200-1200 oC) Eliminao da matriz (mineralizao) Atomizao (2000-3000 oC) Produo de vapor atmico Utilizao de gases de purga (argnio) Remoo de gases produzidos na secagem e calcinao Reduzir a oxidao do tubo Quais as vantagens e desvantagens dos atomatizadores eletromrticos Vantagens Maior tempo de residncia dos tomos gasosos na zona de absoro; Alta sensibilidade (LOD 100-1000 vezes melhores que a chama para diversos metais); Menor volume de amostra (5 100 L); Suspenses e emulses homogneas podem tambm ser usadas; Utilizao de amostras slidas (0,1 a 20 mg); Permite a introduo automtica da amostra. Limitaes Tempo requerido na anlise (~2 minutos / amostra); Requer correo de absoro de fundo; Requer utilizao de modificadores de matriz, em alguns casos; Equipamento complexo, necessita maior manuteno e habilidade do operador; Preciso raramente melhor que 5 10 % (introduo manual da amostra); A radiao de fundo em chama ou plasma geralmente compensada com sucesso por meio de medidas de uma soluo do branco. Radiao

de fundo provocada pela presena de espcies moleculares CN, C2, etc. Estas espcies podem provocar, absoro, emisso ou espalhamento.

Interferncias em Espectroscopia de Emisso Atmica em Plasma e em Chama Muitos efeitos de interferncia causados por concomitantes em emisso atmica em plasma ou em chama so similares. Algumas tcnicas, contudo, podem estar sujeitas a certos tipos de interferncia e livres de outros tipos. Os efeitos de interferncia so convenientemente divididos em interferncias do branco ou aditivas e interferncias do analito ou multiplicativas. As interferncias espectrais so exemplos de interferncias do branco. Elas produzem um efeito independente da concentrao do analito. Problema: Superposio de linhas espectrais Exemplo: V (308,211 nm) em Al (308,215 nm) Soluo: Escolha de linhas no interferidas (Al:309,27 nm), Separao prvia do interferente Problema: Presena de absoro molecular Exemplo: CaOH em Ca Soluo: Mudanas na estequiometria e temperatura da chama. As interferncias qumicas, fsicas e de ionizao so exemplos de interferncias do analito. Estas influenciam a grandeza do sinal do analito em si mesmo. As interferncias fsicas podem alterar os processos de aspirao, de nebulizao, de dessolvatao e de volatilizao. As substncias presentes na amostra e que alteram a viscosidade da soluo, por exemplo, podem alterar a vazo e a eficincia do processo de nebulizao. Os constituintes combustveis, como solventes orgnicos, podem alterar a temperatura do atomizador e dessa forma afetar indiretamente a eficincia de atomizao. Problema: Qualquer diferena (fsica: ponto de ebulio, viscosidade, tenso superficial) entre amostras e padres de calibrao que alterem o processo de nebulizao

Soluo: Fazer com que estas caractersticas sejam o mais parecidas possveis ou fazer uma curva com adio de padro. As interferncias qumicas so geralmente especficas a certos analitos. Elas ocorrem aps a dessolvatao, na converso das partculas slidas ou fundidas em tomos ou ons elementares. Os constituintes que influenciam a volatilizao das partculas do analito causam esse tipo de interferncia e so denominados interferncias de volatilizao do soluto. Problema: Formao (na chama) de compostos refratrios que dificultam a atomizao Exemplo: Presena de fosfato ou sulfato na determinao de Ca (formao de sais pouco volteis) Soluo: Aumentar temperatura da chama, adio de agentes liberadores (Sr, La), adio de agentes protetores (EDTA). Problema: Ionizao Exemplo: Elementos alcalino terrosos Soluo: Utilizao de um tampo (supressor de ionizao) de ionizao (Na, K), espcies que criam uma atmosfera redutora.

Descreva o sistema de atomizadores por chama A amostra introduzida por aspirao. A vazo da amostra introduzida controlada. Na cmara de mistura ocorre a mistura da amostra com o oxidante e o combustvel. Vantagens e Desvantagens de atomizador por chama Vantagens Alta aplicabilidade; Menor tempo de anlise (alguns segundos); Fcil manuseio; Custo e manuteno relativamente baixos. Desvantagem Volume de amostra relativamente grande (1 a 25 mL); Apenas 5 a 10 % da amostra aspirada chega at a chama; Velocidade da chama Menor tempo de residncia dos tomos gasosos na chama; Fatores como viscosidade, tenso superficial, presso de vapor e teor total de sais da amostra afetam a nebulizao.

------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Descreva as diferenas bsicas entre a espectroscopia de absoro a e de emisso atmicas. Em espectroscopia de emisso atmica a fonte de radiao a prpria amostra. A energia para excitao do tomo do analito fornecida por um plasma, uma chama, um forno, um arco eltrico ou ignio. O sinal a medida da intensidade da fonte no comprimento de onda de interesse. Na espectroscopia absoro atmica, a fonte de radiao geralmente uma fonte de linha, como uma lmpada de ctodo oco, e o sinal a absorbncia. Esse ltimo calculado a partir da potncia radiante da fonte e a potncia resultante aps sua passagem pela amostra atomizada. 2.Defina (a) atomizao. A atomizao um processo em que a amostra, geralmente em soluo, volatilizada e decomposta para formar um vapor atmico. (b) alargamento por presso. Efeito que aumenta a largura de uma linha espectral; causado pela coliso entre tomos resultando em pequenas variaes em seus estados de energia. (c) alargamento Doppler. O alargamento Doppler um aumento na largura de uma linha atmica causada pelo efeito Doppler no qual os tomos, que se movem em direo a um detector, absorvem ou emitem comprimentos de onda que so ligeiramente menores que os absorvidos ou emitidos por tomos que se movem a ngulos retos em relao ao detector. O efeito contrrio observado para tomos que se afastam do detector. (d) nebulizador. Nebulizar significa converter um lquido em um jato gasoso spray ou nvoa. (e) plasma. Um plasma um gs condutor que contm uma grande concentrao de ons e/ou eltrons. (f ) lmpada de ctodo oco. As lmpadas de ctodo oco so constitudas de um ctodo feito de um metal (monoelementar) ou de uma liga de vrios metais (multielementar).

(g) sputtering. O sputtering um processo no qual os tomos de um elemento so desalojados da superfcie de um ctodo pelo bombardeamento com um fluxo de ons de um gs inerte que foram acelerados para o ctodo por meio de um alto potencial eltrico. (h) supressor de ionizao. Um supressor de ionizao uma espcie facilmente ionizvel que produz uma alta concentrao de eltrons em uma chama reprimindo a ionizao do analito. (i) interferncia espectral. Uma interferncia espectral em espectroscopia atmica ocorre quando a linha espectral de um elemento na matriz da amostra sobrepe-se linha espectral do analito. ( j) interferncia qumica. As interferncias qumicas so geralmente especficas a certos analitos. Elas ocorrem aps a dessolvatao, na converso das partculas slidas ou fundidas em tomos ou ons elementares. Os constituintes que influenciam a volatilizao das partculas do analito causam esse tipo de interferncia e so denominados interferncias de volatilizao do soluto.

(k) tampo de radiao. Um tampo de radiao uma substncia que adicionada, em grande excesso, aos padres e amostras em espectroscopia atmica para prevenir que a presena daquela substncia na matriz da amostra possa exercer um efeito aprecivel nos resultados. (l) agente liberador. Em espectroscopia de absoro atmica, a espcie introduzida para combinar-se com o componente da amostra que iria apresentar interferncia devido formao de compostos de baixa volatilidade com o analito. (m) filtro de massas quadrupolar. O filtro de massa quadrupolar consiste em quatro barras cilndricas que permitem passar somente os ons de certa relao massa-carga (m/z). Com o ajuste adequado de voltagem aplicada s barras, uma trajetria estvel criada para passar para o

detector somente os ons de certa relao m/z. Aplicaes Ambiental: solos, guas, plantas, sedimentos... Clnica: urina, cabelo, outros fluidos... Alimentos: enlatados... Industrial: Fertilizantes, lubrificantes, minrios...