INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE CINTALAPA

IBQ. Mariana Valdespino Len. Enero 2011

NDICE.

Introduccin .................................................................................................................. 03

Recomendaciones para el estudiante ........................................................................... 04

Prctica #01.- Conteo de bacterias mesoflicas aerobias (carne, huevo) ................... 06

Prctica #02.- Conteo de organismos coniformes totales: Conteo por dilucin en tubo (NMP) ..................................................................................... 10

Prctica #03.- Recuento de Hongos y Levaduras (Cereales)..................................... 15

Prctica #04.- Conteo de Staphylococus aureus (leche contaminada)....................... 16

Prctica #05.- Conteo de Enterococos (mariscos, embutidos) ................................... 17

Bibliografa .................................................................................................................... 18

Anexos .......................................................................................................................... 19

INTRODUCCIN. El objetivo general del curso prctico de Microbiologa de Alimentos es que el alumno adquiera y desarrolle la habilidad en el control sanitario de agua, alimentos, equipo e instalaciones, con la finalidad de evitar en lo posible las alteraciones de estos por la accin de los microorganismos, as como conocer el efecto benfico de los microorganismos a nivel industrial. Este manual est dirigido a estudiantes que continan su experiencia en el manejo de los microorganismos, enfocado principalmente al anlisis microbiolgico de los alimentos, para determinar su vida til, su calidad sanitaria y la eficiencia de los procesos de conservacin de alimentos. Este manual contiene 5 prcticas diseadas para que el estudiante enriquezca y adquiera las herramientas ms comunes en el anlisis sanitario de los alimentos. El orden de presentacin corresponde al programa de curso terico semestral de Microbiologa de Alimentos que forma parte del plan de estudio de la carrera de Ingeniera en Industrias Alimentarias impartida en el Instituto Tecnolgico Superior de Cintalapa. En las primeras dos prcticas se presentan los objetivos y una breve introduccin para facilitar la comprensin de los mismos, despus se indican los materiales necesarios y procedimientos a realizarse en forma de instrucciones numeradas que se complementan con figuras y esquemas, adems se proponen formas de presentacin de los resultados, para que el alumno recopile sus observaciones y por ltimo se incluyen cuestionarios que el estudiante deber resolver consultando materiales bibliogrficos. En las siguientes prcticas se plantean los objetivos a alcanzar y una breve introduccin para que el alumnos sea capaz de proponer su metodologa de trabajo y la manera de reportar sus resultados. Se espera que este manual pueda ser de gran ayuda para profesores y estudiantes del ITSC en el curso de Microbiologa de Alimentos as como en las materias que requieran el apoyo para realizar anlisis sanitario de los alimentos. IBQ. Mariana Valdespino Len.

RECOMENDACIONES PARA EL ESTUDIANTE REGLAS GENERALES DE LABORATORIO. 1. Durante las sesiones, siempre deber usar bata blanca de laboratorio bien abotonada. 2. No deber sacar del laboratorio ningn equipo, medios o cultivos microbianos. 3. Evitar la acumulacin sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la prctica de laboratorio. Colocar todos los objetos personales (libros, mochilas, etc.) en la zona indicada por el encargado del laboratorio. 4. Se prohbe ingerir cualquier tipo de alimento o bebida dentro del laboratorio durante la sesin de trabajo. 5. Se prohbe fumar, aplicarse cosmticos o tocarse la cara con las manos o algn otro objeto. Se deber lavarse las manos meticulosamente con jabn y agua al entrar y del laboratorio. 6. Por seguridad no se deber pipetear oralmente ningn tipo de cultivo microbiano, esta actividad deber realizarse con perillas o jeringas conectadas a la pipeta. 7. No se admitirn visitas personales que distraigan la atencin y pongan en riesgo la seguridad en el trabajo que se realiza. PROCEDIMIENTOS DE TRABAJO. 1. Antes y despus de cada sesin de prctica los alumnos debern limpiar las mesas de trabajo con el desinfectante proporcionado para este fin. 2. Cuando se utilice mechero, este deber colocarse alejado de equipos como el microscopio as como de prendas de vestir, cuadernos, lquidos inflamables, etc. 3. Al concluir cada sesin, el estudiante deber asegurarse de que los materiales de desecho u objetos contaminados sean colocados en recipientes especficos para ello, colocados en lugares apropiados que le indicar el profesor. 4. Siempre deber dejar perfectamente limpios todos los equipos utilizados (microscopios, balanza analtica, potencimetro, etc.) y reportar el encargado de laboratorio cualquier irregularidad en el funcionamiento de ellos. 5. En caso de producirse un incendio o herida personal, el alumno deber conservar la calma y notificarlo de inmediato al profesor. En el caso de derrame de cultivos o rotura de recipientes con cultivos activos deber conservar la calma y adems informar al profesor, seguir inmediatamente el siguiente procedimiento:
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a) Colocar toallas de papel sobre el material derramado para evitar su dispersin. b) Poner abundante solucin desinfectante sobre las toallas. c) Dejar transcurrir al menos 15 minutos, retirar las toallas y tirarlas en el receptculo destinado a la eliminacin de materiales contaminados. MATERIALES INDISPENSABLES EN CADA SESIN DE TRABAJO DE LABORATORIO. Por alumno: Bata blanca de laboratorio, larga, de algodn 100%, manga larga, limpia y con botones. Manual de prcticas y cuaderno de anotaciones. Cubrebocas y cofia. Por equipo de trabajo o grupo: Fibra para lavado de material. Jabn desinfectante, de preferencia tricloro. Encendedor o cerillos. Franela de algodn limpia. Cinta adhesiva (masking tape) de 1.27 cm de ancho. Toallas absorbentes de papel. Caja de pauelos desechables. Rollo de papel aluminio. Marcador indeleble de punta chica. Tijeras rectas. Algodn plisado. Tela paalina. Rollo de papel estraza. Rollo de Kleen pack. Alcohol de 96. Benzaldehdo

PRCTICA No. 01.- Conteo de bacterias mesoflicas aerobias. OBJETIVO: realizar un recuento de bacterias mesfilas viables en los alimentos como un indicador microbiano de la calidad del alimento. INTRODUCCIN: Los recuentos de microorganismos viables se basan en el nmero de colonias que se desarrollan en placas previamente inoculadas con una cantidad conocida de alimento e incubadas en unas condiciones ambientales determinadas. Estos recuentos no pueden considerarse como recuentos totales ya que solo son susceptibles del contaje aquellos microorganismos capaces de crecer en las condiciones establecidas. Se puede conseguir una amplia gama de condiciones variando la temperatura, la atmsfera, la composicin del medio y el tiempo de incubacin. En el grupo de los mesfilos aerobios se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30 C en las condiciones establecidas. En este recuento se estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos; refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones higinicas de la materia prima. Un recuento bajo de aerobios mesfilos no asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora patgena; sin embargo, salvo en alimentos obtenidos por fermentacin, no son recomendables los recuentos elevados. Un recuento elevado puede significar: Excesiva contaminacin de la materia prima. Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin. La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos. La inmediata alteracin del producto. El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos. MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS: Placas Petri Tubos de ensaye de 18 x 150 mm Matraz Erlenmeyer de 250 ml Pipetas de 1 ml Pipetas de 5 ml Pipetas de 10 ml Probeta de 50 ml Aza circular Varilla acodada Mechero de Bunsen o mechero de alcohol Mortero con pistilo
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Contador de colonias Balanza electrnica Incubadora Campana de flujo laminar Agar nutritivo Agua peptonada al 0.1% Agua destilada

METODOLOGA: a) Cuenta en placa por siembra en difusin. 1. Preparar la muestra de alimento segn su tipo, si es lquido hay que homogenizar, si es slido hay que licuar o triturar la mezcla. 2. Preparar las diluciones correspondientes: de 10 -1 a 10-4. 3. Agregar los inculos a cada placa petri e inmediatamente despus agregar a cada placa el Agar Nutritivo fundido, este debe estar a 45 46 C (10 a 15 mL por placa). NOTA: se utilizaran 2 placas por dilucin. 4. Hacer la mezcla agar + inculo, la cul se realiza de la siguiente manera: hacer rotaciones 5 veces sentido horario, 5 veces de abajo arriba, 5 veces antihorario y 5 veces derecha e izquierda. 5. Esperar que solidifique el medio y luego incubar de manera invertida a 29 31 C por 24h (dejando una placa control). 6. Realizar las lecturas a las 24 y 48 h. 7. Para contar se eligen placas que tengan de 30 a 300 colonias. b) Cuenta en placa por extensin de superficie. 1. Colocar en el centro de las cajas de Petri con Agar Nutritivo slido, 0.1 mL de una suspensin bacteriana (correspondiente a cada dilucin preparada). NOTA: se utilizarn dos placas por cada dilucin. 2. Colocar sobre la muestra una varilla de vidrio con un doblez que forme un ngulo de 90. Distribuir la muestra sobre la superficie del agar girando la varilla en un ngulo de 360.

Figura 1.- Aislamiento por varilla acodada. 3. Invertir las cajas e incubar las cajas 24 h a T de 35 C.

RESULTADOS: Reportar los resultados de acuerdo a las siguientes tablas: Tabla 1.- Colonias aisladas por el mtodo de siembra en difusin. CARACTERSTICA Dilucin:-------Forma Color Borde Superficie Elevacin Nmero de colonias en caja 1 Nmero de colonias en caja 2 Nmero de colonias promedio UFC/ml NOTA: Se realizar una tabla por cada dilucin que presente de 30 a 300 colonias aisladas. Tabla 2.- Colonias aisladas por el mtodo de extensin de superficie. CARACTERSTICA Dilucin:-------Forma Color Borde Superficie Elevacin Nmero de colonias en caja 1 Nmero de colonias en caja 2 Nmero de colonias promedio UFC/ml NOTA: Se realizar una tabla por cada dilucin que presente de 30 a 300 colonias aisladas. MUESTRA. MUESTRA.

Para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada ml de medio, se aplicar la siguiente frmula: UFC/ml = Nmero de colonias x Factor de dilucin x Volumen de la dilucin

Donde: Nmero de colonias = el promedio del nmero de colonias detectadas en las 2 cajas de la ltima dilucin. Factor de dilucin = 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, etc. (depende de la dilucin correspondiente a las placas) Volumen de la dilucin = 10 ml. NOTA: En los resultados se pueden anexar dibujos y fotos de lo obtenido. Se consultaran los valores permitidos de UFC/ml por las normas oficiales o el Cdex alimentario para analizar la calidad sanitaria de los alimentos evaluados.

PRCTICA No. 02.- Conteo de organismos coliformes totales: Conteo por dilucin en tubo (NMP) OBJETIVO: Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en diferentes muestras alimenticias por el mtodo del Nmero Ms Probable, utilizando la tcnica de tubos de fermentacin mltiple. INTRODUCCIN: El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias. Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades. MATERIAL DE LABORATORIO: 04 Mecheros Bunsen 02 Mecheros de alcohol 10 tubos de 18 x 150 mm conteniendo 9 mL de agua de dilucin estril. 10 Pipetas de 1 mL estriles 05 Pipetas de 5 ml estriles 05 Pipetas de 10 ml estriles 30 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham y tapn de rosca, conteniendo 9 ml de Caldo Lauril Sulfato estril de concentracin sencilla. 30 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham y tapn de rosca, conteniendo 9 ml de Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante estril. 20 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham y tapn de rosca, conteniendo 9 ml de Caldo E.C. estril. 12 Cajas de Petri conteniendo Agar Eosina Azul de Metileno 10 Tubos de 18 x 150 mm con tapn de rosca conteniendo Agar nutritivo inclinado estril.
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04 Gradillas para tubos de 18 x 150 y de 13 x 100 mm. 03 Matraces Erlenmeyer de 250 ml 03 Matraces Erlenmeyer de 500 ml 02 Tripis 02 Telas de asbesto 02 Asas Bacteriolgica 05 Vasos pp de 50 ml 03 Vasos pp de 100 ml 03 Vasos pp de 250 ml 02 Vasos de 500 ml 01 Probeta de 100 ml 01 Probeta de 50 ml 02 Esptulas 02 Pinzas de diseccin 02 Frascos de boca ancha con tapn esmerilado de aproximadamente 250 ml 02 Termmetros de 100C

EQUIPO: Incubadora Balanza analtica Balanza electrnica Campana de flujo laminar Estufa Bao Mara pH-metro REACTIVOS: Caldo Lauril Sulfato Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante Caldo E.C Agar Eosina Azul de Metileno Agar nutritivo Fosfato monopotsico (KH2PO4) Sulfato de magnesio (MgSO4.7H2O) Solucin de tiosulfato de sodio 10% Etanol NaOH 0.1 N HCl 0.1 N Soluciones reguladoras para pH-metro Agua destilada Benzaldehdo NOTA: si no existen los medios como tal, se requerir: Caldo Lauril Sulfato: Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante al 2% Agar Eosina Azul de Metileno Agar nutritivo

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INSUMOS: Cerillos encendedor Papel Kraft Tela paalina Algodn plisado Kleenex Etiquetas adhesivas Cubrebocas Cofia Guantes Franela Alcohol etlico Jabn lquido Papel estraza Toallas absorbentes Bandeja para material Bolsas de plstico de 2 kg Masking tape Marcador indeleble punta fina Kleenpack Papel aluminio

METODOLOGA: Muestreo. Prueba presuntiva:

1. Preparacin del material y medios. 2. Realizar diluciones seriadas de la muestra de agua hasta 10 -3 en agua de dilucin. 3. Realizar 5 pases de 1ml de cada una de las diluciones (10 -1,10-2,10-3) a tubos con 9 ml de caldo Lauril sulfato (Ver Anexo 2) 4. Incubar de 24 a 48 h a 35C. 5. Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para observar si hay tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el medio contiene un indicador de pH, turbidez y produccin de gas en el interior de la campana Durham. Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de gas sea resultado de la fermentacin de la lactosa, en cuyo caso se observar turbidez en el medio de cultivo, y no confundir con burbujas de aire. Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas Durham antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos tubos cuyas campanas contengan burbujas de aire de alguna manera eliminar stas y as poder utilizarlos. 6. De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales. En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarn en incubacin 24 horas ms. Despus de 48 horas (2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura final. Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de gas, los tubos se toman como negativos.
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Interpretacin: - Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada. - Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarn convenientemente y se proceder a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para Coliformes Totales y Fecales. Prueba Confirmatoria:

1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva, agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB). 2. Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C. 3. Despus de la incubacin observar la presencia de turbidez y de gas. Interpretacin: - Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera - POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del NMP. - Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: Se consideran NEGATIVOS, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del NMP - Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de dilucin menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de muestra), respectivamente. Prueba confirmatoria para coliformes fecales:

1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva, agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C. (Escherichia coli). 2. Incubar durante 24 horas a 44.5 0.2 C. y despus de este perodo, observar presencia de turbidez y gas. Interpretacin: - Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos y establecer el cdigo para posteriormente hacer el clculo del NMP, (Figs. 18.2 y 18.3) - Si no se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: Se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del NMP. - Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de dilucin menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de muestra), respectivamente.

Prueba complementaria:
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1. Se marca las placas de agar eosina azul de metileno correspondiendo cada una a un tubo de caldo lactosado verde brillante bilis. 2. Sembrar el inculo, esparciendo en la superficie del primer cuadrante de la placa petri, cuidando de no romper el agar; girar la placa y continuar el esparcimiento en el segundo cuadrante a partir del inculo del primer cuadrante. 3. Continuar de esta forma hasta completar el esparcimiento en toda la superficie del agar. (Ver Anexo 2) 4. Cerrar e incubar la placa en posicin invertida durante 24 h a 35 C. 5. Observar el desarrollo de las colonias una vez transcurrida la incubacin. Interpretacin: - Las colonias positivas son las colonias tpicas de color rosado oscuro, con ncleo centra, con o sin brillo verde metlico; o las colonias atpicas rosadas, mucoides, opacas y sin ncleo. - Las colonias negativas son las transparentes. - De las colonias positivas, se recomienda aislar en tubos con agar nutritivo inclinado, para su posterior uso y/o preparacin de tinciones. CALCULOS De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y Fecales, establecer los cdigos correspondientes para calcular por referencia en las tablas estadsticas (Tablas 17.1-17.4) el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL de agua. En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear para los clculos la siguiente ecuacin:

ELABORACION Y PRESENTACION DE RESULTADOS. Los resultados se elaboran de la siguiente manera: Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero. A continuacin se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series anteriores a la del valor cero que podr ser leda en la tabla del NMP. Para efectos de expresar el valor obtenido basndose en 100 mL de muestra habr de dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo de la serie central de cada triplete escogido. En general se tiene:

Los resultados obtenidos se expresarn de la siguiente manera: NMP DE COLIFORMES TOTALES: __________ / 100 mL NMP DE COLIFORMES FECALES: __________ / 100 mL

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PRCTICA No. 03.- Recuento de Hongos y Levaduras (Cereales) OBJETIVO: realizar el conteo de hongos y levaduras presentes en cereales. INTRODUCCIN. Los hongos y levaduras son microorganismos que tienen inters como causa de alteracin y como elementos biolgicos utilizados en la manufactura de algunos alimentos: quesos, cerveza, pan, etc. Ciertos hongos pueden producir al desarrollarse en animales y en el hombre, sustancias que genricamente reciben el nombre de micotoxinas. Los hongos se encuentran distribuidos ampliamente en la naturaleza, como en la tierra y en el polvo, las levaduras se desarrollan con facilidad en los utensilios que no han sido perfectamente lavados, utilizados en las industrias de carbohidratos. El objetivo principal de investigacin en el laboratorio es descubrir las fuentes de contaminacin y la defectuosa conservacin de algunos alimentos. Por ello la tcnica se ha diseado para estimar su abundancia y no slo su presencia. La prueba no se aplica a cualquier tipo de alimento, sino slo aquellos en los que de acuerdo con la experiencia, permite correlacionar su hallazgo, por encima de ciertos lmites, con prcticas sanitarias defectuosas en la produccin y almacenamiento del alimento. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS. De acuerdo a la metodologa propuesta, se determinara el tipo y cantidad de material a utilizar. METODOLOGA. Se propondr la metodologa a realizar tomando en cuenta los siguientes aspectos: Preparacin de materiales y medios. Toma de muestras. Anlisis microbiolgico. Toma y reporte resultados.

RESULTADOS Se expresaran de acuerdo a la metodologa propuesta.

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PRCTICA No. 04.- Deteccin y conteo de Staphylococus aureus (leche contaminada) OBJETIVO: detectar y realizar el conteo de Staphylococus aureus en leche contaminada. INTRODUCCIN. El crecimiento de Staphylococcus aureus en alimentos tiene gran importancia por tratarse de un microorganismo capaz de producir una poderosa enterotoxina que al ingerirse causa intoxicaciones alimentarias. Entre las razones para determinar el Staphylococcus aureus en alimentos estn: Confirmar la presencia de este microorganismo como agente causal de una enfermedad de origen alimentario. Determinar si un alimento o ingrediente es fuente potencial de este microorganismo enterotoxignico. Demostrar la contaminacin postproceso la cual es usualmente debida a contacto humano o con superficies inadecuadamente sanitizadas. Los alimentos sujetos a contaminacin postproceso con tipos enterotoxignicos de Staphylococcus aureus representan un riesgo por la ausencia de flora competitiva que normalmente restringe el crecimiento del Staphylococcus aureus y la produccin de enterotoxinas. Este tipo de alimentos se vuelven ms peligrosos, si adems son sujetos a un inadecuado manejo o son mantenidos a temperaturas de conservacin inapropiadas. Los alimentos perecederos tales como: carnes crudas y procesadas, ensaladas, productos de pastelera y productos de leche, son los ms comnmente asociados con intoxicacin estafiloccica. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS. De acuerdo a la metodologa propuesta, se determinara el tipo y cantidad de material a utilizar. METODOLOGA. Se propondr la metodologa a realizar tomando en cuenta los siguientes aspectos: Preparacin de materiales y medios. Toma de muestras. Anlisis microbiolgico. Toma y reporte resultados.

RESULTADOS Se expresaran de acuerdo a la metodologa propuesta.

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PRCTICA No. 05.- Deteccin de Enterococos (mariscos, embutidos) OBJETIVO: detectar y realizar el conteo de enterococos en muestras crnicas. INTRODUCCIN: Los enterococos son cocos gram positivos, que se encuentran aislados, de a pares, o formando cadenas cortas. Ellos pertenecieron, clsicamente, a los Streptococcus grupo D de Lancefield; sin embargo, a mediados de la dcada de 1980 fueron oficialmente clasificados en su propio gnero. Son catalasa negativa, anaerobios facultativos, capaces de crecer en condiciones un tanto extremas. Las caractersticas bioqumicas sobresalientes incluyen: la habilidad de crecer en presencia de NaCl al 6,5%, a temperaturas entre 10C y 45C, y hasta en un pH de 9,6. Tienen la capacidad de hidrolizar la esculina, crecer en presencia de bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60C e hidrolizar la L-pirrolidonil -naftil-amida (PYR); esta habilidad ha sido usada como parte de un test rpido para deteccin de enterococos en el laboratorio. Las especies de enterococos clnicamente importante son: E faecalis, E faecium, E durans, E avium, E gallinarum, E casseliflavus, E raffinosus, E malodoratus, E hirae, E mundtii, E solitarius, E pseudoavium. E faecalis es el patgeno humano ms frecuente representando el 60% al 90% de los aislamientos clnicos de enterococos. E faecium es la segunda especie aislada en frecuencia, representando el 5% al 16% de los aislamientos clnicos. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS. De acuerdo a la metodologa propuesta, se determinara el tipo y cantidad de material a utilizar. METODOLOGA. Se propondr la metodologa a realizar tomando en cuenta los siguientes aspectos: Preparacin de materiales y medios. Toma de muestras. Anlisis microbiolgico. Toma y reporte resultados.

RESULTADOS Se expresaran de acuerdo a la metodologa propuesta.

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BIBLIOGRAFA.

Aquihuatl Ramos M., Laboratorio de

Prez Chabela M.;(2004); Manual de Prcticas del General; 1Edicin; Universidad Autnoma

Microbiologa

Metropolitana, Mxico D.F. NMX-F-255. Mtodo de conteo de hongos, y levaduras. NMX-F-285. Muestreo y transporte de la muestra. MX-F-304. Investigacin de Salmonella mtodo general. (Mtodo general de investigacin de Salmonella). NMX-F-308. Cuenta de organismos coliformes fecales. NMX-F-310-S. Alimentos para humanos. Microbiolgicos. Cuenta de

Staphylococcus aureus, coagulasa positiva. Madigan M.T., J.M. Martinko, J. Parker, Brook, (1998); Biologa de los microorganismos; 8 Edicin; Prentice Hall; Espaa. Prescott L.M., Harley J.P.; Klein D.A.; (1999); Microbiologa; 4 Edicin; Mc Graw Hill Interamericana, Mxico. www.britanialab.com.ar

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Anexo 01.

Figura 02.- Siembra en placa para Prueba Complementaria.

Anexo 02. Tabla 03.- Ejemplo de tabla para seleccin de cdigo

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Anexo 03.

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Anexo 04. INSTRUCTIVO PARA EL USO DEL AUTOCLAVE. 1. 2. 3. 4. Cercirese que la autoclave se encuentre limpio y cuente con todas sus piezas. Coloque la parrilla interna en su lugar. Llene la autoclave con agua corriente, hasta la marca interna. Coloque y acomode el material a esterilizar de manera que tubos y matraces con medios de cultivo se coloquen en forma vertical, asegurndose que no existan derrames. El material de cristal vacio debe acomodarse que de manera que no caiga o se pueda romper. 5. Cierre los cierres tipo mariposa de la tapa del autoclave, en forma de cruz, es decir, por extremos opuestos. 6. Siente la autoclave en la parrilla destinada para su calentamiento, encienda los mecheros necesarios y colquelos debajo de la parrilla de calentamiento. 7. Espere a que comience a salir vapor de agua por la vlvula de escape, cuando el flujo de vapor sea constante, deber cerrar perfectamente la vlvula de escape. 8. Se debe monitorear el manmetro de la autoclave, cuando la aguja de ste llegue a 15 lb se comienzan a contar 15 minutos y se controla el calentamiento de manera que la aguja se mantenga constante en 15 lb. 9. Cuando hayan transcurrido los 15 minutos, se debern apagar todos los mecheros y se debe dejar enfriar hasta que la aguja del manmetro llegue nuevamente a 0. 10. Cuando la aguja este en 0, se debe abrir con cuidado la vlvula de escape, para liberar la presin interior. 11. Despus de liberar el vapor, se proceder a abrir la tapa de la autoclave y se retirar el material estril. 12. Finalmente se procede a la limpieza del equipo, para su posterior uso.

Figura 05.- Autoclave.

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