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TEMA 40

MTODOS DE ESTUDIO DE LOS VIRUS MTODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO. MTODOS DE IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN VIRICA. DIAGNSTICO LABORATORIAL DE LAS ENFERMEDADES VRICAS.
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Tema 40 Virologa

MTODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO


PARASITOS INTRACELULARES ESTRICTOS

CLULAS VIVAS

Animales de laboratorio

Embrin de pollo

Cultivos celulares

CULTIVOS CELULARES Primarios, Secundarios y Lneas celulares

RGANOS y TEJIDOS
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Tema 40 Virologa

ANIMALES DE LABORATORIO

INOCULACIN DE ANIMALES POTENCIALMENTE SENSIBLES CON DOSIS Y VIAS ADECUADAS TIPOS DE ANIMALES: Primates, Hmsters, Ratones, Conejos.

ACTUALMENTE SE UTILIZAN EN: * ESTUDIOS DE LOS MECANISMOS DE PATOGENICIDAD Y RESPUESTA INMUNE * PRODUCCIN DE ANTICUERPOS EN GRANDES CANTIDADES (conejos especialmente)

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Tema 40 Virologa

EMBRIN DE POLLO

MTODO IMPACTANTE EN LOS AOS 50 (s.XX). VENTAJAS


1.- Animal bacteriolgicamente estril 2.- Escaso riesgo de virus latentes 3.- Falta de especializacin de los tejidos del embrin 4.- No respuesta inmunitaria.
channel.nationalgeographi c.com/staticfiles/NG

METODOLOGA
1.- EDAD: 5-14 das despus de su fertilizacin. 2.- VIAS DE INOCULACIN: saco vitelino, cavidad alantoidea, cavidad amnitica y membrana corioalantoidea,

3.- INCUBAR Y OBSERVAR ALTERACINES PRODUCIDAS


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VAS DE INOCULACIN

http://www.cmbi.bjmu.edu.cn/

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Tema 40 Virologa

EJEMPLOS DE CRECIMIENTO VIRAL EN EMBRIN DE POLLO

Virus
Herpes simplex Herpes simplex Poxvirus Influenza Newcastle Aviadenovirus

Va de inoculacin
Saco vitelino Membrana corioalantoidea Cavidad alantoidea

Signos
Muerte Pstulas Hemaglutinacin Muerte Muerte Hemaglutinacin
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Influenza

Cavidad amnitica

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Cultivos celulares

Adulto

Embri n

Huev o

DISECCIN

DIGESTION ENZIMTIC A

MICRO TRITURACIN

DISECCIN POSTERIOR

CULTIVOS CELULARES

Explantes primarios

RGANOS y TEJIDOS
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Cultivos celulares
*Disgregacin celular por mtodos enzimticos (tripsina o colagenasa) o mecnicos de un tejido u rgano.
www.utechproducts.com

CULTIVOS PRIMARIOS (510 divisiones)

CULTIVOS SECUNDARIOS estirpes celulares diploides (50100 divisiones)

www.microbelibrary.org

LINEAS CELULARES (indefinidas)

Conservan caractersticas Tipos: Fibroblasto Epitelial

Tipo celular predominante de mayor longevidad

Clulas indiferenciadas, inmortales, que han modificado su dotacin gentica, perdida de caractersticas morfolgicas y bioqumicas
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EJEMPLOS DE LNEAS CELULARES

Nombre
HeLA HEL Vero BHK CHO RK MDCK

Especie
Humano Humano Mono Hmster Hmster Conejo Perro

Tejido
Crvix Pulmn Rin Rin Ovario Rin Rin
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VALORACIN DEL CRECIMIENTO VRICO EN LOS CULTIVOS CELULARES

EFECTO CITOPTICO HEMOADSORCIN INMUNOFLUORESCENCIA

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Tema 40 Virologa

1.- EFECTO CITOPTICO


CAMBIOS DE COLOR DEL MEDIO CAMBIOS MORFOLGICOS EN LAS CLULAS * AUMENTO DE GRNULOS CITOPLASMTICOS * CONTRACCIN CELULAR * PERDIDA DE MORFOLOGA * INCLUSIONES CITOPLASMTICAS / INTRANUCLEARES
www.tau.ac.il/lifes ci/departments/bio tech/members/roz enblatt/fig1.html

* FORMACIN DE SINCITIOS

LISIS CELULAR

www.scielo.br/i mg/revistas/rsp/ v34n4/2532f1.jpg

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Tema 40 Virologa http://www.flucenter.org/files/Virusreplication.jpg

2.www.hipo-online.de

HEMADSORCIN

3.INMUNOFLUORESCENCIA
Indirect immunofluorescence of RSV antigen in infected epithelial cells. www.virologyj.com

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Tema 40 Virologa

DIAGNSTICO LABORATORIAL DE LAS ENFERMEDADES VRIAS

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Mtodos directos: 1.1 Toma de muestra 1.2 Demostracin virus en muestra e identificacin: Microscopia electrnica, tcnicas inmunolgicas de deteccin de antgeno, Deteccin e identificacin de cidos nucleicos y/o protenas virales. 1.3 Cultivo, aislamiento e identificacin: Animales experimentacin, embrin de pollo, lneas celulares.

2) Mtodos indirectos: tcnicas inmunolgicas 2.1.-Primarias: ELISA, RIA, Inmunoblotting,etc

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2.2.-Secundarias: Aglutinacin, neutralizacin, fijacin de complemento, etc.

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