EL MICROSCOPIO

1.-INTRODUCCION La historia del desarrollo y progreso de la Ciencia ptica va aparejada, o mejor dicho, es la del Microscopio. Como aparato ptico auxiliar en la investigacin cientfica ha adquirido con el decurso del tiempo una importancia trascendental, sin precedentes en la historia de los grandes progresos de las ciencias, de la biologa en particular. No es exagerado ni aventurado afirmar que entre los mltiples instrumentos destinados a la exploracin cientfica no existe en la actualidad otro que tenga tantas aplicaciones, que se haya generalizado tanto y rinda mayores ventajas que el microscopio. Virtualmente ello encarna un imponderable valor definitivo en el campo de la Ciencia. En efecto, hay ciencias basadas exclusivamente en l y cuyo desarrollo no haba sido posible hasta que el microscopio alcanz cierto grado de perfeccin. La Bacteriologa, la Petrografa y la Metalografa son buenos ejemplos de ello. Otras hay, como la Medicina, la Biologa, la Historia Natural, la Qumica, etctera, que precisan apelar ineludiblemente a la Microscopia para completar los estudios hechos a simple vista (macroscpicamente). Sin su hallazgo el estudio de las cosas y de los seres, o entidades sumamente pequeas, microscpicas para el alcance de la vista normal del micrgrafo, habra sido prcticamente imposible. El ojo humano, por su especial estructura anatmica, tiene su capacidad visual; de ah la necesidad de ampliar las impresiones percibidas por nuestra retina con el auxilio de distintos mecanismos o medios pticos, como es el caso del microscopio, por ejemplo. El conocimiento objetivo, especialmente de los diminutos individuos vivientes que pululan a millares en una gota de agua _ponemos por caso- positivamente ha sido asombro del cientfico de todos los tiempos. Y la comprobacin experimental de que la textura de animales y plantas en ltimo anlisis se reduce a una confederacin de tejidos y stos a su vez de clulas federadas, potencialmente capaces cada una de ellas de vida independiente, con una organizacin y estructura complejas; as como el hecho

comprobado de que la suma total de energas elaboradas por cada uno de estos microscpicos componentes celulares, imprimen a la totalidad del individuo, vegetal o animal, el sello especfico de su estirpe en la escala correspondiente, es, repetimos, cosa que maravilla y causa sensacin al hombre de ciencia. El microscopio nos sirve para la observacin de objetos prximos, pequesimos, indivisibles macroscpicamente. Nos da imgenes invertidas, o sea que el lado derecho del objeto amplificado aparece en la izquierda en la imagen ptica, y la cara superior de aqul se ve en la parte inferior de sta. Goza de un enorme poder de amplificacin, pudiendo sobrepujar a varios miles de dimetros. Fundamentalmente consiste su mecanismo en la adaptacin de sistemas de lentes de aumento (lentes convergentes) en los extremos de un tubo cilndrico ennegrecido interiormente. Las colocadas en la parte superior del tubo se llaman oculares y las del extremo inferior, objetivos. De suyo son consideradas como la parte ms importante y noble de este instrumento amplificante. Se construyen -las lentes- de varias calidades: de crow-glass, de flint-glass, que son acromticas; de cuarzo, monocromticas; de feldespato; de fluorita, llamadas semiapocromticas (estas lentes de espato fluor superan en bondades a las anteriores por su escassimo ndice de refraccin y mnima dispersin de los colores, no alcanzada por ninguna mezcla de cristales fundidos); y por ltimo, las lentes apocromticas, de fosfato y borato, con las que se alcanza la mxima perfeccin por la nitidez y uniformidad de la imagen y ausencia de toda aberracin. Por el corto espacio que disponemos no nos es dable seguir paso a paso la trayectoria ascendente del desarrollo del microscopio, desde el sencillo cristal o vidrio de aumento hasta llegar al microscopio electrnico, la mxima expresin evolutiva en lo que concierne a los aparatos de ampliacin ptica que la ciencia dispone actualmente. Seremos concisos a fin de llenar nuestro cometido, limitndonos a sealar y resear en ligera sntesis historial las etapas esenciales de su progresivo desenvolvimiento, omitiendo el comentario de la extensa y nutrida bibliografa que hay sobre esta materia.

2.-TIPOS DE MICROSCOPIO A. Lupas y Microscopio "simple" Un microscopio simple es aquel que solo utiliza un lente de aumento. El ejemplo ms clasico es la lupa. El microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados. El objeto por observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor sea el poder diptrico del lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de la visin ntida del sujeto. El holands Anton Van Leeuwenhoek construy microscopios muy eficaces basados en una sola lente. Esos microscopios no padecan las aberraciones que limitaban tanto la eficacia de los primeros microscopios compuestos, como los empleados por Robert Hooke, y producan una ampliacin de hasta 300 veces; gracias a ellos Leeuwenhoek fue capaz incluso de describir por primera vez las bacterias. Posteriormente, y con destino a la investigacin cientfica, aparecieron las lentes o lupas y el mismo microscopio "simple" con dispositivos especiales y con un poder de ampliacin de la imagen observada de no ms de cuarenta dimetros. Oportuno es consignar aqu que tanto los anteojos como las lupas o lentes (antecesores del microscopio) operan como microscopios simples. Prcticamente son iguales. De ordinario una lupa est compuesta por una sola lentecilla convergente, aunque las hay que se componen de un juego de dos o tres (bilupas, trilupas). Se confeccionaban con monturas especiales, permitiendo superponer o intercambiar lentes de distinto aumento y observar simultneamente, a creciente ampliacin, el objeto de examen. Ellas nos dan una imagen virtual derecha y una ampliacin variable de 5 a 40 dimetros. Igual que el microscopio simple. Este ltimo tambin est compuesto de una sola lente, pero generalmente comprende un juego (sistema) de dos o tres lentes superpuestas, plano-convexas, separadas una de otra por un diafragma. En su construccin se han aadido dispositivos y accesorios que facilitan la manipulacin y el examen ptico.

Tanto la lupa como el microscopio simple estn destinados a obtener una idea general o imagen panormica y topogrfica del objeto examinado, as en entomologa, como en botnica, o como en mineraloga, determinando los caracteres especficos de los insectos, de las plantas y de los cristales. Por su dbil aumento son muy tiles para los que se dedican a las disciplinas de la historia natural. El microscopio simple aventaja al microscopio compuesto solo en la luminosidad, pues sta es ms amplia y por ello se notan menos los inconvenientes de la esfericidad y cromaticidad de que adolecen los microscopios compuestos cuando no estn equipados con lentes de superior calidad. Los mtodos de ese entonces para la confeccin de las lentes no podan ser ms primitivos y burdos. "El procedimiento de fabricacin consista en fundir al soplete glbulos de vidrio, que se procuraba fueran lo ms pequeos y lo ms esfricos posibles". Como se ve, nuestros primeros observadores de microorganismos y objetos diminutos carecan de medios tcnicos apropiados para tallar lentes y construirlos mejores.

B. Microscopio "compuesto" La denominacin de "microscopio" fue dada por Johann Giovanni Faber (1570-1640) de Bamberg en 1624 o 1625; mdico residente en Roma y al servicio del papa Urbano VII; miembro de la Academia de Lincei. El vocablo proviene de dos voces griegas: micros, pequeo y skopein, ver, examinar. Parece evidente que el microscopio "compuesto" fue inventado _si cabe el trmino- en el ao 1590 por Hans (padre) y Zacarias (hijo) Janssen, de Middelbourg, Holanda (no es raro encontrar la referencia de que ambos fueron hermanos); principalmente por Zacarias, quien, aseguran, combinaba dos lentes simples convergentes: una operaba de "objetivo" y la otra de "ocular". No obstante, la paternidad del microscopio ha sido muy discutida y disputada. Tenemos por ejemplo que los italianos atribuyen el singular invento a su compatriota el famoso Galileo Galilei, (1564-1642), natural de Pisa, eminente fsico y matemtico. Segn testimonios lo que hizo el pisano Galileo, fundador del mtodo experimental y de la ciencia dinmica, fue, en el 1609 (historiadores hay que sealan el 1634), combinar las lentes o cristales de aumento (una lente biconvexa le sirvi de ocular) en un tubo de plomo o cartn construido por l mismo, aplicndolas al estudio de la astronoma, pero, afirman, en conocimiento ya del aparato ptico inventado por los Janssen. Tal aparato de Galileo, al que consigui dotar de treinta aumentos, si se considera como el primer telescopio inventado. Pero ni an ste parece ser realmente su descubridor; pues se sabe que su contemporneo Hans Lippershey tena un telescopio y que Galileo indag sus fundamentos, y ya en posesin de ellos construy el suyo, mejorndolo por supuesto. No extraa tal confusin si nos atenemos a que los principios pticos de construccin del microscopio y telescopio son comunes, coincidentes; guardan al menos estrecha semejanza, y el paralelismo o similitud de su gnesis y congruentes relaciones histricas atestiguan que estn profundamente vinculados, asociados, al extremo que no haba en ese entonces una denominacin que los distinguiera entre s. Ms an, se dice que los primeros instrumentos se construan en forma tal que rendan un doble servicio: como microscopio y como telescopio. Esta circunstancia ambigua ha llevado a ciertos autores a suponer que los Janssen son los inventores y primeros constructores de ambos aparatos.

El hecho de haber construido sus propios microscopios, como sucedi con Galileo, Fontana, Drebbel, Kircher, Hooke, Leeuwenhoek, etc., no les acredita obtener la patente de inventores como sus bigrafos pretenden. Por las computaciones cronolgicas, como luego veremos, la progenitura del invento pertenece sin disputa a los Janssen. Ms la realidad parece ser que el microscopio es un producto, como sugiere Julio Aruz, "de una serie de ensayos, que datan de muy lejos, ya que en toda la antigedad se encuentran descripciones ms o menos vagas, de instrumentos amplificadores de la visin". Desde luego, es cierta la comprobacin de un lento perfeccionamiento, de siglo tras siglo, de este imponderable aparato ptico con sus respectivos anexos. Su desarrollo progresivo, del sencillo lente hasta el microscopio electrnico, ha marchado al comps de la necesidad y de la natural curiosidad del hombre cientfico que iba "in crescendo" en el campo de la investigacin. Sembrada la inevitable duda en cuanto a su verdadero progenitor, inventor o creador, se hace asimismo difcil precisar con exactitud la fecha de su nacimiento, por ser, como se ha visto, producto de una lenta y gradual evolucin que se pierde en las brumas de la antigedad. De la digresin anterior infirese que quizs no sera correcto hablar del "inventor" del microscopio sino del "primer constructor" o "fabricante". Y partiendo sobre esta base s puede afirmarse que los primeros microscopios fueron "fabricados" por Hans y Zacaras Janssen, en el 1590, como tenemos dicho, y que Holanda es la cuna del microscopio.

-Los que perfeccionaron el microscopio Durante mucho tiempo los progresos que se observaban en la parte mecnica como en la parte ptica permanecieron casi estables, o apenas perceptibles, salvedad hecha de pequeas modificaciones que mejoraban con relativa lentitud el equipo ptico y mecnico. Los constructores de microscopios centraron su atencin especialmente en los anexos de iluminacin y en los soportes, pues los escasos conocimientos que tenan sobre la naturaleza del vidrio y su influencia sobre la dispersin de la luz, los haba detenido. A continuacin ofrecemos una breve resea sinttica, en orden cronolgico (durante tres siglos y medio), de los cientficos (omitiendo a los Janssen y Galileo por habernos ya referido a ellos) que aportaron sus conocimientos al mejoramiento del microscopio, dndose el caso que algunos de los pioneros construyeron sus propios aparatos. Del microscopio de Francisco Fontana (1618) se dice que llevaba engastadas y fijas dos lentes cncavas en ambos extremos del tubo. Dise y construy su propio microscopio. De Cornelio Drebbel (1572-1634) se afirma que obtuvo un microscopio de Janssen y dise los suyos all por los aos 1619-23 sobre el modelo holands, mejorndolo; pues proporcionaba aumentos variables con slo modificar la longitud del tubo, y aseguran, que "producan la inversin de la imagen". Ren Descartes (1596-1650) hace hincapi, en el 1637, sobre la utilidad de los espejos cncavos e indica el "uso de lentes aisladas de foco corto". El ingls Roberto Hooke (1635-1703) construy en el 1665 sus propios microscopios, aventajando sus modelos en mucho a sus antecesores, en lo que respecta a la parte mecnica. En el 1668, Eustaquio Divini (1620-1695) le imprimi un nuevo impulso al microscopio. Combin varias lentes "constituyendo un sistema fijo"; mejor para el ocular la aberracin de esfericidad, dotando al campo visual de un rendimiento mayor

de luminosidad. Se informa que con ello alcanz a darle al microscopio un aumento hasta de 143 dimetros. El sabio holands Antony van Leeuwenhoek (1632-1723) tuvo en el 1670 microscopio de propia ejecucin. Y por los aos 1673-1723 pula lentes pequesimos con tal perfeccin que eran asombro en su poca, logrando obtener en algunas un aumento hasta de 270 dimetros. Negose siempre a descubrir el secreto de su arte de tallar cristales. Calclase que lleg a construir 247 microscopios y diseado y pulido 419 lentes para objetivos. El ptico John Marshall, ingls, cre la novedad del condensador de luz, lente colectora que se coloca bajo la platina, y dise la columna articulable. Christian G. Hertel, aproximadamente por el 1710, acondicion por primera vez el espejo plano para la luz refracta y construy una platina desplazable (platina mvil) en todos sentidos mediante tornillos, a la par que le dotaba de un micrmetro de tornillo para su consiguiente graduacin focal. Por aquella misma poca, James Wilson le dio un nuevo impulso, perfeccionando en algo las lentes y los medios de iluminacin, llegando a dotar al aparato ptico hasta un aumento de cuatrocientos dimetros. Con l el equipo mecnico y ptico habase perfeccionado considerablemente y registrado un adelanto importante. Al ingls Edward Culpeper, por el 1730, se le debe la creacin de la lente intermedia en el objetivo, constituyndolo en sistemas y cre el tubo de deslizamiento mejorando as su enfoque. A Nathanael Lieberkn (1711-1756), clebre anatomista alemn, se le debe el invento, en el 1733, del microscopio solar (especie de linterna mgica, apropiado para la proyeccin, cuyo principio parece haber sido expuesto en el 1671 por Athanasius Kircher); e insinu la utilidad del espejo cncavo de plata para la iluminacin directa. El mecnico ingls John Cuff, 1744, mejor el modelo de Culpeper y dot al microscopio de una columna-soporte fija, con su respectivo pin y cremallera que afinaba el enfoque. El espejo era cncavo y articulable, sujeto a la columna-soporte, sta podase doblar angularmente.

A George Adams (1708-1773) se le atribuye tambin el haber creado pin y cremallera que regula el enfoque y diseado el microscopio montado sobre un trpode. Johannes Bleuler, en el 1780, incorpor el porta-condensador (mejorando la innovacin de Marshall), movible, desplazable, que va articulado en la columna. William Hyde Wollaston (1760-1828) fue el primero que utiliz el prisma, en el 1811, para dibujar. Se le atribuye haber introducido mejoras en el condensador. El "condensador de inmersin" fue creado por H. F. Wenhan Unia, a favor de la esencia de trementina, el portaobjeto con la lente frontal del condensador, evitando de esta suerte "la reflexin luminosa de su cara inferior". Tambin dise los paraboloides de metal "que proyecta el haz luminoso sobre la preparacin con un ngulo de mayor inclinacin". Sera por el ao 1855. A Charles Chevalier, en el 1823 se le debe la construccin de lentes acromticos para el microscopio (el acromatismo fue descubierto en 1729 por Chester More Hall. Dot al objetivo el verdadero carcter de sistema (varios pares de lentes acromticas atornilladas una tras otro constituan el sistema) logrndolo mediante la interposicin de una lente intermedia bicncava que indic Selligne. Los Chevalier (padre e hijo) introdujeron el uso del Blsamo de Canad para unir las lentes y los diafragmas. La misma firma, en 1870, introdujo el uso del "diafragma iris". Giovanni Battista Amici (1786-1883), en Mdena, emple por el 1829 una lente frontal semiesfrica, perfeccionando los "sistemas a seco que aventajaban a todos los dems objetivos anteriores". En el 1844 (otros autores sealan el 1850) cre el "objetivo de inmersin". Amici interpona agua entre el cubre-objeto y el objetivo como "medio de inmersin". Con tal mtodo, que lo haca en forma emprica, lograba aprovechar ciertos rayos luminosos agrandando y mejorando la formacin de la imagen. No slo con agua experiment Amici, sino que tambin empleo el aceite de anis. La adicin del objetivo de inmersin resolvi parcialmente el problema del "poder de resolucin" y "magnificencia". El fsico Ernest Abbe (1840-1905), discpulo del no menos famoso Zeiss, perfeccion el principio de Amici y expres que el rendimiento de un objetivo obedeca a su "apertura numrica", en otros trminos: "por la cifra que resulta del producto del ndice de refraccin del medio entre la lente frontal y la

preparacin y el seno de la mitad del ngulo de abertura del sistema ptico en cuestin". Y en 1878, en colaboracin con Zeiss, basndose sobre fundamentos cientficos, logr la construccin de una inmersin homognea al aceite de cedro concentrado como medio de conseguir el acromatismo, atendiendo a que este lquido gozaba de un alto ndice de refraccin. Es posible que la idea la hayan tomado de Brewster _inclusive el mismo Amici-, quien en el 1813, se dice que ya haba hecho ensayos experimentales. Mas si damos crdito al fsico Abbe, sera J. M. Stephenson el verdadero inventor del principio de inmersin homognea, por haber aplicado como "medio de inmersin" al aceite de cedro. Nos limitamos a sealar que las experiencias de este ltimo son ulteriores a las de Amici. El empleo del aceite de cedro y del monobromuro de naftalina como medios de inmersin y el aditamento de los objetivos de naturaleza apocromtica, seala no slo el progreso, sino la gnesis de la Bacteriologa, aparejado, como es natural, a los adelantos obtenidos en los mtodos tcnicos de fijacin, tincin y cultivo. Abbe, aparte de su versacin sobre el uso del aceite de cedro, tambin tuvo xito, llevando a feliz trmino la solucin del problema de "la correccin de la dispersin coloreada de la luz a su paso por las lentes". Finalmente, en colaboracin con Schott (1884), Abbe cre nuevos tipos de vidrio, de borato y fosfato, cuyas propiedades pticas permitieron la fabricacin de los afamados objetivos "apocromticos" que brindan una imagen ntida y libre de toda aberracin. Las exigencias de los investigadores de aquella poca obligaron a los pulidores de cristal hacia un mayor perfeccionamiento, no ya en la confeccin de lentes cada vez ms pequeas, de foco corto, sino que urga darle solucin a los problemas de la aberracin esfrica y cromtica. Entendindose por " aberracin cromtica" la "dispersin desigual de los componentes de la luz solar en su trayecto a travs de las lentes". Corregir esta aberracin es restar a la preparacin los contornos coloreados y borrosos. Empero, la historia del perfeccionamiento del microscopio compuesto tuvo un momento apotesico cuando el ya mencionado fsico Ernest Abbe; en las postrimeras del siglo XIX, le dio un impulso casi decisivo al construir un microscopio luminoso de una ampliacin ptica de 2000 dimetros; lmite, al parecer en ese entonces, infranqueable a

las humanas aspiraciones de nuestros abnegados cientficos. Sin embargo, ciertos grmenes bactericidas, cuya vivencia ya era sospechada, no podan ponerlos al descubierto porque sus dimensiones eran extremadamente reducidas para ser captadas por los rayos luminosos de longitud de onda normal, como es la que se emplea en los microscopios de uso corriente. C. El Ultramicroscopio Ao tras ao las fronteras de la Microscopia se amplan, se expanden considerablemente a medida de los nuevos descubrimientos, obteniendo un vastsimo campo de accin. As es como, tras el impulso que imprimi Abbe a la ptica, poco ms tarde se opt por la utilizacin de los rayos ultravioleta, por ser stos de "menor longitud de onda y de frecuencia luminosa mayor" que los rayos normales, dando resultados ms ventajosos en cuanto a su aplicacin ptica; pues, sabido es que el empleo de ondas ms cortas virtualmente determinan en un microscopio su poder de ampliacin. Y sobre la base de este principio se construy el Ultramiscroscopio o Microscopio de campo obscuro, obtenindose con l un poder limitado de unos 3000 dimetros. El primer aparato fue fabricado por Siedentoff y Zsygmondy en 1903 (hay quienes sealan el ao 1900). En lo que respecta a su historia parece que se remonta a la poca del microscopista ingls F. H. Wenham, all probablemente por los aos 1855, quien aparece en los catlogos de aquella fecha haber inventado un aparato similar llamado paraboloide, precursor indiscutible del ultramicroscopio. Merced a este modelo se dice que el alemn Siedentoff, de Jena (Alemania), de la Compaa Zeiss, en cooperacin con Zsygmondy, construy el suyo en la fecha indicada. Hasta aqu la historia del desarrollo del Microscopio. En adelante, la microscopia moderna marca una nueva etapa: la era del Microscopio electrnico. Con su advenimiento la Ciencia ptica se anota un nuevo jaln. Representa el impulso mayor que se haya podido dar en tres siglos y medio. Pero antes de entrar a la descripcin del supermiscroscopio vamos a historiar muy someramente ciertos tpicos que redondean nuestro tema; tales como: relacin de casas fabricantes de microscopios, pioneros de la investigacin cientfica, primeros aportes a la Biologa y los infecundos misoneistas.

Pioneros de la investigacin microscpica Entre los primeros cientficos que asomaron sus ojos curiosos a las lentes microscpicas con verdadero espritu de investigacin biolgica est sin duda Francisco Stellutti (1577-1651), miembro de la antigua Academia de Lincei. En 1618, como resultado de sus observaciones microscpicas describi "la fina estructura del ojo en facetas de la abeja". Le sigue, en orden cronolgico, el sabio jesuita Kircher, de quien se dice que por el ao 1646 logr observar con su microscopio los "mnima animalcula" en la tierra como en el agua, y refiere el hallazgo de "gusanos" en la sangre de los que adolecan de fiebres. Esta circunstancia lo coloca entre los primeros microbilogos, amn de haber puesto "al microscopio al servicio de las investigaciones diagnsticas". El ingls Hooke, que el 1665 descubri la clula vegetal en el tejido suberoso (corcho). Jan Swammerdan (1637-1680), que enloqueci cuando, en el 1669, sus ojos se asombraron al discernir la estructura de los seres vivos bajo la lente de su microscopio. Y el famoso Leeuwenhoek, considerado como el padre o progenitor de la Microscopa y probablemente de la Bacteriologa tambin, que en el 1675 relat haber descubierto animalillos en el agua de lluvia y afirmaba que "eran diez mil veces ms pequeos que las moscas de agua vistas por Swammerdan. Sus numerosas observaciones microscpicas y descripciones que de ellas hizo constituyen un positivo valor cientfico, pese a su profundo espritu mercantil. Hemos citado solamente a los ms antiguos. Primeros aportes a la Biologa A su vez, la investigacin microscpica aport a la Biologa, en los albores del siglo XIX, los descubrimientos siguientes: En el 1827, Karl Ernest von Baer (1792-1876) descubri el vulo de los mamferos. En el 1831, Roberto Brown (1773-1858) observ por primera vez el ncleo celular de las orqudeas. En el 1835, James Paget (1814-1899) y Richard Owen (1804-1892) describen la triquina gusano nemtode endoparasitario que hllase enquistado en el

tejido muscular, de preferencia en la carne de cerdo. En el mismo ao, 1835, Agostino Bassi habla sobre "Los descubrimientos de los agentes patgenos", y reconoci en un hongo la causa de la enfermedad de los gusanos de seda. En el 1836, Charles Caignard de la Tour (1777-1859) descubri la importancia del hongo de la levadura en la fermentacin. Y a la cabeza de todos ellos, en sitial cimero de la ciencia biolgica, figuran Mathas Jacob Schleiden (1804-1881) y Theodor Schwann (1810-1882), quienes formularon y preconizaron la famosa doctrina sobre la Teora Celular; ocurra esto en los aos 1838 y 1839. D. El Supermicroscopio o Microscopio electrnico El quid de la microscopia radica, como expresamos, ya, en la utilizacin de rayos de longitud de onda cada vez ms corta. Al tenor de este imperativo nace el Microscopio electrnico. "De la ptica de la luz, pasando por la microscopa de rayos ultravioleta y la interferometra de rayos X llegamos por camino directo a la ptica electrnica", ha dicho el Prof. E. Hintzsche. Siguiendo el curso o desenvolvimiento progresivo de la ptica, encontramos que un buen da advino el supermicroscopio, la conquista de mayor significacin que ha obtenido la Ciencia en pocas recientes. En el ilimitado radio de accin de las investigaciones ha venido a llenar una necesidad y abre un captulo aparte en la historia del perfeccionamiento de la ciencia ptica. Este instrumento ya nos permite el estudio y conocimiento de la ultra o infraestructura protoplasmtica por su extraordinario poder de resolucin, ofrecindonos imgenes considerablemente ampliadas, no vistas hasta hoy, de la textura de una clula. As, por ejemplo, con l se ha podido reconocer que las neurofibrillas son un "aparato neurotubular". Y algunos misterios de la Bacteriologa han sido dilucidados. Mas no slo la morfologa y textura fsica de los seres y de las cosas submicroscpicas ha sido destacada, pudese, inclusive, analizar la constitucin qumica de los mismos gracias a un aditamento llamado defractmetro. La construccin de este aparato tiene por base o descansa en el conocimiento de la "propiedad de los rayos catdicos de ser desviados por un campo magntico, y de que esta desviacin se realiza en forma estrictamente comparable a la que sufren los rayos lumnicos al atravesar una lente". Dedcese de ello que los rayos electrnicos

(invisibles) ofician de fuente de "luz" y de "lentes" los campos magnticos (que no son de cristal). El aparato trabaja con una corriente de 30 o 60 mil volts. La utilizacin de la descarga de rayos emitidos por un ctodo ("filamento de alambre calentado en un ambiente al vaco") es la clave bsica de este instrumento como fuente poderosa de rayos, an cuando originalmente se utiliz el ctodo fro (los aparatos suizos, con ser de modelo modernsimo, conservan el elctrodo fro). Para la difusin rectilnea y de velocidad constante de los rayos electrnicos es indispensable un alto vaco. Debido a que los rayos electrnicos tienen escaso poder de penetracin, es indispensable el uso de portaobjetos hechos de pelcula de colodin o de laca cuyo espesor no rebase de 20 micras. Los frotis y extensiones de bacterias o virus y los elementos tisulares, como las fibrillas colgenas (inofibrillas) y miofibrillas de las fibras musculares, etc., no demandan tcnica especial para su observacin, pues que el estudio se realiza al vaco; si bien, con cierta tendencia, naturalmente, a sufrir leves desajustes o modificaciones estructurales y morfolgicas por efectos de una dbil deshidratacin. En tocante al estudio histolgico de los rganos se hace posible encastrando el rgano en mezclas apropiadas al alcanfor y naftalina, en sustitucin de la parafina, celoidina, etc., como medios de inclusin ordinaria. Y para la obtencin de cortes de fracciones de micra de espesor precisa recurrir al micrtomo elctrico, equipado con una cuchilla microtmica extremadamente afilada. La imagen es proyectada sobre una pantalla impregnada con materias fluorescentes, y hay que recurrir a las fotografas hechas sobre placas ad-hoc para su estudio. Los ltimos modelos estn simplificados elctricamente y equipados con cmaras para fotografas tridimensionales (estereoscpicas) y con otras cmaras de difraccin que permiten determinar la estructura molecular de una sustancia cualquiera, as como para la investigacin en campos claro y oscuro. Pudiera resumirse que el microscopio electrnico difiere del aparato luminoso ptico comn en que el objeto que se examina es virtualmente "iluminado" por un rayo (un haz) concentrado de electrones, donde la imagen es observada indirectamente; en tanto que en el microscopio corriente la iluminacin se realiza simplemente gracias a la luz

del da (luz natural) o mediante luz artificial, siendo directa su objetivacin. Y se dice que la observacin del objeto es "indirecta" porque la imagen _en el supermicroscopioes proyectada sobre una pantalla florescente, semejante a la de los rayos X (fluroscopa). En el supermicroscopio la imagen es aumentada considerablemente por una combinacin de lentes magnticas, un tanto parecidas a las lentes pticas de un microscopio corriente. Las lentes electrnicas se construyen a base de dos tipos principales: las llamadas "electrostticas" y las "electromagnticas". Por aquella misma poca Hans Busch comprob "que una corta bobina magntica, acta sobre los electrones libres como una lente sobre la luz, es decir, que recoge en haces los rayos electrnicos". Posteriormente, en el 1931, Max Knoll y E. Ruska expresaron, ms o menos en estos trminos, que la longitud focal de la lente magntica para la obtencin de imgenes estribaba fundamentalmente en la mayor o menor intensidad de la corriente de la bobina. Aos ms tarde, a los alemanes Knoll y Ruska se sum Bodo von Borries y, tras largos y laboriosos estudios, pusieron en prctica _y esta vez con feliz xito- la idea original de Busch y Wolt, logrando dotar al aparato de un aumento potencial de unos 100 mil dimetros. Este suceso histrico ocurra en el ao 1937, en la fbrica alemana "Siemens" como escenario. Y en conocimiento de estos principios se emprendi la construccin de aparatos electrnicos en Blgica, Suiza, Inglaterra y EE.UU. A Marton, en el mismo ao 1937, le cabe el honor de haber dado a la publicidad las primeras imgenes ptico-electrnicas de clulas, bacterias, etc. He aqu la razn porque algunos autores suelen considerar a Ruska, Borries y Knoll como los pioneros y verdaderos inventores del referido supermicroscopio; cuando, en rigor, la gloria o prioridad pertenece al binomio Busch-Wolt, si nos atenemos al orden cronolgico de las experiencias cientficas y primeros trabajos experimentales. Los microscopios electrnicos de von Borries y Ruska, de Le Poole, de Hillier, etc., tenan lentes electromagnticos, de alto poder resolvente. Pero las lentes electrostticas construidas ulteriormente por E. Brche y H. Johannson dan mejores resultados. El

modelo creado por Manfred von Ardenne, 1940, es del tipo universal; es decir, que puede usarse con ptica electro-magntica o bien electrosttica. En el perfeccionamiento de este aparato no puede olvidarse el nombre del canadiense James Hillier (de Toronto), de los Laboratorios de Investigacin de la RCA Vctor (U.S.A.), quien, en 1937, desarroll un nuevo lente magntico y cuya adaptacin da por resultado un aumento aproximado de 200 mil dimetros.

D.-Microscopio de rayos X Un novsimo aparato est en vas de construccin; al menos ya lo est en fase de experimentacin. No hace muchos meses hemos visto anunciado que el poder resolutivo (ampliacin) del microscopio compuesto se aumentar considerablemente en un futuro cercano con el aditamento o dotacin de un nuevo y poderoso equipo auxiliar, los "ojos de rayos X", que la ciencia ptica mantiene en estos momentos en perodo de estudio y comprobacin. Se asegura que las primeras pruebas realizadas son ptimas y permiten predecir que competir, como instrumento ptico amplificador, al mismo microscopio

electrnico. La forma cmo trabajan los rayos X (Roentgen) de este anexo y nuevo equipo ptico la describen de la manera siguiente: "Con el microscopio de rayos X, stos pasan a travs del material que se est estudiando y despus van a parar a un par de espejos curvos, que forman un ngulo de menos de medio grado. Los espejos envan los haces de rayos X en tal forma que proporcionan una imagen aumentada de rayos X de la muestra, sobre una pelcula fotogrfica. "Los espejos son placas de cuarzo fundido, cubiertas de aluminio. Se les curva por medio de presin mecnica que pueden ajustarse a mano". Con esta apertura numrica, ngulo de abertura del objetivo y poder resolvente o poder de resolucin ya se han podido poner al descubierto muchos de los grmenes o virus cuya sospechosa existencia o identidad se basaba nicamente por los estragos (patogenicidad) que ocasionaban en el organismo. 3.-PRINCIPALES ELEMENTOS DE UN MICROSCOPIO

Diagrama simple de la ptica de un microscopio.

Los microscopios de este tipo suelen ser ms complejos, con varias lentes en el objetivo como en el ocular. El objetivo de stas lentes es el de reducir la aberracin cromtica y la aberracin esfrica. En los microscopios modernos el espejo se sustituye por una lmpara que ofrece una iluminacin estable y controlable. Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especmenes delgados, puesto que su profundidad de campo es muy limitada. Por lo general, se utilizan para examinar cultivos, preparaciones trituradas o una lmina muy fina del material que sea.

Normalmente depende de laluz que atraviese la muestra desde abajo y usualmente son necesarias tcnicas especiales para aumentar el contraste de la imagen. La resolucin de los microscopios pticos est restringida por un fenmeno llamado difraccin que, dependiendo de la apertura numrica (AN o AN) del sistema ptico y la longitud de onda de la luzutilizada (), establece un lmite definido (d) a la resolucin ptica. Suponiendo que las aberraciones pticas fueran despreciables, la resolucin sera:

Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente a la luz verde. Si el medio es el aire, la AN prctica mxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5. Ello implica que incluso el mejor microscopio ptico est limitado a una resolucin de unos 0,2 micrmetros. Poder separador, objetivos de inmersin y aumento til [editar]

Poder separador

De la teora de la difraccin sobre la formacin de imgenes mediante un microscopio se tiene que la distancia mnima entre dos puntos visibles por separado es:

Donde es la longitud de onda de la luz monocromtica en la que se observa el objeto y A es la abertura del microscopio.

Objetivos de inmersin

El medio ptico lquido que rellena el espacio entre el objeto y el objetivo se le denomina lquido de inmersin. El ndice de refraccin de este es prximo al del vidrio (se utiliza agua, glicerina, aceites cedral y de enebro, monobromonaftalina, etc.) En la figura se muestra el papel del lquido.

4.-APLICACIONES DEL MICROSCOPIO: 1. Geologa: Investigaciones geomineras, cristalogrficas, mineralgicas y petrolgicas. Estudio morfolgico y estructural de las muestras. 2. Estudio de materiales: Caracterizacin microestructural de materiales. Identificacin, anlisis de fases cristalinas y transiciones de fases en diversos materiales tales como metales, cermicos, materiales compuestos, semiconductores, polmeros y minerales. Composicin de superficies y tamao de grano. Valoracin del deterioro de materiales, determinacin del grado de cristalinidad y presencia de defectos. Identificacin del tipo de degradacin: fatiga, corrosin, fragilizacin, etc. 3. Metalurgia: Control de calidad y estudio de fatiga de materiales, caractersticas texturales. Anlisis de fractura (fractomecnica) en materiales (Ver Figura 1), un ejemplo concreto de este tipo de aplicacin se expone en la parte de trabajo prctico. 4. Odontologa: En este campo son muchas las aplicaciones de las caracterizaciones morfolgicas que se pueden realizar con el microscopio electrnico de barrido. 5. Paleontologa y Arqueologa: Caracterizacin de aspectos morfolgicos. 6. Control de Calidad: En este campo, el microscopio electrnico de barrido es de gran utilidad para el seguimiento morfolgico de procesos y su aplicacin en el control de calidad de productos de uso y consumo. 7. Peritajes: Estudios de muestras de cualquiera de las reas antes mencionadas. 8. Medicina Forense: Anlisis morfolgico de pruebas. 9. Botnica, Biomedicina y Medicina: Estudio morfolgico. 10. Estudio qumico y estructural de obras de arte, alteracin de monumentos, control de calidad, identificacin de pigmentos. 11. Peritaciones Caligrficas: Estudio de trazos. 12. Electrnica: Control y calidad de partes electrnicas.

5.-ANEXOS I.
Fsica - Serway, Raymond A. ONDAS Y OPTICA

II. http://www.investigacionyciencia.es III. http://al-quimicos.blogspot.com IV. http://www.upct.es/~sait/documentos/triptico_micros V. http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_ptico