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PROTEINOGRAMA DE CORDEIROS DE DIFERENTES GENOTIPOS INFECTADOS POR Haemonchus contortus SERUM PROTEINS OF DIFFERENT GENOTYPES SHEEPS INFECTED WITH

Haemonchus contortus
Karina Calciolari, Jos Jurandir Fagliari, Carolina Buzzulini, Fernando Augusto de Souza Campus de Jaboticabal- Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinria
Medicina Veterinria karinaveterinaria@hotmail.com - FAPESP Palavras-chave: ovinos; hemoncose; protena de fase aguda. Keywords: sheep; haemonchosi; acute phase proteins

1. INTRODUO A ovinocultura vem assumindo relevante importncia na economia brasileira devido grande capacidade de adaptao desses animais a condies ambientais adversas e maior demanda de carne ovina em nosso pas. Entretanto, a produo nacional ainda no suficiente para abastecer o mercado interno, tornando necessria a utilizao de acasalamentos de raas na tentativa de obter animais rsticos e produtivos. O parasitismo por nematdeos gastrintestinais, especialmente por Haemonchus contortus, representa grave problema sanitrio ao rebanho ovino, afetando a produtividade e causando perdas econmicas significativas. Em razo disso, foram aferidas e quantificadas as protenas de fase aguda albumina, IgG e IgA - de cordeiros Santa Ins e mestios Dorper x Santa Ins, experimentalmente infectados por H. contortus. 2 FUNDAMENTAO TEORICA E OBJETIVOS 2.1 Fundamentao terica A resposta sistmica a algumas enfermidades acompanhada por um aumento nos nveis de protenas sricas dentre as quais as protenas de fase aguda (ECKERSALL, 2000). Tais protenas participam da resposta inflamatria / infecciosa do animal frente s doenas ou leses e, portanto, a avaliao dos teores de protena total e suas fraes proporcionam subsdios para adequada interpretao do estado de hidratao, inflamao, infeco, doenas imunomediadas e perda ou diminuio da sntese protica. Segundo FAGLIARI et al (2008) o emprego da tcnica SDS-PAGE em medicina veterinria pode ser til na avaliao da cintica das protenas de fase aguda da resposta inflamatria, alm de ser um dos mtodos mais confiveis para identificao destas, facilitando a definio do diagnstico das enfermidades animais. As infeces causadas por nematdeos gastrintestinais so consideradas entrave a maior produtividade da ovinocultura. A alterao do metabolismo protico, desviada dos msculos e ossos para reparar e reagir aos danos ocasionados pelos parasitos, um dos principais efeitos do parasitismo sobre o metabolismo do hospedeiro (BORBA, 1996). 2.2 Objetivo Avaliar as alteraes do proteinograma de cordeiros pertencentes a dois gentipos, submetidos infeco experimental por Haemonchus contortus e alimentados com dietas com diferentes teores de protena.

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3.MATERIAL E METODOLOGIA 3.1 MATERIAL

Foram utilizados 20 cordeiros, machos, recm-desmamados com peso mdio de 17kg, sendo 10 da raa Santa Ins e 10 mestios Dorper x Santa Ins. Infeco experimental dos cordeiros: inoculo contendo 1.000 larvas infectantes (L3) de H. contortus. Para coleta de sangue foram utilizados frascos siliconizados (Vacutainer BD), associado a agulhas e porta agulha para sistema vcuo. Material para preparo do gel de poliacrilamida - Agua deionizada, acrilamida, glicerol, lauril sulfato de sdio, persulfato de amnia, trizma base, EDTA, TEMED. Material para corrida eletrofortica pela tcnica SDS-PAGE - placas de vidro, cubas, fonte de energia (30 a 45 miliamperes), soluo tampo. Material para corar e descorar os gis de poliacrilamida - soluo de azul de coomassie (constituda por 50% de metanol, 40% de gua, 9,75% de cido actico glacial e 0,25% de azul de coomassie), cido actico a 7%.
3.2 METODOLOGIA

A fase de campo do experimento foi conduzida no Centro de Pesquisas em Sanidade Animal (CPPAR). Os cordeiros permaneceram confinados at completarem 35kg de peso corporal, poca de abate. De acordo com o gentipo, os cordeiros foram subdivididos em dois grupos infectados recebendo, respectivamente, dieta com menor teor (12%) e maior teor de protena bruta (20%). Todos os cordeiros receberam um inoculo contendo 1.000 larvas infectantes (L3) de H. contortus, por dose, duas vezes por semana, durante todo o experimento. Amostras de 10 mL de sangue sem anticoagulante foram colhidas, semanalmente, de todos os cordeiros, por meio do sistema vcuo, em frascos siliconizados. O fracionamento das protenas sricas a partir do soro dos animais foi desenvolvido no Laboratrio de Apoio Pesquisa do Departamento de Clnica e Cirurgia Veterinria da FCAV-UNESP-Cmpus de Jaboticabal. Este foi realizado por meio da tcnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sdio (SDS-PAGE), conforme tcnica descrita por LAEMMLI (1970). Aps fracionamento o gel foi corado durante 2 horas em soluo de azul de coomassie. Em seguida este foi colocado em soluo de cido actico a 7% para retirar o excesso de corante, at que as fraes proticas ficassem ntidas. A leitura das fraes proticas foi realizada em videodensitmetro gerando um grfico no qual as bandas puderam ser comparadas, possibilitando diviso e evidncia das principais fraes proteicas. Como modelo estatstico utilizou-se delineamento inteiramente casualizado, com dois gentipos, duas dietas e sete momentos de observao. Os dados foram submetidos anlise de varincia e as mdias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significncia (SAS, 1996).
4. RESULTADOS E DISCUSSES Os resultados referentes ao traado eletrofortico da frao albumina para os cordeiros de diferentes gentipos recebendo as duas dietas experimentais, encontram-se na Tabela 1.

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Tabela 1. Comparaes mltiplas da concentrao de Albumina no soro de cordeiros infectados por H. contortus e recebendo dietas com diferentes teores proticos. Perodo Experimental (dias) 0 21 28 35 42 49 63 T1: D x SI,12% PB 2,059 2,004 2,061 2,056 2,177 2,260 1,989 Ba Ba Ba Ba Ba Ba Ba Valores mdios de Albumina (mg/dL) T2: D x SI, 20% PB 2,831 2,604 2,447 2,964 2,545 2,871 3,126 ABab ABab ABb ABab ABab ABab Aa T3: SI, 12% PB 3,191 3,118 3,322 3,279 3,518 3,600 3,263 Aa Aba ABa ABa ABa Aa Aa T4: SI, 20% PB 3,096 3,546 3,661 3,404 3,662 3,591 3,666 Ab Aab Aab Aab Aab Aa Aa

Mdias seguidas por letras iguais, maiscula na linha e minscula na coluna, no diferem entre si pelo teste Tukey (P>0,05)

Observa-se que o gentipo Dorper x Santa Ins mantido com a dieta de menor teor protico apresentou os menores valores mdios de albumina, sendo, inclusive, inferiores ao valor de referncia citado por KANEKO et al. (1997), 2,4 3,0 mg/dL. Tais resultados demonstram maior suscetibilidade deste gentipo infeco por H. contortus, especialmente quando o valor nutricional da dieta no fornece condies suficientes para suportar os efeitos patofisiolgicos da infeco. Os valores mdios de albumina para os demais grupos experimentais estiveram dentro da normalidade para a espcie ovina. As maiores concentraes sricas deste metablito foram observadas nos cordeiros Santa Ins, sendo que em cinco dos sete momentos avaliados, os maiores valores foram encontrados nos cordeiros Santa Ins alimentados com a dieta contendo 20% de protena bruta. Na Tabela 2 esto resumidos os resultados da eletroforese para gamaglobulina G.
Tabela 2. Comparaes mltiplas da concentrao de IgG no soro de cordeiros infectados por H. contortus e recebendo dietas com diferentes teores proticos. Perodo Experimental (dias) 0 21 28 35 42 49 63 T1: D x SI,12% PB 0,9658 0,9938 0,9792 1,1658 1,0894 1,0172 1,1710 Aa Aa Aa ABa Aa Aa ABa Valores mdios de IgG (mg/dL) T2: D x SI, 20% PB 1,0630 1,1278 1,0148 0,8606 0,8772 0,9444 0,9212 Aa Aa Aa Ba Aa Aa Ba T4: SI, 12% PB 1,2836 1,2892 1,1482 1,5932 1,3528 1,4506 1,6090 Aa Aa Aa Aa Aa Aa Aa T5: SI, 20% PB 1,3616 1,1870 1,1924 1,2054 1,3068 1,1485 1,1195 Aa Aa Aa ABa Aa Aa ABa

Mdias seguidas por letras iguais, maiscula na linha e minscula na coluna, no diferem entre si pelo teste Tukey (P>0,05)

Na frao gamaglobulina encontram-se as diferentes imunoglobulinas e a dosagem destas protenas uma forma indireta de avaliar o estado imune dos animais (KANEKO et al., 1997). A IgG representa 73% das imunoglobulinas e tem a capacidade de migrar por toda a banda da frao gamaglobulina (PAULA E SILVA et al., 2008). Observa-se que o traado eletrofortico da IgG foi praticamente similar durante cinco dos sete momentos avaliados, diferenciando-se (P<0,05) nos momentos 35 e 63, nos quais as menores concentraes foram detectadas nos cordeiros Dorper x Santa Ins alimentados com 20% de protena bruta. As concentraes mdias de IgA determinadas ao longo do experimento constam da Tabela 3.

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Tabela 3. Comparaes mltiplas da concentrao de IgA no soro de cordeiros infectados por H. contortus e recebendo dietas com diferentes teores proticos. Perodo Experimental (dias) 0 21 28 35 42 49 63 T1: D x SI,12% PB 0,0766 0,1168 0,0982 0,1324 0,1156 0,1086 0,0974 Aa Aa Aa Aa Aa Aa Aa Valores mdios de IgA (mg/dL) T2: D x SI, 20% PB 0,0736 0,0815 0,0878 0,0540 0,0820 0,0852 0,0762 Aa Ba Aa Ba Aa Aa Aa T3: SI, 12% PB 0,0800 0,0604 0,0960 0,0740 0,0986 0,0780 0,0373 Aa Ba Aa Ba Aa Aa Aa T4: SI, 20% PB 0,0852 0,0628 0,0670 0,0484 0,0632 0,0623 0,0508 Aa Ba Aa Ba Aa Aa Aa

Mdias seguidas por letras iguais, maiscula na linha e minscula na coluna, no diferem entre si pelo teste Tukey (P>0,05)

Representando 19% das imunoglobulinas, a IgA exerce importante funo protetora das mucosas e fluidos corporais (PAULA E SILVA et al., 2008). Neste estudo, nota-se que nos momentos zero, 28 e 42 a 63, a concentrao de IgA foi semelhante em todos os grupos experimentais. Aos 21 e 35 dias ps-incio da infeco por H. contortus, observa-se que os valores mdios de IgA foram superiores nos cordeiros Dorper x Santa Ins alimentados com a dieta de menor teor protico (T1). Provavelmente, tais resultados sejam decorrentes da maior suscetibilidade deste gentipo a hemoncose, caracterizando a ao das larvas (L3 e L4) que penetram profundamente nas glndulas gstricas lesando a mucosa do abomaso e, tambm, a hematofagia provocada pelas L4 e adultos FREITAS, (1976) 5. CONCLUSES Os resultados obtidos neste experimento demonstram maior suscetibilidade do gentipo Dorper x Santa Ins a hemoncose, caracterizado pelas alteraes do proteinograma, principalmente a reduo da concentrao srica de albumina e aumento da frao IgA.

Referncias Bibliogrficas BORBA, M. F. S. Efeitos do parasitismo gastrintestinal sobre o metabolismo do hospedeiro. In: SILVA SOBRINHO, A. G. Nutrio de ovinos. Jaboticabal: FUNEP, 1996, p. 213-233.

ECKERSALL, P. D. Recent advances and future prospects for the use of acute phase proteins as markers of disease in animals. Revue de Medecine Veterinaire, Toulouse, v. 151, p. 577-584, 2000. FAGLIARI, J. J.; SILVA, S. L.; SILVA, P. C.; PEREIRA, G. T. Leucograma e teores plasmticos de protenas de fase aguda de eqinos portadores de abdmen agudo e submetidos laparotomia. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinria e Zootecnia, v. 60, n. 2, p. 322-328, 2008. FREITAS, M. G. Helmintologia veterinria. Belo Horizonte: Copiadora e Editora Rabelo & Brasil, 1976. 396p. KANEKO, J. J.; HARVEY, J.W.; BRUSS, M.L. Clinical biochemistry of domestic animals. 5. ed. San Diego: Academic Press, 1997. 932p. LAEMMLI, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, London, v. 227, p. 680-685, 1970. PAULA E SILVA, R. O.; LOPES, A. F.; FARIA, R. M. D. Eletroforese de protenas sricas: interpretao e correlao clnica. Revista Mdica de Minas Gerais, Belo Horizonte, v. 18, n. 2, 116-122 p., 2008. SAS Statistical Analysis Systems. Users guide. North Caroline: SAS Institute, 1996.

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