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1 INTRODUO
O conceito de esterilidade definido como a completa ausncia de micro-organismos viveis, que apresentam capacidade de desenvolvimento e multiplicao quando em condies favorveis. Segundo as farmacopias, a esterilidade de um produto depende de condies do processo produtivo e deve ser confirmada submetendo-se ao teste de esterilidade uma amostra representativa do produto, que indique a ausncia de micro-organismos viveis (AKERS, 1921). O teste de esterilidade tem por finalidade o contato do produto com o meio de cultura, de forma a permitir a deteco de micro-organismos viveis em produtos que tenham sido submetidos a algum processo de esterilizao durante o ciclo da fabricao. A incubao do produto em meio de cultura, dever permitir o crescimento de bactrias, bolores e leveduras (BATHGATE et al., 1993) O teste de esterilidade pode ser realizado utilizando os mtodos de filtrao em membrana ou de inoculao direta conforme a natureza do produto, exceto quando um dos mtodos for especificado na monografia individual (BRASIL, 2010) O mtodo empregando a inoculao direta consiste na transferncia de massas ou volumes preestabelecidos da amostra para meios de cultura apropriados. No caso de amostras lquidas, a transferncia pode ser por meio de pipetas, seringas ou serem vertidas diretamente no meio de cultura. No caso de amostras slidas, a transferncia pode ser por meio de esptulas com volumes padronizados ou por adio prvia de diluentes estreis, com posterior transferncia da soluo ou suspenso resultante (BARRICHELLO,1997). gua para injetveis o insumo utilizado na preparao de medicamentos para administrao parenteral, como veculo ou na dissoluo/diluio de substncias ou de preparaes. Outros exemplos de aplicaes farmacuticas so a fabricao de princpios ativos de uso

parenteral, para lavagem final de equipamentos, tubulao e recipientes usados em preparaes parenterais e na limpeza de certos equipamentos (BRASIL, 2010).

2 OBJETIVO
Testar a esterilidade da gua para injetveis utilizando o mtodo direto.

3 MATERIAIS
Bico de Bunsen Tubos de ensaio Ala de inoculao Meio caldo tioglicolato Meio caldo casena-soja gua para injetvel Vortex Soluo Salina Cultura de Bacillus subitilis Estufa Pipetas Seringa

4 METODOLOGIA

Fez-se o teste de esterilidade utilizando gua para Injetveis, do fabricante Equiplex, de nmero de lote 15004 e com data de validade 07/10. A metodologia empregada foi a inoculao direta:

No tubo de ensaio contendo meio de cultura inclinado, previamente preparado com Bacillus subtilis, verteu-se salina e raspou-se o microorganismo com ala de platina.

Verteu-se a soluo de salina com o micro-organismo no tubo onde estava previamente a salina, homogeneizou-a no vrtex e fez-se diluies com o objetivo de se obter suspenso comparvel ao tubo nmero trs da escala de MacFarland. Obteve-se assim, a suspenso microbiana.

Fez-se sucessivas diluies da suspenso microbiana em suspenso salina at obter-se aproximadamente 90 UFC. Em tubos de ensaios, preparou-se o controle negativo com 15 ml de meio caldo casena-soja em duplicata. Fez-se o mesmo com o meio caldo tioglicolato.

Preparou-se o controle positivo com o meio caldo casena-soja e 1ml da suspenso microbiana (salina e B. subtilis) em duplicata. Fez-se o mesmo utilizando o meio caldo tioglicolato.

O teste foi feito adicionando-se 1ml da gua para injetveis com seringa nos tubos de ensaio contendo cerca de 15 ml do meio caldo casena-soja, em duplicata. Fez-se o mesmo utilizando o meio caldo tioglicolato.

Incubou-se os tubos contendo o meio caldo tioglicolato em estufa temperatura de 35C. Deixou-se os tubos contendo caldo casena-soja em temperatura ambiente. Realizou-se a leitura dos testes.

5 RESULTADOS E DISCUSSO No foi observado crescimento microbiano nos controles negativos (duplicata), tanto para o meio caldo casena-soja quanto para o tioglicolato,evidenciando que os meios no estavam contaminados. A espcie bacilus subtilis inoculada nos meios para realizao dos controles positivos trata-se de uma bactria aerbia facultativa,ou seja, no

utiliza oxignio no seu metabolismo mas consegue sobreviver na presena do mesmo. Sendo assim, a b. subtilis tem capacidade de crescer tanto no meio caldo casena-soja, o qual favorece o crescimento de aerbios, quanto no caldo tioglicolato que por sua vez favorece o crescimento de anaerbios. O controle positivo contendo caldo casena-soja foi mantido a temperaturas mais amenas (20 25 C) por 7 dias. Com a inoculao do bacilus subtilis observou-se crescimento microbiano. O controle positivo contendo caldo tioglicolato foi incubado em estufa a 37C por 7 dias. A partir da inoculao do bacilus subtilis evidenciou-se crescimento microbiano. O crescimento observado em ambos os controles positivos ocorreu de acordo com o previsto, demonstrando serem os meios aptos proliferao microbiana. Nos meios em que se inoculou a gua para injeo no foi observado crescimento microbiano, evidenciando-se como esperado e desejado, que a gua encontra-se estril, o que fundamental para cumprir o objetivo ao qual se destina. Temperaturas amenas (20 25 C) favorecem o crescimento fngico. Temperaturas um pouco mais elevadas (30 - 35 C) por sua vez, favorecem o desenvolvimento bacteriano.

6 CONCLUSO O teste de esterilidade, verificou que o produto analisado,gua pra injeo, assim como preconizado pela Farmacopia Brasileira V edio apresenta-se estril,estando isenta de contaminao por micro-organismos, tais como bactrias e fungos.

7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS AKERS, M, J. Simplifying and Improving Process Validation. Journal of Parenteral Science and Technology, Philadelphia, v. 47, n.6, p. 281-284, 1993. BATHGATE, H., LAZZARI, D., CANERON, H., MCKAY, D. The Incubation Period in Sterrility Testing. Journal of Parenteral Science an Technology, Philadelphia, v. 47, n.5, p.254-257. 1993.

BARRICHELLO, A. Teste de Esterilidade e Liberao Paramtrica. Revista de Farmcia e Bioqumica da Universidade de So Paulo. So Paulo, v.33, supl.1, p.33-39, 1997.

Brasil. Farmacopia Brasileira, V ed. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2010.