Resolucion y aberraciones Resolucin Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se encuentran muy prximos

entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del otro (14). La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcan en la imagen como puntos separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, ms finos sern los detalles. La distancia entre esos dos puntos se conoce como Lmite de Resolucin, el cual es tambin referido como el Poder de Resolucin y puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del microscopio. Esto se puede comparar vagamente con algunos aspectos de la informtica, el tamao del pixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor ser la cantidad de detalles de la imagen digital. Lmites de Resolucin aproximados de algunos sistemas pticos: Ojo humano: 0,2 mm. Microscopio Fotnico: 0,2 m. Microscopio electrnico: 0,2 nm.

3.4.3.-Factores que determinan el poder de resolucin Al observar pequeos objetos al microscopio, la luz incidente proveniente de ellos es desviada de su trayectoria inicial y mientras ms pequeos sean, mayor ser la desviacin. Las lentes del objetivo deben recolectar como sea posible la mayor cantidad de rayos desviados para formar una imagen ntida; a ms rayos capturados, mayor resolucin (fig.3-3).

Figura 3-3.-Esquema que muestra un objeto (1) que es atravesado por un haz de rayos luminosos (2) los cuales son captados por el objetivo (3). Al formarse el cono de luz proveniente del objeto se determina un ngulo, tambin llamado de apertura, donde a representa la mitad del mismo. Tomado de Kapitza H G. Microscopy from the very begining (13).

A partir de las observaciones precedentes, nace la definicin de apertura numrica (AN), cifra a considerar para determinar el rendimiento de una lente objetivo (13): AN = n x sen a Donde a = la mitad del ngulo de apertura del objetivo. n = el ndice de refraccin del medio que se encuentra entre el objeto y el objetivo. (Para el aire n = 1 y para el vidrio o aceite n = 1.51)

Otra manera de incrementar la resolucin es creando, del lado de la fuente luminosa, un cono amplio con un ngulo mayor. Para ello se emplea otro juego de lentes denominado condensador el cual posee la misma apertura numrica que el objetivo (fig. 3-4).

Figura 3-4.-El objeto (1) es iluminado con un rayo de luz (2) que formar un cono luminoso frente al objetivo. Se coloc otra lente (4) que recoge y condensa la luz antes que ilumine al objeto. Tomado de Kapitza H
G. Microscopy from the very begining (13)

Para aumentar an ms la resolucin, adems de agregar un condensador, otra posibilidad es colocar algn lquido entre la lmina cubreobjeto y el objetivo. Se ha obtenido buenos resultados con ciertos aceites (aceite de cedro) cuyo ndice de refraccin es igual al del vidrio cubreobjeto, eliminando toda reflexin de los rayos luminosos (fig. 3-5).

. Figura 3-5.-A la izquierda el espacio entre el cubreobjeto (5) y el objetivo (3) es ocupado por el aire; a la derecha el espacio es ocupado por un lquido de inmersin (6). Aprciese que el cono de luz y el ngulo a son mayores con inmersin. Modificado de de Kapitza H G. Microscopy from the very
begining (13).

El poder de resolucin de un microscopio compuesto de campo claro puede ser calculado de manera razonable mediante la frmula (13):

Donde delta= resolucin expresada en micrmetros. lambda = longitud de onda de la luz empleada. Como la ANobj y la ANcond son iguales, se resume 2AN. De los anteriores planteamientos se deduce que el poder de resolucin de un sistema ptico, en trminos generales depende principalmente de:

 Apertura numrica del objetivo y condensador: La relacin apertura/resolucin es directamente proporcional; a mayor apertura, mayor resolucin. Longitud de onda de la radiacin electromagntica utilizada: La relacin longitud de onda/resolucin es inversamente proporcional; a menor longitud de onda, mayor resolucin.

3.5.2.-Aberraciones Hay varios tipos de aberraciones: De esfericidad, relacionadas con la forma esfrica de la lente: Se producen por falta de convergencia de las ondas luminosas que pasan por la periferia de la lente cuando no son enfocadas en el mismo punto que aquellas ondas que pasan por el centro, las cuales son refractadas ligeramente; mientras que las que inciden en la periferia son refractadas en mayor grado y convergen en diferentes puntos focales. Este es uno de los artificios ms molestos y la imagen del objeto aparece dispersa y borrosa, en lugar de enfocada y ntida (fig. 3-8). Adems de la lente, la lmina cubreobjeto empleada en la preparacin histolgica puede producir este tipo de aberracin. Una lmina de calidad debe tener 0,17 mm de espesor para poder ser utilizada con las lentes objetivo de la mayora de microscopios, de lo contrario produce una marcada aberracin de esfericidad (13, 57).

Figura 3-8.-Aberracin de esfericidad. Los rayos que inciden paralelamente al eje principal no convergen todos en un mismo punto. Los rayos de la periferia convergen ms cerca de la lente. Modificado de Dini, A.
Apuntes de Fsica (59).

 Cromticas, relacionadas con las variaciones en los ndices de refraccin de las diversas frecuencias (colores) que conforman la luz blanca visible: Cuando la luz blanca atravieza una lente, las diferentes frecuencias son refractadas de acuerdo a su frecuencia. Cada color tiene un camino y un foco diferente; la luz violeta es la ms refractada y le siguen la azul, la verde y la roja, fenmeno tambien conocido como dispersin (fig. 3-9). La incapacidad de la lente de reunir nuevamente los rayos refractados en un punto focal comn resulta en una discreta diferencia en el tamao del objeto y en franjas de colores rodeando la imagen (43). Los sistemas pticos que dan corregida esta aberracin se denominan acromticos.

Figura 3-9.-Aberracin cromtica. La luz blanca se descompone al atravezar la lente y las diversas longitudes de onda convergen en varios puntos focales diferentes.Modificado de Dini, A. Apuntes de Fsica (59).

Otras aberraciones geomtricas: Incluyen una variedad de efectos, tales como:Astigmatismo: No se puede enfocar simultneamente lneas verticales y horizontales. Coma: Se produce una degradacin de la imagen de un punto, se ve similar a un cometa. Distorsin: Se manifiesta en la forma del objeto, afectando particularmente a los bordes. El objeto se ve en forma de barril o de corset. Curvatura del campo: El campo se ve con bordes curvos, deformando la imagen. http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/