CLULAS T REGULADORAS

Introduccin
Todas las clulas T provienen de clulas progenitoras de la mdula sea que se maduran en el timo. Las clulas T proliferan gracias a la accin de las citocinas de tipo IL2. Es necesario un umbral en la poblacin de clulas T para que se desarrolle una respuesta inmunitaria. En el timo se encuentran las clulas T que se diferencian en CD4+ y CD8+. Las clulas CD4+ se subdividen en Th1, Th2, Th17 y Tregs. A su vez en las clulas CD8+ se distinguen Tc y Tregs. Las clulas T reguladoras (a veces conocidas como clulas T supresoras) son una subpoblacin especializada de clulas T que actan para suprimir la activacin del sistema inmune y por lo tanto mantener el sistema inmune y la homeostasis de la tolerancia a antgenos propios. Aunque fueron ignoradas y descuidadas durante muchos aos, las clulas de T reguladoras (Tregs), desempean un papel importante en la regulacin negativa de inmunorespuestas. Los marcadores moleculares son herramientas esenciales para definir y para analizar una subpoblacin de clulas inmunes. Los marcadores ms ampliamente utilizados para las clulas Treg son: CD25; CTLA-4 (Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen 4); GITR (glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor); LAG-3 (Lymphocyteactivation gene 3); CD127; Foxp3 (forkhead box P3). Las clulas T reguladoras son definidas por la expresin del factor de trascripcin Foxp3, clave en el desarrollo de estas clulas. Para ejercer su funcin, las clulas inmunorreguladoras presentan, como propiedades bsicas, la capacidad de produccin de citocinas inmunosupresoras, como IL-10 e TGF, as como la capacidad de induccin de supresin mediada por contacto celular. Actan en una compleja red de mecanismos reguladores destinados a asegurar la modulacin de las respuestas inmunolgicas frente a los distintos antgenos provenientes de agentes infecciosos, tumores, aloantgenos, auto-antgenos y alrgenos.

La actividad de las clulas T reguladoras se ve aumentada en varios contextos infecciosos, como infecciones retrovirales (HIV), infecciones por microbacterias (como la tuberculosis), y infecciones parasitarias (Leishmania y malaria). La activacin de las clulas T reguladoras es antgeno-especfica, lo que implica que las actividades represivas de las clulas de Treg sean antgeno-dependientes. Para funcionar correctamente, el sistema inmune debe discriminar entre lo propio y lo no propio. Cuando esta discriminacin falla, el sistema inmune destruye las clulas y tejidos del cuerpo y como consecuencia, ocasiona enfermedades autoinmunes. Los pptidos antignicos reconocidos por su TCRs tienden a ser auto-pptidos, as una funcin importante de las clulas Treg es inhibir otras clulas de T de montar un ataque inmune contra componentes propios, evitando as la enfermedad autoinmune.

Por consiguiente, las funciones de las clulas de Treg incluyen: prevencin de enfermedades autoinmune; supresin de la alergia, del asma y de la inmunopatologa inducida por patgeno; induccin de la tolerancia feto-maternal; e induccin de la tolerancia contra los antgenos dietticos, es decir tolerancia oral. Adems de estas funciones, ejercen tambin regulacin de la clase efectora de la respuesta inmune; supresin de la activacin de la clula T accionada por los estmulos dbiles; control de la magnitud de la respuesta inmune por las clulas efectoras Th; proteccin de las bacterias comensales de la eliminacin por el sistema inmune.

Clulas T reguladoras CD4+

El inters en el estudio de las Treg se debe a la funcin clave de esta poblacin celular en el mantenimiento de los mecanismos de auto-tolerancia y de la regulacin de la respuesta inmune. Las clulas Treg CD4+ pueden derivar de dos vas, a partir del timo o desde las clulas T no reguladoras en la periferia. La poblacin de clulas CD4+CD25+ que se origina y se educa en el timo en la fase de seleccin negativa son las llamadas Treg naturales o intrnsecas, y a continuacin abandonan este rgano como poblacin reguladora

(constituyen un 5-10% del total de clulas T cooperadoras). Dependen del contacto celular para ejercer su funcin. Las que se forman en la periferia son denominadas inducidas (Tr1, Th3 y CD4 +CD25+ Foxp3+) y su induccin ocurre independientemente del timo.

1.

Clulas T reguladoras naturales

Las clulas T reguladoras naturales son clulas T CD4+CD25+ y, aproximadamente, son el 5% de la poblacin total de clulas T CD4+. Se expresan distintas molculas en la superficie de las clulas CD4+ CD25+: CD25: es una protena transmembrana que es la cadena alfa del receptor IL-2; CTLA-4: es un regulador negativo de la activacin de las clulas T; CD45RB (dbilmente expresado); GITR: es receptor relacionado con el TNF inducido por glucocorticoides.

Adems de estas molculas existe tambin un factor de transcripcin llamado Foxp3, que se encuentra dentro del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). Este factor se expresa tanto en fase activa como en reposo. Este factor cambia la expresin de muchos genes incrementa unos y suprime otros - y no es inducido en las clulas T tras su estimulacin. El Foxp3 desempea un papel vital en la generacin de las Treg CD4+ CD25+ y es el marcador disponible ms especfico. En comparacin, las Tregs CD4+ CD25+ presentan Foxp3 a diferencia de las clulas vrgenes.

Expresin fenotipica de la clula T reguladora natural. Clulas Tregs naturales expresan CD4, CD25+, GITR (glucocorticoid-induced TNFR-related protein) y CTLA-4 (intracellularcytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4) en la membrana y Foxp3 en el ncleo.

2.

Clulas T reguladoras inducidas

Las clulas T reguladoras CD4 inducidas pueden generarse tras la exposicin al antgeno en presencia de ciertas citocinas. Suprimen a travs de citocinas. 2.1 Clulas Tr1

Las clulas Tr1 se asemejan a las clulas Treg naturales de varias maneras, aunque no expresen grandes cantidades de CD25 ni de Foxp3. Requieren IL-10 para su formacin y, una vez que son maduras, secretan grandes cantidades de esa citosina. Tambin secretan factor de crecimiento beta (TGF-), pero en menores cantidades. Las clulas Tr1 son abundantes en el intestino, y su principal funcin es hacer el animal tolerante a los muchos antgenos que forman parte de su dieta.

2.2 Clulas Th3 Las clulas Th3 son tambin frecuentes en el intestino (placas de Peyer y los ganglios mesentricos), pero a diferencia de las clulas Tr1, producen TGF- como principal molcula efectora. Las clulas Th3 y/o Tr1 tolerancia oral. 2.3 Clulas CD4+CD25+ Foxp3+ Aunque las Tregs CD4+ CD25+ inducidas poseen un fenotipo superpuesto al de las Tregs CD4+CD25+ de origen tmico, se trata de una poblacin de clulas diferentes que posee mecanismos distintos para inducir supresin. son los agentes responsables de la

Las T reguladoras pueden generarse en la periferia.

Las clulas CD4+CD25- de la periferia pueden ser estimuladas hasta convertirse en supresoras. En presencia de TGF, las clulas incrementan la expresin de Foxp3 y CD25. En presencia de IL-10, las clulas se vuelven supresoras, aunque no expresan Foxp3 o CD25. Las Tregs inducidas suprimen a travs de mecanismos dependientes de citocinas. En presencia de antgeno y coestimulacin, se generan clulas T efectoras. (Tem, Clulas T de memoria efectoras.)

La generacin y mecanismos de supresin por parte de las Treg CD4+ naturales e inducidas varan, aunque presentan algunas similitudes: ambas poblaciones son anrgicas (incapaces de responder) in vitro; ninguna posee caractersticas de clulas Th1, Th2 CD4+; y aunque las Treg no evitan la activacin inicial de las clulas T, inhiben una respuesta sostenida y una inmunopatologa crnica y potencialmente lesiva.

Tregs CD4+ CD25+

DIFERENCIAS Generadas en el timo Expresan Foxp3 CD25 elevado, CD45R bajo

Tr1/TH3
Generadas en la periferia Expresin variable de Foxp3 CD45R0 elevada, CD45RB baja Expresin variable de CD25

Dependientes de contacto celular Requieren IL-2 para la supresin

independientes de contacto celular Supresin independiente de IL-2 SEMEJANZAS

Activadas por antgeno especfico Secretan IL-10 / TGF No responden al anti-CD3 in vitro

Activadas por antgeno especfico Secretan IL-10 / TGF No responden al anti-CD3 in vitro

Similitudes y diferencias en la generacin y funcin de los subconjuntos de clulas T reguladoras CD4+ tmicas de existencia natural e inducible en la periferia.

Mecanismos de regulacin
Varias subpoblaciones de clulas T CD4+ son capaces de inhibir la respuesta de otras clulas T. Existen tres tipos de mecanismo de regulacin de las clulas CD4+: Dependiente de contacto. Las Treg CD4+ CD25+ de origen tmico dependen de contacto celular para operar. Se cree que el GITR podra estar implicado en esta interaccin, aunque se desconoce la naturaleza exacta de esto.

Citocina TGF-beta. El factor de crecimiento de transformacin beta (TGF-) es un mediador de inmunidad adaptativa que es producido por las clulas de T y muchos otros tipos de la clula. Es sobretodo una citocina inhibitoria. Inhibe la proliferacin de las clulas de T y la activacin de macrfagos. Las clulas Th3 producen altas concentraciones de TGF- (y en menor cantidad IL-10).

Citocina Interleucina 10 (IL 10)

La IL 10 es un mediador de inmunidad adaptativa que es producido por los macrfagos y por clulas activadas Th2. Es predominante una citocina inhibitoria. Inhibe la produccin de IFN- por las clulas Th1, que desplaza respuestas inmunes hacia un tipo Th2. La clulas Tr1 se sitan en los rganos linfoides perifricos y median su supresin a travs de la secrecin IL-10 (y en menores cantidades por TGF-, IL-5 e IFN-).

Clulas T CD8+ reguladoras

Las primeras clulas T reguladoras en descubrirse fueron las Treg CD8, llamadas antiguamente supresoras. A pesar de esto, actualmente se conoce mucho ms de las clulas T reguladoras CD4.

Fenotipos de T CD8+ reguladoras

Diversas molculas de superficie se han identificado en CD8 reg pero ninguna puede ser utilizada como marcador que pueda distinguirlas de las clulas T activadas. Estas son: CD 122+ CD25+ CD45R clow

Podemos diferenciar las CD8+treg en tres subtipos: 1. CD8 CD28+ 2. CD8 CD283. Clulas NKT Las clulas NKT son linfocitos T que actan de "puente" entre la inmunidad innata y la adaptativa. Tienen muchas funciones, y que hagan una u otra depende del grado de estimulacin que reciban. Su TcR reconoce antgenos presentados por CD1 (el cual presenta antgenos lipdicos) Si el estmulo que reciben es ms alto se comportarn como linfocitos T citotxicos clsicos que producen la apoptosis de la clula diana por exocitosis de sus grnulos. Si el estmulo es medio actuar como linfocito Th1. Si el estmulo es menor ejercer su funcin reguladora.

Existe un factor de transcripcin nuclear, el Foxp3, que es expresado en los Linfocitos CD4+ reguladores y est presente tambien en algunos Linfocitos CD8+reg: CD8+CD28-

CD8+CD25+ CD8+CD45R clow

Pero las celulas CD8+CD122+ y CD8aa+ son Fox P3 negativas.

Diferencias entre las clulas Treg CD4 y las Treg CD8

rganos lifoides perifricos

5-10% de clulas T CD4

<1% de clulas T CD8 (ndulos linfticos y bazo) <1% de clulas T CD8 Clulas CD4 y CD8 activadas CD25, CD122, NKG2D IFN Limitado o oligoclonal MHC clase Ib TcR IL2 citocinas,

Timo Clula diana Marcadores de superficie Citocinas Repertorio de TcR Limitacin de MHC Antgeno diana Requerimientos para la seleccin tmica Mecanismo de supresin

5-10% de clulas T CD4 CD4 vrgenes y CD8 CD25, CTLA4, GITR IL10, TGF Heterogneo MHC clase II Diverso IL2, Foxp3, molculas B7 Contacto citocinas

celular, Apoptosis,

sealizacin negativa

Las clulas CD8+ Treg se encuentran en el intestino humano fetal en mayor cantidad pero en el intestino humano adulto estn en menor proporcin. abundante en el intestino adulto y en las amgdalas es de CD8+ Treg. Tambin las representan un pequeo porcentaje en los ganglios linfticos. Los linfocitos CD8 + estn implicados en 2 patologas: 1. CD8 +TcRab+CD4- regulan los linfocitos CD4+ durante la colitis en el SCID de manera dependiente de IL-10 2. CD8 +TcRab+ se encuentran en periferias, timo e intestino de los diabticos no obesos (NOD). La forma ms

Mecanismos de activacin y accin de Treg CD8

En las superficies de las APCs estn expresada molculas MHC de clase I (Ib) que son reconocidas por Qa-1(ratones) y HLA-E(humano) de la Treg CD8. Para ejercer su funcin las clulas CD8+treg tienen que ser activadas. De esto se deduce que Qa-1 es esencial para la funcin supresora de Treg CD8.

Diana de Treg CD8

Se ha descubierto que las principales clulas dianas de los linfocitos CD8 son los Linfocitos T activados. El contacto entre HLAI y Qa I provoca la inhibicion de moleculas coestimuladoras

sobre celulas dendriticas y celulas endoteliales. Esto induce tolerancia puesto que la interacion con TcR y el peptido es un estmulo insuficiente para generar una respuesta inmune funcional.

Mecanismos de supresin
Los mecanismos de supresin son diferentes: 1. Sealizacin negativa sobre la diana o sobre APCs. 2. Secrecin de factores solubles como citocina inmunosupresora. 3. Muerte directa de la clula diana. En definitiva las Treg CD8+: Necesitan ser inducidas por clulas CD4+ en respuesta primaria, de este modo suprimen la respuesta secundaria. Inhiben respuesta tanto de Th1, como de Th2. Controlan respuesta CD4+ frente a superantigenos Pueden suprimir respuesta CD4+ mediante secrecin de citocinas como IFNgamma, IL-6,IL-10.

Enfoque clnico Foxp3

El factor de transcripcin Foxp3 se considera el marcador ms fiable para la identificacin del linaje de las clulas de T reguladoras. Este factor est sobretodo presente restringido en clulas en los de tejidos a B, las linfoides. clulas de de T La T , expresin , y clulas de casi NK Foxp3 es altamente imperceptible naturales,

clulas

macrfagos y clulas dendrticas. La las expresin clulas T de CD4+, Foxp3 pero se restringe clulas T principalmente CD8+ expresan a Foxp3

algunas

tambin. Las clulas que expresan el Foxp3 en el Timo se desarrollan en Tregs CD4+ CD25+ . El Foxp3 se considera importante para las funciones de Treg porque las mutaciones en Foxp3 son la causa de dos sndromes de alteracin de regulacin inmunitaria multiorganicos, el XLAAD (sndrome de desregulacin alrgica autoinmune ligado al X) e IPEX (sndrome de immunodesregulacin, poliendocrinopata, enteropataa, ligado al X). As, Foxp3 es claramente esencial para las funciones de las clulas T y el Foxp3 defectuoso lleva a una desregulacin inmune mortal. La caracterstica ms importante de las protenas Foxp3 es forkhead box, que consiste en una secuencia de 80 a 100 aminocidos que forma el motivo de unin al DNA. La capacidad de unin al DNA permite al factor de transcripcion Foxp3 regular la expresin de genes implicados en el crecimiento celular, proliferacin, diferenciacin y duracin de la vida. FOXP3 codifica una protena de 48 kD (431 aminocidos) que es expresada en clulas T reguladoras CD4+ CD25+. Como en las clulas T convencionales, la activacin de las clulas T reguladoras CD4+ CD25+ provoca la induccin de la transcripcin de NFAT. En el caso de las celulas T convencionales, la sealizacin del TcR en combinacin con la coestimulacin, provoca la unin de NFAT a AP-1, lo cual induce la transcripcin de genes implicados en la activacin de la clula T Sin embargo, en las clulas T reguladoras CD4+ CD25+ NFAT, se une a FOXP3 y provoca la transcripcin de genes que provocan la supresin inmune.

IPEX
Pueden ocurrir mutaciones en el gen Foxp3, produciendo una enfermedad rara conocida por IPEX. Las siglas IPEX significan sndrome de la alteracin de la regulacin inmunitaria, poliendocrinopata y enteropata ligado a X. Esta enfermedad muestra la importancia de las clulas reguladoras, ya que deriva por un defecto en el desarrollo de las clulas T reguladoras CD4+ CD25+, las cuales constituyen un importante subtipo de clulas T implicadas en el control de la homeostasis y en la proteccin contra la autoinmunidad, produciendo, as, implicaciones clnicas importantes. El IPEX es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma X que es causada por mutaciones en el gen foxp3, que est localizado en el cromosoma X (Xq11.23-Xq13.3) y consiste en 11 exones codificantes. Sin embargo, IPEX puede ser genticamente ms heterognea de lo que se pensaba, al encontrar pacientes con IPEX que no presentaban mutaciones en el foxp3. El IPEX puede tambin estar relacionado a un locus autosmico. En estos casos la enfermedad podra ser resultado de mutaciones fuera de la regin codificante. Adems, puede ocurrir tambin una mutacin en una regin, siguiente al ltimo exn codificante, lo cual provocaba una reduccin en la expresin del mRNA en foxp3.

Hasta ahora, se han descubierto 20 mutaciones en el gen foxp3 en pacientes con IPEX, la mayora de las cuales resultaron en un cambio en la secuencia de aminocidos en el dominio de unin al DNA de la protena foxp3.

En esta figura podemos ver la estructura del gen foxp3. Las flechas indican la localizacin de mutaciones en pacientes con IPEX. Hay tres dominios que son clave para la funcin del foxp3: la regin terminal C que contiene el dominio FKH; un dominio central con un dedo de zinc y una cremallera de leucina que promueve la oligemerizacin de la molcula de foxp3; y un dominio represor localizado en la regin N terminal y une la molcula NFAT (factor nuclear de las clulas T activadas).

Cuadro clnico
El IPEX es una enfermedad que normalmente se presenta en los primeros meses de vida. Los sntomas de esta enfermedad son diferentes de unos pacientes a otros, pudiendo variar incluso en la misma familia, sobre todo en la gravedad de los sntomas. Generalmente el IPEX se describe por:

 Enfermedad gastrointestinal. Se caracteriza por una grave diarrea. Tambin muchos pacientes muestran alergias a la comida, por lo que la alimentacin ha de ser parenteral. Endocrinopatas autoinmunes: el ataque es muy temprano, y ataca sobre todo al pncreas y al tiroides, aunque el ataque a las paratiroides y a las glndulas adrenales es menos frecuente. La alteracin del tiroides puede provocar hipo o hipertiroidismo. La diabetes dependiente de insulina tipo 1 empieza durante el primer ao de vida, aunque en muchos casos la intolerancia a la glucosa est presente al nacer. Dermatitis. Eccema es lo ms comn, aunque tambin se puede presentar como sarpullidos eritematosos que cubren todo el cuerpo. Otros rasgos: estos pacientes tambin muestran desordenes hematolgicos como anemia hemoltica, trombocitopenia o netropenia en un 50% de los casos. Enfermedad renal afecta a una 30% con glomerulonefritis y nefritis intersticial, pudiendo provocar desde proteinuria y hematuria hasta una rpida progresin de la glomerulonefritis que solo se cura con transplante. Hepatitis autoinmune tambin es comn. Algunos pacientes muestran alteraciones neurolgicas.

Estos pacientes, por tanto padecen ms enfermedades autoinmunes e inflamatorias. Debido a la gran variedad de signos y sntomas, el diagnstico definitivo de IPEX se basa en estudios genticos para la identificacin de la mutacin. Aunque un anlisis inmunocitoqumico de la expresin de foxp3 en las clulas en biopsias de intestino podra ser una herramienta rpida de escaneo. El IPEX comparte caractersticas con otros sndromes ligados al cromosoma X, sin embargo, los estudios genticos definen el IPEX claramente como una entidad diferente.

Signos clnicos Manifestaciones autoinmunes Diarrea Eczema atpico Las infecciones recurrentes Sangrado anormal La anemia Trombocitopenia Las plaquetas Las clulas T Neutropenia

IPEX + + + + + normal + -

WS + + + + + + pequeo -

XLT + + + pequeo -

XLN + normal +

GATA-1 + + + grande -

IPEX: WS: XLT: XLN:

Immunodysregulation, Sndrome trombocitopenia neutropenia

poliendocrinopata, de ligada ligada al al

enteropata,

ligada

al X.

cromosoma cromosoma cromosoma

Wiskott-Aldrich. X. X.

GATA: es un factor de transcripcin T-cell.

En cuanto a las caracterstas inmunolgicos, la mayora de los pacientes tienen un nmero y proliferacin normal en sangre perifrica de clulas CD3 CD4 y CD8. Sin embargo, una gran produccin de diferentes citocinas provocada por la no represin de las T reg, producen fuertes respuestas linfocitarias a los antgenos un aumento de la expresin de MHC-II indican una activacin de la respuesta inmune.

Tratamiento
El tratamiento de los sntomas incluye nutricin parenteral, inyecciones de insulina que son normalmente necesarias y tambin transfusiones de sangre o de plaquetas. En los ltimos aos la terapia de IPEX se ha basado en drogas inmunosupresoras. Pero los resultados han sido desiguales, a veces decepcionantes porque la respuesta es corta y las complicaciones pueden aparecer. El transplante de mdula sea puede ser la cura para los pacientes con IPEX. Ha sido realizado con xito en algunos casos con remisin clnica completa. Despus del transplante, la recuperacin clnica fue asociada con la emergencia de las clulas T reguladoras, de las cuales, la mayora expresaba fenotipo de memoria. Pero desafortunadamente, los excelentes resultados del transplante de mdula sea son frecuentemente transitorios. La recuperacin de la diabetes mellitus ocurri en algunos casos, pero en la mayora el dao de los islotes pancreticos permaneci tras el transplante de mdula sea, por lo que est recomendado hacer el transplante en la fase temprana de la enfermedad para evitar daos irreversibles y complicaciones. La mejora de los sntomas tambin ha tenido xito con donacin de sangre del cordn umbilical.

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Enciclopedias: o Wikipedia

Pginas web:

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