PRACTICA N0 1 BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

RESUMEN En la prctica se observaron los diferentes tipos de procedimientos y tcnicas que se utilizan para la desinfeccin de superficies y de los implementos del laboratorio, los aspectos bsicos de bioseguridad y las reglas generales de trabajo para el desarrollo de actividades en el laboratorio, adems algunas de las metodologas utilizadas para la esterilizacin de accesorios y materiales usados en el laboratorio de microbiologa. Palabras Claves: Desinfeccin, esterilizacin, bioseguridad. INTRODUCCIN MTODOS La bioseguridad en el laboratorio se refiere al conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de las personas que laboran en las instalaciones y evitando la contaminacin de las prcticas desarrolladas. El propsito bsico es obtener un ambiente de trabajo seguro y ordenado. Debido a que en la microbiologa se labora con microorganismos infecciosos o con materiales que lo contienen, es importante la esterilizacin de los instrumentos y el uso de la indumentaria apropiada para el laboratorio, adems de los elementos de proteccin personal. MATERIALES Cajas Petri. Tubos de ensayo. Pipetas. Erlenmeyer. Papel kraft. Algodn. Mechero de Bunsen o de alcohol. Estufa elctrica. Tubos con solucin de glucosa. Gradillas. Autoclave. Horno de aire caliente. Cinta de enmascarar. Gasa. Asa bacteriolgica y micolgica. Baja lenguas. Tubos con agua destilada. Tijeras y pinzas. Pipetas. Calor Seco Provoca desnaturalizacin de protenas, efectos txicos por desecacin de la clula alcanzando niveles elevados de solutos, procesos oxidativos irreversibles, fusin y desorganizacin de las membranas. Uno de los mtodos ms sencillos de la esterilizacin con calor seco es el flameado. Horno de aire caliente, es un equipo utilizado en los laboratorios para la esterilizar por calor seco, la temperatura vara entre 1200 y 1800C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 1400 se necesitan por lo menso 5 horas de exposicin y de 1600C -1800C se necesitan de al menos 2 horas de exposicin, se utiliza para la esterilizacin de material de vidrio.

Calor Hmedo Produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. El autoclave, es un equipo utilizado en los laboratorios para la esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones en el agua y no se desnaturalicen a temperaturas mayores de 1000. Una temperatura de 1210 C con un tiempo de

exposicin mayor a 15 min. Es necesaria la accin combinada de calor, tiempo y presin para conseguir la destruccin celular. RESULTADOS Las asas se flamean con el mechero hasta que alcance un tono rojizo. Las tijeras y las pinzas se les rocea alcohol y se flamean con el mechero. Las pipetas se tapan su parte superior con tampones de algodn y se envuelven con papel kraft para ser llevadas al horno de aire caliente. Las cajas de petri se envuelven en papel kraft y se empaca bien para posteriormente ser llevados al horno de aire caliente. Erlenmeyer, se tapa en su extremo angosto con tampones de algodn y se cubren con papel aluminio y se esterilizan en el horno. Beaker se le tapa la parte superior con papel aluminio y se lleva al horno. Los isopos se introducen en un tubo de ensayo y se llevan al autoclave. Baja lenguas se envuelven en papel aluminio y papel kraft y se llevan al horno. Las soluciones se esterilizan por medio de filtracin. DISCUSIN Para los instrumentos de vidrio es ms efectivo realizar su esterilizacin en un horno, debido a que no se van a presentar problemas por oxidacin o corrosin. Para instrumentos que sean plsticos o que tenga una parte plstica se deben llevar al autoclave para evitar que este tipo de material se derrita por efectos del calor. Las soluciones no se esterilizan en el horno ni en el autoclave, debido a que hay sustancias sensibles al calor y para ello se utiliza la tcnica de filtracin. CONCLUSIONES La principal funcin de la bioseguridad es hacer que el manejo de agentes infecciosos en el laboratorio sea seguro, logrando as la disminucin de riesgos en la exposicin del personal. El objetivo de la esterilizacin es la eliminacin o muerte de todos los

microorganismos sustancia.

que

contiene

un

objeto

Los instrumentos segn sea su utilizacin y material se esterilizan siguiendo el protocolo y mtodo adecuado tambin teniendo en cuenta el ahorro de tiempo y dinero. BIBLIOGRAFA 1. Silvestre, C., Fagoaga, L., Garcianda, M., Lanzeta, I., Mateo, C., Zapata, M.C. Esterilizacin; Garanta de calidad de la central, [consultado agosto, 2011], disponible en Internet:< http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol 23/suple2/suple9a.html>. 2. Pareja, E.I. Microbiologa y Biotecnologa (2006) [en lnea]. Espaa: Universidad de Granada. Departamento de Microbiologa, Instituto de Biotecnologa. [consultado agosto.,2011]. Disponible en Internet: < http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfis icos. /> 3. ANONIMO, Practicas de microbiologa ambiental. [consultado agosto.,2011], disponible en internet: http://www.cbm.uam.es/jlsanz/docencia/archivo s/practicas.pdf 4. Snchez. M. J., microbiologa de suelos; tcnicas, mtodos y medios de cultivos; Universidad Autnoma de Mxico; facultad superior de estudios Zaragoza; [consultado agosto.,2011], disponible en internet: http://enlinea.zaragoza.unam.mx/didacta/biologi a/micorrizas/Microbiol.pdf ANEXO CUESTIONARIO 1) Microorganismos segn el nivel de contencin: Nivel 1: Lactobacillus casei shirota, Saccharomyces, Bifidobacterium. Nivel 2: Staphylococcus sp., Salmonella sp., Toxoplasma sp. Nivel 3: Micobacterium tuberculosis, Brucella abortus, Coxiella burneti. Nivel 4: Amarita phalloides, Claviceps puprea, Mycobacterium bovis.

Para la agroindustria los microorganismos tienen grandes aplicaciones sobre todo en la parte alimenticia, por ejemplo, en fermentaciones de bebidas alcohlicas, en la elaboracin de pan, en la elaboracin de lcteos, entre otras. As mismo es importante conocer los riesgos por contaminacin en alimentos para poder controlarlos. 2) La efectividad de la esterilizacin por autoclavado depende de la accin combinada del calor, tiempo y presin para conseguir la destruccin celular. Adems se puede medir su eficacia a travs de indicadores biolgicos y qumicos1. 3) Liofilizacin, es un proceso en el que se congela el producto y una vez congelado se introduce en una cmara de vaco para realizar la separacin del agua por sublimacin. De esta manera se elimina el agua desde el estado slido al gaseoso del ambiente sin pasar por el estado lquido2. 4) Sonicacin, consiste en la aplicacin de ultrasonidos a una suspensin celular. En suspensiones liquidas producen cambios de presin generando un fenmeno de cavitacin (burbujas de gases disueltos de 10m de dimetro) que generan grandes presiones locales que terminan por desintegra las clulas2. 5) Metodologa de esterilizacin adecuada para: Medios de cultivo slidos contaminados con Salmonella sp: mediante calor hmedo (autoclave)3. Muestras de agua residual domestica: mediante filtracin. Isopos utilizados en muestreo de manipuladores de alimentos: mediante calor seco, envueltos en papel aluminio y luego en papel kraf (horno). Tejidos de procedencia animal y origen desconocido: calor hmedo (autoclave). Suelo: mediante calor hmedo (autoclave)4. Suelo inoculado con patgenos de plantas: calor hmedo (autoclave)4. Antibiticos: Filtracin y/o rayos UV.