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*Protocolo experimental: classificao de bactrias pelo mtodo de Gram Nome:________________________________________________ N ____ 1.

Introduo A colorao de Gram constitui uma das tcnicas de colorao diferencial mais utilizadas em Bacteriologia e foi desenvolvida empiricamente por Hans Christian Gram, em 1884. As bactrias coradas por este mtodo podem dividir-se em dois grupos: as bactrias Gram positivas (Gram +), que retm o corante primrio (violeta de genciana), apresentando uma colorao violeta escura; as bactrias Gram negativas (Gram -), que perdem o corante primrio e so coradas pela safranina (corante secundrio), apresentando uma cor avermelhada. As explicaes mais plausveis para o esclarecimento da reao ao mtodo de Gram referem-se estrutura e composio qumica da parede celular. As bactrias Gram negativas tm uma concentrao mais elevada de lpidos quando comparadas com as Gram positivas; as suas paredes so tambm mais finas do que as paredes celulares dos microrganismos Gram positivos. O iogurte um produto coagulado obtido atravs da fermentao lctica do leite pela aco das bactrias das espcies Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus. Ambas as espcies apresentam, frequentemente, cadeias longas e desenvolvem-se bem em meios cidos 2. Objetivos: 1.1 Selecionar o material adequado execuo e observao de uma preparao microscpica. 1.2 Descrever o procedimento necessrio para a execuo de uma preparao e posterior observao microscpica. 1.3 Executar uma preparao microscpica com recurso s tcnicas do esfregao, fixao pelo calor e colorao diferencial, aplicando a tcnica de Gram. 1.4 Classificar as bactrias com base na sua resposta tcnica de colorao de Gram e explicar o comportamento verificado. 1.5 Inferir da importncia desta classificao para a medicina. 12A

Classificao de bactrias pelo mtodo de Gram

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Verificar significados 3. Escrever breves descries dos seguintes termos: Termos (s) Bactria Breve descrio

Clula procaritica

Parede celular

Preparao microscpica

Colorao de Gram

Tcnica de esfregao

Tcnica de fixao

Colorao diferencial

Corante primrio

Mordente

Diferenciador

Antibitico

Procedimento 4. Efetuar uma lista do material a utilizar tendo em conta o procedimento

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4.1- Colocar uma gota de gua destilada numa lmina seca. 4.2 -Retirar um pouco de iogurte com uma ansa de inoculao. 4.3 - Colocar o material sobre a gota de gua na lmina e efetuar a tcnica do esfregao. 4.4 - Fixar o esfregao pelo calor. 4.5 - Adicionar umas gotas de lcool para retirar o excesso de gordura e secar ao ar. 4.6 - Corar o esfregao com violeta de genciana durante 1 minuto. Remover o corante com gua destilada e secar cuidadosamente com papel. 4.7 - Cobrir o esfregao com soluto de Lugol e deixar atuar durante 1 minuto. 4.8 - Escorrer o soluto de Lugol, descorar com lcool e lavar de seguida com gua destilada. 4.9 -Corar o esfregao com soluo de safranina durante 2 minutos. 4.10 - Lavar o esfregao com gua destilada e secar cuidadosamente com papel. 4.11 Colocar a lmina no microscpio e, sem colocar lamela, proceder sua focagem com as objetivas de menor ampliao. 4.12 Colocar uma ou duas gotas de leo de imerso sobre o esfregao e observar com a objetiva de imerso (100x). 4.13 Aps a observao e respetivo registo proceder limpeza da objetiva de imerso com algodo embebido num pouco de xilol. 5. Analisar o procedimento descrito nos pontos 4.1 a 4.13 e descrev-lo resumidamente. 6. Executar e observar ao microscpio a preparao efetuada, com recurso objetiva de imerso. 7. Efetuar o registo da observao atravs de um esquema legendado. 8. Classificar as bactrias em Gram positivas ou Gram negativas tendo em conta a colorao apresentada. 9. Explicar o comportamento das bactrias em funo do processo de colorao utilizado. 10. Explicar a funo dos diversos reagentes utilizados. 11. Justificar em que medida o Mtodo de Gram trouxe vantagens para um melhor conhecimento das bactrias e inferir da sua importncia deste conhecimento na Medicina.

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