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MTODOS DE MELHORAMENTO DE PLANTAS DE PROPAGAO ASSEXUADA Prof.

Moeses Danner Estrutura gentica de populaes e teoria da seleo Na natureza existem plantas de propagao sexuada e assexuada. Algumas plantas de importncia econmica se propagam exclusivamente por sementes (sexuada), como o caso da soja, feijo, arroz, entre as plantas autgamas, e milho, entre plantas algamas. Outras plantas se reproduzem principalmente por propagao vegetativa (assexuada), como o caso da cana-de-acar. Por outro lado, a maioria das plantas frutferas, que so perenes, produz sementes em condies naturais, porm, por questes comerciais e de formao de pomares, elas so propagadas vegetativamente. Neste caso, algumas delas so espcies autgamas (pessegueiro, nectarineira, citros) enquanto outras so algamas (maieira, parreira, mangueira, mamoeiro). Em outras espcies no h sistema de reproduo, ou seja, a planta no produz sementes em condies naturais, sendo o exemplo mais clssico o alho. Esta espcie se propaga exclusivamente por meio vegetativo, o que condiciona baixa variabilidade gentica, somente obtida atravs de mutaes. Este fato dificulta o melhoramento desta espcie e, teoricamente seu risco de extino alto devida sua baixa flexibilidade e adaptao s condies adversas. Por possurem diferentes estruturas genticas, existem diferentes mtodos para se desenvolver cultivares, que levam em considerao o sistema de reproduo da espcie (espcie de reproduo vegetativa, autgama ou algama). Neste tpico sero discutidos os mtodos de melhoramento utilizados para plantas propagadas vegetativamente, com nfase em plantas frutferas de clima temperado. A principal caracterstica da propagao vegetativa que as plantas propagadas por este mtodo so clones da planta-me. As variedades em geral so altamente heterozigotas e quando em reproduo sexual expressam ampla segregao na gerao F1, ao contrrio de plantas autgamas de propagao sexuada. Esta variabilidade explorada no melhoramento gentico atravs de cruzamentos entre variedades heterozigotas e posterior seleo dos indivduos com fentipo desejado da populao segregante e sua avaliao. Se estes gentipos se mostrarem superiores so multiplicados vegetativamente, o que determina a fiel multiplicao de seus gentipos em um grande nmero de plantas-clones, possibilitando uniformidade gentica, fator considerado essencial para a explorao comercial em pomares, devido a homogeneidade que facilita os tratos culturais. A propagao vegetativa pode ser realizada atravs das tcnicas de estaquia, alporquia e enxertia, que depende de sua adaptao e facilidade e formao de mudas em cada espcie. Por exemplo, a tcnica de estaquia utilizada largamente para espcies como a figueira. A alporquia por sua vez se mostrou eficiente para a jabuticabeira, para a qual a estaquia no se mostrou vivel. No caso da enxertia ela mostra importncia na propagao de citros, macieira, pessegueiro e videira, entre outras. Ultimamente a cultura de tecidos tem sido um mtodo auxiliar na propagao vegetativa, aps o desenvolvimento de um protocolo especfico de cada espcie. Outro fator diferencial ocorre na cultura dos citros, a qual alm de poder ser propagada assexuadamente por enxertia, podem ser obtidos plantas-clones oriundos de

sementes, geradas dos embries nucelares. Estas plantas no so desenvolvidas a partir de fertilizao e meiose, como o caso do embrio zigtico, mas sim de mitose das clulas da nucela, e apresentam o mesmo genoma da planta-me, embora oriundos de sementes. Este fenmeno que ocorre em citros, com a formao de duas ou mais plantas de uma s semente, sendo uma do embrio zigtico e as demais oriundas do embrio nucelar, denominada de poliembrionia. Vantagens e desvantagens da propagao vegetativa no melhoramento de plantas A maior vantagem da propagao vegetativa que em qualquer fase do programa de melhoramento, plantas que apresentem caractersticas favorveis, tanto de ordem qualitativa quanto quantitativa, podem ser fixadas geneticamente atravs da multiplicao e reproduzidas em larga escala e indefinidamente. Estes clones podem ser utilizados como cultivares comerciais, avaliao em diferentes condies ou como fonte para posteriores hibridaes. Esta possibilidade de multiplicao vegetativa compensa o tempo maior necessrio ao ciclo de espcies perenes, do cruzamento primeira avaliao da prognie, que em mdia de trs anos em frutferas de clima temperado. Por outro lado, este fato pode ser observado como desvantagem, pois este procedimento induz o melhorista ao no aproveitamento de nveis intermedirios da caracterstica de interesse, principalmente algumas de difcil mensurao, como a de tolerncia ou resistncia a doenas. Este fato tambm acarreta perda da variabilidade gentica da populao trabalhada. Desse modo, no caso de plantas F1 oriundas de cruzamentos dirigidos com o intuito de selecionar plantas resistentes doenas e que apresentam nvel intermediria de resistncia, podem ser submetidas a obteno da gerao F2, que atravs da recombinao gnica, ou seja, segregao, pode gerar indivduos com maior nvel de resistncia, ou ainda retrocruzamento com um parental com bom nvel de resistncia. A propagao vegetativa proporciona rpida multiplicao das plantas, propagao em larga escala, e induz as plantas precocidade de produo, devido ausncia de perodo juvenil, em relao a sua propagao por sementes. A prpria conjugao da propagao sexuada com assexuada destas espcies frutferas facilitam os trabalhos de melhoramento, devido a explorao do vigor de hbridos altamente heterticos como cultivares comerciais. Porm, a uniformidade de plantas em um pomar determina que elas so mais vulnerveis a estresses de ambiente, o que pode acarretar em baixa sustentabilidade de seu cultivo em determinada regio sujeita ao estresse. Breve relato do melhoramento de frutferas de clima temperado no Brasil O melhoramento gentico est intimamente relacionado com a variabilidade gentica, que tem papel fundamental nos programas de cruzamento e seleo de gentipos melhorados. O Brasil o centro de origem de algumas frutas tropicais como o abacaxi, o caju, a goiaba e o maracuj, assim como algumas frutas nativas de clima subtropical, principalmente as da famlia Myrtaceae, como a jabuticaba, pitanga, cerejado-mato, etc. Para estas frutas o Brasil detm a variabilidade gentica existente. Por outro lado, as frutferas de clima temperado, como a macieira, a videira e o pessegueiro, que so importantes economicamente no sul do Brasil, so espcies

exticas e foram introduzidas no pas a poucas dezenas de anos para explorao economica e desenvolvimento de variedades adaptadas s condies edafoclimticas aqui existentes, que para muitas espcies so diferentes dos locais de origem. Desse modo, o melhoramento destas frutferas iniciou pela introduo de gentipos dos centros de diversidade gentica de cada espcie e avaliao de gentipos que se adaptavam as condies de inverno ameno do Brasil, os quais foram detectados e aproveitados para os programas de melhoramento gentico destas frutferas no pas. Superado o problema de adaptao climtica, os programas de melhoramento brasileiros intensificaram o melhoramento com outros objetivos, como a melhoria da qualidade de frutos, produtividade e resistncia a doenas, este ltimo atualmente o principal objetivo, j que as condies climticas durante a primavera do sul do Brasil favorecem a disseminao de vrias doenas de importncia econmica nas culturas citadas. ESTRATGIAS DE MELHORAMENTO GENTICO DAS ESPCIES Os principais mtodos de melhoramento das frutferas de clima temperado a introduo de germoplasma, a seleo clonal e a hibridao, seguida de seleo, etapas comumente utilizados em outras espcies. Entretanto, por serem plantas de propagao vegetativa, apresentam particularidades interessantes. A gerao F1, gerada de cruzamentos entre gentipos altamente heterozigotos, apresenta grande variabilidade. Uma vez selecionado determinado indivduo no so necessrias vrias geraes de autofecundao para obter alto grau de homozigose e fixar caractersticas, pois esta funo exercida pela propagao vegetativa. Mtodos auxiliares como a induo de mutaes e de poliploidia tambm so tcnicas desenvolvidas mais recentemente e utilizadas no melhoramento destas espcies em menor escala. Introduo de germoplasma A introduo de germoplasma realizada com gentipos j melhorados, a menos que se busquem caractersticas especficas, como resistncia a doenas em gentipos silvestres ou autctones. Alm disso, se introduz predominantemente gentipos que se adaptam as condies de clima brasileiras, e por isso o material deve ser de baixa necessidade em frio. Quando o gentipo apresenta elevada necessidade em frio, como por exemplo, o germoplasma de pessegueiro autctone oriundo da Espanha, o qual apresenta boas caractersticas de fruto e resistncia a doenas, o intercmbio de plen, realizado pela Embrapa Clima Temperado, um fator que facilita a utilizao deste germoplasma em cruzamentos com plantas adaptadas as condies brasileiras, para incorporao das boas caractersticas do germoplasma espanhol. Os gentipos introduzidos podem ser testados como cultivares em potencial e/ou utilizados como fonte de germoplasma em hibridaes. Normalmente o que se verifica, que a simples introduo de gentipos de outros pases raramente tem fornecido cultivares de bom desempenho. H casos em que necessrio recorrer a espcies afins, como fonte de determinado carter. Foi o que ocorreu com o gene Vf, de Malus floribunda, para resistncia sarna, que foi utilizado pelo programa de melhoramento do EUA.

Hibridao A escolha dos genitores um aspecto importante na hibridao. A escolha deve ser baseada em caractersticas complementares e, pelo menos um dos genitores deve apresentar baixa necessidade e frio. Desse modo, o conhecimento das caractersticas do germoplasma disponvel essencial na escolha. A hibridao envolve diversas etapas: coleta de plen do genitor masculino, emasculao das flores e polinizao da planta me. Coleta de plen O plen deve ser coletado de flores bem desenvolvidas, mas ainda no abertas, para evitar contaminao por plen vindo de outras flores. Isto acarretaria mistura na futura prognie. As flores devem ser colhidas em saquinhos de papel. Em seguida, as anteras devem ser separadas da seguinte maneira. Os botes florais so invertidos sobre uma peneira de malha fina (1,5-2 mm) e esfregados levemente sobre a tela. As aneras atravessam a tela e caem sobre uma pequena bandeja de papel, confeccionada e identificada com o nome do gentipo e data de coleta. As bandejas so deixadas temperatura ambiente e fora do alcance da luz solar direta. A deiscncia das anteras ocorre de 24 a 36 horas aps a coleta. Aps secas, as anteras e o plen so recolhidos em frascos de vidro, tamponados com algodo e colocados em dessecador com substncia higroscpica, a slica gel. Quando se deseja conservar o plen para utiliza-lo no ano seguinte, como o caso de cruzamentos que envolvam o genitor feminino precoce e o masculino tardio, os dessecadores devem ser colocados em congeladores a aproximadamente - 18 C. nestas condies o plen pode permanecer vivel por at 3 ou 4 anos. Teste de viabilidade do plen O mtodo mais utilizado nos programas de melhoramento gentico de frutferas de clima temperado, para testar a viabilidade de plen, a germinao in vitro. Para realizar este mtodo, primeiramente confeccionado um meio de cultura padro, com 10% de sacarose + 1% de agar, diludos em gua destilada. Entretanto, plen de algumas cultivares de ameixeira, germinam melhor com a adio de 20 a 40 ppm de cido brico. O meio aquecido para dissolver completamente o gar, sem ebulir. Ainda quente, so colocadas 3 a 4 gotas de meio sobre tubos de PVC de 1,5 cm de dimetro e 0,5 cm de altura, colados sobre lminas comuns. Aps esfriar o meio, o plen a ser testado polvilhado levemente sobre a superfcie do meio de cultura, com auxlio de um pincel. As lminas so colocadas em placas de Petri, com papel umedecido no fundo, para simular uma cmara mida. As placas de Petri so, ento, colocadas temperatura de aproximadamente 25 C. Trs a quatro horas aps, pode ser feita a contagem dos gros de plen germinados e no germinados. Sob microscpio tico so contados de 100 a 200 gros de plen por gentipo, obtendo-se o percentual de germinao. Em geral, uma boa viabilidade de plen considerada entre 50 a 80%. Entretanto, quando utiliza-se plen vindo do exterior, admite-se at 30% ou menos de germinao, realizando-se polinizao em um maior nmero de flores.

EMASCULAO E POLINIZAO a) Pessegueiro Os estames das flores de pessegueiro so removidos, com auxlio de uma pequena tesoura, cortando-se o tubo floral logo abaixo do ponto de insero dos estames, quando as flores esto ainda em balo, porm prximo da antese. Como o perodo de florao do pessegueiro dura de 1 a 2 semanas, a planta-me deve ser visitada a cada 2/3 dias para efetuar a emasculao e polinizao de flores prximo antese, deixando as flores pouco desenvolvidas para nova visita e a retirada de flores abertas. Recomenda-se a polinizao de aproximadamente 1.000 flores, aps realizar este nmero de polinizaes as demais flores da planta so retiradas, para que os frutos gerados por esta planta sejam oriundos somente do cruzamento desejado, lembrando que o pessegueiro uma espcie autgama. A polinizao deve ser realizada preferencialmente logo aps a emasculao da flor. Ela pode ser realizada com o dedo, com bastante plen. Aps cada cruzamento realizado, as mos devem ser lavadas em lcool 70%, antes de trabalhar com outro plen. As plantas nos quais foram realizados os cruzamentos devem ser convenientemente marcados, para chamara a ateno na hora da colheita. b) Ameixeira A emasculao realizada da mesma forma como no pessegueiro. Entretanto, deve-se ter maior cuidado para no danificar o pistilo, j que a flor menor e mais sensvel aos danos. Se a cultivar utilizada como genitor feminino for auto-infrtil, fato que ocorre na maioria das cultivares, no h necessidade de emasculao. Entretanto, estas flores devem ser protegidas da visita de insetos, utilizando-se sacos de papel nos ramos ou proteo de toda a planta com tela antiinseto. Nas plantas protegidas totalmente, colocase ramos de flores do genitor masculino e uma pequena caixa com abelhas sob a tela para efetuar a polinizao da planta-me. Entretanto, a prtica mais comum a emasculao, seguida da polinizao manual, conforme descrito para pessegueiro. Os ramos com flores polinizadas devem ser identificadas, as flores no polinizadas de um ramo so retiradas. Outro mtodo que pode ser utilizado o plantio de duas cultivares elite, com as quais se deseja efetuar um cruzamento, em blocos isolados de outras plantas de ameixeira. As duas cultivares devem apresentar florao coincidente. Desse modo, ocorre a polinizao aberta e as sementes da obtidas podem ser utilizadas para gerar grande nmero de indivduos a serem testados. Este mtodo apresenta a vantagem do grande nmero de indivduos gerados, porm tem o inconveniente que aps o plantio do bloco isolado, somente aps 3 anos ocorrer a primeira florao das plantas, alm disso as plantas devem ser isoladas das demais da espcie, o que gera custos e mo-de-obra adicionais. c) Macieiras e pereiras Assim como na ameixeira, plantas de macieira e pereira, que so espcies algamas, no necessitam ser obrigatoriamente emasculadas, uma vez que a maioria

delas no fertilizada pelo seu prprio plen e algumas cultivares de pereira so machoestereis, com plen no vivel. Entretanto, como na ameixeira, em geral se faz a emasculao quando as flores esto no estdio de balo, principalmente para facilitar a polinizao cruzada e reduzir visita das abelhas para evitar contaminao por plen de plantas no desejadas. Geralmente so emasculadas 2 a 3 flores por cacho floral, sendo as demais removidas. Este processo apresenta outra vantagem, pois frutas originrias de flores emasculadas so facilmente reconhecidas por ocasio da colheita, pois no apresentam clice. Quando no realiza-se a emasculao das flores os ramos ou as plantas devem ser protegidas, como na ameixeira. Os cachos florais polinizados devem ser identificados. CUIDADOS COM AS SEMENTES a) Pessegueiros e ameixeiras As frutas oriundas das flores previamente polinizadas devem ser colhidas maduras. Com auxlio de uma tesoura so cortados os endocarpos (caroos) ao meio, sem causar dano s sementes (amndoas). As sementes so tratadas com hipoclorito de sdio e colocadas em sacos plsticos, contendo papel filtro embebido em soluo fungicida e vedados com calor e acondicionados em cmara fria para estratificao. Os saquinhos so checados periodicamente para verificar a umidade. O perodo de estratificao pode variar de 60 a 90 dias. A retirada das sementes pode ser realizada quando iniciam a germinao. Aps, so plantadas em sementeira, em casa-devegetao ou telado. Os seedlings so levados a campo, no primeiro inverno aps a realizao das polinizaes e trs anos aps a mesma, os seedlings podem ser avaliados pela primeira vez. Em geral, na primeira avaliao eliminam-se as plantas indesejveis e raras so as selees efetuadas. prefervel efetuar uma segunda avaliao, na frutificao do ano seguinte, para ento, selecionar os gentipos interessantes e eliminar todos os demais. Os gentipos selecionados so propagados por enxertia e colocados em coleo, para avaliao mais criteriosa. Embriocultura Sementes de pessegueiros e ameixeiras, oriundas de cruzamentos com cultivares ou selees de maturao precoce, no germinam em condies naturais. Isto porque, a maturao da polpa ocorre antes que o embrio esteja completamente desenvolvido, fato que ocorre em frutas com perodo de desenvolvimento inferior a 115 dias da plena florao a colheita. Assim, o cultivo de embries torna-se necessrio para permitir o desenvolvimento do embrio e a posterior formao dos seedlings. Em linhas gerais, o procedimento consiste em colher as frutas no incio da maturao e desinfest-las com lcool 70%. Em seguida, retira-se as sementes do interior do endocarpo, em condies de assepsia em cmara de fluxo laminar. Cuidadosamente efetuada a retirada do tegumento e a colocao das sementes em tubos de ensaio contendo meio de cultura, normalmente o WPM (wood plant media).

Aps o desenvolvimento do seedling ele vai para aclimatizao em casa-devegetao e segue os procedimentos j descritos. b) Macieiras e pereiras As frutas originrias das hibridaes devem ser colhidas prximo maturao. As sementes devem ser removidas e bem lavadas e desinfestadas em hipoclorito de sdio. A estratificao pode ser realizada seguindo procedimentos descritos para pessegueiro e ameixeira, a temperatura de 3 a 5 C para sementes de macieira e durante 6 a 14 semanas. Os demais procedimentos so semelhantes aos descritos para pessegueiro e amexeira. SELEO A seleo dos gentipos bastante subjetiva, dependendo principalmente da experincia do melhorista e dos objetivos do programa de melhoramento. No caso de caracteres quantitativos a avaliao de correlaes de caracteres e conhecimento de herdabilidade do carter so essenciais para um planejamento racional. Seleo para resistncia a doenas, por exemplo, necessita de uma metodologia especfica. preciso conhecer a relao patgeno-hospedeiro, ter boas fontes de resistncia, estudar o modo de herana da resistncia e ter um bom mtodo de screening e seleo dos indivduos resistentes. Quando no se consegue preencher todos os requisitos, costuma-se fazer a avaliao das plantas baseadas na incidncia da doena, nas condies de campo, o ideal, entretanto, a inoculao do patgeno em condies controladas.