LABORATORIO 2 COLORANTES EN BIOLOGA

COLORANTES EN BIOLOGA

I. OBJETIVOS

Valorar la importancia del uso de los colorantes, resaltanto las diferentes estructuras de tejidos observando los diferentes contrastes coloreados. Observar y reconocer la accin de los diversos colorantes (cidos, bsicos y neutros), en determinadas estructuras de las clulas.Ejm: cuando se tie con hematoxicilina lo tie de color violceo, reconociendo as el ncleo; y otro colorante eosina, lo tie de color rosceo reconociendo el citoplasma.

II. MARCO TERICO

Los colorantes son sustancias que transmiten su color a las estructuras con las cuales est en contacto, permitiendo de esa manera su fcil reconocimiento de ciertas estructuras de la clula. Por eso es que realizamos coloraciones tanto en el campo de la biologa como en la medicina.

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Fig.1.Cuadro de clasificacin de colorantes

Existen varios tipos de tinciones: Tinciones vitales: teir clulas vivas. De rutina: la tincin de hematoxilina y eosina. Mediante esta tincin se puede demostrar la relacin entre clulas tejidos y orgnulos. Especiales: se tie una estructura en particular de la clula. (Ej. Tcnicas histoqumicas).

Clasificacin de colorantes: Segn su origen: Naturales: tomados del medio natural Artificiales: fabricados

Segn su composicin: cidos: eosina: tien elementos bsicos como citoplasma de un color rosa anaranjado. Bsicos: hematoxilina: tien elementos cidos como el ncleo de color violeta.

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Eosina y hematoxilina se emplean juntas al realizar una tincin para ver la clula entera. Neutros : tiene una parte cida y una parte bsica.Ejm: Wright

CROMFORO +ESQUELETO INCOLORO+ AUXCROMO = CROMGENO

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III.-INTRODUCCIN

Las partes constitutivas de las clulas y sustancias intercelulares son, por lo general, transparentes e incoloras y no se pueden distinguir entre s a menos que haya diferencias en el ndice de refraccin. En el rea de coloracin tenemos que distinguir entre sustancia coloreada y materia colorante. La primera aunque dotada de color no ejerce accin alguna sobre las fibras y tejidos vegetales y/o animales. La segunda(materia colorante) reacciona de forma diferente con las clulas y fibras que constituyen un corte de tejido, dependiendo de su constitucin qumica y llegando a no reaccionar con algunos de los constituyentes tisulares , en alguna ocaciones.Esta coloracin diferencial es la que nos permite distinguir, los elementos que integran el tejido, unos de otros.

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IV.-PARTE EXPERIMENTAL

4.1. MATERIALES

Microscopio ptico

Portaobjetos

Cubreobjetos

Palitos de dientes

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Lanceta hematolgica

Alcohol absoluto(se emple de 96)

Gotero

Pinza de punta fina

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Tallo de geranio

Alcohol ter o ter etlico

Soporte de tincin

Pizeta (agua destilada)

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Colorantes: a) Eosina(excelente colorante citoplasmtico)

b) Hematoxilina

c) Wright

d) Safranina
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Gua de prctica (imgenes microscpicas). Placa petri.

V.-PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS

A.-COLORACIN SIMPLE: EN MUCOSA LABIAL

1) Con un palito de dientes raspe ligeramente la parte interna del labio.

2) Se coloc la muestra en el tercio medio del portaobjeto y se hizo una extensin de la mucosa obtenida.

3) Secar el preparado al medio ambiente.

4) Fijar la lmina con dos gotas de alcohol, durante 2 a 3 minutos.

5) Agregar dos gotas de colorante eosina(cido).

6) Dejar secar al ambiente por periodo de 2 a 3 minutos.

7) Lavar con agua destilada, a chorro fino, hasta que ya no arrastre colorante.

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8) Secar la lmina al medio ambiente.

9) Observar al microscopio empezando desde el menor aumento(10X)

B.-COLORACIN COMPUESTA: EN MUCOSA LABIAL

1) Proceda como en el caso anterior, hasta el paso N 8.

2) Agregar colorante de contraste (2 gotas de hematoxilina durante 2 a 3 minutos).

3) Lavar con agua destilada.

4) Secar la lmina al medio ambiente.

5) Observar al microscopio.

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Citoplasma (rosceo) Ncleo(prpura)

Magnificacin: 100x

C.-COLORACIN NEUTRA: EN EXTENSIN SANGUNEA 1) Desinfectar con alcohol la yema del dedo mayor. 2) Mediante una lanceta extraiga una gota de sangre y colquela en el en un porta objeto limpio.

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3) Con la ayuda de otro porta objeto, colocado sobre la gota de sangre y con una inclinacin de 45.Proceda a extender la sangre hacia adelante, con movimiento continuo. 4) Secar la lmina al medio ambiente. 5) Cubrir el extendido con 2 o 3 gotas del colorante Wright, durante 1 a 2 minutos. 6) Sobre la lmina con el colorante, agregar agua destilada, hasta cubrir la lmina y esperar 7 minutos.

7) Lavar con agua destilada a chorro fino. 8) Observar al microscopio.

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Aumento: 100X

D.-COLORACIN DE MUESTRAS VEGETALES

1) Con la ayuda de una navaja realizar el corte transversal de una tallo de geranio (se deber realizar varios cortes los que se depositan en una placa petri con agua para hidratarla).

2) Colocar una gota de agua sobre el portaobjeto.

3) Colocar la muestra ms delgada de la placa petri. 4) Aadir una gota de safranina. 5) Observar al microscopio.

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Xilema Floema

Aumento: 100X

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ANEXO PRCTICA 2

TINCIN DE LEUCOCITOS (GLBULOS BLANCOS)

NEUTRFILO

1. Neutrfilo en banda. 2. Neutrfilos segmentados. 3. Eritrocito 4. Neutrfilo en segmentacin representan 50- 70 %

LINFOCITOS

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LABORATORIO 2 COLORANTES EN BIOLOGA El ncleo es redondo y no tan comprimido se observa un reborde basfilo (azulado) en el borde del citoplasma celular.
EOSINFILO

Obsrvese el ncleo en forma de anteojo y los grnulos rojos del citoplasma. Representan menos del 5% de glbulos blancos.
BASFILO

Posee un ncleo en forma de lbulos que muchas veces cuesta verlo por los grnulos gruesos del citoplasma.
MONOCITO

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Clulas agranulares ms grandes que otros leucocitos y representan el 3 9 %.

Se ofrece los siguientes datos para que puedas identificar los glbulos blancos:

1.-El linfocito est inmediatamente a la derecha del basfilo. 2.-El neutrfilo est inmediatamente a la izquierda del monocito. 3.-El eosinfilo no est adyacente al monocito, al neutrfilo, o al basfilo. Puedes nombrar los glbulos blancos de izquierda a derecha?

-Los glbulos blancos son: 1) neutrfilo, 2) monocito, 3) basfilo, 4) linfocito, 5) eosinfilo.El fondo muestra algunos eritrocitos (glbulos rojos) que no tienen ncleo.

OBSERVACIN DE VACUOLA VEGETAL

Rojo neutro al 1%

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NaCl al 1%

TINCIN CON LUGOL

Tie el almidn de azul, el glucgeno de amarillo y el resto en tonos de ocre.

CATAFILO DE CEBOLLA

-Remover una hoja interna, colocar sobre la laminilla. -Aadir una gota de agua, colocar cubreobjeto.

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Reposar 10 min.

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-Colocar gota 0.1% rojo neutral, dejar difundir.

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TINCIN CON AZUL DE METILENO

-Tie de azul oscuro restos de cidos nucleicos, y los proteoglicanos cidos en varios tonos de violeta.

CATFILO DE CEBOLLA: lamela media, plasmodesmo.

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CUESTIONARIO 1
1. Realizar esquemas necesarios

CONSTITUYENTE Citoplasma

REACTIVO Eosina Eosina y Hematoxilina Wright

MATERIAL Clulas epiteliales de la mucosa bucal Clulas epiteliales de la mucosa bucal sangre

COLORACION Roscea Prpura( ncleo) citoplasma(rosceo) Violeta Fucsia

Ncleo y citoplasma Ncleo Haces vasculares(xilema,floema)

Safranina

Tallo del Geranio

Esquema:

2. Cules son las diferencias principales entre las clulas vegetales y animales?
CLULA ANIMAL Pared Celular Plastidios(cloroplastos) Nutricin Vacuolas Presenta No presenta Hetertrofa Pequea y en nmero son reducidas Presenta Presenta CLULA VEGETAL No presenta Presenta Auttrofa Grandes y son numerosas

Lisosomas Centrosoma

No presenta

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No presenta

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Reproduccin Sexual Asexual

CLULA VEGETAL

CLULA ANIMAL

3. Realice un cuadro comparativo entre todos los tipos de clulas observados. LOCALIZACIN CARACTERSTICAS Se rpidamente, CLULAS DEL EPITELIO BUCAL En la superficie interna de la boca reproducen se

encuentran juntas por su alta divisin no tienen suministro pero de sangre tienen

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terminaciones nerviosas.

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Xilema: transporta agua e iones. En el tejido maduro est formado de clulas muertas que

carecen de membrana plasmtica.

CLULAS DE LAS HACES VASCULARES

En el mesfilo del geranio.

Floema: es un tejido vascular azcares nutrientes que y conduce otros

sintetizados

desde los rganos que los producen en hacia que se

aqullos

consumen y almacenan (en forma ascendente y descendente).

CLULAS SANGUNEAS

-Neutrfilo:
-Neutrfilo

Tiene

ncleo segmentado en forma de bastoncitos.Se En la sangre encuentra cantidad. en mayor

-Linfocitos

-Linfocitos: Su ncleo es redondo y grande.

-Eosinfilo

-Eosinfilos:

Presenta

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(ncleo

en

forma

de

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dos lbulos o dos lentes

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anteojo) y tiene grnulos pequeos.

-Basfilo : Posee ncleo

-Basfilo

en forma de glbulo y grnulos ms grandes en el citoplasma. -Monocito: Es el ms

-Monocito

grande, es agranulado y se encuentra en menor cantidad.

CUESTIONARIO 2
1.-Explicar el mecanismo de tincin de los colorantes en los tejidos. La coloracin de clulas y tejidos son una combinacin de fenmenos fsicos y qumicos de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos y viceversa indican que hay reaccin qumica. El colorante posee tres componentes: un esqueleto incoloro (anillo aromtico de benceno), al cual se le unen dos tipos de radicales: cromforo (que aporta el color), auxcromo (que posibilita la unin a elementos del tejido. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina cromgeno.

2.-De qu depende la unin de los colorantes.

De que los colorantes al ser cidos (eosina, fucsina cida) tienen afinidad a estructuras bsicas (tien el citoplasma). Los colorantes bsicos (hematoxilina) tiene afinidad por estructuras cidas( tien ncleo, retculo endoplasmtico rugoso y ADN ribosomal.

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3.- Cmo favorece el pH cido en la tincin con colorantes aninicos?

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Para que no afecte el tono de nuestra muestra y no deje restos salinos, frenando as la afinidad (hematoxilina).

VI. CONCLUSIONES
Una de las tinciones ms comnmente usada en histologa es la hematoxilina-eosina sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un colorante bsico y otro cido para teir de diferente color a las estructuras cidas y bsicas de la clula. Antes de proceder a la tincin, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las secciones como es el desaparafinado, puesto que estos cortes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no se lleva a cabo.

Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que tiene en solucin se dice que ha ocurrido un fenmeno

de metacromasia. Esto se debe a que las propiedades de absorcin de la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Por ejemplo, el azul de toluidina se vuelve prpura cuando se une a ciertos grnulos de los mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el mismo color que en solucin se denomina ortocromasia.

VI. REFERENCIAS BIBLIGRFICAS

http://www.diferencia-entre.com/diferencia-entre-celula-animal-y-vegetal/ http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/celula_animal_y_vegetal.htm http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/5-general.php

http://bibmed.ucla.edu.ve/edocs_bmucla/materialdidactico/celular/TecHistol.pdf

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VII. ANEXOS

MUESTRAS CON COLORANTES FIJADOS

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ESQUEMA DE CMO HACER UN FROTIS

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