UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

TALLER MULTIDISCIPLINARIO
DE PROCESOS TECNOLGICOS DE FRUTOS Y HORTALIZAS

PRACTICA 4. EVALUACIN DE CAPACIDAD

ANTIOXIDANTE Y DETERMINACIN DE FENOLES TOTALES PARA FRUTOS

Dra. Ma. Andrea Trejo Mrquez I.A. Selene Pascual Bustamante

En esta prctica se describen los mtodos para la determinacin de capacidad antioxidante y fenoles totales, aplicados a frutos y/o vinos. Con lo que el alumno podr desarrollar, comprender y conocer los mtodos que se para la determinacin de estos compuestos.

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OBJETIVO Identificar la capacidad antioxidante de los frutos y/o vinos y asociarlos al contenido de fenoles correspondiente dentro de la muestra para conocer su uso como antioxidante en el en su consumo. ANTECEDENTES Antioxidantes y Estrs Oxidativo El oxgeno est asociado a las condiciones de vida aerobia, representa la fuerza motriz para el mantenimiento del metabolismo y viabilidad celular al mismo tiempo que involucra un peligro potencial debido a las caractersticas paramagnticas de este gas, responsable de la formacin de intermediarios parcialmente reducidos y dotados de una reactividad alta conocidas como especies reactivas de oxgeno (ROS, por sus siglas en ingls) (Martnez, 2007). Las ROS son radicales libres (RL) o precursores de radicales. En los orbitales, los electrones giran en pares con un espn particular, esto se conoce como mxima estabilidad natural; por tanto, si hay electrones desapareados en un orbital, se generan especie moleculares altamente reactivas que tienden a robar un electrn de cualquier otro tomo para compensar su deficiencia electrnica. El oxgeno, es el principal radical libre, ya que l tiene dos electrones desapareados (Martnez, 2007). Entre las ROS destacan:

Las ROS tienen un origen tanto endgeno, como exgeno. Entre las fuentes endgenas destacan:

1. La cadena respiratoria, donde la reduccin monovalente de la molcula de oxgeno da lugar a la formacin de la mayora de las ROS. 2. Las clulas fagocitarias (neutrfilos, monocitos o macrfagos), utilizan el sistema de la NADPH oxidasa generando directamente al in superxido (O2). Por otra parte, como mecanismo de defensa, dichas clulas tambin generan xido de nitrgeno (NO), por accin de la xido-ntricosintasa sobre la arginina intracelular. La combinacin del O2 con el NO da lugar a la formacin del ONOO- capaz de inducir peroxidacin lipdica en las lipoprotenas. -2-

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3. La autooxidacin de compuestos de carbono tales como aminocidos, protenas, lpidos, glicsidos y cidos nuclicos dan lugar tambin a la formacin de estos radicales. 4. La activacin cataltica de diversas enzimas del metabolismo intermediario como la hipoxantina, xantina oxidasa, aldehdo oxidasa, monoamino oxidasa y ciclooxigenasa, lipoxigenasa, son fuentes representativas de esta produccin (Martnez, 2007). Las fuentes exgenas de radicales libres pueden ser: Ambientales. Radiacin electromagntica, luz solar, ozono, tabaco, etc. Farmacolgicas. Xenobiticos, drogas, etc. Nutricionales. Contaminantes, aditivos, pesticidas, etc.

Dao Oxidativo a biomolculas Son muchas las ROS que actan como oxidantes biolgicos, pero el O2 es el mayor reductor, la simple adicin de un protn da lugar a la formacin de HO2, convirtindose este en un agente oxidante muy activo. Estas transformaciones se resumen de la siguiente forma:

Figura 1 Mecanismo de reaccin del radical superxido

Las ROS producen acciones diversas sobre el metabolismo de los principios inmediatos, que pueden ser el origen del dao celular: 1. Sobre los lpidos poliinsaturados de las membranas produciendo prdida de fluidez y lisis celular como consecuencia de la peroxidacin lipdica (PL). 2. Sobre los glicsidos, actan alterando las funciones celulares tales como las asociadas a la actividad de las interleucinas y la formacin de prostaglandinas, hormonas y neurotransmisores. 3. Sobre las protenas produciendo inactivacin y desnaturalizacin.

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4. Sobre los cidos nucleicos mediante la modificacin de bases produciendo mutagnesis y carcinognesis.

Procesos fisiolgicos y fisiopatolgicos relacionados con los radicales libres Ante el estrs oxidativo el organismo responde con la defensa antioxidante, pero en determinadas ocasiones puede ser insuficiente, desencadenando diferentes procesos fisiolgicos y fisiopatolgicos. En la actualidad son muchos los procesos relacionados con la produccin de radicales libres como son: mutagnesis, transformacin celular, cncer, arteriosclerosis, infarto de miocardio, diabetes, enfermedades inflamatorias, trastornos del sistema nervioso central, envejecimiento celular, etc. (Martnez, 2007).

Funcin de los antioxidantes Los sistemas biolgicos en ambientes oxigenados han desarrollado mecanismos de defensa, tanto a nivel fisiolgico como bioqumico. A continuacin se resumen los mecanismos de defensa bioqumicos: Sistema enzimtico. Los organismos aerobios han desarrollado enzimas antioxidantes tales como: superxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), glutatin peroxidasa (GPx) y DT-diaforasa, que actan tal y como se muestra en las ecuaciones siguientes. La SOD es la responsable de la reaccin de dismutacin del O2 a H2O2, que en reacciones posteriores, catalizadas por la catalasa o por la GPx, se convierte en H2O y O2. La catalasa se encuentra principalmente en los peroxisomas, y su funcin principal consiste en eliminar el H2O2 generado de la -oxidacin de los cidos grasos, mientras que la GPx degrada el H2O2 citoplasmtico. La DT diaforasa, cataliza la reduccin de quinona a quinol y participa en la reduccin de drogas de estructura quinnica (Martnez, 2007).

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Figura 2. Mecanismo De Reaccin De Enzimas Antioxidantes (Martnez, 2007). Sistema no enzimtico. Las clulas utilizan una serie de compuestos antioxidantes o captadores de radicales libres como son: vitamina E, vitamina C, -caroteno, ferritina, ceruloplasmina, selenio, glutatin reducido (GSH), manganeso, ubiquinona, zinc, cido rico, flavonoides, coenzima Q, melatonina, bilirrubina, taurina, cistena, entre otros. Los flavonoides que son extrados de determinados alimentos interactan de manera directa con la especie reactiva para producir complejos estables o de menor reactividad, mientras que en otras ejerce la funcin de co-substrato en la accin cataltica de algunas enzimas (Martnez, 2007). Sistemas reparadores. A su vez stos se subdividen en dos grandes grupos, los directos y los indirectos: Directo. Reduccin de los grupos (S-S) de los aminocidos azufrados de las protenas por enzimas especficas como la disulfuro reductasa y la sulfxido reductasa. Indirecto. En primer lugar se reconoce el dao molecular siendo ste eliminado o degradado, y en segundo lugar se sintetiza la parte eliminada. Esto ocurre tanto en las protenas oxidadas y en perxidos lipdicos de cadenas hidrocarbonadas, as como en las oxidaciones del ADN y ARN (Martnez, 2007). Caractersticas de los antioxidantes Las principales caractersticas de un compuesto o sistema antioxidante son, la prevencin o deteccin de una cadena de propagacin oxidativa, mediante la estabilizacin del radical generado y la regeneracin del antioxidante radicalario

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ayudando as a reducir el dao oxidativo en el cuerpo humano. Hay dos tipos principales de antioxidantes, el "primario" (ruptura de la reaccin en cadena, secuestradores de radicales libres) y el "secundario" o "preventivo". Los mecanismos antioxidantes "secundarios" pueden incluir la desactivacin de metales, inhibicin de los hidroperxidos lipdicos interrumpiendo la produccin de voltiles indeseables, la regeneracin de antioxidantes "primarios", eliminar el oxgeno singulete, etc. (Martnez, 2007). Por lo anterior se puede definir como antioxidantes en el mbito de los alimentos como aquellas sustancias que, en bajas cantidades, actan previniendo o retardando grandemente la oxidacin de materiales fcilmente oxidables tales como las grasas Antioxidantes en alimentos En el organismo se produce un equilibrio entre oxidantes/antioxidantes, cuando este equilibrio se rompe a favor de los oxidantes se produce un estrs oxidativo el cual est implicado en muchos procesos fisiopatolgicos, vide supra. Por tanto, es de vital importancia el consumo de alimentos que contengan antioxidantes naturales y de esta manera se pueda mantener el equilibrio entre oxidantes/antioxidantes o incluso est a favor de los antioxidantes. Adems, si tenemos en cuenta que durante la vida se produce un equilibrio entre oxidantes y antioxidantes, y a medida que el individuo envejece dicho balance est a favor de los oxidantes, es de vital importancia un consumo de alimentos ricos en antioxidantes naturales para contrarrestarlos (Martnez, 2007). Antioxidantes indispensables para la salud En los ltimos aos ha cobrado especial inters, el estudio de la actividad biolgica de los polifenoles y en especial la evaluacin de la capacidad antioxidante asociada a ellos. Los polifenoles en vegetales, frutas y t pueden prevenir enfermedades degenerativas, incluyendo cnceres, con la accin antioxidante. (Martnez, 2007). Compuestos Fenlicos Los polifenoles son un gran grupo de compuestos presentes en la naturaleza que poseen anillos aromticos con sustituyentes hidroxilos. Estos compuestos son en su mayora potentes antioxidantes por su estructura qumica (donador de H+ o electrones) necesarios para el funcionamiento de las clulas vegetales; que se encuentran en frutas y verduras, por ejemplo, manzanas y cebollas, y en bebidas como t y vino (Leighton, 2001).

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Se clasifican de acuerdo con el nmero de tomos de carbono del esqueleto base. Cuadro 1. Principales polifenoles identificados en nuestra dieta. tomos de Esqueleto Tipo Ejemplos presentes carbono en vino 6 C6 Fenoles simples Acido glico Benzoquinonas 7 C6 - C1 cidos fenlicos Tirosol 2 8 C6 - C Derivados de cido cafico tirosina y cidos fenilacticos 3 9 C6 - C cidos cinmicos Fenilpropenos Cumarinas 10 C6 - C4 Naftoquinones 13 C6 -C1-C6 Xantonas 14 C6- C2-C6 Estilbenos Resveratrol Antraquinones 15 C6-C3-C6 Flavonoides Quercitina Isoflavonoides Cianidina Catequina Miricetina Malvidina 18 (C6-C3)2 Lignanos Neolignanos 30 (C6-C3-C6)2 Bioflavonoides n9 (C6-C3)n Ligninas n6 (C6)n Melaninas Procianidina cateclicas n15 (C6-C3-C6)n Taninos condensados (Leighton, 2001)

EQUIPO: Micro pipetas 20 L, 200 L, 1000 L y 5000 L. Parrilla de Agitacin. Vortex. Balanza analtica. Micro centrifuga. Espectrofotmetro.

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MATERIAL: Tabla para picar Cuchillo Vasos de precipitado de 100 y 200 mL Probetas graduadas de 50 y 10 mL Matraces aforados de 5, 10, 100 y 250mL Puntas para micro pipetas Esptulas Agitadores magnticos Celdas para espectrofotmetro 3 Vidrios de Reloj 6 Micro tubos para centrifuga 3 Mortero Toallas de papel. Klennex Marcador indeleble. MUESTRAS Y SOLUCIONES: Una o dos muestras del producto por equipo, todas las actividades se realizaran por triplicado Metanol al 80 % v/v Metanol al 100 % Buffer Acetato 0.1 M (pH 5.25) 250 mL Preparar solucin A: cido actico 0.2 M Medir 1.155 mL de cido actico glacial y aforar a 100 mL con agua des ionizada Preparar solucin B: Acetato de sodio 0.2 M Pesar 2.72 g de acetato de sodio y aforar a 100 mL con agua des ionizada Mezclar 26.25 mL de solucin A con 98.75 mL de solucin B y aforar a 250 mL con agua des ionizada 250 mL

Nota: Verificar que el pH se encuentre en 5.25, en caso contrario corregir el pH con las soluciones A y B segn sea el caso.

Cloruro Frrico 0.05M 10 mL Pesar 135 mg de cloruro frrico y aforar a 10 mL con agua des ionizada DMPD 100mM 5 mL

Nota: Prepararla en fresco para cada ensayo.

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Pesar 104.5 mg de DMPD ((N-N-dimetil-p-fenilenediamina) y aforar a 5 ml con agua des ionizada.

Nota: Esta solucin debe protegerse de la luz y prepararla en fresco para cada ensayo.

Stock Trolox 4 mM (1mg/mL) 100 mL Pesar 100 mg de Trolox y aforar a 100 mL con metanol Buffer PBS 0.01M (pH 7.4) 500 mL Pesar 4 g de NaCl, 0.10 g de KCl, 0.72 g de Na2HPO4 y 0.12 de KH2PO4 Disolver en 400 mL de agua, Ajustar el pH a 7.4 con HCl o NaOH, segn sea necesario. Aforar a 500 mL con agua des ionizada. ABTS 7 mM con persulfato de potasio 2.45 m M 5 mL Pesar por separado 0.0194 g de ABTS (2,2 azinobis-(3-etilbenzotiazolin 6-cido sulfnico) y 0.0033 g de persulfato de potasio, aforar a 5 mL e incubar a temperatura ambiente en la oscuridad por 16 horas. Solucin patrn de cido Glico 0.1 mg/mL 100 mL Pesar 0.010 g y se disuelven en 1 mL de etanol. Se afora con agua destilada a 100mL Carbonato de sodio anhidro 20 % p/v 100 mL Pesar 20 g de carbonato de sodio anhidro y disolverlo en 80 mL de agua destilada hirviendo. Enfriar a temperatura ambiente, despus de 24 horas, filtrar sobre papel y aforar a 100 mL con agua destilada. Reactivo comercial de Folin-Ciocalteu

Nota: Debe protegerse de la luz y ser estable durante 6 meses a -20 C.

Nota: El radical ABTS es estable durante 3 das.

PROCEDIMIENTO: Obtener el extracto metanlico para anlisis de las muestras: 1. Pesar 250 mg de pulpa del fruto en un micro tubo para centrifuga. 2. Agregar 1 mL de metanol al 80%. 3. Agitar en el vortex durante 1 min. 4. Centrifugar a 10 000 rpm durante 15 min. 5. Recuperar el sobrenadante y transferirlo a otro micro tubo. 6. Agregar al pellet 500 L de metanol al 100%. -9-

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7. Agitar en el vortex durante 1 min. 8. Centrifugar a 10 000 rpm durante 15 min. 9. Recuperar el sobrenadante y transferirlo al micro tubo que contiene el sobrenadante obtenido de la primera centrifugacin. 10. Ajustar el volumen a 2 mL. 11. Proteger de la luz el micro tubo con el extracto y mantenerlo a -20 C, hasta su uso.

Figura 1. Centrifuga

Determinacin de Fenoles Totales Curva Patrn

No. de tubo Bco 1 2 3 4 5 c. Glico (mg/mL) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 1.0 c. Glico (L) 0 40 80 120 160 200 Agua destilada (L) 200 160 120 80 40 0 Agua destilada (L) FolinCiocalte (L) Na2CO3 (L) Agitar y dejar reposar Leer en espectro

1500

100

200

30 min

765 nm

1. Para la determinacin de las muestras se toman 200 L del extracto obtenido, y se realiza el mismo proceso que los puntos de la curva. Clculos cido glico (mg/ml) = ((D.O. + b)/m)* FD - 10 -

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Donde b ordenada al origen m pendiente FD factor de dilucin

Figura 2. Estructura del fenol. Determinacin de Capacidad Antioxidante por ABTS 1. Diluir el radical coloreado ABTS en buffer PBS, agregar 2 mL de ABTS concentrado a 200 mL de buffer PBS. La solucin se tronara verde-azul. 2. Medir la absorbancia de aBTS diluido en buffer PBS a 734 nm. Esta debe ser de 0.7000 +/- 0.02. Curva patrn de ABTS 1. Preparar soluciones del antioxidante Trolox a distintas concentraciones a partir de la solucin madre de Trolox 4mM (1 mg/mL)
No. de tubo 1 2 3 4 5 Concentracin de Trolox M 300 240 180 120 60 Solucin madre Trolox (L) 37.5 30 22.5 15 7.5 Metanol 80% (L) 462.5 470 477.5 485 492.5 Tomar (L) 100 100 100 100 100 Solucin de ABTS (L) Agitar y dejar reposar Leer en espectro

1 900

7 min

734 nm

2. Las lecturas de cada punto de la curva se realizaran por triplicado y por cada uno se realizara un blanco, el cual solo contendr metanol al 80%. 3. Tambin se registrar la lectura como A0 (blanco o seal no inhibida). 4. Las muestras se sometern al mismo proceso que la curva, esto a partir de los extractos obtenidos.
Nota: en caso de que el contenido de antioxidantes dentro de la muestra sea mucho mayor al cuantificable por el mtodo, realizar diluciones para lograr la lectura, y tomarlas en cuenta en el clculo.

Clculos de la curva patrn 1. Calcular el porcentaje de inhibicin para cada solucin estndar de Trolox: - 11 -

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A734 (%) = (1-Af/A0) x 100 2. Graficar A734 % contra la concentracin de la solucin estndar de Trolox. Hacer un ajuste lineal. Clculos de las muestras 1. Calcular el porcentaje de inhibicin para cada extracto A734 (%) (1-Af/A0) x 100 2. A partir del ajuste obtenido en la curva patrn de Trolox, determinar la concentracin equivalente de Trolox (TE) y posteriormente hacer los clculos requeridos para determinar la capacidad antioxidante como: TE mmol/g fruto fresco % de inhibicin = [1-(Af/A0)] x 100 Donde Af es la seal inhibida A0 es la seal no inhibida TECELDA = (%inhibicin-b)/m Donde TECELDA es la actividad antioxidante equivalente a trolox en el volumen total de la celda b es la ordenada al origen m es la pendiente TEEXTRACTO DILUIDO = (TECELDA x VOLCELDA) / VOLEXTRACTO LQUIDO Donde TEEXTRACTO DILUIDO es la actividad antioxidante equivalente a trolox del extracto diluido TECELDA es la actividad antioxidante equivalente a trolox en el volumen total de la celda VOLCELDA (L) es el volumen total en la celda VOLEXTRACTO LQUIDO (L) es el volumen de extracto diluido aadido a la celda

TEEXTRACTO = TEEXTRACTO DILUIDO x FD Donde TEEXTRACTO es la actividad antioxidante equivalente al trolox del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco

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TEEXTRACTO DILUIDO es la actividad antioxidante equivalente a trolox del extracto diluido FD es el factor de dilucin (Volumen final/Volumen de extracto en metanol) moles equivalentes a trolox = (TEEXTRACTO x VOLEXTRACTO) / (1000000 X MFRUTO) g de fruto fresco Donde TEEXTRACTO es la actividad antioxidante equivalente al trolox del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco VOLEXTRACTO (L) es el volumen total del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco MFRUTO es el peso de fruto fresco a partir del cual de obtuvo el extracto en metanol Determinacin de Capacidad Antioxidante por DMPD 1. Agregar 2 mL de solucin DMPD 100mM a 200 mL de buffer acetato 0.1 M (pH 5.25). 2. Agregar 400 L de solucin cloruro frrico 0.05 M. en este momento deber detectarse la formacin del radical DMPD. la solucin se tornara moreda. 3. Medir la absorbancia del radical coloreado a 505 nm. Esta deber ser de 0.900+/0.1. Una vez 3el radical coloreado, esperar una hora para iniciar las cuantificaciones.
Nota: la absorbancia del radical coloreado permanecer estable 12 horas a temperatura ambiente

Curva patrn de DMPD 4. Preparar soluciones del antioxidante Trolox a distintas concentraciones a partir de la solucin madre de Trolox 4mM (1 mg/mL)
Solucin madre Trolox (L) 150 125 100 75 50 25 Solucin de DMPD (L) Agitar y dejar reposar

No. de tubo 1 2 3 4 5 6

Concentracin de Trolox M 1200 1000 800 600 400 200

Metanol 80% (L) 350 375 400 425 450 475

Tomar (L) 100 100 100 100 100 100

Leer en espectro

1 900

10 min

505 nm

5. Las lecturas de cada punto de la curva se realizaran por triplicado y por cada uno se realizara un blanco, el cual solo contendr metanol al 80%. 6. Tambin se registrar la lectura como A0 (blanco o seal no inhibida).

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7. Las muestras se sometern al mismo proceso que la curva, esto a partir de los extractos obtenidos.
Nota: en caso de que el contenido de antioxidantes dentro de la muestra sea mucho mayor al cuantificable por el mtodo, realizar diluciones para lograr la lectura, y tomarlas en cuenta en el clculo.

Clculos de la curva patrn 3. Calcular el porcentaje de inhibicin para cada solucin estndar de Trolox: A505 (%) = (1-Af/A0) x 100 4. Graficar A734 % contra la concentracin de la solucin estndar de Trolox. Hacer un ajuste lineal. Clculos de las muestras 8. Calcular el porcentaje de inhibicin para cada extracto A505 (%) (1-Af/A0) x 100 9. A partir del ajuste obtenido en la curva patrn de Trolox, determinar la concentracin equivalente de Trolox (TE) y posteriormente hacer los clculos requeridos para determinar la capacidad antioxidante como: TE mmol/g fruto fresco % de inhibicin = [1-(Af/A0)] x 100 Donde Af es la seal inhibida A0 es la seal no inhibida TECELDA = (%inhibicin-b)/m Donde TECELDA es la actividad antioxidante equivalente a trolox en el volumen total de la celda b es la ordenada al origen m es la pendiente TEEXTRACTO DILUIDO = (TECELDA x VOLCELDA) / VOLEXTRACTO LQUIDO Donde TEEXTRACTO DILUIDO es la actividad antioxidante equivalente a trolox del extracto diluido TECELDA es la actividad antioxidante equivalente a trolox en el volumen total de la celda VOLCELDA (L) es el volumen total en la celda VOLEXTRACTO LQUIDO (L) es el volumen de extracto diluido aadido a la celda

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TEEXTRACTO = TEEXTRACTO DILUIDO x FD Donde TEEXTRACTO es la actividad antioxidante equivalente al trolox del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco TEEXTRACTO DILUIDO es la actividad antioxidante equivalente a trolox del extracto diluido FD es el factor de dilucin (Volumen final/Volumen de extracto en metanol) moles equivalentes a trolox = (TEEXTRACTO x VOLEXTRACTO) / (1000000 X MFRUTO) g de fruto fresco Donde TEEXTRACTO es la actividad antioxidante equivalente al trolox del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco VOLEXTRACTO (L) es el volumen total del extracto en metanol obtenido a partir del fruto fresco MFRUTO es el peso de fruto fresco a partir del cual de obtuvo el extracto en metanol
Nota: muestras que presenten coloracin y absorbancia considerable a 505 nm, este mtodo puede conducir a subestimacin de la capacidad antioxidante

CUESTIONARIO: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) Qu son los fenoles? Cules son las ventajas de que un fruto presente compuestos fenlicos? Cul es la funcin de los compuestos antioxidantes? En qu se ve reflejado el contenido de fenoles en el producto? Menciona algunos antioxidantes que se encuentren en los alimentos Cules son las causas del deterioro de los antioxidantes? Cul es el aporte nutricional de los compuestos fenlicos en la dieta? Menciona otros mtodos de cuantificacin de compuestos fenlicos, y anexa la referencia. Para qu tipo de productos estn desarrollados los mtodos de determinacin de

capacidad antioxidante? 10) Por qu estn relacionados los compuestos fenlicos con la actividad antioxidante? 11) Qu efecto tienen los compuestos fenlicos en la calidad organolptica de los alimentos? 12) Menciona que compuestos fenlicos y en qu cantidad se puede encontrar en la muestra que se analizo en esta prctica.

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REPORTE POR EQUIPO: Antecedentes: Breve Informacin relativa al producto con el cual se trabajo, referencias bibliogrficas de empleo de estos mtodos. Resultados: Tablas que contengan los resultados obtenidos en cada determinacin, anlisis de estos y discusin con respecto a lo que se encuentra reportado en la bibliografa, adems con la concordancia sealada en las Normas que aplican para el producto. Cuestionario. Bibliografa consultada. REFERENCIAS 1. Shetty, K., Paliyath, G., Pometto, A. y Levin, R., (2007). Funtional Foods and Biotechnology. Advisory Board, Massachusetts, EUA. 2. Leighton, F, Urquiaga, I. y Diez, M., (1997) Propiedades Antioxidantes del Vino y Sus Componentes. Facultad de Ciencias Biolgicas, Pontificia Universidad Catlica de Chile, Revista Cubana Plantas Medicinales Scielo,13:4. 3. Leighton, F. y Urquiaga I., (2001) Polifenoles del vino y Salud Humana, Antioxidantes y Calidad de Vida, Revista antioxidantes y calidad de vida online, Pontificia Universidad Catlica de Chile, Febrero, Disponible en <www.antioxidantes.com.ar/Home2.htm>

El presente material fue elaborado con apoyo del proyecto PAPIME: Elaboracin de materiales educativos para fortalecer la enseanza en el taller multidisciplinario de ingeniera en alimentosprocesos tecnolgicos de frutas y hortaliza de la carrera de ingeniera en alimentos (PE 202610).

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