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PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE DE QUALIDADE =EDUCAO CONTINUADA= GUA REAGENTE NO LABORATRIO CLNICO 1 . INTRODUO Esta norma define a gua reagente e seu nvel de pureza necessria para ser utilizada nos Laboratrios Clnicos. Os tipos, as especificaes, os mtodos de obteno e o controle da qualidade citados a seguir, permitem aos profissionais do Laboratrio Clnico selecionar a gua reagente com a qualidade necessria para sua utilizao na rotina diria, na preparao de reagentes, na dissoluo de liofilizados e nas diluies de amostras. 2 . TIPOS DE GUA REAGENTE De acordo com as especificaes publicadas pela ACS - American Chemical Society, ASTM-American Society for Testing and Materials, USP-United States Pharmacopeia, NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards e CAP-College of American Pathologists, existem os seguintes tipos de gua reagente: 1 - gua reagente tipo I 2 - gua reagente tipo II 3 - gua reagente tipo III 4 - gua reagente especial. 3 - ESPECIFICAES DA GUA REAGENTE A gua reagente, de acordo com o seu tipo, deve possuir determinadas especificaes que so mostradas na Tabela 1. Tabela 1: TIPO I 10 N.E. 10,0 0,1 0,05 0,01 60 3 (b) Mnimo TIPO II 10.000 N.E. >2,0 <0,5 0,1 0,01 60 3 TIPO III N.E. 5,8/8,0 >0,1 <10,0 1,0 0,01 60 3

Bactria UFC/ml (a) PH Resistncia especfica, megohm/cm a 25 C (b) Condutividade, micromho/cm (a) Mximo de silicatos(Si)O 2 - mg/l Metais pesados - mg/l Substncias orgnicas KMnO4 - minutos CO2 - mg/l N.E. = No especificado (a) Mximo

UFC= Unidade formadora de colnias

4 - UTILIZAO DA GUA REAGENTE 4.1 - GUA REAGENTE TIPO I Esta gua a ideal para a utilizao geral em Laboratrios Clnicos. Quando obtida por processos adequados e estocada corretamente, no produz nenhuma interferncia na preparao dos reagentes ou execuo das metodologias mais sofisticadas no Laboratrio Clnico. Sua resistncia especfica deve ser 10 megohm/cm. 4.2 - GUA REAGENTE TIPO II Esta gua pode ser usada quando a presena de bactrias tolerada, como nos testes de rotina que no necessitam gua reagente do tipo I ou gua reagente especial. a gua reagente que sempre temos em nossos laboratrios e pode ser usada para dissolver os nossos soros controles, preparar os reagentes e diluir as amostras. Sua resistncia especfica deve ser > 2,0 megohm/cm. 4.3 - GUA REAGENTE TIPO III

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Pode ser usada para rinsar frascos de vidro ou lavagens preliminares de outros recipientes que necessitem no final, tratamento com gua tipo I ou II. Tambm pode ser utilizada como gua original, para a obteno de gua de alto grau de pureza. Sua resistncia especfica deve ser > 0,1 megohm/cm. 4.4 - GUA REAGENTE ESPECIAL Deve ser preparada e utilizada quando h necessidade de que sejam removidos determinados contaminantes, de acordo com a utilizao proposta. Ex.: gua para preparar solues injetveis, exames microssomais, HPLC, etc. Este tipo de gua obtido com a utilizao de dois ou mais processos de purificao, que permitam a eliminao de todo e qualquer contaminante da gua. Ela no deve conter ons, substncias orgnicas, silicatos, bactrias ou substncias em suspenso. 5 - PROCESSOS DE PURIFICAO DE GUA A gua de torneira contm quantidades distintas de microorganismos, de materiais orgnicos e inorgnicos dissolvidos ou suspensos em propores diversas, dependendo da localizao geogrfica, do tratamento urbano de fornecimento de gua populao e, tambm, da poca do ano. A gua de torneira no adequada para o emprego como reagentge no Laboratrio Clnico. Ela deve ser purificada com os processos adequados para tornar-se gua reagente. Esta purificao consiste na eliminao de todas as substncias dissolvidas e suspensas na gua. Uma comparao de processos de purificao da gua mostrada na Tabela 2, com base na publicao da NCCLS Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory - Third Edition, vol.17, nr. 18 -1997 . No h um processo especfico, recomendado para a produo de gua reagente. Um processo simples ou uma combinao de processos podem ser usados satisfatoriamente, desde que o produto final atenda s especificaes requeridas pelas normas internacionais. O laboratrio deve estudar e escolher o mtodo que melhor atenda s suas necessidades, levando em considerao suas reais possibilidades de obter uma gua reagente com o grau de pureza especfico para seu servio. Esses processos so denominados: 5.1 - DESTILAO: o processo de purificao da gua pela mudana dos seus estados fsicos. A gua em estado lquido levada ao estado gasoso (vapor) e condensada novamente ao estado lquido. Em cada uma destas mudanas de estado h uma possibilidade de se purificar a gua. Este processo no elimina gases e alguns vestgios de sais inorgnicos, assim como, h o perigo de contaminao na campnula do destilador, por transbordamento. 5.2 - DEIONIZAO: um processo de troca de ons para obter gua reagente de alta resistividade. Consta da utilizao de colunas contendo resinas de trocas inicas que retm as impurezas existentes na gua. No elimina substncias no ionizadas, como silicatos , algumas substncias orgnicas e algumas impurezas em suspenso. A resistividade da gua purificada por destilao menor que a gua obtida por deionizao, devido principalmente pela presena de CO 2, H2S, NH3 e outros gases ionizados presentes na gua original. A melhor coluna de deionizao a chamada de leito misto, que absorve os aniontes e cationtes. A coluna, depois de saturada, pode ser regenerada e reaproveitada. 5.3 - OSMOSE REVERSA (OR): o processo no qual a gua forada sob presso atravs de uma membrana semi-permevel que retm uma porcentagem das substncias orgnicas e inorgnicas dissolvidas, ions e impurezas em suspenso. A Osmose Reversa pode efetivamente remover mais de 97% dos ions monovalentes e ainda grande parte de ions bivalentes. Entretanto, substncias volteis e algumas substncias orgnicas de baixo peso molecular passam atravs da membrana.

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5.4 - ADSORO E ABSORO PELO CARVO: um processo utilizado como uma fase de pr-tratamento e que em combinao com outro processo de purificao da gua, possibilita a obeteno de gua reagente. Pode ser usado o carvo ativado ou outro adsorvente que seja capaz de remover contaminantes orgnicos. Este processo tem as seguintes limitaes: a) O carvo mecanicamente degradado e produz p que deve ser retido frente; b) Solta resduos minerais na gua obtida; c) Realiza somente pequena adsorso de contaminantes, em funo do tempo de contato. Na prtica o carvo ativado usado para remover o Cloro da gua que vai ser utilizada para a deionizao, ou outro processo de purificao. 5.5 - FILTRAO E ULTRAFILTRAO: A filtrao um processo mecnico de reteno de partculas, incluindo microorganismos, naturalmente dependendo do tamanho dos poros do filtro utilizado. A ultrafiltrao o processo mecnico ou eletro-mecnico destinado a remover pequenas impurezas dissolvidas ou suspensas na gua. A filtrao retm partculas, dependendo do dimetro dos poros do filtro, e a ultrafiltrao retm baseado no seu tamanho, forma e carga eltrica. Estes processos so tambm usados em combinaes com outros processos de purificao da gua. Os ultrafiltros utilizando filtros moleculares, tm demonstrado ser til para reduzir os contaminantes orgnicos da gua original, baseados no princpio de membranas retentoras de substncias de acordo com seus pesos moleculares. 5.6 - NANOFILTRAO: um processo que utiliza uma membrana obtida por tecnologia emergente, destinada purificao da gua. um processo que utiliza em combinao as caractersticas dos ultrafiltros e da osmose reversa. So utilizados cartuchos que realizam concomitantemente esses dois processos de purificao. Neste processo h passagens de grandes quantidades de ions bivalentes como Clcio, Magnsio e Sulfato. Tem ainda uma baixa resistncia para o Cloro existente na gua. 5.7 - OXIDAO QUMICA: um processo ainda no utilizado largamente em Laboratrio Clnico. o sistema de purificao da gua pelo Oznio, mas est ganhando popularidade, pois o Oznio 5 a 10 vezes mais efetivo como bactericida que o Cloro. A ao bactericida do Oznio pode ser aumentada pela ao da luz ultravioleta, sendo tambm mais fcil de remover que o Cloro. Sendo um processo oxidante, o Oznio degrada as membranas de osmose reversa e os plsticos originrios de polmeros, incluindo resinas de troca inica dos deionizadores. Entretanto, tem mostrado ser efetivo para a oxidao de bactrias, vrus ou seus metablitos. 5.8 - OXIDAO E ESTERILIZAO POR ULTRA-VIOLETA: A oxidao por luz ultravioleta resulta da absoro da luz a 185 nm, produzindo radicais de hidroxil, que por sua vez oxida os materiais orgnicos ionizveis. Deve ser usada por recirculao da gua sob o foco da luz ultravioleta. Este processo isolado no garante a remoo das substncias orgnicas da gua. A esterilizao por ultravioleta realizada por absoro da luz de 254 nm que destroi o DNA e RNA dos microorganismos, causando a morte de sua clula. A eficincia de ambos os processos depende da quantidade de luz que penetra na gua e tambm do tempo de exposio.

Tabela 2:- Comparao da capacidade dos processos de purificao da gua C Mtodos O N T Gases A M I N A N T E S Bactrias Pirognio/ Endotoxinas

Slidos

Substncias orgnicas

Partculas

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Destilao Deionizao Osmose reversa Absoro pelo carvo Filtrao (O,22 m) Ultrafiltrao Oxidao por U.V. Esterilizao por U.V. Nanofiltrao Oxidao qumica E E B R R R R R B/R R B/R E R R R R R R R R B R B E/B R R B R B R E R E R E E R R E R E R E R E E B/R B E E/B E R E R R E R R E E/B

Legenda: E = Excelente (capacidade de remoo completa ou prxima do total) B = Boa (capacidade de remoo de larga porcentagem) R = Ruim (capacidade de remoo pequena ou incapaz de remover) 6 - RECIPIENTES PARA DEPOSITAR GUA REAGENTE Metlicos: Devem ser fabricados de ao, titnio ou pintura metlica. Entretanto deve ser tomado cuidado para que no haja transferncia de traos de metal para a gua. No metlicos: Esto disponveis em diferentes materiais como polipropileno, polietileno, fluoropolmeros (Teflon), e mais comumente, o PVC. O NCCLS no recomenda depositar gua reagente tipo I ou II, em frascos de PVC. Traos de contaminantes orgnicos e metlicos so extrados pela gua do PVC. recomendado utilizar frascos de fluoropolmeros, para eliminar todos os problemas existentes com outros produtos no metlicos. De vidros: Recipientes de vidro so inaceitveis para estocar gua reagente. Apesar da alta qualidade dos vidros de borosilicatos, eles transferem traos de chumbo, boro, sdio, arsnico e slica, para a gua reagente depositada. Observao: Como vimos anteriormente, nenhuma gua reagente deve permanecer muito tempo estocada, pois todos os recipientes tendem a transferir algo para a mesma, razo porque, em princpio, ela deve ser utilizada recente, pois alm de evitar a contaminao por outras substncias, ainda diminue a incidncia da contaminao bacteriana. 7 - CONTROLE DE QUALIDADE DA GUA REAGENTE So necessrios os seguintes testes e periodicidade, para determinar a qualidade da gua reagente: Determinao da resistividade ou condutncia, diariamente. Teste de esterilidade, com contagem de colnias, semanalmente. Determinao do pH a 25 C, quando necessrio. Determinao da contaminao por substncias orgnicas, quando necessrio. Determinao da slica solvel, como SiO 2, quando necessrio. Todos os valores aceitveis destas determinaes esto contidos na Tabela 1, na pgina 1. Existem vrios processos para realizar o controle da qualidade da gua reagente, alguns caros e difceis, outros mais baratos e mais fceis de serem realizados em laboratrios de pequeno porte. A seguir transcrevemos algumas metodologias, cabendo entretando ao Laboratrio Clnico escolher a que melhor lhe convir para controlar a qualidade da sua gua reagente. 7.1 - DETERMINAO DA RESISTIVIDADE DA GUA REAGENTE utilizado um aparelho denominado condutivmetro ou resistivmetro, que serve para medir atravs da resistividade, a quantidade de ons dissolvidos na gua, cujo resultado expresso em megohm.Esta determinao deve ser realizada a a 25 C. A quantidade mnima de megohm, em gua reagente tipo I, de 10 megohm/cm.

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A quantidade mnima de megohm, em gua reagente tipo II, de 2 megohm/cm. A quantidade mnima de megohm, em gua reagente tipo III, de 0,1 megohm/cm. Existem vrios modelos de Condutivmetro: com escalas de zero a 100 megohm/cm e outros somente com luzes verdes e vermelhas, indicativas de boa e m qualidade da gua reagente. Existe ainda um mais simples, somente com uma luz vermelha, indicativa quando acende, que a gua est com menos de 10 megohm/cm (pouca resistncia). portanto no indicada para ser usada nos Laboratrios Clnicos. 7.2 - DETERMINAO DO pH DA GUA REAGENTE Serve para verificar a alcalinidade da gua reagente, quando esta sofre deteriorao, aps estocagem por contaminao bacteriana ou substncias orgnicas. O processo consiste em adicionar uma gota de soluo alcolica de Fenolftaleina a 1 % em 10 ml de gua a examinar, e o aparecimento de colorao avermelhada indica perda de qualidade da gua. Tambm pode ser utilizado um potencimetro para verificar essa alcalinidade. 7.3 - DETERMINAO DA SLICA SOLVEL, COMO Si0 2 O processo consiste em utilizar os reagentes empregados para a dosagem do Fsforo inorgnico: Preparar uma reao do branco do Fsforo e fazer a leitura espectrofotomtrica do mesmo contra a gua. Esta absorbncia do branco do Fsforo, lida em 650 nm ou filtro vermelho, no poder ultrapassar 0,010, e tambm no pode ocorrer formao de cor azul visvel, o que corresponderia a uma concentrao de silicatos superior a 0,10 mg/l. Com esses parmetros a gua reagente estar imprpria para ser utilizada em Laboratrio Clnico. Isto quando acontece, o deionizador deve ser regenerado ou a resina deve ser trocada ou, se a gua est sendo obtida por outro processo, o mesmo dever sofrer uma avaliao, para descobrir a razo desta impureza. 7.4 - DETERMINAO DA CONTAMINAO BACTERIANA Esta determinao pode ser realizada pelos mtodos tradicionais, com contagem de colnias, pois em princpio a gua reagente tipo I no deve conter bactrias, apesar que as normas internacionais admitem a presena de at 10 UFC/L 7.5 - DETERMINAO DAS SUBSTNCIAS ORGNICAS Essa determinao pode ser realizada pela reduo do Permanganato de potssio: Adicionar 0,20 ml de uma soluo de KMnO 4 0,01 N em 500 ml de gua e agitar. Dentro de uma hora deve ainda persistir a colorao violeta, o que comprova a no existncia de substncias orgnicas. A presena destas substncias orgnicas provocariam a reduo do Permanganato, tornando o lquido incolor. 8 REGISTROS Nos procedimentos da qualidade do Laboratrio Clnico devem estar especificados, os registros que devem ser realizados com referncia ao controle da qualidade da gua reagente, assim como a periodicidade dos mesmos. 9- BIBLIOGRAFIAS 9.1- American Society for Testing and Materials Standard test methods for electrical conductivity and resistivity of water. ASTM designation D1125-82 .Philadelphia, Pensilvania, ASTM, 1989, and in april 1993, pp 69, 70, and 77. 9.2- Comission on Laboratory Inspection and Acreditation - Reagent water specification . Chicago, College of American Pathologists, 1985. 9.3- APHA-AWWA-WPCF: Standard Methods for Examination of Water and Waste Water - 17th ed. Washington, D.C., 1989. 9.4- Hamilton, H. Selection of materials in testing and purifying water . Ultrapure Water 2(1):36-38, 1985. 9.5- Hanselka, R.; Materials of constrution for water systems part I and II. Ultrapure Water 4(5 e 6) 4650 e 50-53. 1987. 9.6- Kaplan, L.A.; Pesce, A.J. - Methods in Clinical Chemistry- Second Edition. St. Louis, Missouri, C.V. Mosby Co., 1989. 9.7 - U.S. Pharmacopeia XXIII. Rockville, Maryland: The United States Pharmacopeia Convention, Inc.; 1986.

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9.8- ASTM - Standard Specificacion for Reagents Water.ASTM document D 1193-91(1991). 9.9- NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards: Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory - Third Edition 1997, vol. 17 nr.18.

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Conjunto de filtrao para obter gua reagente, com qualidade, para o Laboratrio Clnico. 0

1 - CARCAA TRANSPARENTE CUNO, COM FILTRO DE RETENO DE 25 MICRA 2 - CARCAA OPACA, COM FILTRO DE CARVO E DE RETENO DE 5 MICRA 3 - CARCAA OPACA, COM FILTRO DE CARVO E DE RETENO DE 3 MICRA 4 - DESIONIZADOR DE LEITO MISTO 5 - SISTEMA DE TRATAMENTO DA MILLIPORE, MILLI Q PLUS 6- DEPSITOS DE GUA TRATADA, PARA USO DIRIO Obs.: Se o Laboratrio Clnico no trabalha com DNA, Biologia Molecular ou HPLC, no necessrio utilizar o item 5, devendo somente ser realizado diariamente o controle da qualidade da gua obtida por deionizao.